技术领域：本发明涉及用于降低支气管肺泡灌洗液(BALF)和血液/血清中的细胞因子白细胞介素-17(IL-17或IL-17A)水平的制剂、方法和试剂盒，涉及17α-己酸羟孕酮(17-OHPC)的用途。吸入17-OHPC可以治疗IL-17细胞因子介导的自体免疫性和自身炎症性疾病。
本发明涉及使用17-OHPC抑制肺内p38促分裂原活化蛋白激酶(MAPK或RK或细胞分裂素特异性结合蛋白)的磷酸化(活化)的制剂、方法和试剂盒。吸入17-OHPC可以治疗涉及抑制p38MAPK介导的磷酸化的相关疾病。
本发明涉及与吸入17-OHPC连同其他药物，例如使用糖皮质激素(GC)，例如布地奈德(BUD)有关的制剂、方法和试剂盒。这种17-OHPC和GC的组合治疗可以用于治疗IL-17细胞因子介导的自体免疫性和自身炎症性疾病，并且相关疾病与抑制p38MAPK介导的磷酸化有关。
本发明可用于逆转GC不敏感性或增强GC敏感性以治疗一种或多种GC不敏感性相关疾病或病症。
结合附图从下面的描述将会理解本发明所特有的新颖特征，既指其结构，也指其操作方法，及其进一步的目的和优点，其中，本发明的优选实施例通过举例说明。然而，应该明确理解的是，附图仅用于说明和描述的目的，并不意图作为本发明的限制的定义。
一般背景和现有技术水平：GC信号传导机制具有“显著的复杂性和情境依赖性”，其中糖皮质激素不敏感性的作用机制在不同的细胞类型和环境中会有变化。Keenan C.R.等人，药理学与治疗学2015，150：81-93。例如，哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)的炎症的治疗是不同的，因为它们涉及不同(尽管重叠)的细胞类型和不同的信号传导网络。同上。这种差异导致对GC治疗的不同反应，其中“在大多数哮喘患者中，吸入糖皮质激素治疗可以很好地控制炎症，而对COPD炎症却行不通。”同上。
先天性糖皮质激素抵抗是一种罕见的疾病，正如业内著名的内分泌专家乔治·P·库洛斯博士所描述的。“受影响的患者缺乏库兴样特征，皮质醇和ACTH水平升高(补偿糖皮质激素受体功能下降)，以及抵抗地塞米松对皮质醇水平的抑制。”此外，“家族性糖皮质激素抵抗的治疗包括使用具有最小盐皮质激素活性的高剂量合成糖皮质激素(例如，地塞米松1-3mg/天)，以抑制ACTH的血浆水平，并最终抑制具有雄激素和盐皮质激素活性的肾上腺类固醇的分泌。”http：//emedicine.medscape.com/article/920713-differential.不论抵抗是否来自先天性疾病，低反应性患者所需的高剂量GC意味着产生非常严重的副作用的高风险。Yang N.等人，类固醇，2012，77(11)：1041-1049。
2015年，基南等人，糖皮质激素受体(GR)抵抗的原因因细胞和组织而异，并且是器官系统特异性的。由于多种GR异构体的存在，“每种GR信号传导机制可以同时发生，相互独立或相互依赖”，导致对细胞功能的广泛影响。同上。此外，“GR的一种或另一种分子作用可以在不同的细胞环境下起主导作用。”同上。意思是，相同的细胞类型可以在不同的细胞环境下有不同的反应，甚至根据不同的基因组表达，相同细胞内的不同基因可以被激活或抑制。同上。
已经证实通过IL-17和IL-23细胞因子对GR-β的上调会在外周血单核细胞(PMBC)中诱导糖皮质激素抵抗并导致炎症反应。Vazquez-Tello A.等人，临床免疫学杂志，2013，33：466-478。IL-17显著增加GR-β表达，与显著降低GR-α表达而不影响GR-β的IL-2/IL-4不同。同上。此外，IL-17与诱导人类气道上皮中糖皮质激素不敏感性有关。Zijlstra G.J.等人，欧洲呼吸杂志，2012年2月；39(2)：439-45。
研究显示，“GC不敏感性哮喘是由IL-2和IL-4的高水平表达引起的，这导致[GR]亲和力降低和T细胞对GC的反应性降低。”Leung D.Y.M.等人，实验医学期刊，1997年11月3日；186(9)：1567-1574。患有“GC不敏感性哮喘”的患者在PBMC GR配体结合亲和力方面具有可逆的缺陷，PBMC GR配体结合亲和力可以通过加入IL-2和IL-4来维持。同上。正常外周血T细胞与IL-2和IL-4的组合治疗将GR配体结合亲和力降低至糖皮质激素不敏感性哮喘指示的水平。同上。此外，糖皮质激素不敏感性气道T细胞比糖皮质激素敏感性气道T细胞具有明显更高的IL-2和IL-4基因表达水平。同上。
IL-77家族和来源。白细胞介素17(IL-17)细胞因子家族包含六名成员：IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F。Jin W.等人，新发微生物和感染，2013年9月；2(9)：e60。其中，IL-17A是最好的表征，因此通常被称为IL-17。同上。IL-17细胞因子通过靶向称为IL-17RA、IL-17RB、IL-17RC、IL-17RD和IL-17RE的细胞表面受体介导其作用。这些受体通常是异二聚体，通过将IL-17RA作为亚基共享相似性。IL-17主要由称为Th17细胞的活化CD4+T细胞表达。Park H.等人，自然免疫学，2005年11月；6(11)：1133-41。或者，IL-17可以由已显示定位于粘膜组织例如肠、皮肤和肺的γδT细胞表达。Supra Jin W.等人，IL-17也可以通过在肠固有层中发现的T细胞亚型先天性Th17(iTh17)αβT细胞产生，还可以由参与先天性免疫应答的替代细胞如淋巴组织诱导细胞、自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞、巨噬细胞和潘氏细胞产生。Supra Jin W.等人，IL-17受体(IL-17R)家族包含5个受体亚基，其中IL-17RA是最大的成员，并且是IL-17介导的信号转导所必需的。Pinart M.等人，公共科学图书馆期刊，2013，8(3)：1-8。IL-17从气道上皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞诱导促炎性细胞因子和其他试剂如CXCL-8的释放，从而协调中性粒细胞炎症和活性氧释放。同上。
