Kindlin‑2蛋白作为靶点在制备治疗肾炎的药物中的应用的制作方法

本发明涉及药物领域，特别是涉及一种kindlin-2蛋白作为靶点在制备治疗肾炎的药物中的应用。

背景技术：

肾炎是一种常见的肾脏病，主要发生于双侧肾脏肾小球，常表现为水肿、蛋白尿、血尿、肾功能下降等症状。随着我国进入老龄化社会，肾病患病人群以惊人的速度在上升，发病率已高达10.8％左右。长期过劳疲惫、环境污染、药物滥用等因素都会导致肾脏不同程度的受损，甚至发展从慢性肾脏病。而慢性肾脏病一旦发生后，将不容易治愈，长期服用药物治疗还可能会进一步加重肾脏的负担。因此，非常迫切的需要研发新型的治疗肾炎药物。

然而，目前临床上仍然缺乏有效的治疗肾炎的药物及治疗方法。

技术实现要素：

基于此，有必要提供一种kindlin-2蛋白作为靶点在制备治疗肾炎的药物中的应用。

kindlin-2蛋白在制备治疗肾炎的药物中的应用，所述药物靶向kindlin-2蛋白。

在一个实施方式中，所述药物靶向肾小球中的kindlin-2蛋白。

在一个实施方式中，所述药物能够调节kindlin-2蛋白的表达量。

在一个实施方式中，所述药物能够提高kindlin-2蛋白的表达量。

在一个实施方式中，所述药物能够提高肾小球中的kindlin-2蛋白的表达量。

kindlin-2蛋白在制备治疗慢性肾小球肾炎的药物中的应用，所述药物靶向kindlin-2蛋白。

一种治疗肾炎的药物，所述药物能够提高kindlin-2蛋白的表达量。

一种治疗肾炎的药物组合物，包括kindlin-2蛋白促进剂以及靶向剂，所述kindlin-2蛋白促进剂负载于所述靶向剂上，所述靶向剂靶向kindlin-2蛋白。

在一个实施方式中，所述靶向剂选自aav病毒、mirna和聚合物胶束中的至少一种。

kindlin-2蛋白在制备肾炎的检测试剂中的应用，所述检测试剂以kindlin-2蛋白作为肾炎的生物标记物。

实验结果表明，将kindlin-2基因特异性敲除后，小鼠的尿蛋白含量显著升高而血浆蛋白含量显著降低，且肾脏肾小球的结构严重破坏，有明显的肾小球硬化及间质纤维化。本研究的实验结果提示kindlin-2蛋白可以作为治疗肾炎的药物的一个新靶点。

附图说明

图1为实施例1中实验组和对照组小鼠的生长曲线图；

图2为实施例1中两个月龄的实验组和对照组小鼠的外观；

图3为实施例2中实验组和对照组的小鼠的尿液中的尿蛋白的sds-page电泳结果图；

图4为实施例2中实验组和对照组的小鼠的血液中的血浆蛋白的sds-page电泳结果图；

图5为实施例3中实验组和对照组的白蛋白/肌酸酐比值的统计结果图；

图6为实施例3中实验组和对照组的血浆肌酐含量的统计结果图；

图7为实施例3中8周龄的实验组和对照组的小鼠肾脏的外观；

图8为实施例4中实验组和对照组小鼠肾脏的h&e染色的结果图；

图9为实施例4中实验组和对照组小鼠肾脏的pas染色的结果图；

图10为实施例4中实验组和对照组小鼠肾脏的trichrome染色的结果图；

图11为实施例4中实验组和对照组小鼠的肾小球纤维化的统计结果图；

图12为实施例4中实验组和对照组小鼠的肾小球硬化的统计结果图。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例及附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。

一实施方式的kindlin-2蛋白在制备治疗肾炎的药物中的应用，其中，该药物靶向kindlin-2蛋白。

kindlin-2蛋白是一种粘着斑蛋白，可参与整合素的激活，有研究表明其在肌肉细胞的延长上扮演重要角色。然而关于kindlin-2蛋白作为靶点治疗的研究较少，目前尚未见其在肾炎方面的研究报道。而本发明的发明人经实验研究后意外发现kindlin-2蛋白的表达与肾炎存在密切的相关性。kindlin-2基因特异性敲除后，小鼠的尿蛋白含量显著升高而血浆蛋白含量显著降低，且肾脏肾小球的结构严重破坏，有明显的肾小球硬化及间质纤维化。本研究的实验结果为治疗肾炎的药物提供了一个新的靶点。药物通过靶向kindlin-2蛋白，从而调剂体内kindlin-2蛋白的表达量，协助肾炎治疗。

