包含左旋多巴、抗氧化剂和水性载体的眼科组合物的制作方法

发明领域

本发明大体上涉及用于抑制视觉障碍的发展或进展的、包含左旋多巴和抗氧化剂的组合物，所述视觉障碍包括与糖尿病视网膜病变或帕金森病相关的视觉障碍、以及近视。

发明背景

在本说明书中对任何之前的出版物(或来源于其的信息)或对任何已知的事物的引用不是并且不应当被视为承认或确认或以任何形式暗示该之前的出版物(或来源于其的信息)或已知的事物形成本说明书涉及的所致力于的领域中的普通的一般知识的一部分。

近视(myopia)，通常被称为近视(short-sightedness)，是由在发育过程中眼睛的过度伸长(轴向长度)引起的视觉障碍。近视是低视力的主要原因，并且是世界上最常见的眼病，一些人估计，到2020年底，近视可能会影响多达三分之一的世界人口。流行率最高的是东亚城市，那里的很多地方，约80％-90％的离校生(schoolleaver)近视。

近视的流行似乎与在强光下在户外度过的时间量密切相关。具体地，流行病学研究已经报告，户外度过的时间是针对儿童近视发展的有效保护因素。动物研究已经表明，这种保护作用似乎与光诱导的眼睛内多巴胺水平的增加相关。

人们正在努力减少近视的发病和进展，包括增加儿童在户外强光下度过的时间量。然而，在世界的许多地方，地理位置和当地气候限制可能阻止亮度级足够强或者阻止暴露时间足够长而不能防止近视。此外，社会和文化障碍可能阻止增加儿童在户外度过的时间，因为这被认为阻碍了教育和学术的进展。

目前减少近视进展的治疗选项包括光学方法，例如单光镜片(singlevisionlenses)、多焦点镜片、周边镜片(peripherallenses)和角膜矫正术；以及药剂，例如阿托品和哌仑西平。关于光学方法，来自临床试验的发现是混合的，其中大多数光学方法对近视进展速度示出有限的长期影响至没有长期影响。光学方法也不是针对预防近视的发病，仅是针对近视的进展。传统上，用诸如阿托品的药剂的治疗在降低近视进展速率方面最有效。然而，由于担心治疗后反弹效应以及严重的短期和长期的副作用，阿托品的广泛使用受到了抑制。

因此，需要用于抑制诸如近视的视觉障碍的发展或进展的新疗法。

发明概述

本发明部分地基于以下发现：左旋多巴与抗氧化剂组合的水性制剂可以穿透眼组织并且显著提高眼内多巴胺水平，从而抑制受试者中的视觉障碍的发展或进展，特别是涉及眼睛中降低的多巴胺水平的视觉障碍，例如与糖尿病视网膜病变或帕金森病相关的视觉障碍、或近视。

左旋多巴是神经递质多巴胺、肾上腺素和去甲肾上腺素的天然存在的前体。目前，左旋多巴被口服施用于治疗帕金森病并且提高中枢神经系统内的多巴胺水平，并且在较小程度上，提高全身的多巴胺水平。然而，口服施用左旋多巴不适用于视觉障碍的治疗，因为显著提高患有视觉障碍的受试者的脑中的多巴胺水平是不合意的，并且由于全身分布(systemicdistribution)，口服施用需要大剂量的左旋多巴。

在一方面，本发明提供了眼用药物组合物，该眼用药物组合物包含左旋多巴、抗氧化剂和水性载体；由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成；或基本上由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成。发明人已经发现，合意的是，在水性载体中配制左旋多巴，使得其穿透眼组织并且可用于提高眼内多巴胺水平。

在本发明的另一方面，提供了用于抑制视觉障碍的发展或进展的组合物，该组合物包含左旋多巴、抗氧化剂和水性载体；由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成；或基本上由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成。该组合物还可用于治疗或预防视觉障碍。

在本发明的又一方面，提供了用于抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展的方法，该方法包括向受试者施用本发明的组合物。在一些实施方案中，在受试者中治疗视觉障碍。在其他实施方案中，在受试者中预防视觉障碍。

本发明的另一个方面提供了本发明的组合物用于抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展的用途。

在另外的方面，本发明提供了用于在抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展中使用的本发明的组合物。

本发明还提供了本发明的组合物在制造用于抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展的药物中的用途。

在本发明的还另外的方面，提供了制备本发明的组合物的方法，该方法包括在从0.5至2的范围内的ph将左旋多巴溶解在水性载体中，向组合物中加入抗氧化剂，以及将组合物的ph调节至在从5至8的范围内的ph。

本发明的另一个方面提供了被配制用于局部施用于眼睛的眼用药物组合物，该眼用药物组合物包含左旋多巴、抗氧化剂和水性载体；由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成；或基本上由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成。

在又一方面，本发明提供了用于抑制视觉障碍的进展或发展的局部组合物，该局部组合物包含左旋多巴、抗氧化剂和水性载体；由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成；或基本上由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成。

在另外的方面，本发明提供了用于抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展的方法，该方法包括向受试者施用包含左旋多巴、抗氧化剂和水性载体的组合物；由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成的组合物；或基本上由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成的组合物，其中视觉障碍选自与糖尿病视网膜病变相关的视觉障碍、与帕金森病相关的视觉障碍、以及近视。

在又另外的方面，提供了组合物用于抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展的用途，该组合物包含左旋多巴、抗氧化剂和水性载体；由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成；或基本上由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成，其中视觉障碍选自与糖尿病视网膜病变相关的视觉障碍、与帕金森病相关的视觉障碍、以及近视。

在另一方面，本发明提供了用于在抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展中使用的组合物，该组合物包含左旋多巴、抗氧化剂和水性载体；由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成；或基本上由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成，其中视觉障碍选自与糖尿病视网膜病变相关的视觉障碍、与帕金森病相关的视觉障碍、以及近视。

在又一方面，提供了组合物在制造用于抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展的药物中的用途，该组合物包含左旋多巴、抗氧化剂和水性载体；由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成；或基本上由左旋多巴、抗氧化剂和水性载体组成，其中视觉障碍选自与糖尿病视网膜病变相关的视觉障碍、与帕金森病相关的视觉障碍、以及近视。

在另外的方面，本发明提供了用于抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展的方法，该方法包括向受试者施用包含左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、抗氧化剂和水性载体的组合物；由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、抗氧化剂和水性载体组成的组合物；或基本上由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、抗氧化剂和水性载体组成的组合物，其中视觉障碍选自与糖尿病视网膜病变相关的视觉障碍、与帕金森病相关的视觉障碍、以及近视。

在又另外的方面，提供了组合物用于抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展的用途，该组合物包含左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、抗氧化剂和水性载体；由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、抗氧化剂和水性载体组成；或基本上由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、抗氧化剂和水性载体组成，其中视觉障碍选自与糖尿病视网膜病变相关的视觉障碍、与帕金森病相关的视觉障碍、以及近视。

在另一方面，本发明提供了用于在抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展中使用的组合物，该组合物包含左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、抗氧化剂和水性载体；由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、抗氧化剂和水性载体组成；或基本上由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、抗氧化剂和水性载体组成，其中视觉障碍选自与糖尿病视网膜病变相关的视觉障碍、与帕金森病相关的视觉障碍、以及近视。

在又一方面，提供了组合物在制造用于抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展的药物中的用途，该组合物包含左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、抗氧化剂和水性载体；由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、抗氧化剂和水性载体组成；或基本上由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、抗氧化剂和水性载体组成，其中视觉障碍选自与糖尿病视网膜病变相关的视觉障碍、与帕金森病相关的视觉障碍、以及近视。

在特定实施方案中，视觉障碍是近视。

在又一方面，提供了用于抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展的方法，该方法包括向受试者施用包含左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、和药学上可接受的载体的组合物；由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、和药学上可接受的载体组成的组合物；或基本上由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、和药学上可接受的载体组成的组合物，其中视觉障碍选自与糖尿病视网膜病变相关的视觉障碍、与帕金森病相关的视觉障碍、以及近视。

在另外的方面，提供了组合物用于抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展的用途，该组合物包含左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、和药学上可接受的载体；由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、和药学上可接受的载体组成；或基本上由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、和药学上可接受的载体组成，其中视觉障碍选自与糖尿病视网膜病变相关的视觉障碍、与帕金森病相关的视觉障碍、以及近视。

在另一方面，本发明提供了用于在抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展中使用的组合物，该组合物包含左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、和药学上可接受的载体；由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、和药学上可接受的载体组成；或基本上由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、和药学上可接受的载体组成，其中视觉障碍选自与糖尿病视网膜病变相关的视觉障碍、与帕金森病相关的视觉障碍、以及近视。

在又一方面，提供了组合物在制造用于抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展的药物中的用途，该组合物包含左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、和药学上可接受的载体；由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、和药学上可接受的载体组成；或基本上由左旋多巴或其药学上可接受的盐和/或其溶剂化物或其前药、和药学上可接受的载体组成，其中视觉障碍选自与糖尿病视网膜病变相关的视觉障碍、与帕金森病相关的视觉障碍、以及近视。

在一些实施方案中，组合物包含左旋多巴和药学上可接受的载体；由左旋多巴和药学上可接受的载体组成；或基本上由左旋多巴和药学上可接受的载体组成。在特定实施方案中，药学上可接受的载体是水性载体。

在特定实施方案中，视觉障碍是近视。

附图简述

图1示出了雏鸡眼睛响应于扩散器穿戴(diffuser-wear)(形觉剥夺性近视(formdeprivationmyopia)的诱导)和用左旋多巴/卡比多巴组合物的治疗的屈光发展(refractivedevelopment)。

图2示出了雏鸡眼睛响应于扩散器穿戴和用左旋多巴/卡比多巴组合物的治疗的轴向长度的变化。

图3示出了雏鸡眼睛响应于扩散器穿戴和用左旋多巴或左旋多巴/卡比多巴组合物的治疗的屈光发展。

图4示出了雏鸡眼睛响应于扩散器穿戴和用左旋多巴或左旋多巴/卡比多巴组合物的治疗的轴向长度的变化。

图5示出了雏鸡眼睛响应于扩散器穿戴和左旋多巴或左旋多巴/卡比多巴组合物的玻璃体内注射的屈光发展。*＝p<0.05；**＝p<0.01；***＝p<0.001，相对于g2(仅形觉剥夺性近视)。

图6示出了雏鸡眼睛响应于扩散器穿戴和左旋多巴或左旋多巴/卡比多巴组合物的玻璃体内注射的轴向长度的变化。*＝p<0.05；**＝p<0.01；***＝p<0.001，相对于g2(仅形觉剥夺性近视)。

图7示出了雏鸡眼睛响应于扩散器穿戴和左旋多巴、左旋多巴/卡比多巴或左旋多巴/dmso组合物的局部施用的屈光发展。*＝p<0.05；**＝p<0.01；***＝p<0.001，相对于g13(仅形觉剥夺性近视)。

