本发明涉及兽药领域，具体而言，涉及一种调节动物免疫功能的药物组合物及其制备方法。
背景技术：
我国西南地区云、贵、川均为畜牧业生产大省，其中养猪业在全国首屈一指，家禽养殖业也日趋繁荣，并且养殖量逐年上升。但由于长期使用各种化学药品、抗生素等，动物极易产生耐药性。某些常见疾病，如大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌、流行性感冒、流行性腹泻、传染性支气管炎等病毒性疾病在畜、禽中普遍存在，发病死亡率较高。每年由于这类疾病，对整个畜牧业造成巨大的损失。
使用这些化学药品的同时，存在两大问题：其一，由于家畜家禽的不规范用药和长期使用这类药品，已产生了明显的耐药性，虽用药量在不断的增加，而疗效却并没有明显的提高甚至不断下降；其二，由于这类药品在实际应用中，不严格限制休药期，加之超剂量使用，导致药物在动物体内的蓄积量不断增加，在动物源性食品中引起超量残留。超量残留，一方面严重影响这类食品的出口，给国家在出口创汇方面造成极大的损失；另一方面，人在食用这些食品后，对身体健康危害极大，引起人体耐药性，当需要使用这类药品时，这时正常剂量、甚至超剂量都将达不到治疗效果；同时，由于超量的摄入化学药品，其副作用还将给人的身体器官带来渐近性和不可复损害，因此，必须减少或者避免给动物使用化学类药品。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于提供一种调节动物免疫功能的药物组合物，该药物组合物由黄芪和大青叶组成，通过黄芪和大青叶的相互配伍，能够益气固本、清瘟解毒，提高动物的免疫能力。
本发明的第二目的在于提供一种调节动物免疫功能的药物组合物的制备方法，该方法以黄芪和大青叶为原料，通过提纯工艺同时制备不同纯度的药材提取液，并最后同时得到多种剂型的药物组合物，制剂工艺简便、稳定，易于大批量生产，且生产成本低。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种调节动物免疫功能的药物组合物的制备方法，其包括：
采用溶剂提取法提取3～5份重量份的黄芪，减压浓缩后制备多种纯度的黄芪提取物；
采用溶剂提取法提取1～3份重量份的大青叶，减压浓缩后制备多种纯度的大青叶提取物；以及
将黄芪提取物与大青叶提取物混合，制备颗粒剂、口服液、注射剂或丸剂。
一种调节动物免疫功能的药物组合物，该药物组合物由黄芪和大青叶组成，按重量份数计，黄芪为3～5份，大青叶为1～3份。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
该药物组合物由黄芪和大青叶组成，通过黄芪和大青叶的相互配伍，黄芪扶正补气、调节免疫，大青叶抗菌病毒、增强免疫，两者共奏益气固本、清瘟解毒之功，且安全有效，提高动物的免疫能力，且提高动物的肉质。该方法以黄芪和大青叶为原料，通过提纯工艺同时制备不同纯度的黄芪提取液和大青叶提取液，并通过不同纯度的黄芪提取液和大青叶提取液之间的混合，能够同时得到多种剂型的药物组合物，即处理同一批次的黄芪和大青叶，便可同时得到颗粒剂、口服液、注射剂等剂型的药物组合物，从而极大的减缓了工艺程序、降低了工作强度，且该方法工艺简便、成熟、稳定，易于大批量生产，生产成本低。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本实施方式提供一种调节动物免疫功能的药物组合物的制备方法，其包括：
S1:采用溶剂提取法提取3～5份重量份的黄芪，减压浓缩后制备多种纯度的黄芪提取物。
黄芪提取物包括第一黄芪提取物、第二黄芪提取物和第三黄芪提取物中的一种或多种，第一黄芪提取物、第二黄芪提取物和第三黄芪提取物的纯度依次递增。较高纯度的黄芪提取物是由较低纯度的黄芪提取物制备而来，即第三黄芪提取物是由第二黄芪提取物或者第一黄芪提取物提纯制备而来；第二黄芪提取物是由第一黄芪提取物提纯制备而来。
