KGM改性卵磷脂载NMN透皮醇质体、制剂及其制备工艺与应用的制作方法

本发明属于药物制剂生产技术领域，具体地说涉及一种生物高分子材料kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体、制剂及其制备工艺与应用。

背景技术

透皮给药系统是一种新型给药系统，由于其具有更人性化的给药治疗特点以及透皮技术的不断发展，现已成为制药行业发展最快的领域之一。其是指在皮肤表面给药，药物一定速率透过皮肤各层，由毛细血管进入人体全身血液循环而达到有效血药浓度、实现全身或局部治疗作用的新剂型。相比于口服、静脉注射等给药方式，透皮给药由于药物吸收不受消化道内ph、食物、转运时间等因素影响，具有可避免肝脏和胃肠首过效应、降低血药浓度的波动、避免药物对胃肠道的刺激、给药无创伤、顺应性强等优点。

由于皮肤角质层对药物透皮吸收的屏障作用，使得大多数药物，即便是一些剂量低、疗效高的药物，其透皮速率和渗透量也难以满足治疗的需求，是开发透皮给药制剂的重大障碍。醇质体是一种具有低毒性、低免疫性、良好的细胞相容性的物质，可同时装载水溶性、脂溶性和大分子药物，在药物递送尤其是透皮给药技术领域受到了广泛关注。

醇质体突出的特点是含有较高体积分数的乙醇，从而使其具有囊泡结构，其形态多为近球形或球形，外形圆整光滑，乙醇的存在提高了亲脂性和两亲性物质在囊泡的磷脂双分子层和水性中心的溶解度。在载药过程中，脂质体首先携带药物经细胞间途径穿透角质层到达皮肤深层，再释放药物，使药物向皮肤深层分布并促进药物经皮肤吸收。

nmn(烟酰胺单核苷酸)会转化成体内能量代谢必不可少的“烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)”物质，可用于糖酵解和细胞呼吸作用中的柠檬酸循环。nmn存在人体的每个活细胞中，它们与氧气发生反应，产生能量，对人体内的上千种生理代谢反应都起着至关重要的作用。人体细胞中nmn的含量多少与许多疾病息息相关，如阿尔兹海默症、帕金森、肌肉萎缩等。另外，研究发现，癌症是因为细胞内的dna受到致癌物质的攻击后，遭到了损伤而没有及时修复所导致的，而nmn可以激活dna修复酶(parp)，迅速修复损伤的dna，阻止其演变成癌。不仅如此，nmn还是超强抗氧化剂，可清除体内自由基，阻止癌症的进程。

人们通过日常饮食可以为身体补充nmn，但摄取的量非常低，且nmn非常不稳定，易发生降解，nmn还具有不耐酸的特点，口服后不能顺利被吸收，从外部摄入的nmn在经过人体胃部时，会受到胃酸的影响导致失去活性，吸收率普遍比较低，大部分成分在到达血液前就被氧化和降解，使其应用受限。

nmn还能通过皮肤作用途径对机体内不断补充外源，能有效地防止和延缓皮肤衰老过程的发生。经临床验证和长期应用表明nmn不仅有抗皱、祛斑祛色素等显著功效外，还有抗炎、防晒、保健、延缓衰老等作用。但由于在常温下稳定性差，生物半衰期短，易被酶解以及具有免疫原性等缺点，而限制了其潜在应用。目前，nmn有多种给药方式，如口服、注射等，但由于药物本身的性质，不可避免的导致需要频繁给药这一缺点。为了提高患者的顺应性，同时增加nmn的生物利用度，并维持恒定的有效血药浓度，开发可间隔较长时间给药的nmn醇质体有着重大的意义。

技术实现要素：

为此，本发明正是要解决上述nmn难以有效给药的问题，从而提出一种可通过透皮给药的kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体、制剂及其制备工艺与应用。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：

本发明提供一种kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体，所述醇质体以质量百分比计，由如下组分组成：nmn0.03-1％，魔芋葡甘聚糖0.1-10％，磷脂1-10％，胆固醇0.05-1％，稳定剂0.1-0.5％，抗氧化剂0-1％，低分子量醇5-50％，余量为水。