图8示出了雏鸡眼睛响应于扩散器穿戴和左旋多巴、左旋多巴/卡比多巴或左旋多巴/dmso组合物的局部施用的轴向长度的变化。*＝p<0.05；**＝p<0.01；***＝p<0.001，相对于g13(仅形觉剥夺性近视)。

图9示出了四周的时间段内，雏鸡眼睛响应于扩散器穿戴和左旋多巴的局部施用的屈光发展[相对于以其他方式未治疗的眼睛(无实验性近视)，▲＝年龄匹配的未治疗对照；■＝形觉剥夺性近视；◆＝形觉剥夺性近视和0.3％w/v(15mm)左旋多巴局部治疗；●＝0.3％w/v(15mm)左旋多巴局部治疗]。

图10示出了四周的时间段内，雏鸡眼睛响应于扩散器穿戴和左旋多巴的局部施用的轴向长度的变化[相对于以其他方式未治疗的眼睛(无实验性近视)，▲＝年龄匹配的未治疗对照；■＝形觉剥夺性近视；◆＝形觉剥夺性近视和0.3％w/v(15mm)左旋多巴局部治疗；●＝0.3％w/v(15mm)左旋多巴局部治疗]。

图11示出了雏鸡眼睛响应于扩散器穿戴和左旋多巴与adtn、阿托品和哌仑西平的局部施用的屈光发展。*＝p<0.05；**＝p<0.01，相对于g2(仅形觉剥夺性近视)。

图12示出了雏鸡眼睛响应于扩散器穿戴和左旋多巴与adtn、阿托品和哌仑西平的局部施用的轴向长度的变化。*＝p<0.05；**＝p<0.01；***＝p<0.001，相对于g2(仅形觉剥夺性近视)。

图13示出了在扩散器穿戴和四周的局部左旋多巴治疗之后，用1％甲苯胺蓝染色的来自雏鸡眼睛的视网膜的组织学分析。图13a表示来自雏鸡对侧对照眼睛的染色的视网膜，其中另一只眼睛装有半透明扩散器以诱导fdm；图13b表示来自装有半透明扩散器以诱导fdm的雏鸡眼睛的染色的视网膜；图13c表示来自雏鸡对侧对照眼睛的染色的视网膜，其中另一只眼睛装有半透明扩散器以诱导fdm并且采用每天局部施用包含0.3％w/v左旋多巴的组合物进行治疗；图13d表示来自雏鸡眼睛的染色的视网膜，该雏鸡眼睛装有半透明扩散器以诱导fdm并且采用每天局部施用包含0.3％w/v左旋多巴的组合物进行治疗；图13e表示来自雏鸡对侧对照眼睛的染色的视网膜，其中另一只眼睛采用每天局部施用包含0.3％w/v左旋多巴的组合物进行治疗；图13f表示来自采用每天局部施用包含0.3％w/v左旋多巴的组合物进行治疗的雏鸡眼睛的染色的视网膜；并且图13g表示来自年龄匹配的未治疗对照雏鸡的眼睛的染色的视网膜。

图14示出了在扩散器穿戴和四周的局部左旋多巴治疗之后，来自雏鸡眼睛的视网膜的tunel测定分析。图14a表示阴性对照；图14b表示阳性对照；图14c表示来自年龄匹配的未治疗对照雏鸡的眼睛的视网膜切片(retinalsection)；图14d表示来自装有半透明扩散器以诱导fdm的雏鸡眼睛的视网膜切片；图14e表示来自采用每天局部施用包含0.3％w/v左旋多巴的组合物进行治疗的雏鸡眼睛的视网膜切片；并且图14f表示来自雏鸡眼睛的视网膜切片，该雏鸡眼睛装有半透明扩散器以诱导fdm并且采用每天局部施用包含0.3％w/v左旋多巴的组合物进行治疗。

发明详述

1.定义

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。虽然描述了优选的方法和材料，但与本文描述的那些方法和材料相似或等效的任何方法和材料都可用于实践或测试本发明。为了本发明的目的，下文中定义了以下术语。

冠词“一(a)”和“一(an)”在本文用于指的是一个或多于一个(即至少一个)该冠词的语法的对象。举例来说，“要素(anelement)”意指一个要素或多于一个要素。

对于“约”，其意指变化多达参考的数量(quantity)、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量(amount)、重量或长度的15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度。

如本文所用，术语“和/或”指的是并且包括一个或更多个相关列出项目的任何和所有可能的组合，以及当在替代方案(或)中解释时没有组合。

措辞“水性载体”在本文中用于指的是液体水性稀释剂，其中水性载体包括但不限于水、盐水、水性缓冲液以及包含水溶性或水混溶性添加剂例如葡萄糖或甘油的水溶液。水性载体还可以呈水包油乳液的形式。

在整个本说明书和随后的权利要求中，除非上下文另有要求，否则措词“包含(comprise)”、以及变型例如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”，将被理解为意味着包括所陈述的整数或步骤或整数或步骤的组但不排除任何其他的整数或步骤或整数或步骤的组。因此，术语“包含”及类似术语的使用表示列出的整数是必需的或强制性的，但是其他整数是任选的并且可以存在或可以不存在。对于“由……组成”，其意指包括并且限于伴随措辞“由……组成”的任何内容。因此，措辞“由……组成”表示列出的要素是必需的或强制性的，并且不可以存在其他要素。对于“基本上由……组成”，其意指包括该措辞中间列出的任何要素，并且限于不干扰或不贡献于本公开内容中对于列出的要素所指定的活性或作用的其他要素。因此，措辞“基本上由……组成”表示列出的要素是必需的或强制性的，但是其他要素是任选的，并且可以存在或可以不存在，这取决于它们是否影响列出的要素的活性或作用。

如本文所用，术语“状况”指的是身体作为整体或其一部分的身体状况(physicalstate)的异常。

如本文所用，术语“盐”和“前药”包括任何药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或在施用于接受者之后能够(直接或间接)提供期望的化合物或其活性代谢物或残基的任何其他化合物。合适的药学上可接受的盐包括药学上可接受的无机酸的盐或药学上可接受的有机酸的盐，所述无机酸为诸如盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和氢溴酸，所述有机酸为诸如乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、马来酸、羟基马来酸、富马酸、柠檬酸、乳酸、粘酸、葡糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、水杨酸、磺胺酸、天冬氨酸、谷氨酸、乙二胺四乙酸、硬脂酸、棕榈酸、油酸、月桂酸、泛酸、丹宁酸、抗坏血酸和戊酸。碱盐包括但不限于与药学上可接受的阳离子形成的那些，所述阳离子诸如钠、钾、锂、钙、镁、铵和烷基铵。此外，碱性含氮基团可以用诸如以下的剂来季铵化：低级烷基卤化物例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯例如硫酸二甲酯和硫酸二乙酯；以及其他的剂。然而，将理解的是，非药学上可接受的盐也落入本发明的范围内，因为这些盐可以用于制备药学上可接受的盐。盐和前药的制备可以通过本领域已知的方法进行。例如，金属盐可以通过期望的化合物与金属氢氧化物的反应来制备。酸盐可以通过使适当的酸与期望的化合物反应来制备。

如本文所用，措辞“溶解形式”指的是以下的形式：其中诸如左旋多巴的化合物溶解在液体中，使得获得包含均匀分布的该化合物的溶液，该溶液基本上不含固体化合物。在一些实施方案中，液体是如本文所述的水性载体。

如本文所用的术语“受试者”指的是期望疗法或预防的脊椎动物受试者，特别是哺乳动物或鸟类受试者。合适的受试者包括但不限于灵长类动物；鸟类；牲畜动物，例如绵羊、牛、马、鹿、驴和猪；实验室测试动物，例如兔子、小鼠、大鼠、豚鼠和仓鼠；伴侣动物，例如猫和狗；以及圈养的野生动物，例如狐狸、鹿和野狗。在特定实施方案中，受试者是人类。在一些实施方案中，受试者是例如从约2岁到20岁的年龄的人类儿童或年轻成人。然而，将理解的是，上述术语并不意味着存在症状。

如本文所用，措辞“视觉障碍”指的是改变受试者的视觉的状况。在特定实施方案中，这样的状况与“视敏度(visualacuity)”的降低相关，所述“视敏度”的降低通常与视觉敏锐度或清晰度的降低或减弱相关。因此，“视敏度”的降低通常指的是形态视觉(formvision)的敏锐度或清晰度的任何可测量的降低或减弱，这取决于眼睛内视网膜焦点的锐度(sharpness)和脑解释能力的灵敏度。在某些实施方案中，视敏度是指斯内伦敏度(snellenacuity)(例如20/20)。

除非另有具体说明，否则本文所述的每个实施方案将加以必要的修改被应用于所有的实施方案。

2.组合物

本发明部分地基于以下的确认：包含左旋多巴和抗氧化剂的水性组合物可以显著提高眼内多巴胺水平。因此，本发明人设想，包含左旋多巴和抗氧化剂的水性组合物可以用于抑制涉及眼睛中降低的多巴胺水平的视觉障碍的发展或进展。

组合物中左旋多巴的量可以取决于正在治疗的视觉障碍、受试者的特征例如体重和年龄以及施用途径。在一些实施方案中，组合物中左旋多巴的量是在组合物的从0.01％w/v至60％w/v、0.02％w/v至50％w/v、0.03％w/v至40％w/v、0.04％w/v至30％w/v、0.05％w/v至20％w/v、0.06％w/v至10％w/v、0.065％w/v至9％w/v、0.07％w/v至8％w/v、0.075％w/v至7％w/v、0.08％w/v至6％w/v、0.085％w/v至5％w/v、0.09％w/v至4％w/v、0.095％w/v至3％w/v、0.1％w/v至2％w/v或0.105％w/v至1％w/v的范围内(以及其间的所有整数)；特别是组合物的约0.1％w/v、0.2％w/v、0.3％w/v、0.4％w/v、0.5％w/v、0.6％w/v、0.7％w/v、0.8％w/v、0.9％或1％w/v。

在优选的实施方案中，左旋多巴在组合物中呈溶解形式。技术人员将很清楚地知道本领域中常规用于确定化合物的溶解度的程序，例如在以下文献中描述的程序：goodwin(2006)drugdiscoverytoday:technologies,3(1):67-71；jouyban(2010)handbookofsolubilitydataforpharmaceuticals(crcpress)；或hefterandtomkins(2003)theexperimentaldeterminationofsolubilities(johnwiley&sons,ltd)。例如，可以使用uv光谱学或高效液相色谱法分析化合物的溶解度。