溶剂提取法包括水煎煮法、回流提取法、浸泡法、超声波提取法等。在本发明较佳的实施例中，采用水煎煮法提取。
第一黄芪提取物的制备方法包括：采用水煎煮法提取黄芪，滤液减压浓缩至其在55～65℃下的相对密度为1.2～1.3。优选的，取黄芪药材，加入8倍量的水煎煮3次，每次1.5h，合并滤液，将滤液减压浓缩至相对密度为1.2～1.3(60℃)，即将滤液浓缩至其在60℃下的相对密度为1.2～1.3。
第二黄芪提取物的制备方法包括：将第一黄芪提取物与乙醇按照体积比1～2：1～3混合，即使所得溶液中乙醇的含醇量为50～60％，优选为55％；静置后，离心得第一黄芪沉淀和第一黄芪上清液；优选为静置12～48小时；第一黄芪上清液减压浓缩至其在55～65℃下的相对密度为1.20～1.28，优选为第一黄芪上清液减压浓缩至其相对密度为1.20～1.28(60℃)。
由第一黄芪提取物制备第二黄芪提取物的过程，主要采用水提醇沉的纯化工艺，将第一黄芪提取物中不易溶于水中的组分通过乙醇沉淀除去，进而提高最后所得的第二黄芪提取物的纯度。
第二黄芪提取物的制备方法还包括：用水溶解第一黄芪沉淀，再使其与乙醇按照体积比6～7：3～4混合，即使所得溶液中乙醇的含醇量为30～40％，优选为35％，进行醇沉法，以除去第一黄芪沉淀中不易溶于水中的组分；随后，静置12～48h，离心得第二黄芪上清液，第二黄芪上清液减压浓缩至其在55～65℃下的相对密度为1.20～1.28，优选为第二黄芪上清液减压浓缩至其相对密度为1.20～1.28(60℃)。
第三黄芪提取物的制备方法包括：将第二黄芪提取液用水溶解，优选为用5～10倍注射用水溶解；溶解后，加热煮沸30～60min，优选为45min；再与活性炭混合均匀，使溶液中活性炭的浓度为1～5g/L，优选为0.8g/L，静置后过滤澄清。
第二黄芪提取液溶解后，加热煮沸30～60min，以使第二黄芪提取液中的水溶性蛋白在高温下变性、聚集，有利于提高活性炭的吸附效果，从而得到纯度更高的第三黄芪提取物。
优选的，在将第二黄芪提取液用水溶解前，先加乙醇使所得溶液中乙醇的含醇量为85～95％，静置12～48h，上清液加入活性炭进行循环过滤澄清，滤液浓缩至相对密度1.20～1.28(60℃)；再加5～10倍注射用水，搅拌溶解，冷藏过夜，过滤澄清，加热煮沸30min，加入活性炭搅拌10min，使溶液中活性炭的浓度为5～10g/L，过滤澄清。
S2:采用溶剂提取法提取1～3份重量份的大青叶，减压浓缩后制备多种纯度的大青叶提取物。
大青叶提取物包括第一大青叶提取物、第二大青叶提取物和第三大青叶提取物中的一种或多种，第一大青叶提取物、第二大青叶提取物和第三大青叶提取物的纯度依次递增；较高纯度的大青叶提取物是由较低纯度的大青叶提取物制备而来，即第三大青叶提取物是由第二大青叶提取物或者第一大青叶提取物提纯制备而来；第二大青叶提取物是由第一大青叶提取物提纯制备而来。
第一大青叶提取物的制备方法包括：采用水煎煮法提取大青叶，滤液减压浓缩至其在55～65℃下的相对密度为1.18～1.28。优选的，取大青叶药材，加入10倍量的水煎煮2次，每次1h，合并滤液，将滤液减压浓缩至相对密度为1.18～1.28(60℃)，即将滤液浓缩至其在60℃下的相对密度为1.18～1.28。
第二大青叶提取物的制备方法包括：将第一大青叶提取物与乙醇按照体积比1～2：1～3混合，即使所得溶液中乙醇的含醇量为50～60％，优选为55％；静置后，离心得大青叶上清液，大青叶上清液减压浓缩至其在55～65℃下的相对密度为1.16～1.26。
第三大青叶提取物的制备方法包括：将第二大青叶提取液与水混合，优选用5～10倍注射用水溶解；溶解后，加热煮沸25～35min后，与活性炭混合，使溶液中活性炭的浓度为5～10g/L，静置后过滤。