IL-17在免疫中的作用。最近，IL-17途径扩大了其在临床自体免疫性和自身炎症性疾病中的应用。Konya C.等，细胞因子，已接受发表，接受日期2015年1月8日。IL-17诱导嗜中性气道炎症。Allen J.E.等人，免疫学新观点，2015，34：99-106。IL-17激活单核吞噬细胞并聚集嗜中性粒细胞，从而诱导上皮抗微生物反应，防止细胞外细菌和真菌。同上。IL-17介导的自体免疫性疾病的一个例子是当Th17细胞因子分泌通过IL-17激活气道上皮细胞以分泌CXCL8(嗜中性粒细胞的化学引诱物)，并且IL-17导致促进肺损伤的嗜中性粒细胞的积聚。Supra，Allen J.E等人。
IL-17通过在气道平滑肌细胞中诱导RhoA来增加收缩性而在呼吸道平滑肌中起作用。Kudo M.等人，自然医学，2012，4；18(4)：547-54。由此产生的过强收缩导致气道变窄。此外，IL-17会通过增加平滑肌细胞增生和胶原沉积来诱导气道重塑。Vroman，H.等人，免疫生物学，2015，220：254-261。由平滑肌过强收缩和气道重塑造成的与肺气流减少有关的疾病包括COPD、闭塞性支气管炎、支气管扩张症、囊性纤维化、结节病、嗜酸性肉芽肿、呼吸道细支气管炎间质性肺病和哮喘。
在严重哮喘和COPD病例中观察到IL-17水平升高。Caramori，G.等人，国际慢性阻塞性肺疾病杂志，2014，9：397-412。然而，由臭氧诱导的肺气肿和肺部炎症不依赖于IL-17。Supra Pinart M.等人，Kang M.J.等人进一步举例证明了与COPD有关的气道和血管重塑(例如气道和血管中的组织纤维化)响应于IL-17，IL-17反过来由IL-18诱导。Kang MJ.等人，美国呼吸和重症监护医学杂志，2012年6月1日；185(11)：1205-1217。“刺激COPD中的血管改变和重塑[是][香烟烟雾]或炎性介质的直接后果”和“IL-18是通过其诱导IL-17A的能力介导这些反应的血管重塑的有效刺激剂”。同上。因此，IL-17诱导“粘液化生、气道纤维化和血管重塑”，其特征在于COPD的病理学特征。同上。
慢性肺移植功能障碍，尤其是闭塞性细支气管炎(OB)是肺移植成功的主要限制因素。Suzuki，H.等人，免疫学杂志，2013，191：4431-4439。数据显示，IL-17下调气道上皮中的补体调节蛋白(CRP)，其转化为补体级联的激活和随后的补体激活，导致OB发病。同上。
IL-17信号传导与哮喘的发展和持续有关，表明阻断IL-17受体信号传导的靶向策略可能对哮喘治疗有益。Morishima Y.等人，临床与发育免疫学，2013，609395：1-9。进行了一项大型的临床试验来确定人类抗IL-17受体A单克隆抗体brodalumab在定期吸入糖皮质激素的控制不充分的中度至重度哮喘患者中的疗效和安全性。Busse W.W.等人，美国呼吸和重症监护医学杂志，2013，188(11)：1294-1302。
IL-17也与其他疾病有关。B细胞活化因子对博来霉素和IL-17介导的实验性肺纤维化极为重要。Francois A.等人，自身免疫性杂志，2015，56：1-11。在骨膜素(促纤维化因子)介导的胶原沉积中存在促炎性TNFα和IL-17的协同作用，其在肝纤维化中具有潜在的作用。Amara S.等人，分子免疫学，2015，64：26-35。由Qiao等人所做的近期的研究表明来氟米特的活性代谢物A77 1726通过Akt依赖性机制抑制在淋巴结中产生双阴性T细胞的IL-17，从而减弱了狼疮性肾炎的广义自体免疫性特征。Qiao G.等人，临床免疫学，2015，157(2)：166-174。
而且，免疫力上调的特征是在患有T1D的儿童中抗CD3和抗CD28Th17细胞和分离的记忆CD4细胞中IL-17的分泌和表达增加。Honkanen J.等人，免疫学杂志，2010，185(3)：1959-67。该研究还表明，IL-17诱导介导对胰岛细胞体外有害作用的炎症和促凋亡反应。同上。此外，IL-17与糖尿病相关的并发症，如糖尿病肾病有关。Vasanthakumar R.等人，细胞因子，2015，72(1)：109-112；KimY.G.等人，美国肾脏病学杂志，2012，36：472-477。通过中和抗体抑制IL-17减轻了胰岛炎症，并且阻止了10周龄NOD小鼠中自体免疫性糖尿病的发展。Emamaullee J.A.等人，糖尿病，2009，58：1302-1311。
自体免疫性脑脊髓炎是与多发性硬化有关的复杂疾病，表现出包括炎症、脱髓鞘、轴突损失、神经胶质增生和视神经炎的病理学特征；视神经的炎症和脱髓鞘。与实验性自体免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中的脑和脊髓相比，视神经中IL-17mRNA水平最高。Knier B.等人，自身免疫性杂志，2015，56：34-44。在视神经内，有大量产生IL-17的CD4(+)T细胞致力于Th17转录程序。同上。经证明，通过抗IL-17抗体中和IL-17完全防止了视网膜神经纤维层以及内丛状层的恶化。同上。
先兆子痫也与较高水平的产生IL-17的Th17细胞相关，其中阻断IL-17使得血压和氧化应激降低，并缓解宫内生长受限。Cornelius D.C.等人，妊娠高血压，2015，5(1)：1。在精神分裂症的发病机制中，与对照相比，在精神分裂症患者中发现IL-17水平显著且一致的增加，突出炎症在神经疾病中的作用，Kissi Y.E.等人，精神病学研究，2015，225(1-2)：58-63。关于肠易激综合征(IBD)，研究显示IL-17对患有IBD的孕妇具有免疫调节作用。Seow C.H.等人，Gas.2015，148(4)，S1 454-455。
此外还表明活化p38MAPK导致GR-α磷酸化，其停止核转位，导致激素抵抗。Boardman C.等人，肺病药理学与治疗学.2014，29：129-43。重度哮喘患者在暴露于GCs后可减少GR的核转位，减少PMBC中糖皮质激素反应元件(GRE)的结合，这可能是GR磷酸化所致。同上。
研究还表明，卵巢激素，即天然孕酮(P4)通过IL-23R和Let-7f介导的途径，在严重哮喘病人中增加由Th17细胞产生的IL-17。Newcomb D.C.等人，过敏及临床免疫学杂志，2015年8月1日，pii：S0091-6749(15)00840-4。因此，表明P4只能加重IL-17介导的疾病。
