一种靶向紫杉醇纳米制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属药物制剂领域，具体设一种祀向紫杉醇纳米制剂及其制备方法。
【背景技术】
[000引紫杉醇(Pacli化xel)，分子式为C47也iN0i4。外观为白色针状结晶，在甲醇、乙醇、乙 酸乙醋或氯仿中溶解，在乙酸中微溶，在水中几乎不溶。紫杉醇主要药理作用是微管动力学 稳定作用，能与细胞内微管网直接结合，其高浓度及低浓度抑制细胞有丝分裂和增生的作 用机制并不完全相同，在高浓度(血清浓度0.45ymol/L)下增加微管二聚体的数量和聚合速 度，促进微管束的形成;在低浓度(<10 nmol .L -1)下抑制胞质微管的解聚，增加其动力学 稳定性。其临床主要适用于卵巢癌和乳腺癌，对肺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋己瘤、 脑瘤也都有一定疗效。
[0003] 尽管紫杉醇具有良好的抗肿瘤活性，但其极低的水溶性给静脉用药带来很大困 难。为解决运一难题，人们在注射剂中加入了表面活性剂聚氧乙締藍麻油(Cremo地or EL)。 Cremo地or化虽能增加其水溶性，使其更容易通过血液循环输送至全身，但化emo地or EL 会导致组胺的释放，引起多种毒副反应，如严重的过敏反应、中毒性肾损害、神经毒性、屯、脏 血管毒性等。同时，聚氧乙締藍麻油还会浸出聚氯乙締输液器中的增塑剂从而引起毒性反 应。目前在临床最为常用的泰素(Taxol)，是将紫杉醇溶于化emo地ore化与无水乙醇（1:1) 的混合溶剂中制得，使用前需要预先稀释，美国国立癌症研究所推荐在使用化xol前2地给 予抗变态反应的药物，如预先使用皮质醇类(如地塞米松）、苯海拉明和H2受体括抗剂(如西 咪替下、雷尼替下)等。有研究显示，虽然经预处理后，过敏反应的发生率仍达到10%~30%， 大大限制了其临床应用。
[0004] 传统紫杉醇较差的水溶性和辅助溶剂的使用，使其疗效和安全性受到影响，为了 降低毒性，提高抗肿瘤活性，研究人员开发了能提高紫杉醇溶解度的新剂型，如前体药物、 微球和微囊、包合物、脂质体、纳米粒和纳米混悬剂等，但是运些剂型都存在一定程度上的 弊端：紫杉醇前药研究中的主要问题是连接药物与大分子的架桥基团不易寻找，并且连接 效率较低;微球的粒径太大，无法透过粘膜或经体循环直接把药物输送到祀组织，通常适用 于化学栓塞和局部注射，不适合注射用药;紫杉醇包合物在水性介质中稀释后，药物容易从 中沉淀出来;脂质体实际应用时会遇到因载药量低而导致给药体积增大、药物易泄漏和胆 存稳定性差等一系列问题。
[000引纳米混悬剂是近年来针对难溶性药物的制剂难题开发的一种新剂型，其处方中表 面活性剂含量很少，药物含量很高，特别适合大剂量、难溶性药物的口服和注射给药，真正 实现了使用较小给药体积达到较高的治疗效果。美国生物科学公司研制的注射用紫杉醇白 蛋白纳米混悬剂是目前紫杉醇新制剂研究中较成功的一个范例，但由于需用到成本较高的 白蛋白，给病人带来沉重的经济负担。在肿瘤及关节炎组织中，叶酸受体高度表达，对叶酸 及含叶酸的药物复合物具有高亲和力，可通过细胞内吞作用，将药物转运至细胞内，从而发 挥主动祀向作用，提高药物有效性，降低副反应。
[0006] 因此，如何增加药物含量、降低给药毒性、减小生产成本、提高病人适应性和顺应 度，对于紫杉醇的临床应用尤为重要。本发明开发了一种微沉淀结合高压均质技术制备紫 杉醇纳米混悬剂，通过对泊洛沙姆进行叶酸修饰，将紫杉醇制成祀向纳米制剂，同时保证其 一定的载药量。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种可静脉给药的紫杉醇纳米混悬剂，解决现有紫杉醇注射 液毒副作用强的问题。
[0008] 本发明还提供通过纳米技术和祀向修饰技术制备祀向紫杉醇纳米混悬剂的方法。
[0009] 本发明所述的紫杉醇祀向纳米制剂，通过对表面活性剂泊洛沙姆进行修饰，采用 的修饰基团为叶酸及其衍生物，主要祀向部位为肿瘤组织高度表达的叶酸受体。
[0010] 本发明的目的是运样实现的：一种含紫杉醇的纳米混悬剂，紫杉醇与稳定剂的重 量比例为1:1~1:6，表面活性剂与助稳定剂的重量比为1: 2~1: 5，有机相所用溶剂为二氯甲 烧与丙酬，体积比为1:2，制备冻干粉针时，需加入冻干保护剂的量为纳米制剂量的2~5%，该 混悬剂的粒径为200~280nm。
[0011] 本发明所述的混悬剂，其中表面活性剂为泊洛沙姆、聚乙締醇、卵憐脂、径丙甲纤 维素 E5、聚维酬K30中的一种或多种;助稳定剂为甘油、憐脂、聚乙二醇中至多一种;冻干保 护剂为海藻糖、薦糖、甘露醇中的一种。
[0012] 冻干保护剂优选甘露醇，其含量占该混悬剂重量的2~5%。