优选的，在将第二黄芪提取液用水溶解前，先加乙醇使所得溶液中乙醇的含醇量为85～95％，静置12～48h，上清液加入活性炭进行循环过滤澄清，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.28(60℃)；再加5～10倍注射用水溶解，冷藏过夜，过滤澄清，加热煮沸30min；再与活性炭混合，搅拌均匀，过滤澄清。
S3:将黄芪提取物与大青叶提取物混合，制备颗粒剂、口服液、注射剂或丸剂。
药物组合物为颗粒剂，该颗粒剂的制备方法包括：在将第一黄芪提取物与第一大青叶提取物混合，再与药用辅料混合均匀并制粒、干燥，药用辅料的质量为黄芪提取物与大青叶提取物总质量的5～10倍，药用辅料包括蔗糖、糊精、可溶性淀粉等。
在本实施方式中，溶液减压浓缩后的相对密度是在发明人多年的理论研究和实践研究中得到的，若相对密度过高，则所得提取物的稠度过大，难以进行有效浓缩；而当相对密度过低，则不能很好的去除溶剂，不利于后续的纯化步骤。
药物组合物为口服液，该口服液的制备方法包括：将第二黄芪提取物和第二大青叶提取物混合并用水溶解，优选的，用5～10倍的水溶解；调节其pH值为7.0～7.5后，优选的，用10wt％的NaOH调节pH；随后，再加热煮沸30～60min，优选为45min；随后与活性炭混合，使溶液中活性炭的浓度为1～5g/L，过滤澄清；最后，加水定容后，再次用10wt％的NaOH调节pH值为7.0～7.5，过滤、灌装、灭菌。
药物组合物为注射液，该注射液的制备方法包括：将第三黄芪提取物与第三大青叶提取物混合，调节其pH值为7.0～7.5后，优选的，用10wt％的NaOH调节pH；随后，加热煮沸55～65min，优选为60min；随后与活性炭混合，使溶液中活性炭的浓度为1～5g/L，保温10min后过滤；滤液冷藏过夜，再次过滤后，用注射用水定容，再次用10wt％的NaOH调节pH值为7.0～7.5，过滤、灌装、灭菌。
该制备方法以黄芪和大青叶为原料，通过提纯工艺同时制备不同纯度的黄芪提取液和大青叶提取液，并通过不同纯度的黄芪提取液和大青叶提取液之间的混合，能够同时得到多种剂型的药物组合物，即处理同一批次的黄芪和大青叶，便可同时得到颗粒剂、口服液、注射剂等剂型的药物组合物，从而极大的减缓了工艺程序、降低了工作强度，且该方法工艺简便、成熟、稳定，易于大批量生产，生产成本低。
一种调节动物免疫功能的药物组合物，该药物组合物由黄芪和大青叶组成，按重量份数计，黄芪为3～5份，大青叶为1～3份。
该药物组合物由黄芪和大青叶组成，通过黄芪和大青叶的相互配伍，黄芪扶正补气、调节免疫，大青叶抗菌病毒、增强免疫，两者共奏益气固本、清瘟解毒之功，且安全有效，具有调节免疫功能，促进抗体形成，抗菌、抗病毒的功能，能够有效的提高动物的免疫能力，且能够提高动物的肉质。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述：
实施例1
本实施例提供一种调节动物免疫功能的药物组合物，该药物组合物为颗粒剂，其制备方法为：
称取黄芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.28(60℃)，得第一黄芪提取液；
大青叶400g加4000mL水煎煮2次，每次1小时，过滤，滤液减压浓缩至相对密度1.24(60℃)，得第一大青叶提取物。
合并第一黄芪提取液和第一大青叶提取物，加蔗糖粉850g混合均匀，制粒，80℃干燥，即得。
实施例2
本实施例提供一种调节动物免疫功能的药物组合物，该药物组合物为颗粒剂，其制备方法为：
称取黄芪600g，加4800mL水煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.2(60℃)，得第一黄芪提取液；
大青叶200g加2000mL水煎煮2次，每次1小时，过滤，滤液减压浓缩至相对密度1.18(60℃)，得第一大青叶提取物。