IL-17在介导上皮和粘膜屏障上的细菌和真菌病原体的清除方面具有独特的作用。特别地，已经证明IL-17参与了抗细菌病原体，例如金黄色葡萄球菌、单核细胞增生利斯特氏菌、肺炎克雷伯氏菌、鼠柠檬酸杆菌、分枝杆菌属和真菌如卡氏肺囊虫和白色念珠菌的先天免疫反应。Supra Jin W.等人，IL-17通过诱导促炎细胞因子和趋化因子聚集先天免疫细胞如嗜中性粒细胞来介导炎症和病原体清除。例如，IL-17可以“诱导产生促炎性细胞因子(IL-6，粒细胞集落刺激因子和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)”并上调“包括趋化因子(C-X-C基序)配体1(CKCL1)、趋化因子(C-C基序)配体2(CCL2)、CCL7、CCL20和基质金属蛋白酶3和13的几个细胞因子”，Supra Jin W.等人，p.3。
此外，研究显示IL-17基因敲除的小鼠(//17a-/-)具有降低的促炎细胞因子和趋化因子产生水平。Aujla S.J.等人，自然医学，2008年3月；14(3)：275-281。与野生型小鼠相比，//17a-/-小鼠具有“支气管肺泡灌洗(BAL)液中的G-CSF和CXCL1的量显著降低”以及“IL-6和CCL3丰度减少”。同上。p.4，第二段。另外，//17a-/-小鼠缺乏对白色念珠菌全身感染的适当反应的能力，并且极易感染。Saijo S.等人，免疫力，2010 32(5)：681-91。在STAT3基因缺陷的人类中，由于IL-17不足，对诸如肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌等病原体的易感性也较高。Milner J.D.等人，自然，2008；452：773-776。
IL-17，慢性炎症和自体免疫性疾病。IL-17失调可能不幸导致细胞因子和趋化因子的过度表达，造成过度的促炎反应和慢性炎症。例如，IL-17已经与许多炎症性和自身炎症性疾病如自体免疫和1型糖尿病相关联(Emamaullee J.A.等人，糖尿病，2009，58：1302-1311和Kudo等人，自然医学，2012，4；18(4)：547-54)，末期肾病(KimY.G.等人，美国肾脏病杂志，2012，36：472-477)，肺移植后的闭塞性细支气管炎(Suzuki H.等人，免疫学杂志，2013，191：4431-4439)，哮喘(Supra Busse W.W.等人)，脑脊髓炎(Knier B.等人，自身免疫性杂志，2015，56：34-44)，肺纤维化(Francois A.等人，自身免疫性杂志，2015，56：1-11)，肝纤维化(Suneetha Amara S等人，分子免疫学，2015，64：26-35)，慢性阻塞性肺病(Caramori，G.等人，国际慢性阻塞性肺疾病杂志，2014，9：397-412)，先兆子痫(Cornelius D.C.等人，妊娠高血压，2015，5(1)：17)，实质性肺纤维化(Martinu T.等人，心肺移植杂志，34：4，2015，175-6)，动脉粥样硬化(Gong F.等人，细胞免疫学，已接受发表，已接受手稿，2015年5月29日可在网上获取)，类风湿性关节炎(Konya等人，细胞因子，已接受发表，接受日2015年1月8日)，系统性红斑狼疮(同上)，牛皮癣(同上)，狼疮肾炎(Qiao G等人，临床免疫学，2015，157(2)：166-174)，炎症性肠病(Fujino S.等人，肠病学，2003；52：65-70)，克罗恩氏病(HueberW.等人，肠病学，2012；61(12)：1693-700)，多发性硬化症(Gold R等人，美国病理学杂志，2008；172(1)：8-10)，杜兴氏肌营养不良(De Pasquale L等人，神经病学，2012 78(17)：1309-14)，以及精神障碍如精神分裂症和抑郁症(Potvin S.等人，精神病学，2008；63(8)：801-8和Roy等，情感障碍杂志，142Suppl：S8-21)。
IL-17作为炎性疾病的治疗靶点。由于IL-17在趋化因子和细胞因子调节以及先天免疫反应中的广泛参与，IL-17仍然是旨在治疗各种促炎和自体免疫性疾病的主要药物靶点。例如，抗IL-17的人源化单克隆抗体，例如苏金单抗(IgG1)、艾克司单抗(IgG4)和Broadalumab(IgG2)已经在临床上测试其治疗类风湿性关节炎、克罗恩氏病、牛皮癣、银屑病关节炎和强直性脊柱炎的疗效。Tsoukas A.等人，B细胞分子生物学(第2版)，2015，p.527-539。与安慰剂治疗组相比，苏金单抗通过“靶向抑制促炎细胞因子IL-17A”，“显著降低[牛皮癣、类风湿性关节炎和非感染性葡萄膜炎]的疾病活性”。HueberW.等人，科学转化医学，2010；2(52)：52ra72。2015年早些时候FDA批准苏金单抗用于牛皮癣的治疗，以及该药物在日本同时被批准用于牛皮癣和关节炎的治疗，这进一步表明了开发IL-17靶向治疗剂的潜在和临床必要性。美国食品和药物管理局。
2015-01-21；诺华公司，2014-12-26。
IL-17作为癌症的治疗靶点。普遍认为慢性炎症在癌症发生和发展中起重要作用。Mantovani A.等人，自然，2008年7月24日；454(7203)：436-44。不出所料，促炎症细胞因子IL-17的表达水平在几种人类肿瘤中出现上升，如卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、肝细胞癌、食道癌、胃癌和[结直肠癌]。Wu D.等人，临床与发育免疫学，2013；2013：436307。描述IL-17参与肿瘤发展的机制包括通过诱导血管生成因子如PGE1、PGE2、VEGF、CXCL-1、CXCL-5、CXCL-6、CXCL8、MMP-2和MMP-9(同上)来抑制抗肿瘤反应以及促进血管生成。因此，通过例如中和、降低其表达或阻断下游信号传导途径来靶向IL-17已经被用作癌症治疗的一种方法。例如，“IL-17介导的炎症是炎症介导促进肿瘤发展的重要机制”和在皮肤中的发展。He D.等人，公共科学图书馆期刊，2012；7(2)：e32126，IL-17是二甲基苯并蒽(DMBA)和12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)在皮肤中诱导癌变所必需的。同上。而且，中和IL-17会显著抑制DMBA/TPA诱导的皮肤肿瘤的发展。同上。同样，Ortiz M.L.等人证明“阻断IL-17阻止了[未成熟]骨髓细胞引起的[皮肤]肿瘤形成的增加”。Ortiz ML等人，实验医学杂志，2015年3月9日；212(3)：351-67。此外还显示IL-17参与肠肿瘤的发展，并且抗IL-17单克隆抗体治疗减少野生型小鼠的盲肠中的肿瘤尺寸。Oshiro K等人，免疫生物学，2012；217(1)：54-60.
