本发明涉及医药
技术领域：
，具体涉及一种替西罗莫司脂质体及其制备方法。
背景技术：
替西罗莫司(英文名，temsirolimus)是西罗莫司的42-双羟甲基丙酸酯，其结构式如下。替西罗莫司几乎不溶于水，且为非电解质，无法通过ph调节、成盐等方法增加其溶解度。虽然在一些药学上可接受的有机溶剂(如乙醇、丙二醇、聚乙二醇等)中溶解性较好，但是几乎都存在易氧化降解、内酯环裂解等化学稳定性问题；另一方面，将替西罗莫司溶于上述有机溶剂中，临床使用时无法直接使用0.9％氯化钠溶液、5％葡萄糖溶液等水溶液稀释，否则会析出沉淀，无法供临床使用。由于上述诸多原因，使替西罗莫司成药具有较大的难度。研究表明，替西罗莫司在体内和体外模型中对肿瘤生长均表现出显著的抑制作用，而非细胞毒性，它可以延迟肿瘤的发展时间或肿瘤复发时间。其作用机理与西罗莫司类似，与胞质蛋白fkbp结合并形成复合体，从而抑制酶mtor(雷帕霉素的哺乳动物靶点)。mtor激酶活性的抑制使得多个信号传导路径被抑制，包括细胞因子刺激的细胞增殖、mrna对多种关键蛋白的翻译(这些蛋白调节细胞周期的g1期)和il-2诱导的转录，从而抑制细胞周期从g1到s期的过程，替西罗莫司这种对g1到s期阻滞的作用机理对于抗癌药物是一种新机理。由于在肿瘤抑制方面的优势，替西罗莫司是第一个被美国fda批准上市的抗肿瘤的mtor抑制剂，用于晚期肾细胞癌治疗的孤儿药。惠氏公司通过采用大量的有机溶媒以解决替西罗莫司溶解性问题，同时采用含吐温80、有机溶剂的特定稀释剂，以解决直接用水溶液稀释药物析出的问题，从而研制了一种替西罗莫司的两瓶装制剂，包括替西罗莫司浓缩液和稀释剂美国fda于2007年5月批准其上市，用于晚期肾癌，欧盟批准其用于至少具有三个以上预后危险因子的晚期肾癌的一线治疗。该制剂中，替西罗莫司浓缩液组成为替西罗莫司、无水乙醇、dl-α-生育酚、丙二醇、无水柠檬酸；稀释剂组成为吐温80、聚乙二醇400、无水乙醇。但是该制剂也存在诸多缺点：①该制剂中含有大量有机溶媒，用于静脉给药具有较大的刺激性；②该制剂含有吐温80，可能产生过敏反应，说明书中明确指出，给药前须给予抗组胺剂；③该制剂与输液器具相容性较差，由于其中含有吐温80，能够溶解出输液袋及输液管路中所含的增塑剂(邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯)；④该制剂为两瓶装制剂，必须首先采用专用稀释剂稀释，再用生理盐水稀释，否则会产生沉淀，这种两步稀释法操作繁琐，也增加了二次污染的风险。鉴于已上市替西罗莫司制剂存在诸多缺陷，因此，迫切需要开发一种新的安全、稳定的替西罗莫司制剂。目前对于替西罗莫司新制剂研究的相关报道很有限，专利cn200480021450.3公开了一种cci-779(替西罗莫司)冻干制剂，该制剂与上市的主要区别在于将替西罗莫司溶液冻干，以增加其稳定性，但经非胃肠道给药时，仍需首先用特定的含有吐温80、有机溶剂的稀释剂溶解，再用生理盐水等水溶液稀释使用。专利cn201210460639.9公开了一种替西罗莫司冻干制剂，通过加入助溶剂聚乙二醇硬脂酸酯15，可以直接通过注射用水或生理盐水配制使用，解决了和专利cn200480021450.3公开制剂需要两瓶装，先必须使用特定稀释剂稀释，再经生理盐水稀释，操作繁琐，易造成二次污染等问题。但是，该制剂使用了大量的表面活性剂聚乙二醇硬脂酸酯15助溶，有文献(张嘉，李贻奎，李连达，等.聚山梨酯-80和泊洛沙姆188等4种增溶剂对小鼠的急性毒性，中国新药杂志,2008,17(17):1491-1493)报道，该表面活性剂经小鼠尾静脉注射急性毒性较大，甚至大于吐温80，可见其安全性问题仍待商榷。文献(马海霞，邹祥.响应面分析法优化替西罗莫司脂质体的处方工艺，全国抗生素学术会议，2013)制备了一种替西罗莫司脂质体，但其包封率仅约83％；文献(ranmo,qiongsun,nanli,etal.intracellulardeliveryandantitumoreffectsofph-sensitiveliposomesbasedonzwitterionicoligopeptidelipids，biomaterials，2013,34(11):2773-2786.)通过在脂质体膜材中加入一种两亲性寡肽hhg2c18，制备了一种替西罗莫司ph敏感脂质体，首先，该文献研究结果中显示，当脂质体膜材中加入hhg2c18或peghg2c18后，所制备的空白脂质体、载药脂质体粒径都明显增加，特别是加入peghg2c18后，对药物替西罗莫司的载荷能力也明显降低，可见该成分对于脂质体成药性存在一定的影响，很可能会影响脂质体的稳定性及药物的包封，而且根据该成分的结构，其疏水部分为两条硬脂烷烃链，其与磷脂的亲和力明显不如peg化磷脂(即聚乙二醇修饰磷脂)，若作为脂质体膜材成分，很可能对于脂质体的形成、药物的包封都是不利的；其次，文献(方超，施斌，洪鸣，等.粒径和mepeg相对分子质量对隐形纳米粒体外巨噬细胞吞噬和大鼠体内长循环的影响，药学学报，2006,41(4):305-312.)中分别比较了80nm、170nm和240nm粒径对体外巨噬细胞吞噬和大鼠体内长循环的影响，结果显示随着粒径的减小，巨噬细胞吞噬量减小，大鼠血浆半衰期延长，可见，该脂质体膜材中中加入peghg2c18后，脂质体粒径由原来普通脂质体的100nm增至150nm，很可能对巨噬细胞吞噬、体内循环时间等存在不利影响。因此，针对于目前已有替西罗莫司制剂存在的不足，我们针对于替西罗莫司，对一些安全性较好的常用剂型，如磺丁基醚-β-环糊精包合物、脂质体、脂肪乳剂进行了筛选，期望找到一种与替西罗莫司匹配的剂型(见实施例1)，结果表明，磺丁基醚-β-环糊精、脂肪乳剂对于替西罗莫司而言，成药可能性极低，主要体现在：(1)高达50％的磺丁基醚-β-环糊精仍然无法实现对1mg/ml替西罗莫司的包合；(2)替西罗莫司在常用注射用油(中链油、大豆油)中的溶解度太低，无法满足制剂需求。