作为优选，所述魔芋葡甘聚糖包括季铵化魔芋葡甘聚糖，还包括羧甲基魔芋葡甘聚糖、氧化魔芋葡甘聚糖、壳聚糖中的至少一种；所述磷脂为大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂中的至少一种。

作为优选，所述稳定剂为磷酸二鲸蜡脂、磷脂酞甘油、磷脂酸、磷脂酞丝氨酸和荷负电磷脂中的至少一种；所述抗氧化剂为维生素c、维生素e、二叔丁基对甲酚、苹果酸、β-胡萝卜素中的至少一种；所述低分子量醇为碳原子数不大于5的醇。

本发明还提供一种kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体凝胶剂，其由所述的醇质体与凝胶体按照1:2-2:1的体积比混合而成，所述凝胶体以质量百分比计，由如下组分组成：凝胶基质1-5％，保湿剂2-15％，防腐剂0.2-1％，促渗透剂0.3-10％，ph调节剂1-5％，余量为水。

作为优选，所述凝胶基质为羟丙甲基纤维素、卡波姆、甲基纤维素、海藻酸钠中的至少一种；所述保湿剂为无水乙醇、丙三醇、异丙醇、丁二醇、己二醇、山梨醇、聚乙二醇、透明质酸和透明质酸钠中的至少一种；所述促渗透剂为氮酮类、甲基亚砜类、有机醇类、醋酸乙酯以及菇烯类中的至少一种。

作为优选，所述防腐剂选自山梨酸、山梨酸钾、苯甲醇、三氯叔丁醇、苯甲酸钠中的至少一种或几种；所述ph调节剂为氢氧化钠、氢氧化钾、三乙醇胺中的至少一种。

作为优选，所述醇质体的粒径为35-85μm。

本发明还提供一种制备所述的醇质体的方法，其包括如下步骤：

s1、按比例称量魔芋葡甘聚糖、磷脂、胆固醇、稳定剂和抗氧化剂，混合均匀；

s2、按比例加入低分子量醇，在10-40℃下，使步骤s1得到的混合物溶解；

s3、按比例加入nmn，混合均匀后，注入水；

s4、将步骤s3得到的溶液在10-8000r/min的转速下均质处理2-20min；

s5、将均质后的溶液超声处理2-45min，过滤后即得醇质体溶液。

本发明还提供一种制备所述的凝胶剂的方法，其包括制备醇质体的步骤和制备凝胶体的步骤，其中所述醇质体的制备步骤为：

a、按比例称量魔芋葡甘聚糖、磷脂、胆固醇、稳定剂和抗氧化剂，混合均匀；

b、按比例加入低分子量醇，在10-40℃下，使步骤s1得到的混合物溶解；

c、按比例加入n，混合均匀后，注入水；

d、将步骤s3得到的溶液在10-8000r/min的转速下均质处理2-20min；

e、将均质后的溶液超声处理2-45min，过滤后即得醇质体溶液；

所述凝胶体的制备步骤为：将凝胶基质用水充分溶胀后加入保湿剂、防腐剂、促渗透剂边搅拌边加入ph调节剂将混合物ph值调节至中性，即得凝胶体；

将制得的醇质体与凝胶体混合后，研制均匀，即得凝胶制剂。

本发明还提供一种所述的醇质体在治疗阿尔兹海默症、帕金森、肌肉萎缩症的药物以及抗氧化、防衰老制剂中的应用。

本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：

(1)本发明所述的kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体，所述醇质体以质量百分比计，由如下组分组成：nmn0.03-1％，魔芋葡甘聚糖0.1-10％，磷脂1-10％，胆固醇0.05-1％，稳定剂0.1-0.5％，抗氧化剂0-1％，低分子量醇5-50％，余量为水。所述醇质体提高了nmn的生物利用度，可维持恒定的有效血药浓度，因此可延长给药的时间间隔，解决了常规给药方式中nmn易被酶解、生物半衰期端、稳定性差的问题，所述kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体，是一种新型形态为球形或近球形的多室囊泡结构，具有更稳定的热力学特性，粒径更小，包封率高，具有透皮性能更快、更强，皮肤耐受性好，可减小用药量，降低不良反应的发生率，提高安全性。