[0013] 本发明所述的混悬剂，其中助稳定剂优选甘油，表面活性剂与助稳定剂的重量比 为1:2~1:5。
[0014] 在有机相组成的研究中，选用组合溶剂二氯甲烧和丙酬时，制备的初悬液有淡蓝 色乳光，内部分散均匀，无絮状物。表面活性剂筛选中选用泊洛沙姆或聚乙締醇时，制备的 纳米混悬剂粒径介于200~30化m左右，PI值为0.1左右，粒径分布较为均匀，放置24h后粒径 变化不显著。助稳定剂研究中，当选用甘油作为助稳定剂时，在放置相同时间下，粒径变化 相对较小。在冻干保护剂的选择中，选用甘露醇时，冻干产品外观好无塌陷，复溶前后粒径 变化小。
[0015] 本发明所述的混悬剂，其制备方法为通过沉淀法联合高压均质法制备，按W下步 骤进行： (1) 将紫杉醇溶于有机溶剂作为油相，表面活性剂与助稳定剂溶于水中作为水相，在冰 浴条件下，将油相缓慢注入到水相中，同时用高剪切匀浆机高速揽拌后制得初悬液； (2) 将初悬液旋转蒸发除去有机溶剂，最后用高压均质机均质循环，制得纳米混悬剂； (3) 如制备冻干制剂，则加入冻干保护剂后，采用冻干机冻干。
[0016] 本发明中优选二氯甲烧与丙酬（1:2)作为沉淀法中的有机溶剂，优选叶酸修饰的 泊洛沙姆188作为表面活性剂，优选甘油作为助稳定剂，其中表面活性剂与助稳定剂的重量 比优选1:4,优选紫杉醇与稳定剂的重量比为1:5,优选甘露醇作为冻干保护剂，用量为纳米 混悬液重量的4%。
[0017] 本发明中的高压均质条件优选递增加压，即400bar循环5次，然后900bar循环20 次，运种均质方式得到的纳米混悬剂放置时，不易聚集使粒径变大。
[0018] 本发明中的冷冻干燥条件优选缓慢预冻，再程序升溫，可保证紫杉醇纳米混悬剂 最终含水量低于3%。
[0019] 本发明最终制备得到的祀向紫杉醇纳米混悬剂，平均粒径为226.5ηm，PI值为 0.13，复溶后平均粒径为237.4nm，PI值为0.118。
[0020] 本发明紫杉醇纳米混悬剂有如下优点： ①相对于市售紫杉醇注射液，本发明的纳米混悬剂通过减小药物的粒径，使药物能够 迅速溶出，从而提高药效，降低毒副作用;相对于脂质体、纳米粒等给药系统，药物的载药量 高，便于临床大剂量应用。
[0021] ②通过叶酸修饰后的紫杉醇纳米混悬剂，能提高紫杉醇在肿瘤部位的聚集度，增 加药物的疗效。
[0022] ③通过大鼠体内药动学和组织分布研究，本发明的祀向紫杉醇纳米混悬剂能提高 药物的生物利用度和体内留存时间，改善的药物在体内的分布。
[0023] 本发明的纳米混悬剂的制备方法，工艺简单，使用高压均质法易于工业化生产，成 本较脂质体及纳米粒低。
【附图说明】
[0024] 图1表示本发明的祀向紫杉醇纳米混悬剂的粒径分布图； 图2表示紫杉醇的差示扫描热量分析图； 图3表示本发明的祀向紫杉醇纳米混悬剂的差示扫描热量分析图； 图4表示市售紫杉醇注射液和祀向紫杉醇纳米混悬剂在小鼠肝内的药时曲线图；
【具体实施方式】
[0025] 发明人参考现有纳米混悬剂制备技术，研究了不同有机相及不同稳定剂对纳米混 悬剂性质的影响。
[0026] 本发明的优选配方如下：
本发明中所用的叶酸修饰的泊洛沙姆188及泊洛沙姆407均是是通过W下方法制备： (1)将lOg泊洛沙姆188溶解于丙酬后，加入正己烧，使泊洛沙姆188析出，过滤，真空干 燥得纯化的泊洛沙188。将2.6g纯化后的泊洛沙姆188和1.2g化田容解于无水二氯甲烧中， 另将0.4g 2-漠乙胺氨漠酸溶解于适量无水二氯甲烧中，然后将2-漠乙胺氨漠酸的无水二 氯甲烧溶液在氮气保护的条件下，缓慢滴加到上述溶液中，室溫磁力揽拌24h。反应结束后， 去离子水透析(MW2000)24h，冷冻干燥即得F68-N出粉末。
[0027] (2)将2.82g叶酸、0.6g N服、0.72g CD巧日0.08g DMAP溶解于无水DMSO中，加入Ξ 乙胺，氮气保护，避光条件下，室溫磁力揽拌1化进行活化。将4g泊洛沙姆F68-N出溶解于无 水DMS0中，再加入Ξ乙胺，将含叶酸的溶液缓慢滴加到泊洛沙姆F68-N此的无水DMS0溶液 中，同时在氮气保护条件下，室溫磁力揽拌反应2地。反应结束后，向反应液中缓慢加入去离 子水，然后用去离子水透析(MWC05000)，过程中不断更换去离子水，透析结束后冷冻干燥得 到叶酸修饰的泊洛沙姆188。
[0028] W下均对本发明进一步说明，但不仅限于本
【发明内容】
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[0029] 实施例1 将紫杉醇30mg置于烧杯中，加入二氯甲烧3ml及丙酬1.5ml使其溶解，用作油相;取叶酸 修饰的泊洛沙姆188 3Omg于另一烧杯中，注入12Omg甘油及5Om 1蒸馈水，揽拌使其充分溶 解，作为水相。室溫下，将油相缓慢滴加入水相，同时用高速匀浆5min，将初悬液旋转蒸发， 除去有机溶剂后，加入高压均