而对于脂质体，采用常规的处方工艺制备，其质量也较差，与上述文献中提到的替西罗莫司脂质体相似，但是相对于磺丁基醚-β-环糊精包合物和脂肪乳剂两种剂型而言，脂质体成药性更好。经过大量的试验，我们发现在普通脂质体的膜材中加入适量的peg化磷脂，可以明显改善替西罗莫司脂质体的质量。我们经过比较不含peg化磷脂的替西罗莫司脂质体与含有peg化磷脂的替西罗莫司脂质体的包封率和稳定性，结果发现，通过加入peg化磷脂等可以明显提高包封率(＞90％)和稳定性(见实施例2)，这可能与替西罗莫司特有的理化性质有关。鉴于上述问题，本发明结合替西罗莫司的理化特性，通过大量试验研究，成功开发了一种包封率高、质量稳定、安全的替西罗莫司脂质体，解决了已有替西罗莫司制剂存在的不足，为临床研究与应用提供了新的制剂。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种包封率高、质量稳定、安全的替西罗莫司脂质体。本发明的另一目的在于提供替西罗莫司脂质体的制备方法。鉴于替西罗莫司现有制剂存在的问题，我们拟开发一种不含吐温80、单剂包装、稳定、安全的制剂。结合替西罗莫司的理化性质，对环糊精包合物以及常用的纳米包裹制剂(如脂质体、脂肪乳剂)等剂型进行研究，见实施例1。出乎预料的是，只有脂质体才具有一定的可行性，而其他剂型未看出有任何可实施的迹象，例如，替西罗莫司在常用注射用油(中链油、大豆油)中的溶解性很低，10mg/g时仍然呈严重浑浊的状态；采用磺丁基醚-β-环糊精包合时，即使其用量达到50％，也无法实现对1mg/ml的替西罗莫司实现包合。采用常规的脂质体处方组成与用量时，对替西罗莫司而言，虽然勉强能得到脂质体，但质量相差甚远，存在包封率低、药物泄漏、不溶性微粒大、稳定性差等一系列问题。在试验过程中，意外发现，若在处方中添加peg化磷脂，与卵磷脂合用做包裹材料时，收到了相当好的效果，完美的解决了上述问题。该发现可能与替西罗莫司的理化性质有关，只有与其固有的特性相吻合，才能顺利制备出符合要求的脂质体。故本研究的替西罗莫司脂质体，处方中含有peg化磷脂，是本发明的核心技术特征之一。本发明一方面，提供一种替西罗莫司脂质体，其组成中除替西罗莫司、磷脂外，还含有peg化磷脂，提高脂质体包封率和稳定性。为此，本发明提供一种替西罗莫司脂质体组合物，由以下重量比例的组分制备而成：替西罗莫司0.5-10份磷脂10-100份peg化磷脂0.2-10份胆固醇0-10份稳定剂0-10份冻干保护剂50-400份溶媒适量。优选的，本发明所述的脂质体组合物，由以下重量比例的组分制备而成：替西罗莫司0.5-7份磷脂15-80份peg化磷脂0.5-8份胆固醇0-5份稳定剂0.05-8份冻干保护剂100-400份溶媒适量。更优选的，本发明所述的脂质体组合物，由以下重量比例的组分制备而成：替西罗莫司1-5份磷脂15-60份peg化磷脂1-5份胆固醇0-4份稳定剂0.1-5份冻干保护剂100-350份溶媒适量。其中，所述溶媒包括在制备脂质体组合物的过程中使用的有机溶媒或者水，这些溶媒在制备过程中使用，但在终产品中被干燥移除，所述适量是根据组分的不同采用不同的量，以可以溶解有关组分为基本需要，所用的量属于本领域的常规技术，并非本发明必不可少的技术特征。其中，所述的磷脂选自高纯蛋黄卵磷脂、高纯大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、二芥酰基卵磷脂(depc)、二油酰基卵磷脂(dopc)、二肉豆蔻酰基卵磷脂(dmpc)、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂(popc)、磷脂酰胆碱、蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂中的一种或两种以上，优选高纯蛋黄卵磷脂。其中，所述的peg化磷脂选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(dspe-peg)，二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(dppe-peg)，优选二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(dspe-peg)；其中聚乙二醇分子量选自1000-8000，优选2000-5000。其中，所述的稳定剂包含螯合剂和/或抗氧剂，选自乙二胺四乙酸及其盐、α-生育酚、α-生育酸琥珀酸酯、α-醋酸生育酚、柠檬酸、甘氨酸、谷氨酸、琥珀酸、己二酸、苹果酸、马来酸、抗坏血酸、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、谷胱甘肽、半胱氨酸、硫代甘油、叔丁基羟基茴香醚、二叔丁基对甲酚、没食子酸丙酯中的一种或两种以上，优选α-生育酚、乙二胺四乙酸及其盐。其中，所述的冻干保护剂选自麦芽糖、海藻糖、蔗糖、甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、赤藓糖醇、苏氨酸中的一种或两种以上，优选蔗糖、麦芽糖、海藻糖。本发明所述的脂质体组合物，根据需要还可加入助溶剂丙二醇0-40份。本发明进一步提供本发明所述的脂质体组合物的制备方法，所述方法可以是以下方法：取替西罗莫司、磷脂、peg化磷脂、胆固醇、稳定剂，加有机溶媒适量，在25-75℃下加热溶解，得有机相；称取适量注射用水，加热至25-75℃，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，即得脂质体粗品；将脂质体粗品进行乳化，可将其置于高压均质机中进行均质乳化，或将其置于挤出器中依次通过不同孔径的挤出膜挤出，或高压均质后再进行挤出，得脂质体溶液；称取配方量冻干保护剂，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至全量；用ph调节剂调节ph值；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉针，所述的有机溶媒，选自无水乙醇、丙二醇、叔丁醇的一种或两种以上。