(2)本发明所述的kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体凝胶剂，其由所述的醇质体与凝胶体按照1:2-2:1的体积比混合而成，所述凝胶体以质量百分比计，由如下组分组成：凝胶基质1-5％，保湿剂2-15％，防腐剂0.2-1％，促渗透剂0.3-10％，ph调节剂1-5％，余量为水。所述凝胶制剂可用作透皮给药药剂，其质地细腻，人体吸收性好，搭配nmn成分，具有减缓阿尔兹海默症等疾病、延缓皮肤衰老、抗炎防晒等功效，应用范围广、安全性能高。

(3)本发明所述的kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体及其凝胶剂的制备方法，采用搅拌、均质、超声即能得到含nmn的醇质体，将醇质体与凝胶体混合均匀即得凝胶剂，醇质体及凝胶制剂的制备工艺简单，条件温和，适宜于工业化批量生产。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中

图1是本发明实施例所述的醇质体囊泡粒径分布柱状图；

图2是本发明实施例所述的醇质体囊泡粒径分布曲线图；

图3是本发明实施例所述的醇质体透射电镜(tem)图像；

图4是本发明实施例所述的醇质体体外累计释放趋势图；

图5是本发明实施例所述的醇质体体外透皮率释放曲线。

具体实施方式

实施例1

本实施例提供一种kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体，所述醇质体以质量百分比计，由如下组分组成：nmn0.03％、魔芋葡甘聚糖0.1％、磷脂1％、胆固醇0.05％、稳定剂0.1％、抗氧化剂0.15％、低分子量醇5％，余量为水。其中，所述魔芋葡甘聚糖(kgm)包括等量的季铵化魔芋葡甘聚糖(qkgm)和羧甲基魔芋葡甘聚糖(ckgm)，所述磷脂为大豆卵磷脂，所述稳定剂为磷酸二鲸蜡脂，所述抗氧化剂为维生素c，所述低分子量醇为丙三醇。

所述kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体凝胶剂可用于治疗阿尔兹海默症、帕金森、肌肉萎缩症的药物以及抗氧化、防衰老制剂中的应用。

本实施例还提供一种kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体凝胶剂，其由上述醇质体与凝胶体按照1:2的体积比混合而成，其中，所述凝胶体以质量百分比计，由以下组分组成：凝胶基质1％、保湿剂2％、防腐剂0.2％、促渗透剂0.3％、ph调节剂1％，余量为水，其中，凝胶基质为羟丙甲基纤维素，保湿剂为无水乙醇，防腐剂为山梨酸，促渗透剂为月桂氮酮，ph调节剂为氢氧化钠。

本实施例还提供一种kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体的制备工艺，其包括如下步骤：

s1、按比例称量魔芋葡甘聚糖、磷脂、胆固醇、稳定剂和抗氧化剂，混合均匀。

s2、按比例加入低分子量醇，在10℃下，使步骤s1得到的混合物溶解。

s3、按比例加入nmn，混合均匀后，注入水，水的注入速度为水的加入量的2-10％/min，本实施例中为2％/min。

s4、将步骤s3得到的溶液置于高速分散均质机进行整粒，在10r/min的转速下均质处理20min。

s5、将均质后的溶液超声处理2min，然后依次过0.45μm、0.22μm微孔过滤膜过滤后即得粒径分布均匀的醇质体溶液，所述醇质体溶液中含有醇质体囊泡，所述醇质体囊泡的粒径为35-85μm。

本实施例还提供一种制备kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体凝胶体的工艺，其包括按上述步骤制备醇质体和制备凝胶体的步骤，所述凝胶体的制备步骤为：将凝胶基质在室温下用水充分溶胀，向其中加入保湿剂、防腐剂、促渗透剂，然后边搅拌边加入ph调节剂将混合物ph值调节至中性，充分混合均匀即得无色透明凝胶体。将所述醇质体与凝胶体按比例混合，研制均匀，得到细腻的淡黄色kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体凝胶剂。

本实施中，所述nmn采用如下工艺制备：

以烟酰胺、atp和木糖为原料，在烟酰胺磷酸核糖转移酶、核糖磷酸焦磷酸激酶、核糖-5-磷酸异构酶、核酮糖-3-磷酸异构酶、木酮糖激酶以及木糖异构酶的催化作用下发生反应，制得烟酰胺单核苷酸(nmn)。