合并第一黄芪提取液和第一大青叶提取物，加蔗糖粉850g混合均匀，制粒，80℃干燥，即得。
实施例3
本实施例提供一种调节动物免疫功能的药物组合物，该药物组合物为颗粒剂，其制备方法为：
称取黄芪1000g，加8000mL水煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.3(60℃)，得第一黄芪提取液；
大青叶600g加6000mL水煎煮2次，每次1小时，过滤，滤液减压浓缩至相对密度1.28(60℃)，得第一大青叶提取物。
合并第一黄芪提取液和第一大青叶提取物，加蔗糖粉850g混合均匀，制粒，80℃干燥，即得。
实施例4
本实施例提供一种调节动物免疫功能的药物组合物，该药物组合物为口服液，其制备方法为：
称取黄芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.20(60℃)，加乙醇使含醇量为60％，搅拌均匀，静置过夜，离心，得沉淀120g和上清液1100mL。取上清液减压浓缩至相对密度为1.20(60℃)，得第二黄芪提取物；
称取大青叶400g，加4000mL水煎煮2次，每次1小时，过滤，滤液减压浓缩至相对密度1.20(60℃)，加乙醇至含醇量50％，静置过夜，再将上清液浓缩至相对密度为1.16(60℃)，得第二大青叶提取物。
将第二黄芪提取物和第二大青叶提取物混合，加水800mL，搅拌溶解，用10wt％的NaOH溶液调pH值至7.0～7.5，加热煮沸30min，加活性炭，使溶液中活性炭的浓度为1g/L搅匀，过滤澄清，冷藏过夜，过滤，加水定容至1000mL，用10wt％的NaOH溶液调pH值7.0～7.5，过滤，灌装，灭菌，即得。
实施例5
本实施例提供一种调节动物免疫功能的药物组合物，该药物组合物为口服液，其制备方法为：
称取黄芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.3(60℃)，加乙醇使含醇量为50％，搅拌均匀，静置过夜，离心，得沉淀120g和上清液1100mL。取上清液减压浓缩至相对密度为1.28(60℃)，得第一浸膏；取沉淀，加720mL水搅拌溶解，加乙醇使含醇量为40％，搅拌均匀，静置过夜，离心，取上清液减压浓缩至相对密度为1.20(60℃)，得第二浸膏，混合第一浸膏和第二浸膏，得到第二黄芪提取物；
称取大青叶400g，加4000mL水煎煮2次，每次1小时，过滤，滤液减压浓缩至相对密度1.20(60℃)，加乙醇至含醇量60％，静置过夜，再将上清液浓缩至相对密度为1.26(60℃)，得第二大青叶提取物。
将第二黄芪提取物和第二大青叶提取物混合，加水800mL，搅拌溶解，用10wt％的NaOH溶液调pH值至7.0～7.5，加热煮沸60min，加活性炭，使溶液中活性炭的浓度为1g/L搅匀，过滤澄清，冷藏过夜，过滤，加水定容至1000mL，用10wt％的NaOH溶液调pH值7.0～7.5，过滤，灌装，灭菌，即得。
实施例6
本实施例提供一种调节动物免疫功能的药物组合物，该药物组合物为口服液，其制备方法为：
称取黄芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.25(60℃)，加乙醇使含醇量为55％，搅拌均匀，静置过夜，离心，得沉淀120g和上清液1100mL。取上清液减压浓缩至相对密度为1.24(60℃)，得第一浸膏；取沉淀，加720mL水搅拌溶解，加乙醇使含醇量为35％，搅拌均匀，静置过夜，离心，取上清液减压浓缩至相对密度为1.28(60℃)，得第二浸膏，混合第一浸膏和第二浸膏，得到第二黄芪提取物；
称取大青叶400g，加4000mL水煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.20(60℃)，加乙醇至含醇量55％，静置过夜，再将上清液浓缩至相对密度为1.30(60℃)，得第二大青叶提取物。