也可以是以下方法：取替西罗莫司、磷脂、peg化磷脂、胆固醇、稳定剂，加适量有机溶媒，25℃～75℃下加热溶解，得有机相；在25℃～75℃下将有机相经旋转蒸发除去有机溶媒，或将有机相置于样品盘中经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相；称取适量注射用水，加热至25℃～75℃，得水相；将水相加入脂质相中，搅拌，即得脂质体粗品；将脂质体粗品进行乳化，可将其置于高压均质机中进行均质乳化，或将其置于挤出器中依次通过不同孔径的挤出膜挤出，或高压均质后再进行挤出，得脂质体溶液；称取配方量冻干保护剂，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至全量；用ph调节剂调节ph值；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉针，所述的有机溶媒，选自乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、甲醇、乙腈、叔丁醇、乙丙二醇、甲醇的一种或两种以上。所述的稳定剂，根据其溶解性质，也可溶解于水相中。所述的冻干保护剂，也可加入水相中。所述的将脂质体粗品进行乳化，乳化方法优选为挤出乳化法；挤出膜孔径选自2.0μm、1.0μm、0.8μm、0.6μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm，选用一种或两种以上依次通过大孔径到小孔径的挤出。上述方法中所述的ph调节剂，选自有机或无机酸或碱，选自枸橼酸、乙酸、丙酸、盐酸、氢氧化钠、磷酸、三乙胺、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、枸橼酸钠、醋酸钠中的一种或两种以上。所述的ph调节剂调节ph值，调节ph值至3-8；优选调节ph值至4-7；更优选调节ph值至4-6。本发明的替西罗莫司脂质体粒径为70-140nm。本发明的优点在于：(1)本发明的替西罗莫司脂质体，不含有吐温80、聚氧乙烯蓖麻油等增溶剂，避免了已上市制剂由吐温80等增溶剂引起的过敏反应。(2)本发明的替西罗莫司脂质体，属于纳米包裹制剂，且其粒径为100nm左右，具有epr效应，对肿瘤部位具有一定的靶向作用。(3)本发明的替西罗莫司脂质体，经过处方工艺的优化，具有包封率高、稳定性好等特点，且通过制备成冻干制剂，更增加了替西罗莫司的化学稳定性；(4)本发明的替西罗莫司脂质体，制备工艺简单，可实现工业化生产，而且临床使用方便，无需多次采用不同稀释剂稀释。具体实施方式：以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。实施例1不同制剂剂型对替西罗莫司的成药性研究分别对磺丁基醚-β-环糊精包合物、脂质体、脂肪乳剂的成药性进行研究，固定载药量为1mg/ml进行平行对比。现将主要研究方案与结果总结如下：1.磺丁基醚-β-环糊精包合物1.1处方工艺一1.1.1处方替西罗莫司磺丁基醚-β-环糊精注射用水处方1100mg10g至100ml处方2100mg30g至100ml处方3100mg50g至100ml1.1.2制备方法称取处方量磺丁基醚-β-环糊精，加适量注射用水溶解，并定容至100ml；称取处方量替西罗莫司，加入磺丁基醚-β-环糊精水溶液中，常温下搅拌2h。1.1.3结果评价上述各处方下，搅拌2h后，均呈现严重浑浊状态。1.2处方工艺二1.2.1处方1.2.2制备方法称取处方量磺丁基醚-β-环糊精，加适量注射用水溶解，得水相；称取处方量替西罗莫司、有机溶媒(无水乙醇或丙二醇或peg400)，水浴超声使其溶解，得有机相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，用注射用水定容至全量，即得。1.2.3结果评价随着药物溶液加入磺丁基醚-β-环糊精水溶液中，各个处方配方下溶液都逐渐变浑浊，其中以无水乙醇为溶媒，浑浊程度大于丙二醇和peg400。综上，磺丁基醚-β-环糊精很难实现对替西罗莫司的包合。2.脂质体2.1处方处方1处方2处方3处方4替西罗莫司100mg100mg100mg100mg磷脂epcs3.0g//2.0g磷脂pc-98t/3.0//磷脂e80//3.0g/磷脂hspc///1.0g胆固醇200mg200mg200mg200mg无水乙醇4ml4ml4ml4ml注射用水至100ml至100ml至100ml至100ml2.2制备方法称取处方量的替西罗莫司、磷脂、胆固醇，加处方量无水乙醇，在60℃下加热溶解，得有机相；称取处方量注射用水，加热至60℃，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，即得。1.2.3结果评价3.脂肪乳剂替西罗莫司在常用注射用油(中链油、大豆油)中的溶解性考察如果采用10％的油，要实现1mg/ml的载药量，也需要药物在油中的溶解度达到10mg/g，而根据上述溶解性考察结果，替西罗莫司在中链油和大豆油中的溶解性都很差，几乎无法实现脂肪乳剂的制备。综上所述，(1)磺丁基醚-β-环糊精用量已达到50％，仍无法包合1mg/ml的替西罗莫司；(2)替西罗莫司脂质体质量较差，如：有可见微粒、不稳定、包封率不够高等；(3)替西罗莫司以10mg/g的浓度加入中链油或大豆油中，高温下加热仍呈严重浑浊状态，无法溶解。