向反应釜中加入底物溶液，含30mm的atp、30mm的木糖、20mm的mgcl2、10mm的kc1以及l00mm的tris-hcl缓冲液，调ph至7.5-8.0。然后加入以下催化用酶：核糖磷酸焦磷酸激酶6g/l底物溶液，核糖-5-磷酸异构酶10g/l底物溶液，核酮糖-3-磷酸异构酶11g/l底物溶液，木酮糖激酶10g/l底物溶液，木糖异构酶10g/l底物溶液。搅拌均匀后进行反应，反应过程中持续搅拌(搅拌速度50rpm)，控制反应温度为35℃，维持ph值为7.5-8.0。

待上述反应进行4h后，分离出反应液，并将反应液送入另一反应釜中，再向反应液中加入60mm的烟酰胺、30mm的zncl2、l00mm的tris-hcl缓冲液以及烟酰胺磷酸核糖转移酶15g/l底物溶液，搅拌均匀后继续反应，反应过程中持续搅拌(搅拌速度50rpm)，控制反应温度为35℃，维持ph值为7.5-8.0，再反应4h后即得烟酰胺单核苷酸粗产品溶液(含nmn12mm)，再经过滤、纯化、干燥后即得烟酰胺单核苷酸成品。

实施例2

本实施例提供一种kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体，所述醇质体以质量百分比计，由如下组分组成：nmn1％、魔芋葡甘聚糖10％、磷脂10％、胆固醇1％、稳定剂0.5％、抗氧化剂1％、低分子量醇50％，余量为水。其中，所述魔芋葡甘聚糖(kgm)包括季铵化魔芋葡甘聚糖(qkgm)和壳聚糖(cs)，二者的质量比为1:2，所述磷脂为蛋黄卵磷脂，所述稳定剂为磷脂酞甘油与磷酸酯的混合物，二者的质量比为1:1，所述抗氧化剂为维生素e、二叔丁基对甲酚的混合物，二者的质量比为1:2，所述低分子量醇为乙醇。

所述kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体凝胶剂可用于治疗阿尔兹海默症、帕金森、肌肉萎缩症的药物以及抗氧化、防衰老制剂中的应用。

本实施例还提供一种kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体凝胶剂，其由上述醇质体与凝胶体按照1:1的体积比混合而成，其中，所述凝胶体以质量百分比计，由以下组分组成：凝胶基质5％、保湿剂15％、防腐剂1％、促渗透剂10％、ph调节剂5％，余量为水，其中，凝胶基质为卡波姆凝胶基质与甲基纤维素的混合物，二者的质量比为1:2，保湿剂为丙三醇、异丙醇和己二醇的混合物，三者体积比为1:1：0.5，防腐剂为苯甲醇、三氯叔丁醇的混合物，二者的体积比为1:1，促渗透剂为二甲基亚砜和乙醇的混合物，二者的体积比为1:1，ph调节剂为三乙醇胺。

本实施例还提供一种kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体的制备工艺，其包括如下步骤：

s1、按比例称量魔芋葡甘聚糖、磷脂、胆固醇、稳定剂和抗氧化剂，混合均匀。

s2、按比例加入低分子量醇，在40℃下，使步骤s1得到的混合物溶解。

s3、按比例加入nmn，混合均匀后，注入水，水的注入速度为水的加入量的2-10％/min，本实施例中为5％/min。

s4、将步骤s3得到的溶液置于高速分散均质机进行整粒，在8000r/min的转速下均质处理2min。

s5、将均质后的溶液超声处理45min，然后依次过0.45μm、0.22μm微孔过滤膜过滤后即得粒径分布均匀的醇质体溶液，所述醇质体溶液中含有醇质体囊泡，所述醇质体囊泡的粒径为35-85μm。

本实施例还提供一种制备kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体凝胶体的工艺，其包括按上述步骤制备醇质体和制备凝胶体的步骤，所述凝胶体的制备步骤为：将凝胶基质在室温下用水充分溶胀，向其中加入保湿剂、防腐剂、促渗透剂，然后边搅拌边加入ph调节剂将混合物ph值调节至中性，充分混合均匀即得无色透明凝胶体。将所述醇质体与凝胶体按比例混合，研制均匀，得到细腻的淡黄色kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体凝胶剂。