具体的，本文中所说的“治疗肾炎的药物”可以是为治疗已经确诊为肾炎的病人制备的药物，也可以是为预防肾炎而制备的药物。

在一个实施方式的kindlin-2蛋白在制备治疗肾炎的药物中的应用中，该药物靶向肾小球中的kindlin-2蛋白。肾小球与肾炎具有密切的关联，通过药物靶向肾小球中的kindlin-2蛋白，能够进一步的增强药物的特异性，减少副作用。

在一个实施方式的kindlin-2蛋白在制备治疗肾炎的药物中的应用中，该药物能够调节kindlin-2蛋白的表达量。以kindlin-2作为靶点，针对不同的患者的病情，调节体内的kindlin-2蛋白的表达量，从而使得体内的kindlin-2蛋白表达量分泌正常。

具体的，在kindlin-2蛋白在制备治疗肾炎的药物中的应用中，该药物能够提高kindlin-2蛋白的表达量。研究结果表明，kindlin-2基因特异性敲除后的小鼠尿蛋白含量显著升高而血浆蛋白含量显著降低，且肾脏肾小球的结构严重破坏，有明显的肾小球硬化及间质纤维化。提示当kindlin-2蛋白分泌量降低时，肾小球的功能受损，其选择性过滤性能减弱，从而导致尿蛋白含量显著升高而血浆蛋白含量显著降低等肾炎的症状。因此可通过药物提高kindlin-2蛋白的表达量来提高肾小球的选择性过滤性能，预防肾小球硬化及间质纤维化。

进一步的，在kindlin-2蛋白在制备治疗肾炎的药物中的应用中，该药物能够提高肾小球中的kindlin-2蛋白的表达量。通过药物提高肾小球中的kindlin-2蛋白的表达量，增强药物的特异性，进而提高肾小球功能，进一步预防或治疗肾炎。

一实施方式的kindlin-2蛋白在制备治疗慢性肾小球肾炎的药物中的应用，其中，该药物靶向kindlin-2蛋白。经实验研究后发现kindlin-2基因特异性敲除后，小鼠表现尿蛋白含量显著升高而血浆蛋白含量显著降低等明显慢性肾小球肾炎的症状，提示kindlin-2蛋白可以作为治疗慢性肾小球肾炎的药物的一个新的靶点。

进一步的，kindlin-2蛋白在制备治疗慢性肾小球肾炎的药物中的应用中，该药物可以靶向肾小球中的kindlin-2蛋白。

在一个实施方式中，该药物具体为可以靶向肾小球足细胞中的kindlin-2蛋白。

在一个实施方式中，该药物能够提高kindlin-2蛋白的表达量。具体为能够提高慢性肾小球中的kindlin-2蛋白的表达量。

综上，研究结果表明，kindlin-2蛋白的表达量与肾炎存在密切的相关性。kindlin-2蛋白可以作为制备治疗肾炎的药物的一个新靶点，在制备预防或治疗肾炎特别是慢性肾小球肾炎的药物中的应用中具有良好的应用前景。

此外，本申请还提供一实施方式的治疗肾炎的药物，其中，该药物能够提高kindlin-2蛋白的表达量。

在一个实施方式中，该治疗肾炎的药物靶向肾小球中的kindlin-2蛋白，并能够提高肾小球中的kindlin-2蛋白的表达量。

上述药物以kindlin-2蛋白作为治疗靶点，通过提高kindlin-2蛋白的表达量从而治疗肾炎。研究结果显示，当kindlin-2基因特异性敲除后，kindlin-2蛋白表达量下降，小鼠的尿蛋白含量显著升高而血浆蛋白含量显著降低，且肾脏肾小球的结构严重破坏，有明显的肾小球硬化及间质纤维化。因此可通过药物提高kindlin-2蛋白的表达量来预防肾小球硬化及间质纤维化，提高肾小球的功能，从而治疗肾炎。

进一步的，本申请还提供一实施方式治疗肾炎的药物组合物，该组合物包括kindlin-2蛋白促进剂以及靶向剂，kindlin-2蛋白促进剂负载于靶向剂上，靶向剂靶向kindlin-2蛋白。

