本发明涉及属于去蛋白提取物生产领域，一种小牛血去蛋白提取物中间体的生产方法。
背景技术：
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目前现有的小牛血去蛋白提取物中间体多为采集自出生后6个月以内的小牛，实际情况为该牛龄段牛源较少，且可能参入部分大牛血，因此影响该产品的活性。
而且现有的小牛血去蛋白提取物中间体的生产方法基本都为化学提取法，如中国发明专利:CN200910246717.3公开的一种小牛血去蛋白提取物组合物注射液及其制备方法，其方法为小牛血加枸橼酸钠，加水搅拌升温，搅拌下迅速降温至-10～0℃，离心，上清液调节pH值，加入胃蛋白酶酶解，过滤，调节pH值，加入枯草杆菌蛋白酶酶解，过滤；滤液加入乙醇水溶液搅拌，离心，上清液过活性炭柱，合并洗脱液和穿流液，浓缩至无乙醇味，浓缩液加入木糖醇和ε-聚赖氨酸，加水稀释，超滤；超滤液分装灌装后紫外灭菌，包装即得。这样的方法不仅复杂，而且需要加入大量的化学物质，从而破坏了小牛血去蛋白提取物的纯净性。
技术实现要素：
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针对现有技术的上述不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种小牛血去蛋白提取物中间体的生产方法，解决了现有技术复杂，而且需要加入大量的化学物质，从而破坏了小牛血去蛋白提取物的纯净性的问题。
本发明的技术解决措施如下：
一种小牛血去蛋白提取物中间体的生产方法，包括：
a、取血：在清洁环境下采集小牛全血；
b、分离：将小牛全血恒温放置至全血中的血清和血块自然分离后，离心去除血清后得到血块，并将血块低温冷冻保存；
c、碾磨：将冷冻的血块化冻至常温后加入纯化水，混合均匀后得到混合液；
d、变性：将混合液加入反应罐中升温变性，变性后冷却至50℃以下再进行离心得到离心液，将离心液冷冻保存；
e、超滤：将离心液化冻后进行超滤，收集得到超滤液，并将超滤液低温冷冻保存；
f、无菌灌装：将超滤液化冻后，通过除菌过滤后灌装，得到小牛血去蛋白提取物中间品，并将小牛血去蛋白提取物中间品至2～8℃保存。
作为优选，取血步骤中，血液采集自出生14小时以内未进食的新生小牛，采集环境应在超净工作台内。出生14小时内的小牛血分离出来的血清是细胞培养基的主要成分之一，具有较高的经济价值。而小牛全血分离血清后得到的血块依然含有较高的活性成分，本发明从本来丢弃的血块中分离提取得到小牛血去蛋白提取物中间体，一方面充分利用了小牛血的所有组分，提高了其利用率；另一方面也一定程度提高了小牛血去蛋白提取物中间体的活性成分。
作为优选，分离步骤中，恒温放置温度控制在25～35℃，放置时间为30分钟，离心转速为2000～4000转，离心时间10～20分钟，低温保存温度不低于-5℃。
作为优选，碾磨步骤中，混合时采用碾磨机进行混合，碾磨机转速为2000～3000转/分钟，每碾磨50L混合液需要碾磨10分钟，加入的纯化水的体积与血块的体积比为3：1。
作为优选，变性步骤中，升温温度为80±2℃，升温时间保存时间为30分钟，离心条件为40±2℃，离心转速为3000～5000转/分钟，离心时间为10～20分钟，低温保存温度不低于-5℃。
作为优选，超滤步骤中，超滤使用的滤膜截留分子量为10KD。
作为优选，无菌灌装步骤中，过滤孔径为0.22μm。
本发明的有益效果在于：
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：1、本发明所采集的原料血来自于刚出生的出生后14小时以内采集的小牛血液，比普通工艺的小牛血液中的活性成分含量更高；2、本发明采用纯物理手段对小牛血进行逐步处理，从而得到了小牛血去蛋白提取物中间体，不仅步骤少，生产工艺流程短，更由于采用纯物理手段，完全保证了小牛血去蛋白提取物中间体的纯净性，提高了小牛血的利用价值。
具体实施方式：
实施例1：一种小牛血去蛋白提取物中间体的生产方法，包括：
a、取血：在清洁环境下采集小牛全血；
b、分离：将小牛全血恒温放置至全血中的血清和血块自然分离后，离心去除血清后得到血块，并将血块低温冷冻保存；