将第二黄芪提取物和第二大青叶提取物混合，加水800mL，搅拌溶解，用10wt％的NaOH溶液调pH值至7.0～7.5，加热煮沸45min，加活性炭，使溶液中活性炭的浓度为1g/L搅匀，过滤澄清，冷藏过夜，过滤，加水定容至1000mL，用10wt％的NaOH溶液调pH值7.0～7.5，过滤，灌装，灭菌，即得。
实施例7
本实施例提供一种调节动物免疫功能的药物组合物，该药物组合物为注射液，其制备方法为：
按照实施例6的方法得到第二黄芪提取物和第二大青叶提取物；
将第二黄芪提取物用水溶解，加热煮沸60min，加活性炭搅拌10min，使溶液中活性炭的浓度为1g/L过滤澄清，得第三黄芪提取物；
将第二大青叶提取物用水溶解，加热煮沸35min，加活性炭，使溶液中活性炭的浓度为5g/L搅匀，过滤澄清，得第三大青叶提取物。
混合第三黄芪提取物和第三大青叶提取物，用10wt％的NaOH溶液调pH值7.0～7.5，加热煮沸65min，加活性炭保温10min，使溶液中活性炭的浓度为1g/L过滤，滤液冷藏过夜，过滤，加注射用水至1000ml，再用10wt％的NaOH溶液调pH值7.0～7.5，精滤，灌装，灭菌，即得本发明注射液。
实施例8
本实施例提供一种调节动物免疫功能的药物组合物，该药物组合物为注射液，其制备方法为：
按照实施例6的方法得到第二黄芪提取物和第二大青叶提取物；
将第二黄芪提取物用水溶解，加热煮沸30min，加活性炭使溶液中活性炭的浓度为5g/L，搅拌10min，过滤澄清，得第三黄芪提取物；
将第二大青叶提取物用水溶解，加热煮沸25min，加活性炭，使溶液中活性炭的浓度为1g/L搅匀，过滤澄清，得第三大青叶提取物。
混合第三黄芪提取物和第三大青叶提取物，用10wt％的NaOH溶液调pH值7.0～7.5，加热煮沸55min，加活性炭使溶液中活性炭的浓度为5g/L，保温10min，过滤，滤液冷藏过夜，过滤，加注射用水至1000ml，再用10wt％的NaOH溶液调pH值7.0～7.5，精滤，灌装，灭菌，即得本发明注射液。
实施例9
本实施例提供一种调节动物免疫功能的药物组合物，该药物组合物为注射液，其制备方法为：
按照实施例6的方法得到第二黄芪提取物和第二大青叶提取物；
将第二黄芪提取物用水溶解，加热煮沸45min，加活性炭使溶液中活性炭的浓度为2.5g/L，搅拌10min，过滤澄清，得第三黄芪提取物；
将第二大青叶提取物用水溶解，加热煮沸30min，加活性炭使溶液中活性炭的浓度为8g/L，搅匀，过滤澄清，得第三大青叶提取物。
混合第三黄芪提取物和第三大青叶提取物，用10wt％的NaOH溶液调pH值7.0～7.5，加热煮沸60min，加活性炭使溶液中活性炭的浓度为2.5g/L，保温10min，过滤，滤液冷藏过夜，过滤，加注射用水至1000ml，再用10wt％的NaOH溶液调pH值7.0～7.5，精滤，灌装，灭菌，即得本发明注射液。
实施例10
本实施例提供一种调节动物免疫功能的药物组合物，该药物组合物为注射液，其制备方法为：
称取黄芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.24(60℃)，得第一黄芪提取物。
将第一黄芪提取物加乙醇使含醇量为60％，搅拌均匀，静置过夜，离心，得沉淀100g和上清液1000mL。取上清液减压浓缩至相对密度为1.24(60℃)，用水溶解，加乙醇使含醇量为85％，静置过夜，上清液加活性炭使溶液中活性炭的浓度为1g/L，循环过滤澄清，滤液减压浓缩至相对密度1.25(60℃)，得第一浸膏。取沉淀，加600mL水搅拌溶解，加乙醇使含醇量为35％，搅拌均匀，静置过夜，离心，取上清液减压浓缩至相对密度为1.24(60℃)，得第二浸膏。第二黄芪提取物即为第一浸膏和第二浸膏的总和。