可见，将替西罗莫司制备成磺丁基醚-β-环糊精包合物、脂肪乳剂几乎无可能性，而替西罗莫司脂质体，虽然通过目前的处方工艺制备质量仍然不好，但相对而言，通过处方工艺的优化更具有可行性。实施例2peg化磷脂对替西罗莫司脂质体开发的关键性通常脂质体是由卵磷脂或卵磷脂与胆固醇组成。但是对替西罗莫司而言，处方中必须添加适量的peg化磷脂，否则无论如何调整处方与工艺，也无法制备出稳定的脂质体，在极短的时间内出现混浊与沉淀的问题。典型验证方案如下所示。以dspe-peg2000为例：1.处方：组分处方1处方2处方3处方4处方5处方6替西罗莫司125mg125mg125mg125mg125mg125mgepcs3.5g4.5g5.5g3.5g3.5g3.5g胆固醇0.2g0.2g0.2g0.2g0.2g0.2gdspe-peg2000///10mg50mg100mg乙醇4ml4ml4ml4ml4ml4ml注射用水至100ml至100ml至100ml至100ml至100ml至100ml2.制备工艺称取处方量的替西罗莫司、高纯蛋黄卵磷脂(epcs)、胆固醇或dspe-peg2000，加处方量乙醇，在50℃下加热溶解，得有机相；量取处方量注射用水，加热至50℃，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品依次经0.2μm、0.1μm、0.05μm挤出膜挤出，即得替西罗莫司脂质体。3.试验结果dspe-peg2000对成药性的影响结果结果分析：当处方中不含有dspe-peg2000时，所制备的脂质体溶液呈混悬液状态，且在较短时间内可明显观察到底部有沉淀物，即使当磷脂用量增至5.5％后，仍然不能改善这种状态，经不溶性微粒检测显示含有大量微粒；另外，通过对其他多种磷脂进行考察，也是相似的结果，都不能得到稳定的替西罗莫司脂质体。当处方中加入少量dspe-peg2000后，溶液外观明显改善，呈半透明均一液体，无沉淀、无可见微粒，经检测不溶性微粒也非常少，且放置24h后仍未见微粒、沉淀，可见脂质体稳定性明显改善。同时，包封率比相同磷脂用量明显增加。同理，对dspe-peg5000、dppe-peg2000、dppe-peg5000等进行了考察，可得到与dspe-peg2000相似的结果。由此可见，peg化磷脂的加入，对替西罗莫司脂质体而言至关重要，将直接影响脂质体的成药性，是本发明的核心技术特征。实施例3替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.15g、高纯蛋黄卵磷脂(epcs)3.5g、dspe-peg20000.125g、α-生育酚0.03g，加叔丁醇8.0g，在45℃下加热溶解，置于样品盘中，经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相；称取edta-2na0.01g、注射用水75g，加热至45℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，搅拌使其充分溶解分散，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取麦芽糖20g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用枸橼酸、枸橼酸钠调节ph值为5.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为98.8nm。实施例4替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.125g、高纯蛋黄卵磷脂(epcs)3.5g、胆固醇0.1g、dspe-peg20000.125g、α-生育酚0.03g，加无水乙醇3.5g，在50℃下加热溶解，得有机相；称注射用水75g，加热至50℃，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；将脂质体溶液通过超滤去除无水乙醇；称取蔗糖25g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用枸橼酸、枸橼酸钠调节ph值为5.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为96.8nm。实施例5替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.05g、高纯蛋黄卵磷脂(epcs)1.5g、dspe-peg200050mg、α-生育酚0.005g，加适量无水乙醇溶解，在45℃下加热溶解，得有机相；将有机相在45℃下经旋转蒸发除去有机溶剂，得脂质相；称注射用水90g，加热至45℃，得水相；将水相加入脂质相，水化脂质成分，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取海藻糖5g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用枸橼酸、枸橼酸钠调节ph值为5.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为70.6nm。实施例6替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.1g、高纯蛋黄卵磷脂(epcs)2.0g、胆固醇0.1g、dspe-peg50000.1g、α-生育酚0.01g，加无水乙醇1.0g，在30℃下加热溶解，得有机相；称海藻糖15g、注射用水80g，加热至30℃，溶解，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；用注射用水定容至100ml；用枸橼酸调节ph值为5.