其中，kindlin-2蛋白促进剂为能够提高kindlin-2蛋白表达量的药物或试剂，靶向剂为能够靶向kindlin-2蛋白。kindlin-2蛋白促进剂可以通过化学键连接或包覆等物理方式负载于靶向剂上。

在一个实施方式中，靶向剂可以选自aav病毒(adeno-associatedvirus，腺相关病毒)、mirna(microrna)和聚合物胶束中的至少一种。

具体的，aav病毒、mirna或聚合物胶束作为载体将kindlin-2蛋白促进剂携带至体内特定的部位，kindlin-2蛋白促进剂释放促进体内kindlin-2蛋白的表达，从而提高kindlin-2蛋白的表达量，预防肾小球硬化及间质纤维化，提高肾小球的功能，从而预防或治疗肾炎。

在一个实施方式中，aav病毒上还可以携带表达kindlin-2蛋白的基因，从而在体内表达kindlin-2蛋白，提高kindlin-2蛋白的表达量。

上述治疗肾炎的药物组合物，包括kindlin-2蛋白促进剂以及靶向剂，两者协同作用，提高kindlin-2蛋白的表达量，进而预防或治疗肾炎。

此外，本申请还提供一实施方式的kindlin-2蛋白在制备肾炎的检测试剂中的应用，其中，该检测试剂以kindlin-2蛋白作为肾炎的生物标记物。

通过研究表明，kindlin-2蛋白的表达量与肾炎存在密切的相关性，因此kindlin-2蛋白可作为肾炎的生物标记物。具体地，检测试剂可以通过kindlin-2蛋白的表达量来判定肾炎的病情。

综上，经实验研究后意外发现kindlin-2蛋白与肾炎存在密切的相关性。基因特异性敲除后，kindlin-2蛋白表达量下降，小鼠的尿蛋白含量显著升高而血浆蛋白含量显著降低，且肾脏肾小球的结构严重破坏，有明显的肾小球硬化及间质纤维化。实验结果提示kindlin-2蛋白可以作为治疗肾炎的一个新靶点。kindlin-2蛋白在制备治疗肾炎的药物或者制备肾炎的检测试剂中具有良好的应用前景。

以下为具体实施例。

实施例中采用药物和仪器如非特别说明，均为本领域常规选择。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如文献、书本中所述的条件或者试剂盒生产厂家推荐的方法实现。

未特别说明，以下实施例中wt表示野生型对照小鼠，cko表示肾小球足细胞的kindlin-2特异性敲除后的小鼠。实验用小鼠由美国拉什大学提供，均为雄性鼠。

实施例1

敲除kindlin-2基因对小鼠生长曲线的影响

采用基因敲除技术特异性敲除小鼠肾小球足细胞的kindlin-2，敲除后提取相应组织的总rna，然后进行实时qpcr定量分析，通过测定相应组织中总rna与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh)的比值判断基因敲除是否为特异性的。结果显示cko小鼠的kindlin-2的敲除是特异的，仅限于肾脏，其他组织例如肝脏、胰岛、心脏、肺等与正常组无明显差异。实验组和对照组均从小鼠出生后一周开始量体重，每组12只鼠，每周一次，连续称量8周，作图，结果如图1，动物生长曲线显示cko小鼠生长比对照组缓慢。两个月龄的对照小鼠(wt)和kindlin-2特异敲除小鼠(cko)的外观如图2，显示cko小鼠的体型明显变小。

以上结果表明，肾小球足细胞中的kindlin-2对小鼠的生长具有重要的影响。

实施例2

敲除kindlin-2基因对小鼠尿蛋白以及血浆蛋白含量的影响

小鼠尿蛋白含量实验

分别收集实验组和对照组的小鼠的尿液中的尿蛋白，取相同体积进行上样并进行sds-page蛋白质电泳实验，得到的电泳结果如图3所示，其中图3中从左往右的电泳样品如下，第1泳道为laoder(蛋白marker)，第2泳道为bsa样品(牛血清白蛋白，作为实验参照品)，第3泳道为1周后wt型的小鼠的尿蛋白，第4泳道为1周后cko型的小鼠的尿蛋白，第5泳道为2周后wt型的小鼠的尿蛋白，第6泳道为2周后cko型的小鼠的尿蛋白，第7泳道为1个月后wt型的小鼠的尿蛋白，第8泳道为1个月后cko型的小鼠的尿蛋白，第9泳道为2个月后wt型的小鼠的尿蛋白，第10泳道为2个月后cko型的小鼠的尿蛋白。从图3中可以看出，敲除kindlin-2基因后，随着时间的推移，cko小鼠尿蛋白的含量显著升高。