将第一浸膏加注射用水400mL，搅拌溶解，冷藏过夜，过滤澄清，加热煮沸30min，加活性炭使溶液中活性炭的浓度为1g/L，搅拌10min，过滤澄清，得第一溶液；将第二浸膏加注射用水300mL溶解，加热煮沸30min，加活性炭使溶液中活性炭的浓度为5g/L，，搅匀、过滤澄清，得第二溶液；混合第一溶液和第二溶液，得到第三黄芪提取物。
称取大青叶400g，加4000mL水煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.24(60℃)，得第一大青叶提取物；加乙醇至含醇量60％，静置过夜，再将上清液浓缩至相对密度为1.20(60℃)，得第二大青叶提取物；用水溶解，加乙醇至含醇量60％，静置过夜，上清液浓缩至相对密度1.20(60℃)，加乙醇至含醇量85％，静置过夜，上清液加活性炭使溶液中活性炭的浓度为1g/L，过滤，滤液浓缩至相对密度1.20(60℃)，加注射用水300ml，搅拌溶解，冷藏过夜，过滤澄清，滤液加热煮沸30min，加活性炭使溶液中活性炭的浓度为5g/L，搅匀，过滤澄清，得第三大青叶提取物。
混合第三黄芪提取物和第三大青叶提取物，用10wt％的NaOH溶液调pH值7.0～7.5，加热煮沸1小时，加活性炭使溶液中活性炭的浓度为1g/L，保温10min，过滤，滤液冷藏过夜，过滤，加注射用水至1000ml，再用10wt％的NaOH溶液调pH值7.0～7.5，精滤，灌装，灭菌，即得本发明注射液。
实施例11
本实施例提供一种调节动物免疫功能的药物组合物，该药物组合物为颗粒剂、口服液和注射剂，其制备方法为：
称取黄芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.24(60℃)，得黄芪提取物。将黄芪提取物分为2份，其中一份为第一黄芪提取物，另一份采用实施例6的方法制备第二黄芪提取物；将第二黄芪提取物分为2份，一份留用，另一份采用实施例9的方法制备第三黄芪提取物。
称取大青叶400g，加4000mL水煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.24(60℃)，得大青叶提取物；将大青叶提取物分为2份，其中一份为第一大青叶提取物，另一份采用实施例6的方法制备第二大青叶提取物；将第二大青叶提取物分为2份，一份留用，另一份采用实施例9的方法制备第三大青叶提取物。
采用实施例3的方法将第一黄芪提取物与第一大青叶提取物混合，制得颗粒剂；采用实施例6的方法将留用的第二黄芪提取物与留用的第二大青叶提取物混合，制得口服液；采用实施例9的方法将第三黄芪提取物与第三大青叶提取物混合，制得注射液。
实验例
下面结合药效试验对本发明实施例提供药物组合物在调节动物免疫功能，促进动物生长，提高动物肉质等方面的效果进行评价。
一、试验材料
1.1试验药品
实施例11制备的颗粒剂和口服液。
1.2试验动物
KM小鼠，体重16-18g；雏鸡，21日龄左右；
1.3试验仪器、试剂
96孔细胞培养板；注射器；电子天平；玻璃毛细管；96孔V型血凝板；游标卡尺；色差计，等；
环磷酰胺；生理盐水；1640细胞培养基；小鼠外周血淋巴细胞分离液；CCK-8试剂盒；刀豆蛋白A(ConA)等
1.4阳性药物
阳性药物配方：黄芪150g、大青叶150g、黄连100g、黄芩150g、连翘250g。
制备方法：将上述药物分别加入8～10倍量水，采用煎煮法提取三次，每次1～1.5h，分别将每味药材的滤液合并，减压浓缩至相对密度为1.2(60℃)后，合并所有药材的提取物，加蔗糖粉850g混合均匀，制粒，80℃干燥，即阳性药物颗粒剂。
二、试验方法
取240只雌性KM小鼠分为12组，每组20只，适应性喂养3天后，禁食12h，开始按照表1进行给药，连续7天，在给药第3天、第4天和第7天时对第9-12组进行腹腔注射80mg/kg环磷酰胺免疫抑制剂，0.5ml/25g体重。
表1
最后一天给药后间隔12h后，每组每只小鼠腿部肌肉注射鸡新城疫疫苗，每只2头份，给药结束。