p38的背景介绍。促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)是参与导致多种细胞反应和信号传导刺激的磷酸化级联的多种细胞网络中的蛋白质。它们的激活可能是由于各种应激，“如炎症性细胞因子、病原体、生长因子、紫外线辐射、渗透性应激和各种形式的氧化应激”以及DNA损伤。Chung K.F.，胸腔，2011；139(6)：1470-9。MAPKs的p38家族包括保守的脯氨酸导向的丝氨酸-苏氨酸MAPKs，其参与将细胞外信号连接到细胞内调节机制的过程。已经确定了p38的四种异构体：p38a、p38β、p38γ和p38δ，分别由MAPK14、MAPK11、MAPK12和MAPK13基因编码。通常通过环境应激和细胞因子响应炎症信号而发生p38的激活。更具体地说，通过保守的Thr-Gly-Tyr基序的双重磷酸化作用，由上游MAPK激酶(MKKs)或MAPK激酶(MEKKs)介导p38的激活，从而允许ATP结合以及随后的磷酸转移至下游靶蛋白。同上。然而，p38也可能在细胞周期调控、诱导细胞死亡、分化和衰老中起作用。Coulthard L.R.等人，分子医学趋势，2009年8月；15(8)：369-379。P38也被证明在MKK-独立的机制中自磷酸化。Mittelstadt P.R.等，生物化学杂志，2009；284(23)：15469-15474。
有许多p38异构体激活的下游激酶。例如，p38α和β激活MAPK活化蛋白激酶(MAPKAPK2/3)以及多种转录因子、细胞骨架蛋白、转译成分和酶。而γ和6同工酶已被证明对于“靶向转录因子如激活转录因子-2、细胞外信号调节样激酶和血清应答因子辅助蛋白1”更具特异性，Supra Chung K.F.等人。活性p38还诱导炎性细胞如嗜中性粒细胞、干细胞和嗜酸性粒细胞的聚集和迁移，并被提出“改变响应于氧化应激的皮质激素响应”。同上。而且，“重度哮喘或COPD患者的巨噬细胞和重度哮喘患者的上皮细胞中活性p38水平增加，并且可能导致皮质类固醇不敏感性。”同上。
p38在糖皮质激素反应中的作用。p38参与改变糖皮质激素反应性。例如，“重度哮喘患者的肺泡巨噬细胞表现出与可能由[MAPK磷酸酶1(MKP-1)]的诱导性受损导致的p38MAPK活化作用增加相关的CS不敏感性”。Bhavsar P.等，胸腔，2008年9月；63(9)：784-90。p38可能通过直接抑制GR的磷酸化，促进组蛋白H3磷酸化和减少皮质类固醇诱导MKP-1导致糖皮质激素不敏感性。Supra Chung K.F.等人。通过p38MAPK活化的糖皮质激素敏感性的降低可以通过NF-B的过度磷酸化而发生，这导致与GR的相互作用降低。同上。
p38在“几种慢性细胞因子依赖性炎症性疾病，包括类风湿性关节炎、克罗恩氏病、牛皮癣和哮喘”中起着一致的作用。Coulthard L.R.等人，分子医学趋势，2009年8月；15(8)：369-379。在哮喘和COPD中，糖皮质激素不敏感性的特征在于“地塞米松抑制从单核细胞和巨噬细胞释放促炎细胞因子的作用减弱”。Supra Chung K.F.等人，Irusen E.等人证明了由于同时暴露于IL-2和IL-4两者而引起的PBMCs中的糖皮质激素不敏感性可以通过用p38抑制剂SB203580抑制p38MAPK来逆转。Irusen E.等人，过敏及临床免疫学杂志，2002年4月；109(4)：649-57。此外还表明活性p38水平的增加会促进导致心血管疾病的心肌细胞功能障碍，以及有助于神经退行性疾病如阿尔茨海默病、亨延顿舞蹈病、肌萎缩侧索硬化、多发性硬化和帕金森病。Supra Coulthard L.R.等人。糖尿病和与糖尿病有关的疾病(如神经病和肾病)的发展也显示与活性p38水平的增加有关。同上。
Roussel等人证实IL-17“通过p38MAPK途径”增加肺微血管内皮细胞(LMVEC)产生的CXCL8。Roussel等人，免疫学杂志，2010年4月15日；184(8)：4531-7。
靶向p38的疗法。因此抑制剂对p38MAPK表达的下调、抑制或降低可能“不仅作为其自身的抗炎剂，而且还作为恢复皮质类固醇反应性的药剂”。Supra Irusen E.等人。不幸的是，有报告称p38MAPK抑制剂，如SB203580、BIRB796、SD282、VX745、SCI0469、SD0006和SB681323靶向其他非p38激酶和蛋白质，这可能会引起诸如肝脏毒性等副作用。Supra Chung KF等人。需要对肺部局部施用p38抑制剂，因为其“使得在疾病一侧具有较高的局部浓度，而较少量用于全身循环，因此具有较少的副作用”。Supra Irusen E.等人。
仍然需要治疗糖皮质激素不敏感性，特别是哮喘和COPD。本发明的一个目的是提供一种通过抑制IL-17表达和p38表达来治疗自身炎症性病症的方法。
技术实现要素：
本发明涉及恢复皮质类固醇敏感性或逆转糖皮质激素不敏感性或增强糖皮质激素敏感性的方法。
本发明的一个实施例涉及给患有糖皮质激素不敏感性相关病症的受试者施用包含类固醇激素的药物组合物。糖皮质激素不敏感性相关病症包括一系列皮质激素抵抗疾病和用类固醇治疗的免疫性炎性疾病，当治疗对皮质类固醇无效或不耐受或依赖或不反应或难治或其组合时。