c、碾磨：将冷冻的血块化冻至常温后加入纯化水，混合均匀后得到混合液；
d、变性：将混合液加入反应罐中升温变性，变性后冷却至50℃以下再进行离心得到离心液，将离心液冷冻保存；
e、超滤：将离心液化冻后进行超滤，收集得到超滤液，并将超滤液低温冷冻保存；
f、无菌灌装：将超滤液化冻后，通过除菌过滤后灌装，得到小牛血去蛋白提取物中间品，并将小牛血去蛋白提取物中间品至2～8℃保存。
取血步骤中，血液采集自出生1小时以内未进食的新生小牛，采集环境应在超净工作台内。
分离步骤中，恒温放置温度控制在25℃，放置时间为30分钟，离心转速为2000转，离心时间10分钟，低温保存温度不低于-5℃。
碾磨步骤中，混合时采用碾磨机进行混合，碾磨机转速为2000转/分钟，每碾磨50L混合液需要碾磨10分钟，加入的纯化水的体积与血块的体积比为3：1。
变性步骤中，升温温度为80±2℃，升温时间保存时间为30分钟，离心条件为40±2℃，离心转速为3000转/分钟，离心时间为10～20分钟，低温保存温度不低于-5℃。
超滤步骤中，超滤使用的滤膜截留分子量为10KD。
无菌灌装步骤中，过滤孔径为0.22μm。
表1、实施例1生产的小牛血去蛋白提取物的相关性状检测
实施例2：一种小牛血去蛋白提取物中间体的生产方法，包括：
a、取血：在清洁环境下采集小牛全血；
b、分离：将小牛全血恒温放置至全血中的血清和血块自然分离后，离心去除血清后得到血块，并将血块低温冷冻保存；
c、碾磨：将冷冻的血块化冻至常温后加入纯化水，混合均匀后得到混合液；
d、变性：将混合液加入反应罐中升温变性，变性后冷却至50℃以下再进行离心得到离心液，将离心液冷冻保存；
e、超滤：将离心液化冻后进行超滤，收集得到超滤液，并将超滤液低温冷冻保存；
f、无菌灌装：将超滤液化冻后，通过除菌过滤后灌装，得到小牛血去蛋白提取物中间品，并将小牛血去蛋白提取物中间品至2～8℃保存。
取血步骤中，血液采集自出生2小时未进食的新生小牛，采集环境应在超净工作台内。
分离步骤中，恒温放置温度控制在35℃，放置时间为30分钟，离心转速为4000转，离心时间20分钟，低温保存温度不低于-5℃。
碾磨步骤中，混合时采用碾磨机进行混合，碾磨机转速为3000转/分钟，每碾磨50L混合液需要碾磨10分钟，加入的纯化水的体积与血块的体积比为3：1。
变性步骤中，升温温度为80±2℃，升温时间保存时间为30分钟，离心条件为40±2℃，离心转速为5000转/分钟，离心时间为10～20分钟，低温保存温度不低于-5℃。
超滤步骤中，超滤使用的滤膜截留分子量为10KD。
无菌灌装步骤中，过滤孔径为0.22μm。
表2、实施例2生产的小牛血去蛋白提取物的相关性状检测
实施例3：一种小牛血去蛋白提取物中间体的生产方法，包括：
a、取血：在清洁环境下采集小牛全血；
b、分离：将小牛全血恒温放置至全血中的血清和血块自然分离后，离心去除血清后得到血块，并将血块低温冷冻保存；
c、碾磨：将冷冻的血块化冻至常温后加入纯化水，混合均匀后得到混合液；
d、变性：将混合液加入反应罐中升温变性，变性后冷却至50℃以下再进行离心得到离心液，将离心液冷冻保存；
e、超滤：将离心液化冻后进行超滤，收集得到超滤液，并将超滤液低温冷冻保存；
f、无菌灌装：将超滤液化冻后，通过除菌过滤后灌装，得到小牛血去蛋白提取物中间品，并将小牛血去蛋白提取物中间品至2～8℃保存。
取血步骤中，血液采集自出生14小时未进食的新生小牛，采集环境应在超净工作台内。
分离步骤中，恒温放置温度控制在30℃，放置时间为30分钟，离心转速为3000转，离心时间15分钟，低温保存温度不低于-5℃。
碾磨步骤中，混合时采用碾磨机进行混合，碾磨机转速为2500转/分钟，每碾磨50L混合液需要碾磨10分钟，加入的纯化水的体积与血块的体积比为3：1。
变性步骤中，升温温度为80±2℃，升温时间保存时间为30分钟，离心条件为40±2℃，离心转速为4000转/分钟，离心时间为15分钟，低温保存温度不低于-5℃。
超滤步骤中，超滤使用的滤膜截留分子量为10KD。
无菌灌装步骤中，过滤孔径为0.22μm。
表3、实施例3生产的小牛血去蛋白提取物的相关性状检测
以上所述仅为本发明的较佳实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。