在一些实施方案中，左旋多巴可以呈衍生物的形式，例如其药学上可接受的盐和/或溶剂化物、或其前药。在一些实施方案中，左旋多巴呈水合物的形式。在一些实施方案中，左旋多巴的药学上可接受的盐是盐酸盐，例如us2007/0027216a1中描述的盐酸盐。在一些实施方案中，左旋多巴的前药是(2r)-2-苯基羰基氧基丙基(2s)-2-氨基-3-(3,4-二羟基苯基)丙酸酯甲磺酸盐，如us2009/0156679a1中所述的；或左旋多巴酯，例如左旋多巴甲基酯或左旋多巴乙基酯、左旋多巴酰胺、左旋多巴甲酰胺或左旋多巴磺酰胺，例如us2014/0088192a1中描述的那些。

不希望受理论束缚，与用非天然存在的药剂的疗法相比，使用由人体天然合成并存在于人体内的左旋多巴被认为减少了副作用，并因此，本发明的组合物将适合于长期使用。此外，认为使用天然存在的化合物将降低耐受性的发生率，这通常是与用于治疗和/或预防诸如近视的视觉障碍的现有药剂一起发展的。

抗氧化剂可以是减缓、抑制或防止本发明的组合物的任何组分，特别是左旋多巴的氧化的任何化合物。合适的抗氧化剂可以包括但不限于抗坏血酸或维生素c、酚酸、山梨酸、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、乙酰半胱氨酸、硫代硫酸钠、乙二胺四乙酸(edta)、亚硝酸钠、抗坏血酸硬脂酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、α-硫代甘油、异抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、柠檬酸、生育酚或维生素e、生育酚乙酸酯、二丁基羟基甲苯、大豆卵磷脂、硫代乙醇酸钠、丁基羟基茴香醚、没食子酸丙酯、尿酸、褪黑激素、硫脲、或其盐或组合。在一些实施方案中，抗氧化剂是抗坏血酸或其盐。

抗氧化剂可以以适合于显著地减缓、抑制或防止本发明的组合物的任何组分，特别是左旋多巴的氧化的量存在。例如，抗氧化剂可以以在组合物的从0.01％w/v至10％w/v、0.01％w/v至5％w/v、0.03％w/v至4％w/v、0.05％w/v至3％w/v、0.07％w/v至2％w/v、0.09％w/v至1％w/v或0.1％w/v至0.5％w/v的范围内的量存在；特别是以组合物的约0.1％w/v的量存在。

水性载体优选地是药学上可接受的水性载体。可以使用本领域公知的多种药学上可接受的水性载体。例如，水性载体可以选自但不限于盐水、水、水性缓冲液、包含水和可混溶溶剂的水溶液、及其组合。在一些实施方案中，水性载体是盐水。当使用盐水时，对于施用点，例如眼睛，优选地是等渗的。例如，在一些实施方案中，盐水包含0.15％w/v至8％w/v氯化钠；特别是0.18％w/v至7％w/v、0.22％w/v至5％w/v或0.45％w/v至3％w/v氯化钠；更特别地0.5％w/v至2％w/v或0.65％w/v至1.5％w/v氯化钠；最特别地约0.9％w/v氯化钠。

在水性载体不是等渗的(例如水)一些实施方案中，组合物可以包含张力剂(tonicityagent)。可以使用本领域公知的任何药学上可接受的张力剂。合适的张力剂包括但不限于硼酸、酸式磷酸钠缓冲液、氯化钠、葡萄糖、海藻糖、氯化钾、氯化钙、氯化镁、聚丙二醇、甘油、甘露醇、或其盐或组合。张力剂可以以提供给诸如眼睛的施用点等渗性的量存在于组合物中，例如在从0.02％w/v至15％w/v的范围内的量。

在一些实施方案中，水性载体是缓冲液，其中缓冲液维持ph在从5至8、5.2至7.4、5.5至7.4或5.5至6的范围内。在一些实施方案中，缓冲液维持ph在从5.5至6.5的范围内，特别是5.5至6或6至6.5的范围内。合适的缓冲剂包括但不限于乙酸、柠檬酸、焦亚硫酸钠、组氨酸、碳酸氢钠、氢氧化钠、硼酸、硼砂、碱金属磷酸盐、磷酸盐或柠檬酸盐缓冲液、或其组合。缓冲剂在组合物中可以以适于维持期望的ph的量存在。

在一些实施方案中，组合物的ph在从5至8、5.2至7.4、5.5至7.4或5.5至6的范围内。在一些实施方案中，组合物的ph在从5.5至6.5的范围内，特别是5.5至6或6至6.5的范围内。在一些实施方案中，组合物的ph在从5.5至6的范围内。在一些实施方案中，组合物的ph在从6至6.5的范围内。

在一些实施方案中，本发明的组合物还包含芳香族l-氨基酸脱羧酶的抑制剂。芳香族l-氨基酸脱羧酶的合适的抑制剂包括但不限于卡比多巴、苄丝肼、甲基多巴、或其盐或组合。在一些实施方案中，芳香族l-氨基酸脱羧酶的抑制剂是卡比多巴。不希望受理论束缚，认为芳香族l-氨基酸脱羧酶的抑制剂减少了左旋多巴在非神经元组织(non-neuronaltissue)内向多巴胺的转化，并因此增加了在本发明的组合物中的左旋多巴的生物利用度。

在本发明的组合物中芳香族l-氨基酸脱羧酶的抑制剂的量将取决于正治疗的状况、组合物的施用途径和组合物中左旋多巴的量。芳香族l-氨基酸脱羧酶的抑制剂应当以足以显著抑制左旋多巴的脱羧的量存在。在一些实施方案中，左旋多巴与芳香族l-氨基酸脱羧酶的抑制剂的比率在从20:1至1:1、15:1至1:1、10:1至1:1、9:1至1:1、8:1至1:1、7:1至1:1、6:1至2:1或5:1至3:1。在一些实施方案中，左旋多巴与芳香族l-氨基酸脱羧酶的抑制剂的比率是约4:1。

在一些实施方案中，组合物中芳香族l-氨基酸脱羧酶的抑制剂的量是在以下的范围内：组合物的从0.0005％w/v至30％w/v、0.0025％w/v至15％w/v、0.005％w/v至12.5％w/v、0.0075％w/v至10％w/v、0.01％w/v至7.5％w/v、0.0125％w/v至5％w/v、0.015％w/v至2.5％w/v、0.0163％w/v至2.25％w/v、0.0175％w/v至2％w/v、0.0188％w/v至1.75％w/v、0.02％w/v至1.5％w/v、0.0213％w/v至1.25％w/v、0.0225％w/v至1％w/v、0.0238％w/v至0.75％w/v、0.025％w/v至0.5％w/v、0.0263％w/v至0.25％w/v(以及其间的所有整数)；特别是组合物的约0.025％w/v、0.03％w/v、0.035％w/v、0.04％w/v、0.045％w/v、0.05％w/v、0.055％w/v、0.06％w/v、0.065％w/v、0.07％w/v、0.075％w/v、0.08％w/v、0.085％w/v、0.09％w/v、0.095％w/v、0.1％w/v、0.125％w/v、0.15％w/v、0.175％w/v、0.2％w/v、0.225％或0.25％w/v。

该组合物还可以包含一种或更多种辅助药物活性剂或可以与一种或更多种辅助药物活性剂分开、同时或顺序地施用。在一些实施方案中，辅助药物活性剂可以增加多巴胺能系统的活化。示例性的辅助药物活性剂包括但不限于多巴胺受体激动剂、γ-氨基丁酸(gaba)受体拮抗剂和/或毒蕈碱乙酰胆碱受体拮抗剂。在一些实施方案中，药物活性剂是用于抑制视觉障碍的发展或进展的剂，所述视觉障碍特别是涉及眼睛中降低的多巴胺水平的视觉障碍，例如近视。

不希望受理论束缚，认为相对于单独的一种药物活性剂，施用多于一种药物活性剂可以降低对疗法的耐受性的发展，尤其是当药物活性剂具有不同的作用机制和/或不同的分子靶标时。例如，本发明的组合物与现有的用于视觉障碍的药物治疗例如阿托品一起施用，可以减少响应于现有的药物治疗的受体脱敏的发生。还认为施用多于一种药物活性剂可以导致比单独施用每种剂更大的治疗效果，例如增加的功效、减少的副作用和/或降低的耐受性。

在一些实施方案中，本发明的组合物还包含多巴胺受体激动剂。多巴胺受体激动剂可以在任何多巴胺受体亚型具有激动剂活性，所述多巴胺受体亚型包括但不限于来自受体的d1样家族(d1和d5受体)和d2样家族(d2、d3和d4受体)的任何受体亚型，以及多巴胺受体异源二聚体。合适的多巴胺受体激动剂包括但不限于喹吡罗、阿扑吗啡、罗匹尼罗、普拉克索、右普拉克索(dexpramipexole)、吡贝地尔、罗替戈汀、溴隐亭、麦角乙脲、卡麦角林、2-氨基-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢萘(adtn)、培高利特、calidopa、dihydrexidine、doxathrine、丙基去甲阿朴吗啡、喹高利特、罗克吲哚、sumanirole、非诺多泮(fenoldopam)、麦角柯宁碱、1-苯基-2,3,4,5-四氢-(1h)-3-苯并吖庚因-7,8-二醇(还被称为skf-38393)、2-(n-苯乙基-n-丙基)氨基-5-羟基四氢萘(ppht；还被称为n-0434)、二氢麦角胺、(1r,3s)-1-(氨基甲基)-3-苯基-3,4-二氢-1h-异色烯-5,6-二醇(还被称为a-68930)、卡莫昔罗、非诺多泮、或其盐或组合。在一些实施方案中，多巴胺受体激动剂是二氢麦角胺酒石酸盐、2-(n-苯乙基-n-丙基)氨基-5-羟基四氢萘盐酸盐或(1r,3s)-1-(氨基甲基)-3-苯基-3,4-二氢-1h-异色烯-5,6-二醇盐酸盐。在一些实施方案中，多巴胺受体激动剂选自adtn、喹吡罗、阿扑吗啡、及其盐和组合；特别是adtn及其盐。

组合物中多巴胺受体激动剂的量可以取决于正治疗的状况和施用途径。在一些实施方案中，组合物中多巴胺受体激动剂的量是在以下的范围内：组合物的从0.01％w/v至20％w/v、0.01％w/v至10％w/v、0.01％w/v至5％w/v、0.03％w/v至3％w/v、0.033％w/v至2.7％w/v、0.038％w/v至2.4％w/v、0.043％w/v至2.1％w/v、0.05％w/v至1.8％w/v、0.06％w/v至1.5％w/v、0.075％w/v至1.2％w/v、0.1％w/v至0.9％w/v或0.15％w/v至0.6％w/v(以及其间的所有整数)；特别是组合物的约0.2％w/v、0.21％w/v、0.22％w/v、0.23％w/v、0.24％w/v、0.25％w/v、0.26％w/v、0.27％w/v、0.28％w/v、0.29％w/v、0.3％w/v、0.31％w/v、0.32％w/v、0.33％w/v、0.34％w/v、0.35％w/v、0.36％w/v、0.37％w/v、0.38％w/v、0.39％w/v或0.4％w/v。