本发明的一个实施例涉及给患有自体免疫性和自身炎症性相关病症的受试者施用包含类固醇激素的药物组合物。自体免疫性和自身炎症性病症包括一系列其中细胞因子和趋化因子导致过度促炎反应和慢性炎症的病症。过度的促炎和慢性炎症病症包括但不限于1型糖尿病、晚期肾病、肺移植后闭塞性细支气管炎、哮喘、重度哮喘、脑脊髓炎、肺纤维化、肝纤维化、慢性阻塞性肺病、先兆子痫、实质肺纤维化、动脉硬化、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、牛皮癣、狼疮肾炎、炎症性肠病、克罗恩氏病、多发性硬化症、杜兴氏肌营养不良症和精神障碍如精神分裂症和抑郁症。
本发明的一个实施例包括涉及施用用于治疗导致过度促炎和慢性炎症的糖皮质激素不敏感性的17-OHPC的制剂、方法和试剂盒。
本发明的另一个实施例包括涉及施用用于治疗导致过度促炎和慢性炎症的糖皮质激素不敏感性的17-OHPC和其他药物(例如布地奈德)的组合物的制剂、方法和试剂盒。
本发明的另一个实施例包括涉及施用17-OHPC以抑制肺中p38MAPK磷酸化(活化)的制剂、方法和试剂盒。
本发明的另一个实施例包括涉及施用17-OHPC和其它药物(例如布地奈德)的组合物以抑制肺中p38MAPK的磷酸化的制剂、方法和试剂盒。
本发明的一个优选实施例包括涉及施用17-OHPC以降低
BALF和血液/血清中的细胞因子IL-17水平，从而治疗自体免疫性和自身炎症性疾病的制剂、方法和试剂盒。
本发明的一个优选实施例包括涉及施用17-OHPC以降低细胞因子IL-17水平，从而治疗哮喘、重度哮喘或COPD的制剂、方法和试剂盒。
本发明的另一优选实施例包括涉及施用17-OHPC和其他药物(例如布地奈德)的组合物以降低细胞因子IL-17水平，从而治疗自体免疫性和自身炎症性疾病的制剂、方法和试剂盒。
本发明的另一优选实施例包括涉及施用17-OHPC和其他药物(例如布地奈德)的组合物以降低细胞因子IL-17水平，从而治疗哮喘、重度哮喘或COPD的制剂、方法和试剂盒。
可以理解的是，上述实施例是作为本发明的代表性实施例而提供的，并不构成对本发明范围的限制。
附图说明
图1是BALF和血清中IL-17水平的图示。
图2是肺组织中磷酸化p38MAPK/p38MAPK比率的图示。
图3是治疗组的肺组织中GR蛋白表达相对于肌动蛋白的比率的图示。
图4是治疗组的肺组织中IL-17蛋白表达相对于肌动蛋白的比率的图示。
图5是治疗组的肺结构的图示。
图6是处理组的肺功能的图示。
定义
本文所用的术语“糖皮质激素不敏感性”旨在包括但不限于皮质类固醇抗性、皮质类固醇依赖性、皮质类固醇难治性反应、皮质类固醇不耐受性和其他类型的皮质类固醇无效性。已经认识到几种不同的分子机制有助于降低糖皮质激素的抗炎作用。不同的炎症性疾病可能具有相似的分子机制，单一疾病可能具有异质性机制。
对皮质类固醇的抗炎作用的“皮质类固醇抗性”被定义为使用高剂量糖皮质激素治疗后没有临床改善。
“皮质类固醇依赖性”被定义为最初对皮质类固醇有反应但在停药或剂量逐渐减少时迅速复发的病症。
“皮质类固醇难治性反应”被定义为对适当的诱导剂量的皮质类固醇没有反应的病症。它包括对糖皮质激素治疗相对或完全难治的反应，并且通常需要通过附加治疗来控制。
其他类型的“皮质类固醇无效性”包括需要非常高剂量的治疗，“难以治疗”和“作用不大”或严重病例，并且体外和体内反应性受损。
“皮质类固醇不耐受性”被定义为治疗毒性和/或出现与皮质类固醇相关的不良事件，如机会感染和骨质流失的风险。
“糖皮质激素敏化剂”被定义为具有恢复皮质类固醇敏感性，增强糖皮质激素敏感性，逆转糖皮质激素不敏感性和防止糖皮质激素敏感性丧失的功能的药物制剂和产品，用于治疗、预防或改善与糖皮质激素不敏感性相关的疾病或病症的一种或多种症状(例如，皮质类固醇依赖性或皮质类固醇抗性或对皮质类固醇无反应或不耐受)。使用糖皮质激素敏化剂的治疗效果包括但不限于皮质类固醇依赖性患者的类固醇样效应，对皮质类固醇的更好的反应性或耐受性，通过使用较低剂量的皮质类固醇即可起作用，防止个体由于抗原刺激、感染、运动或刺激物而发生难治性反应、抗性或急性发作的风险，获得最佳的免疫功能，当类固醇给药逐渐减少或停用时，或在长期服用皮质类固醇之后，受试者或患者反应更容易，降低发生皮质类固醇相关的不良事件，例如机会感染、骨质流失、病理性骨折、糖尿病、白内障及其组合的风险。
本文所用的术语“孕酮”或“P4”是指具有系统名称为孕甾-4-烯-3，20-二酮的化合物，其化学文摘社(CAS)号为57-83-0。
本文所用的术语“17α-己酸羟孕酮”或“17-OHPC”是指具有系统名称为17-[(1-氧代己基)氧基]-孕甾-4-烯-3，20-二酮的化合物，其CAS注册号为630-56-8。
除非另有说明，否则本文使用的术语“白细胞介素-17”或“IL-17”是指细胞因子蛋白“IL-17A”。其中“IL-17A”是指本领域已知的任何IL-17A蛋白质序列的蛋白质。
本文所用的术语“p38”是指本领域已知的任何p38异构体，即p38α(MAPK14)、p38β(MAPK11)、p38γ(MAPK12/ERK6)或p38δ(MAPK13/SAPK4)，除非另有特别说明。
本文所用的术语“R-基团”是指连接到胆固醇烃环骨架上的C-17位置的碳、氢、氧、氮和/或卤素原子的任意组合。
本文所用的术语“患者”是指接受或登记接受医疗护理或治疗的人。