小鼠血浆蛋白含量实验

分别收集实验组和对照组的小鼠的血液中的血浆蛋白，取相同体积进行上样并进行sds-page蛋白质电泳实验，得到的电泳结果如图4所示，其中图4中从左往右的电泳样品如下，第1泳道为laoder(蛋白marker)，第2泳道为bsa样品(牛血清白蛋白，作为实验参照品)，第3泳道为1周后wt型的小鼠的血浆蛋白，第4泳道为1周后cko型的小鼠的血浆蛋白，第5泳道为2周后wt型的小鼠的血浆蛋白，第6泳道为2周后cko型的小鼠的血浆蛋白，第7泳道为1个月后wt型的小鼠的血浆蛋白，第8泳道为1个月后cko型的小鼠的血浆蛋白，第9泳道为2个月后wt型的小鼠的血浆蛋白，第10泳道为2个月后cko型的小鼠的血浆蛋白。从图4中可以看出，敲除kindlin-2基因后，随着时间的推移，cko小鼠尿蛋白的含量显著降低。

以上结果表明，kindlin-2基因特异性敲除后，小鼠的尿蛋白含量显著升高而血浆蛋白含量显著降低，提示kindlin-2蛋白与肾炎存在密切的相关性。

实施例3

进一步采用elisa检测试剂盒分别对不同时期的实验组和对照组的小鼠的尿白蛋白、肌酸酐和血浆肌酐进行检测，以白蛋白/肌酸酐作为纵坐标结果如图5所示，以血浆肌酐作为纵坐标结果如图6所示。以上结果可以看出在不同时间点，cko小鼠尿白蛋白与肌酸酐的比值明显升高，cko小鼠的血浆肌酐含量也显著增加。分别取8周龄的实验组和对照组的小鼠的肾脏，结果如图7所示，cko小鼠的肾脏颜色明显变浅，变小，形状不规则。

以上结果进一步表明，kindlin-2基因特异性敲除后，cko小鼠尿白蛋白与肌酸酐的比值明显升高，血浆肌酐含量也显著增加，肾脏出现损伤，提示kindlin-2蛋白的缺乏与肾炎存在密切的相关性。

实施例4

将两个月龄的实验组和对照组的小鼠肾脏石蜡包埋切片，分别用h&e染色、pas染色以及trichrome染色，并在激光共聚焦显微镜下观察。

h&e染色结果如图8所示，其中图8中(a)图表示1周wt型小鼠的染色结果，(b)图表示1周cko型小鼠的染色结果，(c)图表示2周wt型小鼠的染色结果，(d)图表示2周cko型小鼠的染色结果，(e)图表示4周wt型小鼠的染色结果，(f)图表示4周cko型小鼠的染色结果，(g)图表示8周wt型小鼠的染色结果，(h)图表示8周cko型小鼠的染色结果。

pas染色结果如图9所示，其中图9中(a)图表示1周wt型小鼠的染色结果，(b)图表示1周cko型小鼠的染色结果，(c)图表示2周wt型小鼠的染色结果，(d)图表示2周cko型小鼠的染色结果，(e)图表示4周wt型小鼠的染色结果，(f)图表示4周cko型小鼠的染色结果，(g)图表示8周wt型小鼠的染色结果，(h)图表示8周cko型小鼠的染色结果。

trichrome染色结果如图10所示，其中图10中(a)图表示1周wt型小鼠的染色结果，(b)图表示1周cko型小鼠的染色结果，(c)图表示2周wt型小鼠的染色结果，(d)图表示2周cko型小鼠的染色结果，(e)图表示4周wt型小鼠的染色结果，(f)图表示4周cko型小鼠的染色结果，(g)图表示8周wt型小鼠的染色结果，(h)图表示8周cko型小鼠的染色结果。

进一步的，分别对2周、4周、8周的实验组和对照组小鼠的肾小球纤维化和硬化得分进行统计，结果如分别如图11和图12，得分越高表示肾小球纤维化或硬化越严重，wt型小鼠几乎无肾小球纤维化和硬化发生，而kindlin-2敲除后小鼠(cko型小鼠)肾小球纤维化和硬化较严重。

以上结果表明，随着时间的推移，kindlin-2敲除后小鼠的肾脏肾小球结构严重破坏，有明显的肾小球硬化及间质纤维化。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。