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为78.2nm。实施例7替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.1g、氢化大豆磷脂(hspc)2.0g、胆固醇0.1g、dspe-peg500020mg，加适量二氯甲烷溶解，在60℃下加热溶解，得有机相；将有机相在40℃下经旋转蒸发除去有机溶剂，得脂质相；称取edta-2na0.02％、蔗糖20g、注射用水75g，加热至60℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，水化脂质成分，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；用注射用水定容至100ml；用枸橼酸、枸橼酸钠调节ph值为6.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为90.8nm。实施例8替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.075g、高纯蛋黄卵磷脂(epcs)1.5g、dppe-peg20000.1g，加叔丁醇3.0g，在55℃下加热溶解，得有机相；将有机相置于样品盘中，经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相；称硫代甘油0.2g、edta-2na0.02g、葡萄糖7g、山梨醇15g、注射用水70g，加热至55℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，搅拌使其充分溶解、分散，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于高压均质机中均质乳化，得脂质体溶液；用注射用水定容至100ml；用枸橼酸、枸橼酸钠调节ph值为6.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为87.7nm。实施例9替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.125g、高纯蛋黄卵磷脂(epcs)3.0g、胆固醇0.1g、dspe-peg20000.15g、α-生育酸琥珀酸酯0.03g，加无水乙醇2.0g，在35℃下加热溶解，得有机相；称取edta-2na0.01g、葡萄糖5g、注射用水70g，加热至35℃，溶解，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取葡萄糖8g、甘露醇10g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用盐酸调节ph值为3.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为89.8nm。实施例10替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.125mg、高纯蛋黄卵磷脂(pc-98t)3.5g、胆固醇0.1g、dspe-peg20000.3g、α-醋酸生育酚0.02g，加丙二醇4.0g，在60℃下加热溶解，得有机相；称取注射用水80g，加热至60℃，溶解，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；将脂质体溶液通过超滤去除丙二醇；称取蔗糖10g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用枸橼酸调节ph值为4.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为94.8nm。实施例11替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.15g、高纯蛋黄卵磷脂(epcs)3.5g、胆固醇0.3g、dppe-peg20000.125g、α-醋酸生育酚0.02g，加叔丁醇3.0g，甲醇2.0g，在55℃下加热溶解，得有机相；将有机相置于样品盘中，经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相；称edta-2na0.02g、注射用水70g，加热至55℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，搅拌使其充分溶解、分散，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于高压均质机中均质乳化，得脂质体溶液；称取葡萄糖7g、山梨醇15g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用乙酸、乙酸钠调节ph值为6.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为97.7nm。实施例12替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.15g、高纯蛋黄卵磷脂(pc-98t)2.5g、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂(popc)0.5g、胆固醇0.25g、dspe-peg20000.2g、己二酸0.1g，加无水乙醇4.5g，在60℃下加热溶解，得有机相；称取谷胱甘肽0.1g、注射用水75g，加热至60℃，溶解，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；将脂质体溶液通过刮板薄膜蒸发器去除无水乙醇；称取木糖醇20g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用磷酸氢二钠、磷酸二氢钠调节ph值为6.