在一些实施方案中，本发明的组合物还包含gaba受体拮抗剂。gaba受体拮抗剂可以在任何gaba受体亚型具有拮抗剂活性，所述gaba受体亚型包括但不限于gabaa受体、gabab受体和/或gabaa-rho(以前为gabac)受体。合适的gaba受体拮抗剂包括但不限于荷包牡丹碱、氟马西尼、gabazine、亚苯基四唑、(1,2,5,6-四氢吡啶-4-基)甲基次膦酸(tpmpa)、(3-氨基丙基)(环己基甲基)次膦酸(还被称为cgp-46381)、4-咪唑乙酸、木防己苦毒素、哌啶-4-基次膦酸(ppa)、哌啶-4-基亚硒酸(sepi)、3-氨基丙基-n-丁基次膦酸(还被称为cgp-36742)、(哌啶-4-基)甲基次磷酸(p4mpa)、或其盐或组合。在一些实施方案中，gaba受体拮抗剂选自tpmpa、荷包牡丹碱、及其盐和组合。

组合物中gaba受体拮抗剂的量可以取决于正治疗的状况和施用途径。在一些实施方案中，组合物中gaba受体拮抗剂的量是在以下的范围内：组合物的从0.01％w/v至20％w/v、0.01％w/v至10％w/v、0.01％w/v至5％w/v、0.03％w/v至3％w/v、0.033％w/v至2.7％w/v、0.038％w/v至2.4％w/v、0.043％w/v至2.1％w/v、0.05％w/v至1.8％w/v、0.06％w/v至1.5％w/v、0.075％w/v至1.2％w/v、0.1％w/v至0.9％w/v或0.15％w/v至0.6％w/v(以及其间的所有整数)；特别是组合物的约0.2％w/v、0.21％w/v、0.22％w/v、0.23％w/v、0.24％w/v、0.25％w/v、0.26％w/v、0.27％w/v、0.28％w/v、0.29％w/v、0.3％w/v、0.31％w/v、0.32％w/v、0.33％w/v、0.34％w/v、0.35％w/v、0.36％w/v、0.37％w/v、0.38％w/v、0.39％w/v或0.4％w/v。

在一些实施方案中，本发明的组合物还包含毒蕈碱乙酰胆碱受体拮抗剂。毒蕈碱乙酰胆碱受体拮抗剂可以在任何毒蕈碱乙酰胆碱受体亚型具有拮抗剂活性，所述毒蕈碱乙酰胆碱受体亚型包括但不限于m1受体、m2受体、m3受体、m4受体和m5受体。合适的毒蕈碱受体拮抗剂包括但不限于阿托品、哌仑西平、喜巴辛、东莨菪碱、环戊通、异丙托品、氧托品(oxitropium)、托吡卡胺、奥昔布宁、托特罗定、苯海拉明、双环维林、黄酮哌酯、噻托溴铵、三己芬迪、索利那新、达非那新、苯扎托品、美贝维林、普环啶、阿地溴铵(aclidinium)、毒蕈碱毒素1(mt1)、毒蕈碱毒素2(mt2)、毒蕈碱毒素3(mt3)、毒蕈碱毒素4(mt4)、毒蕈碱毒素7(mt7)、或其盐或组合。在一些实施方案中，毒蕈碱乙酰胆碱受体拮抗剂选自阿托品、哌仑西平、喜巴辛、及其盐和组合；特别是阿托品和哌仑西平、及其盐和组合。

组合物中毒蕈碱乙酰胆碱受体拮抗剂的量可以取决于正治疗的状况和施用途径。在一些实施方案中，组合物中毒蕈碱乙酰胆碱受体拮抗剂的量是在以下的范围内：组合物的从0.01％w/v至30％w/v、0.2％w/v至20％w/v、0.22％w/v至18％w/v、0.25％w/v至16％w/v、0.29％w/v至14％w/v、0.33％w/v至12％w/v、0.4％w/v至10％w/v、0.5％w/v至8％w/v、0.67％w/v至6％w/v或1％w/v至4％w/v(以及其间的所有整数)；特别是组合物的约0.1％w/v、0.2％w/v、0.3％w/v、0.4％w/v、0.5％w/v、0.6％w/v、0.7％w/v、0.8％w/v、0.9％w/v、1％w/v、1.1％w/v、1.2％w/v、1.3％w/v、1.4％w/v、1.5％w/v、1.6％w/v、1.7％w/v、1.8％w/v、1.9％w/v、2％w/v、2.1％w/v、2.2％w/v、2.3％w/v、2.4％w/v、2.5％w/v、2.6％w/v、2.7％w/v、2.8％w/v、2.9％w/v、3％w/v、3.1％w/v、3.2％w/v、3.3％w/v、3.4％w/v、3.5％w/v、3.6％w/v、3.7％w/v、3.8％w/v、3.9％或4％w/v。在特定实施方案中，组合物中毒蕈碱乙酰胆碱受体拮抗剂的量是在以下的范围内：组合物的从0.0001％w/v至30％w/v、0.0003％w/v至20％w/v、0.0005％w/v至10％w/v、0.0007％w/v至5％w/v、0.0009％w/v至2％w/v、0.001％w/v至1％w/v、0.003％w/v至0.5％w/v、0.005％w/v至0.2％w/v、0.007％w/v至0.15％w/v、或0.009％w/v至0.1％w/v(以及其间的所有整数)；特别是组合物的约0.001％w/v、0.002％w/v、0.003％w/v、0.004％w/v、0.005％w/v、0.006％w/v、0.007％w/v、0.008％w/v、0.009％w/v、0.01％w/v、0.011％w/v、0.012％w/v、0.013％w/v、0.014％w/v、0.015％w/v、0.016％w/v、0.017％w/v、0.018％w/v、0.019％w/v或0.02％w/v；最特别地组合物的约0.01％w/v。

本发明的组合物还可以包含表面活性剂。可以使用本领域公知的多种药学上可接受的表面活性剂。示例性表面活性剂包括但不限于以下类别的表面活性剂：醇；氧化胺；嵌段聚合物；羧基化醇或烷基酚乙氧基化物；羧酸/脂肪酸；乙氧基化的芳基酚；乙氧基化的脂肪酯、油、脂肪胺或脂肪醇例如鲸蜡醇；脂肪酯；脂肪酸甲酯乙氧基化物；甘油酯例如单硬脂酸甘油酯；二醇酯；基于羊毛脂的衍生物；卵磷脂或其衍生物；木质素或其衍生物；甲酯类；甘油单酯或其衍生物；聚乙二醇；聚丙二醇；烷基酚聚乙二醇；烷基硫醇聚乙二醇；聚丙二醇乙氧基化物；聚乙二醇醚，例如cetomacrogol1000；聚合物表面活性剂；丙氧基化和/或乙氧基化的脂肪酸、醇或烷基酚；基于蛋白质的表面活性剂；肌氨酸衍生物；脱水山梨醇衍生物例如聚山梨醇酯；山梨醇酯；山梨醇聚二醇醚的酯；脂肪酸烷醇酰胺；n-烷基多羟基脂肪酸酰胺；n-烷氧基多羟基脂肪酸酰胺；烷基多糖苷；季铵化合物例如苯扎氯铵；环糊精例如α-环糊精、β-环糊精或γ-环糊精；蔗糖酯或葡萄糖酯或其衍生物；磺基琥珀酸酯/盐(sulfosuccinate)，例如磺基琥珀酸钠二辛酯；或其组合。不希望受理论束缚，如果组合物中包含油，表面活性剂的存在可以用于与油一起乳化水性载体，并且可以增强活性成分例如左旋多巴穿透角膜上皮。表面活性剂可以以在组合物的从约0.1％w/v至30％w/v的范围内的量存在。

在一些实施方案中，本发明的组合物还包含流变改性剂。流变改性剂可以被用于改变组合物的表面张力和流动，并且当配制用于局部施用时，还可以有助于组合物在眼睛表面上的停留时间。合适的流变改性剂在本领域中是熟知的。例如，流变改性剂可以选自但不限于透明质酸、壳聚糖、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、右旋糖酐、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基瓜尔胶、丙烯酸酯例如卡波普聚合物(carbopolpolymer)、泊洛沙姆、阿拉伯树胶、黄原胶、瓜尔胶、刺槐豆胶、羧甲基纤维素、藻酸盐、淀粉(来自大米、玉米、马铃薯或小麦)、卡拉胶、魔芋、芦荟凝胶、琼脂糖、果胶、黄蓍胶、卡德兰胶(curdlangum)、结冷胶、硬葡聚糖、及其衍生物和组合。流变改性剂应当以足以获得期望的组合物粘度的量存在。流变改性剂可以以在组合物的从约0.5％w/v至5％w/v的范围内的量存在。

本发明的组合物还可以包含防腐剂。防腐剂可以特别地用于防止来自同一容器的组合物中的微生物污染，该组合物经受多次使用，例如，如果本发明的组合物被配制成以多个单位剂型局部施用。合适的防腐剂包括本领域中常规使用的任何药学上可接受的防腐剂，以防止组合物中的微生物污染。非限制性实例包括过硼酸钠、稳定化的氧氯络合物(stabilizedoxychlorocomplex)、聚季铵盐-1(polyquaternium-1)、苯基汞酸(phenylmercuricacid)、苯扎氯铵、氯丁醇、乙酸苯汞、硝酸苯汞、氯己定、苯度溴铵(benzododeciniumbromide)、西曲氯铵(cetrimoniumchloride)、硫柳汞、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、聚季铵盐氯化铵(polyquaterniumammoniumchloride)、聚氨基丙基双胍、过氧化氢、苯甲酸、酚酸、山梨酸、苯甲醇、或其盐或组合。防腐剂应当以提供足够的防腐活性的量存在。例如，防腐剂可以以在从组合物的约0.001％w/v至1％w/v的范围内的量存在。

增加组合物到眼睛中的渗透可以是合意的。这在组合物被配制用于局部施用时可以是特别有用的。因此，本发明的组合物还可以包含渗透增强剂。在这方面，本发明的组合物可以包含但不限于二甲基亚砜(dmso)；环糊精例如α-环糊精、β-环糊精或γ-环糊精；edta；十烃季铵；甘氨胆酸盐；胆酸盐；皂苷；夫西地酸盐(fusidate)；牛磺胆酸盐；聚乙二醇醚；聚山梨醇酯；或其盐、衍生物或组合。在一些实施方案中，渗透增强剂是二甲基亚砜。其他渗透增强剂包括纳米颗粒、脂质体或胶束，其在一些实施方案中包封左旋多巴。渗透增强剂应当以促进左旋多巴穿过角膜上皮渗透的量存在。例如，渗透增强剂可以以在组合物的从约0.1％w/v至30％w/v的范围内的量存在。