本文所用的术语“重度哮喘”或“皮质类固醇抗性哮喘”或“难治哮喘”是指对吸入或全身性皮质类固醇没有反应或反应不佳，导致皮质类固醇在控制哮喘中的有效性降低的哮喘症状和急性发作。正如Bhavsar P.等人所定义的，皮质类固醇抗性哮喘中的次优反应被定义为服用泼尼松龙(30-40mg/天)14天后1秒钟基线用力呼气量(FEV1)小于15％，同时与皮质类固醇反应性哮喘患者相比，显示对吸入的β2激动剂具有显著的气道反应性，皮质类固醇反应性哮喘患者在接受泼尼松龙治疗后其FEV1提高大于25％。Supra Bhavsar P.等人。皮质类固醇抗性哮喘患者也表现出“地塞米松对外周血单个核细胞(PMBC)中性粒细胞活化因子的增殖反应或释放的抑制作用降低”，同上。此外，重度哮喘患者的活性p38水平比非重度哮喘患者高。同上。此外，“在重度哮喘患者和吸烟的哮喘患者以及所有COPD和囊性纤维化患者中发现“糖皮质激素反应性降低”。
Barnes P.J.，类固醇生物化学和分子生物学杂志，2010年5月31日；120(2-3)：76-85。轻度间歇性哮喘可由β2激动剂单独控制，而中度至重度哮喘可能需要使用高剂量吸入或口服皮质类固醇。Stirling R.G.等人，过敏期刊，2001∶56∶825-840。
本文所用的术语“吸入”是指作为药物组合物通过呼吸道的给药途径的吸入，其中所述药物组合物可以优选地，例如，通过气溶胶喷雾剂、粉末混合物、气体或加压包装或雾化器或吸入器中的蒸气进行给药。
具体实施方式
根据各种实施例，使用包含17-OHPC的药物制剂的治疗方法已被证实在两种特定机制中是有效的：降低IL-17水平和抑制p38MAPK活性。这两种机制在治疗IL-17和p38MAPK介导的糖皮质激素抵抗中都可以起到治疗作用。鉴于之前使用P4的研究产生了相反的结果，这一结果是令人惊讶的。
P4和17-OHPC都被归类为孕激素。P4是生物体内源性的天然孕激素，可以认为是属的化学等价物。P4是在卵巢、睾丸、胎盘和肾上腺内合成的。而17-OHPC是17α-羟孕酮(17-OHP)和己酸衍生的孕酮(合成孕激素)。
结构上，孕酮(分子量(MW)为314.46g/mol，熔点为129.5℃)和17-OHPC(MW为428.6g/mol，熔点为119℃)和孕酮衍生物和代谢物，例如但不限于，17-羟孕酮、19-去甲孕酮、美屈孕酮、17-OHPC、己酸羟孕酮、地美孕酮、地屈孕酮、甲孕酮、普美孕酮、甲地孕酮、曲美孕酮、氯地孕酮、己酸孕诺酮、环丙氯地孕酮、诺美孕酮、睾酮、19-去甲睾酮、脱水羟基孕酮、诺塞甾酮、去氧孕烯、异炔诺酮、诺孕酯、替勃龙、地诺孕素、奎孕醇、诺孕烯酮、左炔诺孕酮、孕三烯酮和促孕激素，具有作为所有类固醇的特征的胆固醇环烃骨架。
类固醇和所述化合物在沿着胆固醇骨架和延伸基团的各种位置上可以具有不同的结构。例如，胆固醇环结构的第6位上的碳可以连接氯或甲基。而且，结构内可以存在一个或多个双键的组合，特别是但不限于，碳4和碳5、碳6和碳7、碳11和碳12、碳11和碳12、碳9和碳10、碳10和碳5。此外，胆固醇环上的碳17位(C-17)可以连接有乙酰基或羟基以及唯一的R-基团。例如，孕酮在其C-17位具有乙酰基，而17-OHPC在其C-17位具有相同的乙酰基，区别在于在C-17位具有酯化的羧基以及从C-17位延伸出四碳烃链(参见下面的化学结构)。其他合成孕酮，如17α-醋酸羟孕酮和17α-丙戊酸羟孕酮可能与17-OHPC具有相似的生物活性，因其具有相似的结构。这同样适用于其他与17-OHPC具有相同的基础结构但具有连接到存在于C-17位上的羧基的烃链的不同变化的合成孕酮。
已有报告指出口服微粉化孕酮的生物利用度半衰期为16-18小时。Rathore A.M.等，妇产科学激素，2015，杰皮兄弟出版社。此外，报告指出肌内注射时孕酮的半衰期为12小时，经皮给药时其半衰期为30小时。
Scott-Moncrieff J.C.等，美国兽医研究杂志，1990年六月；51(6)：893-5；Garfield R.E.等人，妇产科的事实、观点和视觉，2012，4(4)：237-244。但是，合成孕激素比孕酮具有更长的半衰期。Schindler A.E.等人，欧洲更年期杂志，2003年12月10日；46Suppl1：S7-S16。注射条件下，合成孕激素17-OHPC具有10天的半衰期。Caritis S.N.等人，美国妇产科杂志，2011年7月；205(1)：40。关于17-OHPC的代谢，报告指出己酸酯不被切割，因此17-OPHC不分解成其17α-羟孕酮的形式(17-HP)。Attardi等人，美国妇产科杂志，2007年12月；197(6)：599.e1-599.e7。
正如Schindler等人所教导的，孕激素“只有一种共同的作用，即对雌激素引发的兔子子宫内膜的孕激素作用，但孕激素在许多其他引出的生物效应方面差异很大。”Supra Schindler A.E.等人。本领域普通技术人员将认识到P4和17-OHPC不具有相同的化学、生物学和药理作用，因此“其同义用法是不准确的和具有误导性的”。Romero R.等人，美国妇产科杂志，2013，208(6)：421-426。此外，关于孕酮和合成孕激素，Dalton例证了“两者都是有价值的药物，具有使用的特定适应症”，并指出“孕激素不能模仿孕酮的作用”。Dalton K.，英国医学杂志，1976，2：1257。
例如，P4已被证实刺激子宫肌收缩力，而17-OHPC在刺激子宫肌收缩力方面具有相反作用。RuddockN.K.等人，美国妇产科杂志，2008，199：391.另外，Kuon等人的研究证明P4可以用于预防宫颈短的妇女早产，而17-OHPC不具有相同的保护作用。Kuon R.J.等人，美国妇产科杂志，2010，202：455。然而，在有早产史的妇女中，可注射的17-OHPC()是目前唯一用作降低早产风险的一线药物。Patel Y等人，PT 201237(7)：405-11，405。此外，P4和17-OHPC对子宫肌层基因表达具有不同的影响。P4上调宫颈内防御素-1的表达，而17-OHPC对基因表达没有可检测的影响。Nold C.等人，美国妇产科杂志，2013；208：223。
