一种抗菌用三氯生脂质体及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物制剂和抗菌材料技术领域，特别涉及一种载抗菌型药物脂质体，更具体地说，本发明涉及一种抗菌用三氯生脂质体及其制备方法。
【背景技术】
[0002]三氯生，学名称作“二氯苯氧氯酸”，化学分子式为C12H7C1302，是一种广谱型的高效抗菌剂，对革兰氏阳性菌、阴性菌、酵母及病毒均有杀灭和抑制作用，被广泛应用于肥皂、牙膏等日用化学品之中。但是，三氯生是疏水性抗菌剂且在水基质中容易聚集而失去活性，从而导致生物利用率降低，限制了其应用范围。因此，如何将疏水的三氯生均匀分散到亲水性基质中，是三氯生在实际应用中面临的难题。目前以三氯生为主要活性成分的产品多是通过添加乙二醇、甘油等有机溶剂增加其溶解性，仍难以解决提高其稳定性和持久作用的目的，而且乙二醇等添加剂也容易产生神经毒性，不利于三氯生水系抗菌产品的广泛应用。
[0003]脂质体(liposome)是英国学者Bangham和Standish于1965年发现的，并很快被应用于药物载体领域。脂质体由磷脂及附加剂组成，磷脂为两性物质，其结构上有亲水及亲油基团，常用的有蛋黄磷脂、大豆磷脂等。构成双分子层的类脂的亲水性的首部形成膜的内外表面，而亲脂性的尾端部分处于膜的中间，膜壁厚度约为5?7nm，而囊的直径一般在25?50nm之间。脂质体的这种结构使其能够携带各种亲水或疏水性物质，特别是可以用于装载疏水性药物以提高药物在水体系中的分散性和活性。同时，脂质体与生物膜结构相似，能与细胞膜有较强的亲和力，可以增强活性物的通透能力，提高疗效，通过改变脂质体的大小甚至可以控制其在组织内的分布。因此，将水不溶性抗菌药物三氯生包封成脂质体，可以极大地提高其水溶液中的有效浓度，延长作用时间，有望使三氯生水性抗菌产品的应用得到广泛扩展。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是针对目前抗菌剂三氯生自身存在的难溶性，不利于其抗菌产品的广泛使用，提供一种产品质量高，粒径均匀，产品稳定性好，载药量高的抗菌用三氯生脂质体材料，同时提供一种方法简单，易于生成，成本较低的制备该抗菌用三氯生材料的方法。
[0005]为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是:
[0006]本发明所述的抗菌用三氯生脂质体，它的组分包括三氯生、磷脂、胆固醇，各组分的重量份配比为三氯生6.2?15.3份、磷脂78.5?82.5份、胆固醇4.7?11.5份。作为优选，所述各组分的重量份配比为三氯生9.2份、磷脂82.5份、胆固醇8.3份。
[0007]在所述三氯生脂质体中，三氯生为抗菌药物活性成分，磷脂和胆固醇为构成脂质体膜结构的基本成分。
[0008]本发明所述的三氯生脂质体属于小单室脂质体，是以磷脂和胆固醇为膜材构成单室的双层脂质膜的封闭囊泡，胆固醇分布在脂质膜双分子层的内部，三氯生同样被包埋在脂质膜的双分子层中间。
[0009]该脂质体的抗菌药物活性成分三氯生包埋在脂质体中，有效提高了三氯生在水中的有效浓度，并且结合脂质体与细胞膜的较强亲和力优势，提高三氯生的生物利用效率。当脂质体在水溶液中与细菌接触时，脂质体膜可以与细菌相结合，持续释放抗菌活性成分三氯生，起到杀死细菌的效果，因此该三氯生脂质体具有较好的抗菌性能。
[0010]作为对本发明的限定，所述磷脂为天然蛋黄磷脂、天然大豆磷脂或氢化大豆磷脂。优选地，考虑到脂质体的稳定性，所述磷脂为氢化大豆磷脂。氢化大豆磷脂由天然的大豆磷脂经化学加氢而得，因此具有更高的相变温度和稳定性，因此制得的脂质体也更加稳定。
[0011]本发明所述抗菌用三氯生脂质体的制备方法，包括如下步骤:
[0012](1)按比例分别称取三氯生、磷脂、胆固醇，充分溶解于乙醇中配制成混合溶液；
[0013]在步骤(1)中所述的混合溶液中，磷脂的浓度为1.25?5mg/mL。当磷脂的浓度小于1.25mg/mL时，磷脂含量低导致脂质体的药物装载能力低；当磷脂浓度大于5mg/mL时，所得脂质体形态不好、稳定性差。优选地，混合溶液中磷脂的浓度为2.5mg/mL。
[0014]在步骤(1)中所述的混合溶液中，磷脂、胆固醇与三氯生的重量份配比为1:0.06?