在特定实施方案中，渗透增强剂是胶束。合适的胶束包括但不限于tritonx-100胶束，例如在jodko-piorecka和litwinienko(2015)freeradicalbiologyandmedicine,83:1-11中描述的胶束；表面活性剂纳米胶束，例如用十二烷基硫酸钠、十二烷基三甲基溴化铵、正十二烷基四(环氧乙烷)、维生素etgps、辛基酚聚醚-40(octoxynol-40)和/或二辛酰基磷脂酰胆碱形成的纳米胶束；聚合物胶束，例如用聚(己内酯)、聚(d,l-丙交酯)、聚环氧丙烷、聚(β-苄基-1-天冬氨酸酯)、甲氧基聚(乙二醇)-己基取代的聚(丙交酯)、pluronicf127聚(氧乙烯)/聚(氧丙烯)/聚(氧乙烯)、f68、f127、聚(羟乙基天冬氨酰胺)-聚乙二醇-十六烷基胺、聚乙二醇40硬脂酸酯(polyoxyl40stearate)、n-异丙基丙烯酰胺和与n,n'-亚甲基双丙烯酰胺交联的乙烯基吡咯烷酮和丙烯酸、pluronicf127和壳聚糖、聚乳酸、聚(乙醇酸)、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、n-邻苯二甲酰基羧甲基壳聚糖(n-phthaloylcarboxymethylchitosan)、聚(丙烯酸2-乙基己酯)-b-聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸叔丁酯)-b-聚(2-乙烯基吡啶)、聚(环氧乙烷)-b-聚己内酯、聚(ε-己内酯)-b-聚(乙二醇)-b-聚(ε-己内酯)、聚(ε-己内酯)-b-聚(甲基丙烯酸)、聚(乙二醇)-b-聚(ε-己内酯-共-三亚甲基碳酸酯)、聚(天冬氨酸)-b-聚丙交酯、聚(乙二醇)-嵌段-聚(天冬氨酸-酰肼)、聚(n-异丙基丙烯酰胺-共-甲基丙烯酸)-g-聚(d,l-丙交酯)和/或硬脂酸接枝的壳聚糖寡糖形成的胶束；或us2009/0092665a1中公开的胶束。在特定实施方案中，胶束将左旋多巴包封在组合物中。

本发明的组合物还可以另外包含螯合剂。合适的螯合剂包括但不限于氨基羧酸或其盐，例如edta、氨三乙酸、氨三丙酸、二亚乙基三胺五乙酸、2-羟基乙基-乙二胺三乙酸、1,6-二氨基-六亚甲基-四乙酸、1,2-二氨基-环己烷四乙酸、o,o'-双(2-氨基乙基)-乙二醇-四乙酸、1,3-二氨基丙烷-四乙酸、n,n-双(2-羟基苄基)乙二胺-n,n-二乙酸、乙二胺-n,n'-二乙酸、乙二胺-n,n'-二丙酸、三亚乙基四胺六乙酸、7,19,30-三氧杂-1,4,10,13,16,22,27,33-八氮杂双环[11,11,11]三十五烷(o-bis-tren)、乙二胺-n,n'-双(亚甲基膦酸)、亚氨基二乙酸、n,n-双(2-羟基乙基)甘氨酸(dheg)、1,3-二氨基-2-羟基丙烷-四乙酸、1,2-二氨基丙烷-四乙酸、乙二胺-四(亚甲基膦酸)、n-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸、或其组合或盐；特别是edta的药学上可接受的盐或混合盐，例如二钠盐、三钠盐、四钠盐、二钾盐、三钾盐、锂盐、二锂盐、铵盐、二铵盐、钙盐或钙-二钠盐；最特别地edta二钠。螯合剂可以以在组合物的从约0.01％w/v至1％w/v的范围内的量存在。

在一些实施方案中，本发明的组合物还可以包含油。合适的油包括但不限于杏仁油；蓖麻油；矿物油；橄榄油；花生油(peanutoil)；椰子油；大豆油；玉米油(cornoil)；茴香油；丁香油；桂皮油；肉桂油；花生油(arachisoil)；玉米油(maizeoil)；葛缕子油；迷迭香油；薄荷油；桉叶油；种子油如菜籽油、棉籽油、亚麻子油、红花油、芝麻油或葵花油；有机硅油；或其组合。这样的油可以以水包油乳液的形式与水性载体一起被包含在组合物中，任选地与表面活性剂一起。油可以以在组合物的从约0.1％w/v至20％w/v的范围内的量存在。

本发明的组合物还可以包含通常存在于眼用制剂中的任何其他药学上可接受的赋形剂。例如，组合物还可以包含醇例如异丙醇、苯甲醇、鲸蜡硬脂醇或乙醇；润滑剂例如葡萄糖、甘油、聚乙二醇、聚丙二醇或其衍生物；多糖例如壳聚糖、壳多糖、皮肤素(dermatan)、透明质酸盐、肝素、皮肤素、软骨素、环糊精或其衍生物；或其组合。合适的药学上可接受的载体包括但不限于如本文所述的水性载体、如本文所述的油、脂肪酸、有机硅液体载体(siliconeliquidcarrier)例如全氟化碳或氟化液体载体，例如如us6458376b1中所述的，以及其组合。在一些实施方案中，组合物不包含抗氧化剂。

在特定实施方案中，本发明的组合物可以被配制成局部施用到眼睛。在这方面，本发明的组合物可以呈滴眼剂或凝胶的形式；尤其是滴眼剂。不希望受理论束缚，将组合物配制成用于局部施用于眼睛被认为增加使用者的依从性，特别是当组合物用作预防措施或控制措施时。如果将组合物施用于儿童受试者，这可以是特别重要的。此外，这样的制剂可以降低左旋多巴的脱靶效应的发生率。

在一些实施方案中，本发明的组合物被配制用于使左旋多巴穿透角膜上皮。在优选实施方案中，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％的剂量的左旋多巴穿透角膜上皮。

当配制成滴眼剂或凝胶时，本发明的组合物可以呈单个单位剂型或多个单位剂型，优选地多个单位剂型。

在可选择的实施方案中，本发明的组合物被配制用于直接注射到眼睛中。在特定实施方案中，本发明的组合物被配制用于玻璃体内注射、结膜下注射、前房内注射、巩膜内注射、角膜内注射或视网膜下注射；特别是玻璃体内注射、巩膜内注射或角膜内注射。在一些实施方案中，本发明的组合物被配制用于脉络膜上腔注射(suprachoroidalinjection)。在一些实施方案中，本发明的组合物被配制用于经由微针注射，例如经由巩膜内施用或角膜内施用。

本领域技术人员可以容易地确定组合物的其他赋形剂和组分。用于配制和施用的技术可以在例如remington(1980)remington'spharmaceuticalsciences,mackpublishingco.,easton,pa.,最新版中找到；并且合适的赋形剂可以在例如katdare和chaubel(2006)excipientdevelopmentforpharmaceutical,biotechnologyanddrugdeliverysystems(crc出版社)中找到。

本领域技术人员将熟悉本发明的组合物的组分，并因此将能够容易地合成或获得这些组分，例如从诸如sigmaaldrichco.llc获得。例如，左旋多巴从许多来源是可商购的，例如sigma-aldrichco.llc，并且合成路线可得自例如vandanyan和hruby(2006)synthesisofessentialdrugs(elsevier)第136-137页；vandanyan和hruby(2016)synthesisofbest-sellerdrugs(学术出版社)第180-182页；以及us4,962,223；所有这些文献以其整体通过引用并入本文。

3.用于制备组合物的工艺

发明人已经发现，本发明的组合物可以通过以下来制备：在从0.5至2.5的范围内的ph将左旋多巴溶解在水性载体中，向组合物中加入抗氧化剂，以及将组合物的ph调节至在从5至8的范围内的ph。

左旋多巴被溶解在水性载体中时所处于的ph在从0.5至2.5的范围内，优选地1至2，最特别地1.5至2。在一些实施方案中，左旋多巴在约2的ph被溶解在水性载体中。不希望受理论束缚，认为将水性载体保持在酸性ph增加了左旋多巴在水性载体中的溶解度。

最终组合物的ph在从5至8的范围内，优选地5.5至7.5，特别是5.5至7.4，最特别地5.5至6。在一些实施方案中，组合物的ph在从5.5至6.5的范围内，特别是5.5至6或6至6.5的范围内。在一些实施方案中，组合物的ph被调节至在从5.5至6的范围内的ph。在一些实施方案中，组合物的ph被调节至在从6至6.5的范围内的ph。

可以使用本领域中常规使用的任何药学上可接受的ph调节剂，例如盐酸、氢氧化钠等来调节组合物的ph。本领域技术人员将很清楚地知道合适的剂。

本发明的组合物的芳香族l-氨基酸脱羧酶的抑制剂、赋形剂和其他组分可以在该工艺的任何阶段加入到组合物中。例如，芳香族l-氨基酸脱羧酶的抑制剂可以在将组合物的ph调节到在从5至8的范围内的ph之前，在从0.5至2.5的范围内的ph被加入到左旋多巴和水性载体的溶液中，或者可以在将组合物的ph调节到在从5至8的范围内的ph之后被加入到组合物中。在一些实施方案中，芳香族l-氨基酸脱羧酶的抑制剂和左旋多巴在从0.5至2.5的范围内的ph被同时溶解在水性载体中。

本发明的组合物还可以在使用前灭菌，例如通过过滤、高压灭菌法和/或γ辐照。

不希望受理论束缚，使用该工艺制备本发明的组合物增加了左旋多巴在水性载体中的溶解度，从而消除了对增加左旋多巴在组合物中的溶解度的有机载体或有机剂的存在的需求。

4.预防和治疗视觉障碍的方法

本发明的组合物可用于抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展，特别是涉及眼睛中降低的多巴胺水平的视觉障碍，例如与糖尿病视网膜病变或帕金森病相关的视觉障碍、或近视。因此，本发明的组合物可以被用于抑制受试者中的视觉障碍的进展或发展的方法中。本发明的组合物还可以被用于制造用于本文所述用途的药物。

本发明的组合物可用于抑制受试者中的视觉障碍的进展。在这方面，本发明的组合物可以被用于治疗视觉障碍。在一些实施方案中，本发明的组合物可以减缓受试者中的视觉障碍的进展。

本发明的组合物还可用于抑制受试者中的视觉障碍的发展。因此，本发明的组合物可用于预防受试者中的视觉障碍。在一些实施方案中，本发明的组合物可以延迟受试者中的视觉障碍的发病，即可以增加发展视觉障碍时的受试者所处于的年龄，并因此延迟视觉障碍的可能的严重性。

视觉障碍可以是涉及眼睛中降低的多巴胺水平的任何视觉障碍，特别是涉及视网膜中降低的多巴胺水平的任何视觉障碍。因此，视觉障碍可以是任何视觉障碍，其中增加在眼睛中、特别是在视网膜中的多巴胺水平与视觉障碍的进展或发展的有效抑制相关。