将雏鸡40只分为8组，每组5只，按照表1中组别1-8的浓度进行拌料给药，自由采食7天。
2.1小鼠生长发育试验
分别称量各组小鼠的初始体重和给药结束后第7、14、21天小鼠的体重并记录，进行数据比较。
2.2小鼠抗体水平检测
于给药后第7、14、21天每组随机选择3-5只小鼠，用毛细管采眼眶血0.2-0.4mL，分离血清，采用微量血凝抑制试验检测抗体效价并记录。
2.3小鼠淋巴细胞转化率
给药结束后第7、14、21天，分别每组随机选择3-5只，采集含抗凝剂眼眶外周血1mL，按照淋巴细胞分离液试剂盒说明书进行淋巴细胞分离，将分离出的淋巴细胞加入96孔细胞培养板中，每孔100μL，以培养基作为空白对照，每个样本做4个孔重复，其中两孔加入50μL 50μg/ml Con A，另外两孔不加，空白对照同样进行本处理。在含5％二氧化碳37℃培养箱中培养48h。于培养结束前4h，每孔加入10μL CCK-8试剂，继续培养3h，取出后用酶标仪测定OD450值并记录，按照下面公式进行计算淋巴细胞转化率：
2.4小鼠脾脏指数测定
于给药结束后22天处死小鼠，并取出脾脏，称量脾脏重量并按照下面公式计算脾脏指数：
脾脏指数＝脾脏重量(mg)/小鼠体重(g)
2.5雏鸡肉质测定
给药结束后7天，将肉鸡处死并去毛，剥离肉鸡胸肌，静置45min后，采用美国产WSC一II型色差计测定肌肉颜色(红色色度，也称Hunterα值)，测定并计算胸肌滴水损失率。
三、试验结果
3.1小鼠生长发育试验
给药结束后不同时间测量小鼠体重发现，给药后7、14、21天免疫抑制-阴性对照组于阴性对照组比较均有显著差异(P<0.05)，表明免疫抑制模型造模成功，且数据可信；给药后7、14、21天后颗粒剂高浓度组和口服液高浓度组与阴性对照组差异极显著(P<0.01)，免疫抑制给药组(即口服液和颗粒剂的高、中、低浓度)与阴性对照组相比较接近，高于免疫抑制-阴性对照组；阳性对照组与阴性对照组比较没有明显差异(P>0.05)，与免疫抑制-阴性对照组比较有明显差异。
3.2小鼠抗体水平
结果表明经过鸡新城疫疫苗免疫后第7、14、21天，免疫抑制-阴性对照组抗体水平与阴性对照组相比均有显著差异(P<0.05)，表明免疫抑制模型造模成功；免疫后第7、14、21天颗粒剂和口服液高剂量与阴性对照组差异均为显著(P<0.05)，免疫抑制给药组与阴性对照组差异趋势相同；阳性对照组抗体效价与阴性对照组差异并不显著。
3.3小鼠淋巴细胞转化率
给药后不同时间各组小鼠外周淋巴细胞刺激指数说明免疫后7、14、21天免疫抑制-阴性对照组与阴性对照组相比有显著或者极显著差异(P<0.05或P<0.01)，表明免疫抑制模型造模成功；免疫后第7天颗粒剂和口服液高剂量与阴性对照组差异极显著(P<0.01)，免疫后14、21天颗粒剂和口服液高剂量与阴性对照组差异均为显著或极显著(P<0.05或P<0.01)，免疫抑制给药组与阴性对照组差异趋势相同，给药组中、低剂量与阴性对照组差异不显著(P>0.05)；阳性对照组与阴性对照组差异不显著(P>0.05)。
3.4提高雏鸡肉质
经过对雏鸡肉质的测定发现，与阴性对照组比较，口服液和颗粒剂高浓度组红色色度具有极显著差异(p<0.05)；阳性对照组与阴性对照组趋势相同(p>0.05)；且给药组(即颗粒剂与口服液)滴水损失率与阴性对照组相比有减少，差异显著或极显著(p<0.05或p<0.01)；阳性对照组则与阴性对照组比较无显著性差异(p>0.05)。
四、结论
本发明实施例11中提供的颗粒剂和口服液，相比与阳性以及阴性对照组，能够促进动物的生长发育，提高动物体内的抗体水平以及淋巴细胞转化率，并且能一定程度提高动物肉质，由此说明，本发明提供的药物组合物具有提高动物免疫功能和增加体重的作用。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。