0.14:0.1?0.4。当胆固醇比例过低时，会导致脂质双层的流动性降低，影响脂质双分子层的稳定性；当胆固醇比例过高时，胆固醇会竞争性地结合磷脂的亲脂性区域，导致脂质体的载药率降低，并会使磷脂的脂肪酸链僵化，同样影响脂质体膜的稳定性。当三氯生的比例过低时，脂质体的载药率不高，药物有效浓度低，实用意义不大；当三氯生的浓度过高时，所得脂质体的亲水性下降，其水溶液的稳定性较差。优选地，混合溶液中磷脂、胆固醇与三氯生的质量配比为1:0.1:0.2。
[0015](2)将步骤(1)中所述的磷脂、胆固醇、三氯生的混合乙醇溶液置于旋转蒸发仪上，缓慢除去乙醇，在瓶底形成乳白色薄膜；
[0016]所述旋转蒸发仪的旋转速度为60?100转/min，旋转时间为30min?lh，水浴温度为40?60°C。当旋转蒸发仪的旋转速度低于60转/min时，形成的脂质膜较厚；当旋转速度高于100转/min时，形成的脂质膜不均匀，均影响生成脂质体的均匀性。水浴温度低于40°C时，达不到氢化大豆磷脂的相变温度，无法成膜;水溶温度高于60°C时，乙醇溶液容易暴沸影响成膜。优选地，所述旋转蒸发仪的旋转速度为80转/min，旋转时间为45min，水浴温度55°C。
[0017](3)将纯水或磷酸钠缓冲溶液加入到烧瓶中，在摇床上振荡，得到脂质体混悬液；
[0018]磷酸钠缓冲溶液的浓度为0.01mol/L，pH为7.4，作为水合介质。
[0019]所述步骤(3)中的振荡时间为25?40min，可以使薄膜充分溶胀水合。脂质发生溶胀并被一层层洗脱，大多数形成了多层脂质体。优选地，所述振荡时间为30min。
[0020](4)对步骤(3)中得到的脂质体混悬液在冰水浴中进行探头超声，形成透明液体；过滤，收集滤液，得到抗菌用三氯生脂质体的水溶液。
[0021 ] 所述探头超声的方法为:设置功率为80?120W;采用循环超声，每次超声0.6?Is，间隔0.6?0.8s，超声时间10?30min，在冰水浴中进行。本发明采用探头式超声方法，将粒径较大的多层脂质体进一步分散为粒径较小的单层脂质体，使得到的脂质体粒径较小且较均一，通过冰水浴的降温防止超声过程中热量聚集导致磷脂氧化。优选地，所述探头超声的方法为:设置功率为100W;采用循环超声，每次超声0.8s，间隔0.8s，超声时间20min。
[0022]所述步骤(4)中采用0.22μπι孔径的一次性无菌针式过滤器过滤除菌。既可以控制粒径，提高均一性，又可以通过过滤去除溶液中的细菌，达到除菌的效果，便于实际应用。
[0023]通过紫外可见吸收光谱计算可以得到，本发明得到的三氯生脂质体中，三氯生的有效装载率6.2?15.3%，在水溶液中三氯生的有效浓度可以达到0.12?0.3mg/mL，有效改善了三氯生的水溶性，进而可以使其在水系抗菌产品中的应用范围更加广泛。
[0024]将本发明得到的抗菌用三氯生脂质体用于制备深层抗菌型皮肤药剂，具有抗菌作用的织物类医疗器械或其他产品以及在水性抗菌材料中的应用。
[0025]其中优选地，上述三氯生脂质体可以用于针对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌等多种抗菌型药剂、织物和水性抗菌材料中的应用。
[0026]采用上述技术方案后，本发明得到的有益效果是:本发明所述脂质体采用三氯生、磷脂、胆固醇为原料，并调节各原料的重量份配比，将抗菌活性成分三氯生包埋在脂质体中，药物产品质量高，粒径均匀，稳定性好，载药量高，有效提高了药物在水中的有效浓度，具有细胞膜亲和性，可通过融合进入细胞内，释放活性药物，提高了药物的抗菌效果。同时，本发明所述三氯生脂质体的制备方法提高了产品质量，载药量大，且方法简单，易于生成，成本较低。
【附图说明】
[0027]图1为三氯生脂质体的结构示意图，磷脂与胆固醇组成脂质体双分子膜结构，三氯生分子被包埋在磷脂的双分子层中间。1是整体结构模型图，2表示磷脂的疏水链，3表示磷脂的亲水端，4表示胆固醇，5表示三氯生。
[0028]图2为通过实施例3制备的三氯生脂质体的粒径分布图，脂质体具有较均一的尺寸，平均粒径为52nm，为小单层脂质体。
[0029]图3为通过实施例3制备的三氯生脂质体溶液的紫外可见吸收光谱图，由三氯生在280nm位置处的特征吸收峰可通过其标准曲线计算得三氯生的装载率为9.2%。
[0030]图4为通过实施例3制备的三氯生脂质体的抗菌效果:2_a为对照组；2-b为三氯生脂质体组，菌液中三氯生有效浓度为10yg/mL。测试细菌为大肠杆菌。
【具体实施方式】
[0031]为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合本发明的【具体实施方式】做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
[0032]下面为具体实施例部分。
[0033]实施例1
[0034]按比例分别称取天然蛋黄磷脂、胆固醇、三氯生，加入一定量乙醇中，充分溶解得到混合乙醇溶液，其中磷脂浓度为3.5mg/mL，磷脂、胆固醇与三氯生的质量配比为1:0.1:
0.13ο
[0035]将上述磷脂、胆固醇