有许多视觉障碍涉及眼睛中降低的多巴胺水平。例如，视觉障碍可以是，但不限于，与糖尿病视网膜病变或帕金森病相关的视觉障碍、近视、增加的眼睛生长(increasedoculargrowth)、降低的空间和时间对比灵敏度、弱视、视力模糊或复视、眼睛疲劳、主动睁开眼睛的问题(失用症)、眼睑痉挛(eyelidspasm)(睑痉挛(blepharospasm))、过度眨眼、改变的颜色知觉、降低的深度知觉或视幻觉。在一些实施方案中，视觉障碍选自与糖尿病视网膜病变或帕金森病相关的视觉障碍、以及近视。在特定实施方案中，视觉障碍是近视。

在一些实施方案中，视觉障碍不与帕金森病相关。

该方法包括向受试者施用本发明的组合物。本发明的组合物可以通过局部施用到眼睛表面或经由直接注射到眼睛中来局部施用。

在一些实施方案中，组合物以例如滴眼剂或凝胶的形式局部施用于眼睛。在优选的实施方案中，组合物作为滴眼剂被应用。本发明的组合物可以被应用于眼睛的任何表面，优选地角膜/巩膜，从而允许组合物中存在的组分，特别是左旋多巴，穿透到眼睛中。在一些实施方案中，组合物被配制成使得左旋多巴穿透角膜上皮。

在其他实施方案中，组合物通过注射到眼睛中来施用。例如，组合物可以直接注射到巩膜、前房或玻璃体中，或者可以注射到结膜下的空间、球周的空间、球后的空间或脉络膜上的空间中。在特定实施方案中，本发明的组合物经由以下来施用：玻璃体内注射、结膜下注射、前房内注射、巩膜内注射、角膜内注射或视网膜下注射；特别是玻璃体内注射、巩膜内注射或角膜内注射。在一些实施方案中，本发明的组合物经由脉络膜上注射来施用。在一些实施方案中，本发明的组合物通过玻璃体内注射来施用。在其他实施方案中，本发明的组合物使用微针来注射，例如经由巩膜内施用或角膜内施用。为了经由这些途径施用，本发明的组合物可以呈无菌可注射溶液的形式。

本发明的组合物优选地被施用于其中或其上的眼睛的部分是允许组分，特别是左旋多巴穿透到眼睛中，优选地穿透到视网膜中的部分。优选地在角膜/巩膜和结膜上进行施用用于局部施用，或者可以将组合物注射到结膜下的空间、球周的空间、球后的空间或脉络膜上的空间中，或注射到巩膜、角膜、前房或玻璃体中。

当局部应用时，本发明的组合物可以与硬性隐形眼镜和软性隐形眼镜两者一起使用。

根据本领域技术人员熟知的方法，可以为不同的适应症建立剂量方案。组合物的剂量将取决于待治疗的状况、受试者的年龄和施用途径。

本发明的组合物可以以合适的量局部施用或通过注射施用，以便提供在从0.001mg/kg/天至12mg/kg/天、特别是从0.001mg/kg/天至4mg/kg/天、更特别地从0.001mg/kg/天至2mg/kg/天的范围内的左旋多巴的剂量。在一些实施方案中，组合物以合适的量施用以便提供在从0.001mg/kg/天至30mg/kg/天、特别是从0.001mg/kg/天至12mg/kg/天、更特别地从0.001mg/kg/天至4mg/kg/天、最特别地从0.001mg/kg/天至2mg/kg/天的范围内的左旋多巴的剂量。

当作为滴眼剂局部施用时，本发明的组合物可以以在从1滴每只眼睛至6滴每只眼睛(以及其间的所有整数)的范围内的量被施用，这可以等于例如在从约0.04ml每只眼睛至0.24ml每只眼睛(以及其间的所有整数)的范围内的量。每天可以将滴剂从1次至4次地应用于每只眼睛。当本发明的组合物被配制成凝胶时，提供等效剂量。技术人员将知道用于局部应用本发明的组合物的合适的分配器。

当通过注射施用时，本发明的组合物可以以在从0.001ml至0.5ml(以及其间的所有整数)的范围内的量施用，特别是约0.01ml。本发明的组合物可以以每周一次至每天一次的频率施用。

为了本发明可以易于理解以及付诸实践，现在将通过以下非限制性实施例的方式描述特定的优选实施方案。

实施例

除非另有说明，否则以下实施例中使用的所有材料均是从例如sigma-aldrich公司可商购的。

实施例1-产生0.3％w/v左旋多巴组合物的方法

将12mg左旋多巴(可商购自sigma-aldrichco.llc)溶解在含有0.15m盐酸、0.1％抗坏血酸和1x磷酸盐缓冲盐水(pbs)的溶液中(溶液约为ph2)。在左旋多巴被溶解之后，使用氢氧化钠将溶液调节至ph为6，以得到4ml的最终体积。

实施例2-产生0.3％w/v左旋多巴、0.08％w/v卡比多巴组合物的方法

将12mg左旋多巴溶解在含有0.15m盐酸、0.1％抗坏血酸和1xpbs的溶液中(溶液约为ph2)。在左旋多巴被溶解之后，向溶液中加入3mg卡比多巴(可商购自sigma-aldrichco.llc)。使用氢氧化钠将溶液调节至ph为6，以得到4ml的最终体积。

实施例3-产生0.03％w/v左旋多巴、0.008％w/v卡比多巴组合物的方法

将1.2mg左旋多巴溶解在含有0.15m盐酸、0.1％抗坏血酸和1xpbs的溶液中(溶液约为ph2)。在左旋多巴被溶解之后，向溶液中加入0.3mg的卡比多巴。使用氢氧化钠将溶液调节至ph为6，以得到4ml的最终体积。

实施例4-左旋多巴组合物在预防形觉剥夺性近视中的功效

44只雄性白色小公鸡(whitecockerelchicken)被随机分配到如下文定义的11个治疗组中的一个(每组n＝4)，并治疗持续5天时间。g1-g11表示图1和图2中使用的标记系统。

g1.年龄匹配的未治疗对照组

g2.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导形觉剥夺性近视(fdm)的雏鸡

g3.在其左眼上装有半透明扩散器并且每天玻璃体内注射实施例2的组合物的雏鸡

g4.在其左眼上装有半透明扩散器并且每天局部施用实施例2的组合物的雏鸡

g5.在其左眼上装有半透明扩散器并且每天口服施用作为粉末的10mg/kg左旋多巴、2.5mg/kg卡比多巴的雏鸡

g6.在其左眼上装有半透明扩散器并且每天玻璃体内注射实施例3的组合物的雏鸡

g7.在其左眼上装有半透明扩散器并且每天局部施用实施例3的组合物的雏鸡

g8.在其左眼上装有半透明扩散器并且每天玻璃体内注射媒介物溶液(在1xpbs中缓冲的0.1％抗坏血酸)的雏鸡

g9.在其左眼上装有半透明扩散器并且每天局部施用媒介物溶液(在1xpbs中缓冲的0.1％抗坏血酸)的雏鸡

g10.每天玻璃体内注射实施例2的组合物

g11.每天局部施用实施例2的组合物

对于药物治疗，使用玻璃体内注射或局部施用，在轻度异氟醚麻醉(lightisofluraneanesthesia)下施用组合物。

玻璃体内注射如下进行：使用附接到hamilton注射器的30号针(gaugeneedle)，每天一次地将10μl(0.01ml)测试组合物注射到眼睛的玻璃体腔中。

局部施用如下进行：使用滴眼剂分配器将40μl的两滴(0.04ml的两滴，或总共0.08ml)的测试组合物应用到眼睛的角膜表面。每天两次地将滴剂应用于雏鸡。

为了确定眼睛生长速度和近视发展的变化，评估了轴向长度和屈光的变化。近视与眼睛相对于正常生长速度在轴向上的过度伸长有关。这种过度的轴向伸长导致相对近视的屈光变化。分别使用a-扫描超声照相法(a-scanultrasonography)(biometeral-100；tomeycorporation,nagoya,japan)和自动化红外照片视网膜检影法(automatedinfraredphoto-retinoscopy)来测量轴向长度和屈光。对各组之间的屈光和轴向长度两者的变化的统计学分析涉及单向anova检验，然后是带有bonferroni校正的student'st检验。所有数据均以平均值±平均值的标准偏差(sem)表示。

结果

结果在图1和图2中提供。相对于在对侧对照眼睛(g2，图1和图2；屈光，p<0.001；轴向长度p<0.001)或年龄匹配的未治疗对照眼睛(g1，图1和图2；屈光，p<0.001；轴向长度p<0.001)中看到的，在左眼上附接半透明扩散器在五天时间内诱导了与过度的轴向伸长(g2，图2)相关的显著的屈光近视变化(myopicshiftinrefraction)(g2，图1)。在不同治疗组的对侧对照眼睛相对于彼此(屈光p＝0.34；轴向长度p＝0.39)或年龄匹配的未治疗眼睛(屈光p＝0.54；轴向长度p＝0.42)之间的屈光发展或轴向长度没有差异。

通过玻璃体内注射或局部施用每天施用左旋多巴/卡比多巴组合物在五天时间内消除了形觉剥夺性近视的发展(g3、g4、g6和g7，图1和图2)。具体地，每天经由玻璃体内注射或局部应用而施用左旋多巴/卡比多巴组合物的扩散器处理的眼睛的轴向长度(g3、g4、g6和g7，图2)与在对侧对照眼睛(注射实施例2的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.38；注射实施例3的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.22；滴实施例2的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.33；滴实施例3的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.24)或年龄匹配的未治疗对照眼睛(注射实施例2的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.27；注射实施例3的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.18；滴实施例2的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.26；滴实施例3的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.19)中看到的轴向长度没有不同。类似地，在用扩散器加左旋多巴/卡比多巴组合物治疗的眼睛(g3、g4、g6和g7，图1)相对于对侧对照(注射实施例2的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.26；注射实施例3的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.19；滴实施例2的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.23；滴实施例3的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.16)或年龄匹配的未治疗眼睛(注射实施例2的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.19；注射实施例3的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.16；滴实施例2的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.16；滴实施例3的左旋多巴/卡比多巴组合物，p＝0.15)之间不存在屈光发展的显著差异。因此，用包含左旋多巴和卡比多巴的组合物治疗的眼睛既没有示出增加的轴向伸长，也没有示出响应于扩散器穿戴的屈光近视变化。

每天以相当于由局部应用提供的量的量(10mg/kg/天的左旋多巴和2.5mg/kg/天的卡比多巴)口服施用左旋多巴和卡比多巴持续五天(g5，图1和图2)，相对于在仅fdm组(g2)中所看到的减少了大约50％的fdm的发展(轴向长度，p<0.05；屈光，p<0.05)。这种保护显著少于响应于玻璃体内注射或局部施用左旋多巴/卡比多巴组合物时所看到的保护，这表明直接应用到眼睛上是更有效的施用途径。