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为102.0nm。实施例13替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.15g、高纯蛋黄卵磷脂(epcs)2.0g、二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)1.0g、dppe-peg20000.2g、二叔丁基对甲酚0.4g，加无水乙醇3.0g、叔丁醇2.0g，在65℃下加热溶解，得有机相；称乙二胺四乙酸0.05g、注射用水75g，加热至65℃，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取海藻糖10g、麦芽糖10g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用磷酸调节ph值为4.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为105.1nm。实施例14替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.125g、高纯蛋黄卵磷脂(epcs)2.0g、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)1.0g、dppe-peg50000.1g，加适量无水乙醇溶解，得有机相；将有机相在45℃下经旋转蒸发除去有机溶剂，得脂质相；称取半胱氨酸0.5g、注射用水85g，加热至45℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，水化脂质成分，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取麦芽糖10g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用磷酸氢二钾、磷酸二氢钾调节ph值为7.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为94.6nm。实施例15替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.175g、高纯蛋黄卵磷脂(pc-98t)2.5g、二芥酰基卵磷脂(depc)1.0g、胆固醇0.15g、dspe-peg10000.2g、没食子酸丙酯0.2g，加无水乙醇4.0g，在55℃下加热溶解，得有机相；称取马来酸0.3g、注射用水75g，加热至55℃，溶解，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于高压均质机中均质乳化，然后再置于挤出器中，依次通过孔径0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取麦芽糖15g、蔗糖5g、苏氨酸5g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用三乙胺调节ph值为8.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为106.8nm。实施例16替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.2g、大豆磷脂3.0g、二油酰基卵磷脂(dopc)0.5g、dppe-peg50000.2g，加丙二醇4.0g，在70℃下加热溶解，得有机相；称取苹果酸0.5g、注射用水70g，加热至70℃，溶解，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取葡萄糖14g，甘露醇11g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用枸橼酸、枸橼酸钠调节ph值为6.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为108.9nm。实施例17替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.25g、高纯大豆卵磷脂(s100)4.0g、胆固醇0.1g、dspe-peg80000.25g、α-生育酚0.04g，加叔丁醇8.0g、甲醇2.0g，在50℃下加热溶解，得有机相；将有机相置于样品盘中经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相；称取谷氨酸0.5g、蔗糖10g、注射用水70g，加热至50℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，搅拌使其充分溶解分散，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取蔗糖15g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用枸橼酸调节ph值为5.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为112.4nm。