实施例3

本实施例提供一种kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体，所述醇质体以质量百分比计，由如下组分组成：nmn5％、魔芋葡甘聚糖5.5％、磷脂6％、胆固醇0.5％、稳定剂0.3％、抗氧化剂0.45％、低分子量醇30％，余量为水。其中，所述魔芋葡甘聚糖(kgm)包括氧化魔芋葡甘聚糖(okgm)和季铵化魔芋葡甘聚糖(qkgm)的混合物，二者的质量比为1:2，所述磷脂为氢化大豆卵磷脂，所述稳定剂为磷脂酞丝氨酸，所述抗氧化剂为苹果酸、β-胡萝卜素的混合物，二者的质量比为1:1，所述低分子量醇为正丁醇与乙醇的混合物，二者体积比为1:2。

所述kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体凝胶剂可用于治疗阿尔兹海默症、帕金森、肌肉萎缩症的药物以及抗氧化、防衰老制剂中的应用。

本实施例还提供一种kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体凝胶剂，其由上述醇质体与凝胶体按照2:1的体积比混合而成，其中，所述凝胶体以质量百分比计，由以下组分组成：凝胶基质3％、保湿剂9％、防腐剂0.5％、促渗透剂6％、ph调节剂3％，余量为水，其中，凝胶基质为等量海藻酸钠、甲基纤维素的混合物，保湿剂为山梨醇、聚乙二醇、透明质酸的混合物，三者体积比为1:1：2，防腐剂为苯甲醇、三氯叔丁醇的混合物，二者的体积比为1:1，促渗透剂为醋酸乙酯，ph调节剂为氢氧化钾。

本实施例还提供一种kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体的制备工艺，其包括如下步骤：

s1、按比例称量魔芋葡甘聚糖、磷脂、胆固醇、稳定剂和抗氧化剂，混合均匀。

s2、按比例加入低分子量醇，在25℃下，使步骤s1得到的混合物溶解。

s3、按比例加入nmn，混合均匀后，注入水，水的注入速度为水的加入量的2-10％/min，本实施例中为7％/min。

s4、将步骤s3得到的溶液置于高速分散均质机进行整粒，在500r/min的转速下均质处理15min。

s5、将均质后的溶液超声处理30min，然后依次过0.45μm、0.22μm微孔过滤膜过滤后即得粒径分布均匀的醇质体溶液，所述醇质体溶液中含有醇质体囊泡，所述醇质体囊泡的粒径为35-85μm。

本实施例还提供一种制备kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体凝胶体的工艺，其包括按上述步骤制备醇质体和制备凝胶体的步骤，所述凝胶体的制备步骤为：将凝胶基质在室温下用水充分溶胀，向其中加入保湿剂、防腐剂、促渗透剂，然后边搅拌边加入ph调节剂将混合物ph值调节至中性，充分混合均匀即得无色透明凝胶体。将所述醇质体与凝胶体按比例混合，研制均匀，得到细腻的淡黄色kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体凝胶剂。

实验例

1、测试本发明所制得的kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体囊泡的粒径分布情况，结果如图1所示，平均粒径为57.2μm。

2、测试本发明所制得的kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体囊泡的粒径分布情况，结果如图2所示，大部分囊泡粒径分布在35-85μm。

3、测试本发明所述的kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体的透射电镜图像，结果如图3所示，测试结果表明，所述醇质体以大小不等的囊泡形态存在。

4、大鼠透皮实验，测试本发明所述的kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体凝胶剂的透皮释放率，测试结果如图4所示，测试结果表明，所述醇质体24h的累计释放率可达30％，稳态透皮速率为1331.24μg/cm²，说明其具有一定的控释作用。

5、测试本发明所述的kgm改性卵磷脂载nmn透皮醇质体的体外透皮速率释放曲线，结果如图5所示，测试结果表明该醇质体符合透皮动力学理论，其渗透动力学方程为：q＝59.34t-20.91，其中稳态渗透速率为js＝59.34μg·xh^-1·cm^-2。

另外，静置实验表明，所述醇质体溶液静置120天溶液保持稳定，不分层、不沉淀。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。