将媒介物溶液注射或局部施用到扩散器处理的眼睛持续五天时间，不改变fdm的发展(g8和g9，图1和图2)。此外，将左旋多巴/卡比多巴组合物注射或局部应用到其他未治疗的眼睛上(g10和g11，图1和图2)，相对于在年龄匹配的未治疗对照眼睛中看到的，不改变轴向生长(注射，p＝0.63；滴，p＝0.57)或屈光发展(注射，p＝0.71；滴，p＝0.62)。

实施例5-左旋多巴组合物在预防形觉剥夺性近视中的功效

32只雄性白色小公鸡被随机分配到如下文定义的8个治疗组中的一个(每组n＝4)，并治疗持续5天时间。g1-g8表示图3和图4中使用的标记系统。

g1.年龄匹配的未治疗对照组

g2.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm的雏鸡

g3.在其左眼上装有半透明扩散器并且每天玻璃体内注射实施例2的组合物的雏鸡

g4.在其左眼上装有半透明扩散器并且每天玻璃体内注射实施例1的组合物的雏鸡

g5.在其左眼上装有半透明扩散器并且每天局部施用实施例2的组合物的雏鸡

g6.在其左眼上装有半透明扩散器并且每天局部施用实施例1的组合物的雏鸡

g7.在其左眼上装有半透明扩散器并且每天口服施用作为粉末的10mg/kg左旋多巴、2.5mg/kg卡比多巴的雏鸡

g8.在其左眼上装有半透明扩散器并且每天口服施用10mg/kg左旋多巴的雏鸡

测试组合物的施用和其活性的分析如实施例4中所描述。

结果

结果在图3和图4中提供。再次，相对于在对侧对照眼睛(g2，图3和图4；屈光，p<0.001；轴向长度，p<0.001)或年龄匹配的未治疗对照眼睛(g1，图3和图4；屈光，p<0.001；轴向长度，p<0.001)中看到的，在左眼上附接半透明扩散器诱导了与过度的轴向伸长(g2，图4)相关的显著的屈光近视变化(g2，图3)。在不同治疗组的对侧对照眼睛相对于彼此(p＝0.27)或年龄匹配的未治疗眼睛(p＝0.21)之间的屈光发展或轴向长度没有差异。

每天施用左旋多巴/卡比多巴组合物消除了fdm的发展，使得当与对侧对照眼睛(屈光，p<0.01；轴向长度，p<0.01)或年龄匹配的未治疗眼睛(屈光，p<0.01；轴向长度，p<0.01)(g3和g5，图3和图4)相比时，在响应于扩散器穿戴的轴向伸长或屈光发展中没有看到差异。当与阳性对照相比时，左旋多巴组合物的每天施用减少了fdm的发展(g2，图3和图4；屈光，p<0.05；轴向长度，p<0.05)。然而，这种抑制程度显著低于包含左旋多巴和卡比多巴的组合的组合物。

实施例6-产生0.003％w/v左旋多巴组合物的方法

将0.12mg左旋多巴溶解在含有0.15m盐酸、0.1％抗坏血酸和1xpbs的溶液中(溶液约为ph2)。在左旋多巴被溶解之后，使用氢氧化钠将溶液调节至ph为6，以得到4ml的最终体积。

实施例7-产生0.03％w/v左旋多巴组合物的方法

将1.2mg左旋多巴溶解在含有0.15m盐酸、0.1％抗坏血酸和1xpbs的溶液中(溶液约为ph2)。在左旋多巴被溶解之后，使用氢氧化钠将溶液调节至ph为6，以得到4ml的最终体积。

实施例8-产生0.03％w/v左旋多巴、10％w/vdmso组合物的方法

将1.2mg左旋多巴溶解在含有0.15m盐酸、0.1％抗坏血酸、10％dmso和1xpbs的溶液中。在左旋多巴被溶解之后，使用氢氧化钠将溶液调节至ph为6，以得到4ml的最终体积。

实施例9-产生0.3％w/v左旋多巴、10％w/vdmso组合物的方法

将12mg左旋多巴溶解在含有0.15m盐酸、0.1％抗坏血酸、10％dmso和1xpbs的溶液中。在左旋多巴被溶解之后，使用氢氧化钠将溶液调节至ph为6，以得到4ml的最终体积。

实施例10-产生0.03％w/v左旋多巴、0.03％w/v2-氨基-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢萘氢溴化物(adtn)组合物的方法

将1.2mg左旋多巴(1.5mm)溶解在含有0.15m盐酸、0.1％抗坏血酸和1xpbs的溶液中。在左旋多巴被溶解之后，使用氢氧化钠将溶液调节至ph为6，并且将1.2mgadtn(1mm；呈2-氨基-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢萘氢溴化物的形式；可商购自sigmaaldrichco.llc)溶解在溶液中至4ml的最终体积。

实施例11-产生0.03％w/v左旋多巴、0.14％w/v阿托品组合物的方法

将1.2mg左旋多巴(1.5mm)溶解在含有0.15m盐酸、0.1％抗坏血酸和1xpbs的溶液中。在左旋多巴被溶解之后，使用氢氧化钠将溶液调节至ph为6，并且将5.6mg阿托品(2mm；呈阿托品硫酸盐一水合物的形式；可商购自sigmaaldrichco.llc)溶解在溶液中至4ml的最终体积。

实施例12-产生0.03％w/v左旋多巴、0.7％w/v哌仑西平组合物的方法

将1.2mg左旋多巴(1.5mm)溶解在含有0.15m盐酸、0.1％抗坏血酸和1xpbs的溶液中。在左旋多巴被溶解之后，使用氢氧化钠将溶液调节至ph为6，并且将28mg哌仑西平(16mm；呈哌仑西平二盐酸盐的形式；可商购自sigmaaldrichco.llc)溶解在溶液中至4ml的最终体积。

实施例13-左旋多巴剂量和dmso的存在对预防形觉剥夺性近视的作用

120只雄性白色小公鸡被随机分配到如下文定义的24个治疗组中的一个(每组n＝5)，并治疗持续5天时间。g1-g24表示图5-图8中使用的标记系统。

g1.年龄匹配的未治疗对照组

g2.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm的雏鸡

g3.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天口服施用作为粉末的20mg/kg左旋多巴的雏鸡

g4.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天口服施用作为粉末的20mg/kg左旋多巴和5mg/kg卡比多巴的雏鸡

g5.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天玻璃体内注射实施例6的组合物(0.003％w/v左旋多巴)的雏鸡

g6.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天玻璃体内注射实施例7的组合物(0.03％w/v左旋多巴)的雏鸡

g7.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天玻璃体内注射实施例1的组合物(0.3％w/v左旋多巴)的雏鸡

g8.每天玻璃体内注射实施例1的组合物(0.3％w/v左旋多巴)

g9.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天玻璃体内注射实施例3的组合物(0.03％w/v左旋多巴、0.008％w/v卡比多巴)的雏鸡

g10.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天玻璃体内注射实施例2的组合物(0.3％w/v左旋多巴、0.08％w/v卡比多巴)的雏鸡

g11.每天玻璃体内注射实施例2的组合物(0.3％w/v左旋多巴、0.08％w/v卡比多巴)

g12.年龄匹配的未治疗对照组

g13.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm的雏鸡

g14.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天口服施用作为粉末的20mg/kg左旋多巴的雏鸡

g15.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天口服施用作为粉末的20mg/kg左旋多巴和5mg/kg卡比多巴的雏鸡

g16.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天局部施用实施例6的组合物(0.003％w/v左旋多巴)的雏鸡

g17.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天局部施用实施例7的组合物(0.03％w/v左旋多巴)的雏鸡

g18.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天局部施用实施例1的组合物(0.3％w/v左旋多巴)的雏鸡

g19.每天局部施用实施例1的组合物(0.3％w/v左旋多巴)

g20.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天局部施用实施例3的组合物(0.03％w/v左旋多巴、0.008％w/v卡比多巴)的雏鸡

g21.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天局部施用实施例2的组合物(0.3％w/v左旋多巴、0.08％w/v卡比多巴)的雏鸡

g22.每天局部施用实施例2的组合物(0.3％w/v左旋多巴、0.08％w/v卡比多巴)

g23.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天局部施用实施例8的组合物(0.03％w/v左旋多巴、10％dmso)的雏鸡

g24.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天局部施用实施例9的组合物(0.3％w/v左旋多巴、10％dmso)的雏鸡

测试组合物的施用和其活性的分析如实施例4中所描述。

结果

结果在图5至图8中提供。相对于在年龄匹配的未治疗对照眼睛(g1，图5和图6；和g12，图7和图8)中看到的，在左眼上附接半透明扩散器诱导了与过度的轴向伸长(g2，图6；和g13，图8；p<0.001)相关的显著的屈光近视变化(g2，图5；和g13，图7；p<0.001)。

每天玻璃体内注射左旋多巴组合物显著抑制了fdm的发展，其中施用0.3％w/v左旋多巴组合物具有最大的作用(g5，p<0.01；g6，p<0.01；和g7，p<0.001；图5；和g5，p<0.01；g6，p<0.001；g7，p<0.001；图6)。这种作用显著大于口服施用左旋多巴(g3，图5和图6)。与包含单独的左旋多巴的组合物相比，添加芳香族l-氨基酸脱羧酶抑制剂卡比多巴，增加了组合物的抑制作用(g9，p<0.01；和g10，p<0.01；图5；和g9，p<0.001；和g10，p<0.001；图6)。

每天局部施用左旋多巴组合物显著抑制了fdm的发展(g16，p<0.05；g17，p<0.01；和g18，p<0.01；图7；和g16，p<0.01；g17，p<0.01；和g18，p<0.01；图8)并显示出比口服左旋多巴施用更强的作用(g14，图7和图8)。再次，与包含单独的左旋多巴的组合物相比，向组合物中添加卡比多巴显著增加了抑制作用(g20，p<0.01；和g21，p<0.01图7；和g20，p<0.001；和g21，p<0.001；图8)。

相对于包含单独的左旋多巴的对应的组合物，向局部左旋多巴组合物中添加10％dmso显著增加了针对fdm的发展的抑制作用(g23，p<0.01；和g24，p<0.01；图7；和g23，p<0.001；和g24，p<0.001；图8)。

实施例14-四周时间内局部左旋多巴施用的安全性和功效

为了评价左旋多巴的局部治疗的安全性和有效性，在四周时间内测试每天两次滴眼施用15mm(0.3％w/v)左旋多巴组合物(根据实施例1制备)。雄性白色小公鸡被保持在正常的实验室灯(500勒克司，荧光灯)下经历12:12小时的光:暗循环，其中灯在9:30am打开并且在9:30pm关闭。在所有的雏鸡中，左眼被实验性地治疗，而右眼保持未治疗以用作对侧对照。雏鸡被随机分配到四组中的一组(对于每组，n＝6)，并且在以下实验条件下在四周时间内进行治疗：