实施例18替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.5g、高纯蛋黄卵磷脂(pc-98t)6.0g、胆固醇0.4g、dspe-peg60000.5g，加无水乙醇5.0g，在50℃下加热溶解，得有机相；称取edta-2na0.03g、谷胱甘肽0.6g、注射用水55g，加热至50℃，溶解，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.8μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；将脂质体溶液通过刮板薄膜蒸发器去除无水乙醇；称取麦芽糖20g、蔗糖15g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用氢氧化钠调节ph值为8.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为125.5nm。实施例19替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.7g、高纯蛋黄卵磷脂(pc-98t)8.0g、胆固醇0.5g、dspe-peg40000.7g、α-生育酚0.08g，加叔丁醇10.0g、乙腈5.0g，在60℃下加热溶解，得有机相；将有机相置于样品盘中经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相；称抗坏血酸0.1g、注射用水50g，加热至60℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，搅拌使其充分溶解分散，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于高压均质机中均质乳化，然后再置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取麦芽糖20g、海藻糖20g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用乙酸、乙酸钠调节ph值为5.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为130.2nm。实施例20替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.3g、高纯蛋黄卵磷脂(pc-98t)2.5g、二肉豆蔻酰基卵磷脂(dmpc)1.0g，胆固醇0.2g、dppe-peg10000.2g、叔丁基羟基茴香醚0.1g，加适量二氯甲烷，在40℃下加热溶解，得有机相；将有机相在40℃下经旋转蒸发除去有机溶剂，得脂质相；称取琥珀酸0.1g、麦芽糖10g，海藻糖13g、注射用水70g，加热至40℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，水化脂质成分，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于高压均质机中均质乳化，得脂质体溶液；用注射用水定容至100ml；用枸橼酸调节ph值为5.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为115.7nm。实施例21替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.6g、高纯蛋黄卵磷脂(pc-98t)8.0g、胆固醇0.4g、dspe-peg20000.5g、α-生育酚0.15g，加无水乙醇5.0g，在55℃下加热溶解，得有机相；称取注射用水70g，加热至55℃，溶解，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径1.0μm、0.6μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；将脂质体溶液通过超滤去除无水乙醇；称取麦芽糖10g、赤藓糖醇10g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用枸橼酸、枸橼酸钠调节ph值为6.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为125.6nm。实施例22替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.8g、高纯蛋黄卵磷脂(pc-98t)10.0g、胆固醇1.0g、dppe-peg80000.9g，加适量二氯甲烷，在40℃下加热溶解，得有机相；将有机相在40℃下经旋转蒸发除去有机溶剂，得脂质相；称取硫代甘油0.6g、焦亚硫酸钠0.2g、注射用水55g，加热至50℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，水化脂质成分，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径2.0μm、1.0μm、0.6μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取蔗糖20g、麦芽糖10g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用枸橼酸调节ph值为5.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为133.6nm。