P4也被证实增加IL-17水平，导致IL-17介导的疾病的恶化。简言之，P4属的先前教导不包括17-OHPC的任何预测性治疗效果，特别是关于17-OHPC对IL-17水平和p38MAPK活性的预测性治疗效果。
为了评估17-OPHC对BALF和血液/血清中IL-17水平和肺内p38MAPK活性的影响，发明人已经对COPD小鼠模型系统进行了研究。本领域普通技术人员熟知，通过小鼠COPD建模获得的结果是人类疾病研究的重要且必要的步骤。Vlahos R.等人，临床科学(伦敦)，2014年2月；126(4)：253-265。可以在小鼠中模拟的一些人类COPD病症包括但不限于BALF/肺炎，包括嗜中性白细胞增多症，巨噬细胞和T细胞的积累，以及BALF/肺炎介质，包括细胞因子、趋化因子和蛋白酶的增加；氧化应激增加；气肿；小气道和血管重塑；肺动脉高压；粘液分泌过多；肺功能受损；全身性副发病变；响应于与感染性急性发作相关的呼吸道病原体而加重的BALF/肺炎；以及戒烟后持续的BALF/肺炎。同上。
在一个示例性研究中，在室温(19-23℃)和55％±10％的湿度下，将六十(n＝60)只野生型无病原体的十周龄雄性C57BL/6小鼠驯化一周，并以标准饮食喂养。驯化后，使用臭氧发生器将小鼠暴露于臭氧(O3)。对照动物(n＝10只小鼠，CON组)仅在等效周期内接受医用空气，并对其施用0.9％盐水代替药物治疗。暴露于臭氧的小鼠在密封的有机玻璃容器中以2.5ppm的浓度一周暴露于臭氧两次，一次3小时，持续6个星期。暴露于O3六周后，10只小鼠(O3组)中断臭氧暴露，剩下的50只小鼠被随机分配到5个治疗组(10只小鼠/组)，吸入或不吸入17-OHPC和布地奈德(BUD)。通过侧流喷射式喷雾器(PARI BOY，型号37.00，德国施塔恩贝格)将BUD、17-OHPC或其组合物在容器中气雾化。将小鼠放入容器内的不锈钢笼中，随意提供辐射食物和酸化水。喷雾器产生1.4-1.5巴的压力和20L/min的气流。使用喷雾器将测试药物按以下述浓度进行给药。在30分钟内为每个治疗组提供5ml(即总体积)的测试药物。研究药物在每天臭氧暴露的同时提供。臭氧暴露前12小时施用17-OHPC，臭氧暴露前30分钟施用BUD。在产生气溶胶之前，将17-OHPC溶解在1％DMSO中。治疗组的臭氧暴露在2.5ppm的浓度下持续进行，每次3小时，每周两次，持续10周。治疗组在下面的表1中显示并总结：
在10周治疗结束时，通过腹腔内注射将小鼠麻醉，并进行支气管肺泡灌洗(BAL)以进行BALF收集以及静脉血/血清样品收集。然后用气管插管提取肺。将右肺用福尔马林固定24小时用于组织学检查，并将左肺在液氮中快速冷冻。使用无菌生理盐水分离BALF，恢复超过合格标本的80％。样品离心。细胞用汉克平衡盐溶液(HBSS)洗涤并计数。通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定上清液以测得BALF和血清中细胞因子IL-17水平。处死标本后取空腹血。通过ELISA分析上清液以测得细胞因子IL-17水平。使用市售的IL-17定量ELISA试剂盒(安迪生物公司)根据制造商的说明书在肺匀浆上清液中测量IL-17浓度。
表2显示了来自上述治疗组的BALF和血清中的平均细胞因子IL-17水平。也参见图1。
这些示例性研究证明17-OPHC在降低BALF和血清中的IL-17水平方面具有显著效果。而且，增加17-OHPC的剂量导致IL-17的相应减少。在17-OPHC和BUD的联合治疗下，IL-17水平逐渐回到控制平均值的范围内。
在测量p38MAPK活性时，示例性研究涉及来自治疗组的肺组织，其从每个样品中提取并免疫沉淀，并使用用于测量磷酸化-p38MAPK和p38MAPK水平表达的一抗进行免疫印迹试验。通过红外染料结合的二抗和Odyssey系统(Li-Cor，USA)检测一抗的结合，并且使用密度测定法定量条带。用于进行免疫沉淀和免疫印迹试验的抗体如下：小鼠抗p38MAPK，小鼠抗磷酸化-p38MAPK(细胞信号传导技术，美国马萨诸塞州)和小鼠抗α-肌动蛋白(Sigma Aldrich，密苏里州圣路易斯)。磷酸化-p38MAPK与p38MAPK的比率在表3中示出，并在图2中显示。
表3和图2的结果表明，在17-OHPC吸入治疗下，与较低剂量的17-OHPC相比，在较高剂量的17-OHPC下，磷酸化p38MAPK与总p38MAPK的比率(磷酸化-38/p38)显著降低。而且，17-OHPC和BUD联合治疗比单独使用BUD治疗产生的磷酸化-38/p38比率平均值低。因此，这些结果表明，BUD和17-OHPC的组合可能比单独使用BUD更适合抑制p38活性介导的疾病。
IL-17A和GR蛋白在肺组织中的表达。在一个示例性研究中，在从治疗组收集的肺组织样品中检测GR和IL-17蛋白水平。通过对来自治疗组的肺组织进行免疫印迹试验进行检测。采用中国碧云天生物技术公司的提取试剂盒提取细胞核和细胞质蛋白。分离的蛋白质通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离，转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上，并与一抗一起孵育。然后膜与跟辣根过氧化物酶共轭的二抗一起孵育，并使用增强的化学发光(ECL)试剂盒显现。参照甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)对照强度来调整GR条带和IL-17蛋白质强度。表4、图3和图4中显示了GR蛋白与肌动蛋白和IL-17与肌动蛋白的比率。