1.年龄匹配的未治疗对照：雏鸡保持未治疗，没有接受眼部或左旋多巴治疗

2.形觉剥夺性近视(fdm)：雏鸡在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm，没有接受进一步的治疗

3.形觉剥夺性近视和局部0.3％w/v(15mm)左旋多巴治疗：雏鸡在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm，并且每天两次地局部施用实施例1的组合物(9:30am和2pm)

4.0.3％w/v(15mm)左旋多巴局部治疗其他未治疗的眼睛：将实施例1的组合物每天两次(9:30am和2pm)局部地施用于雏鸡

根据实施例4中描述的进行测试组合物的施用。

为了确定眼睛生长速度和近视发展的变化，分别使用a-扫描超声照相法(biometeral-100；tomeycorporation,nagoya,japan)和自动化红外照片视网膜检影法来测量轴向长度和屈光。眼睛测量(轴向长度和屈光)在第一天(实验开始之前)进行，并且每七天进行，持续四周。

结果

结果在图9和图10中提供。使用多元方差分析(multivariateanalysisofvariance)(manova)以及重复测量设计来比较不同治疗方案随时间的作用。与不存在左旋多巴治疗的那些装有半透明扩散器的动物相比，装有半透明扩散器并且用局部左旋多巴治疗的动物看到显著更小的屈光近视变化(图9；f(3,21)＝191.013；p<0.001)。此外，与不存在左旋多巴治疗的那些装有半透明扩散器的动物相比，装有半透明扩散器并且用局部左旋多巴治疗的动物示出降低的轴向伸长(图10；f(3,21)＝34.129；p<0.001)。

实施例15-左旋多巴与adtn、阿托品和哌仑西平的共同治疗(co-treatment)对形觉剥夺性近视发展的作用

70只雄性白色小公鸡被随机分配到如下文定义的14个治疗组中的一个(每组n＝5)，并治疗持续5天时间。g1-g14表示图11和图12中使用的标记系统。

g1.年龄匹配的未治疗对照组

g2.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm的雏鸡

g3.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天玻璃体内注射在1xpbs(ph7)中含有1mmadtn(0.03％w/v)和0.1％抗坏血酸的组合物的雏鸡

g4.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天局部施用在1xpbs(ph7)中含有1mmadtn(0.03％w/v)和0.1％抗坏血酸的组合物的雏鸡

g5、g9和g13。在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天局部施用实施例7的组合物(0.03％w/v左旋多巴)的雏鸡

g6.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天局部施用实施例10的组合物(0.03％w/v左旋多巴、0.03％w/vadtn)的雏鸡

g7.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天玻璃体内施用在蒸馏水(ph7)中含有2mm阿托品(0.14％w/v；呈阿托品硫酸盐一水合物的形式)的组合物的雏鸡

g8.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天局部施用在蒸馏水(ph7)中含有2mm阿托品(0.14％w/v；呈阿托品硫酸盐一水合物的形式)的组合物的雏鸡

g10.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天局部施用实施例11的组合物(0.03％w/v左旋多巴、0.14％w/v阿托品)的雏鸡

g11.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天玻璃体内施用在蒸馏水(ph7)中含有16mm哌仑西平(0.7％w/v；呈哌仑西平二盐酸盐的形式)的组合物的雏鸡

g12.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天局部施用在蒸馏水(ph7)中含有16mm哌仑西平(0.7％w/v；呈哌仑西平二盐酸盐的形式)的组合物的雏鸡

g14.在其左眼上装有半透明扩散器以诱导fdm并且每天局部施用实施例12的组合物(0.03％w/v左旋多巴、0.7％w/v哌仑西平)的雏鸡

通过将adtn溶解在1xpbs中含有0.1％抗坏血酸的溶液中至1mm的最终浓度(0.03％w/v)并将ph调节至7来制备adtn组合物。通过将阿托品(呈阿托品硫酸盐一水合物的形式)或哌仑西平(呈哌仑西平二盐酸盐的形式)溶解在蒸馏水中分别至2mm(0.14％w/v)和16mm(0.7％w/v)的最终浓度并将ph调节至7来制备阿托品和哌仑西平组合物。

根据实施例4中描述的进行测试组合物的施用和眼参数的测量。

结果

结果在图11和图12中提供。与只装有半透明扩散器的动物(g2)相比，每天施用多巴胺d2受体激动剂adtn(g3和g4)显著抑制屈光近视变化并降低轴向伸长，其中玻璃体内注射比局部施用具有更大的效果(g3，p<0.01；和g4，p<0.05；图11；g3，p<0.001；和g4，p<0.05；图12)。值得注意地，包含adtn和左旋多巴两者的组合物的局部施用比单独的任一种化合物(分别为g4和g5；图11和图12)更大程度上抑制了屈光近视变化(g6，p<0.01；图11)并且降低了轴向伸长(g6，p<0.01；图12)。

与只装有半透明扩散器的动物(g2)相比，每天施用毒蕈碱乙酰胆碱受体拮抗剂阿托品(g7和g8，图11和图12)显著抑制屈光近视变化并降低轴向伸长，其中玻璃体内注射比局部施用具有更大的效果(g7，p<0.01；和g8，p<0.05；图11；g7，p<0.001；和g8，p<0.05；图12)。包含阿托品和左旋多巴两者的组合物的局部施用比单独的任一种化合物(分别为g8和g9；图11和图12)更大程度上抑制了屈光近视变化(g10，p<0.01；图11)并且降低了轴向伸长(g10，p<0.01；图12)。

与只装有半透明扩散器的动物(g2)相比，m1毒蕈碱乙酰胆碱受体拮抗剂哌仑西平(g11和g12，图11和图12)显著抑制屈光发展近视变化并降低轴向伸长(g11，p<0.01；和g12，p<0.05；图11；g11，p<0.001；和g12，p<0.05；图12)。当玻璃体内施用时，哌仑西平的作用更大(g11，图11和图12)。哌仑西平和左旋多巴的组合的局部施用(g14，图11和图12)比单独的任一种化合物的局部施用对屈光发展(g14，p<0.01；图11)和轴向长度(g14，p<0.01；图12)具有更大的抑制作用。

实施例16-局部左旋多巴施用对形觉剥夺性近视发展的作用的组织学分析

为了使用甲苯胺蓝染色的基础组织学分析(basehistologicalanalysis)，将多聚甲醛固定的视网膜切片浸入1％甲苯胺蓝(sigmaaldrich，目录号89640)水溶液中持续1.5分钟，然后在流动的蒸馏水下冲洗持续2分钟。然后在盖滑动(coverslipping)之前将切片安装在甘油中。切片在40x放大倍数的moticba410光学显微镜上观察，并由与moticlive成像模块结合的moticam1000万像素相机(10.0megapixelcamera)采集。

视网膜切片来自如下的雄性白色小公鸡的眼睛：

a.雏鸡的对侧对照眼睛，其中另一只眼睛装有半透明扩散器以诱导fdm

b.装有半透明扩散器以诱导fdm的雏鸡的眼睛

c.雏鸡的对侧对照眼睛，其中另一只眼睛装有半透明扩散器以诱导fdm并且通过每天局部施用实施例1的组合物(0.3％w/v左旋多巴)进行治疗

d.装有半透明扩散器以诱导fdm并且通过每天局部施用实施例1的组合物(0.3％w/v左旋多巴)进行治疗的雏鸡的眼睛，

e.雏鸡的对侧对照眼睛，其中另一只眼睛通过每天局部施用实施例1的组合物(0.3％w/v左旋多巴)进行治疗

f.通过每天局部施用实施例1的组合物(0.3％w/v左旋多巴)进行治疗的雏鸡的眼睛

g.年龄匹配的未治疗对照雏鸡的眼睛

根据实施例4中描述的进行左旋多巴组合物的施用。

结果

结果在图13中提供。如在图13中可以看出，在以下组的眼睛中未观察到视网膜构造或细胞密度的改变：年龄匹配的未治疗对照(图13g)、形觉剥夺性(图13b)、所有条件下的对侧未治疗对照眼睛(图13a、图13c和图13e)、形觉剥夺性和每天局部施用包含0.3％w/v左旋多巴的组合物(图13d)、以及每天局部施用包含0.3％w/v左旋多巴的组合物到其他未治疗动物中(图13f)。因此，左旋多巴组合物不显示视网膜毒性。

实施例17-局部左旋多巴施用对形觉剥夺性近视发展的作用的tunel染色分析

tunel染色使用罗氏原位细胞死亡检测试剂盒(rocheinsitucelldeathdetectionkit)，ap(sigmaaldrich，目录号11684795910)来进行。用于染色来自雄性白色小公鸡的视网膜切片的方案是根据denton和kumar(2015)coldspringharbprotoc；doi:10.1101/pdb.prot086199的工作调整的。简言之，通过以下来制备视网膜切片：以三种变化的在0.1％tritonx-100中的1xpbs(1xpbst)洗涤，在0.1％柠檬酸钠中在冰上透化持续5分钟，然后以另外三种变化的1xpbst洗涤。然后根据制造商的说明书，将切片在tunel反应混合物中孵育(阴性对照仅在标记混合物中孵育，而阳性对照在tunel标记前在dna酶1(100u/ml)中孵育持续10分钟，以诱导dna断裂，就像凋亡中观察到的那样)。在tunel标记后，切片在黑暗中以三种变化的1xpbs进行洗涤，随后使用徕卡dmil荧光显微镜以20倍放大倍数进行可视化，其中图像由徕卡dfc425相机使用徕卡应用套件版本4.8采集。

分析的样品如下：

a.阴性对照(仅用标记溶液处理视网膜切片)

b.阳性对照(用dna酶1处理视网膜切片以诱导dna链断裂，dna链断裂指示凋亡)

c.来自年龄匹配的未治疗对照雏鸡的眼睛的视网膜切片

d.来自装有半透明扩散器以诱导fdm的雏鸡的眼睛的视网膜切片

e.来自通过每天局部施用实施例1的组合物(0.3％w/v左旋多巴)进行治疗的雏鸡的眼睛的视网膜切片

f.来自装有半透明扩散器以诱导fdm并且通过每天局部施用实施例1的组合物(0.3％w/v左旋多巴)进行治疗的雏鸡的眼睛的视网膜切片

根据实施例4中描述的进行左旋多巴组合物的施用。

结果

如从图14中可以看出，当与用dna酶1处理以诱导dna缺口(dnanick)和基因组降解的阳性对照视网膜组织(图14b)相比时，视网膜细胞没有表现出响应于形觉剥夺性(图14d)或左旋多巴治疗(图14e和图14f)的凋亡的迹象。由于不存在染色，可视化需要除阳性对照视网膜切片外的所有视网膜切片的过度暴露(overexposure)，导致观察到更亮的外观。

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