实施例23替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.4g、高纯蛋黄卵磷脂(epcs)3.0g、高纯蛋黄卵磷脂(98t)3.0g、胆固醇0.2g、dspe-peg20000.3g、α-醋酸生育酚0.05g，加叔丁醇5.0g、丙二醇2.0g，在60℃下加热溶解，得有机相；将有机相置于样品盘中经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相；称取亚硫酸氢钠0.1g、15g、木糖醇5g、苏氨酸5g、注射用水70g，加热至60℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，搅拌使其充分溶解分散，即得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.6μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；用注射用水定容至100ml；用枸橼酸调节ph值为4.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为124.0nm。实施例24替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司1.0g、高纯蛋黄卵磷脂(pc-98t)10.0g、胆固醇0.4g、dspe-peg20001.0g，加叔丁醇15.0g，乙腈5.0g，在60℃下加热溶解，得有机相；将有机相置于样品盘中经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相；称取硫代甘油0.8g、谷胱甘肽0.2g、麦芽糖10g、注射用水65g，加热至60℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，搅拌使其充分溶解分散，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径2.0μm、1.0μm、0.8μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取麦芽糖10g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用乙酸、乙酸钠调节ph值为5.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为138.9nm。实施例25替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.2g、高纯蛋黄卵磷脂(epcs)3.5g、胆固醇0.2g、dspe-peg20000.15g、α-生育酚0.02g，加叔丁醇8.0g，乙醇2.0g，在40℃下加热溶解，得有机相；将有机相置于样品盘中经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相；称取半胱氨酸0.2g、注射用水75g，加热至40℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，搅拌使其充分溶解分散，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取海藻糖20g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用磷酸氢二钠、磷酸二氢钠调节ph值为7.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为105.6nm。实施例26替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.25g、高纯蛋黄卵磷脂(pc-98t)4.0g、dspe-peg20000.2g、α-生育酚0.03g，加适量三氯甲烷、甲醇，在35℃下加热溶解，得有机相；将有机相在35℃下经旋转蒸发除去有机溶剂，得脂质相；称取edta-2na0.01g、注射用水70g，加热至35℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，水化脂质成分，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于高压均质机中均质乳化，然后再置于挤出器中，通过孔径0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取麦芽糖25g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用枸橼酸、枸橼酸钠调节ph值为6.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为108.8nm。实施例27替西罗莫司脂质体的制备称取替西罗莫司0.1g、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)2.0g、胆固醇0.1g、dspe-peg20000.1g，加适量三氯甲烷、乙腈，在35℃下加热溶解，得有机相；将有机相在35℃下经旋转蒸发除去有机溶剂，得脂质相；称注射用水85g，加热至60℃，得水相；将水相加入脂质相中，水化脂质成分，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取蔗糖10g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用盐酸调节ph值为5.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。经测定，平均粒径为90.1nm。实施例28替西罗莫司脂质体稳定性考察分别取实施例3、5、7、18、24样品，于40℃下放置30天考察稳定性，分别于第0天、第10天、第20天、第30天取样，以粒径、包封率、药物含量为指标进行评价。结果见下表1。可见，本发明的替西罗莫司脂质体稳定性良好。表1替西罗莫司脂质体40℃下30天稳定性试验结果注：记各实施例样品第0天药物含量为100％，其后药物含量为相对于第0天的百分含量。当前第1页12