GR是皮质类固醇的抗炎功效的重要辅助因子。暴露于氧化应激/刺激的动物和COPD患者中的GR表达显著低于对照，其导致促炎基因的转录增加，并由此引起炎症的放大，从而导致皮质类固醇不敏感性。如表4和图3所示，在O3-诱导的炎症小鼠模型中观察到的皮质类固醇不敏感性与文献中报道的先前研究一致，即小鼠模型研究显示GR是皮质类固醇的抗炎功效的重要辅助因子。O3诱导的氧化应激显著抑制GR蛋白表达(与对照相比，P＜0.01)。
在此示例性研究中，用17-OHPC治疗，用或不用BUD，显著恢复了O3-降低的GR蛋白水平(P＜0.05)。相比之下，仅使用BUD的治疗组和O3暴露组的GR蛋白水平(P＞0.05)无显著差异，说明BUD不能恢复CS损伤的GR蛋白表达。因此，这些结果表明用17-OHPC或17-OHPC和BUD的组合物治疗与未治疗相比进一步减弱了O3-诱导的GR的下调。
如表4和图4所示，O3诱导的氧化应激显著增加了IL-17蛋白的表达。与仅使用O3的组相比，用17-OHPC治疗降低臭氧诱导的IL-17蛋白水平。在仅使用BUD的治疗组中观察到IL-17表达的类似降低，表明BUD未能完全降低臭氧诱导的IL-17表达。然而，BUD和17-OHPC的联合治疗将IL-17蛋白表达降低至接近对照水平。因此，17-OHPC施用以及其与BUD的组合显著抑制O3-降低的IL-17蛋白水平，并进而减弱03-诱导的呼吸炎性反应。
这些结果表明，与单独使用BUD或17-OHPC治疗相比，联合使用BUD和17-OHPC治疗可以恢复O3-降低的GR蛋白表达并改善糖皮质激素敏感性。
肺结构和肺气肿。在另一个示例性研究中，使用本发明的治疗表现出与治疗的益处一致的生理指标。测量肺泡间隔壁距或平均线性截距(Lm)是评估肺结构破坏的常用手段。Janssens等人，欧洲呼吸杂志，1999；13：197-205。在一个示例性研究中，使用具有包含5行(每个550mm长)的Thurlbeck网格的标线，确定每个治疗组的Lm，每个部分随机评估10个场。Lm值是通过将线的长度除以肺泡壁和网格线截取的数目来计算的。治疗组的Lm值的结果呈现在表5中并显示在图5中。
暴露于空气的C57/BL6小鼠的Lm在对照组和O3暴露组之间存在显著差异(表5和图5)。与暴露于空气的小鼠相比，暴露于O3的小鼠的Lm增加(图5a)，表明暴露于O3的小鼠表现出肺泡大小的增加，因此形成类肺气肿的模式(臭氧：173.9±63.7对比对照：78.91±8.54，P＜0.01)。使用BUD和/或17-OHPC的积极治疗减少类肺气肿的Lm变化，并且这些改善在BUD、BUD+17-OHPC(lo)和BUD+17-OHPC(hi)组具有统计显著性(仅与O3相比)。BUD+17-OHPC治疗组显示出与对照组相当的最佳Lm值回复。这些结果表明，17-OHPC和17-OHPC与BUD的组合可以预防和减轻肺泡破坏，预防和缓解肺气肿的发展，并且可能减缓COPD的发展。
肺功能。在另一个示例性研究中，使用强制机动技术来评估肺功能参数。在研究结束时，腹腔内注射氯胺酮(100mg/kg)和甲苯噻嗪(5mg/kg)使小鼠麻醉，在维持自主呼吸的同时进行气管插管。记录呼气前50毫秒(分别是FEV50)的用力肺活量(FVC)和用力呼气量(FEV)。治疗组的FEV25值的结果呈现在表6中并显示在图6中。
与未经药物治疗的O3组相比，联合使用BUD和17-OHPC的治疗组显著改善了肺功能(FEV25)。观察到BUD+17-OHPC(lo)和BUD+17-OHPC(hi)的FEV25值分别为0.33±0.05和0.35±0.05；如在对照中观察到的，几乎完全恢复FEV25至0.38±0.03。BUD+17-OHPC治疗组的FEV25值较高，因此肺功能改善较单独使用BUD或17-OHPC更好。
如本研究中所观察到的，与对照组相比，O3治疗组的FEV25降低，O3暴露引起的炎症导致了气流的限制，从而限制了肺功能。BUD+17-OHPC的治疗组合显著改善肺功能，指示FEV25值增加至接近对照组。
通过测量FEV50和FEV100来获得类似于FEV25值的结果。
本文显示的结果表明，17-OHPC和17-OHPC与BUD的组合可用于治疗和减轻臭氧诱导的肺损伤、肺部炎症和肺系统上的氧化应激。
示例性研究显示17-OHPC可以用作抑制IL-17水平和p38MAPK活性的药物。17-OPHC可与BUD或具有同等性能的任何其他GC一起使用。如前所述，该治疗方法可用于治疗IL-17和/或p38MAPK介导的自体免疫性和自身炎症性疾病。
用于吸入式给药的药学上可接受的组合物优选包括干粉，其包含存在于适于干粉吸入的干膨化粉末中的活性成分或适于雾化的悬浮液，以及适合用于定量吸入器的气溶胶喷射剂。可能的制剂可以包括在母专利申请号13/021950中描述的制剂。母专利申请号13/021950通过引用整体并入本文作为参考。
其他给药途径可用于施用有效量的17-OHPC或17-OHPC与其他药物的组合物。这样的途径可以包括肠胃外、口服、静脉内给药或用于局部施用。
加或不加GC的17-OHPC优选以间隔超过一天给药或以每周一次的间隔给药。其他给药方案可以遵循母专利申请号13/174939公开的方法。
尽管说明书描述了本发明的具体实施例，但是本领域普通技术人员可以在不脱离本发明构思的情况下设计出本发明的变型。