一种环孢菌素缓释微球制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及环孢菌素缓释微球。
【背景技术】
[0002] 环孢菌素（也简称为环孢素）是一类通常具有免疫抑制或抗炎活性的多肽，临床 上在器官和组织移植中广泛使用。环孢菌素可与肾上腺皮质激素或其他免疫抑制剂合用， 也可用于治疗类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肾病型慢性肾炎、自身免疫性溶血性贫 血、银屑病、葡萄膜炎等自身免疫性疾病。
[0003] 最常见的环孢菌素是环孢菌素-A。其他形式的环孢菌素包括：环孢菌素-B、-C、-D 和-G及其衍生物。应理解，本文所用术语"环孢菌素"表示一些环孢菌素衍生物或其前药 中的任一种，或是任意上述物质的混合物。
[0004] 环孢菌素在水中的溶解性差，而用于输注的市售产品Sandimmune? (山地明 ?)被配制成含50mg/ml环孢菌素和聚乙氧基化菌麻油（polyoxylatedcastoroil, (^〇1〇?11〇出1^):)在乙醇中的浓缩物，并且在使用之前必须用氯化钠等渗溶液或5%葡萄糖 溶液稀释，然后缓慢静脉输入，时间应大约为2~6小时，一经稀释，溶液必须于24小时内 使用或遗弃（环孢素注射液（山地明?)药品说明书）。
[0005]CremophorEL是巴斯夫公司（BASFCrop)为其聚乙氧基化菌麻油版本注册的商 标。它是通过使35摩尔环氧乙烷与每摩尔蓖麻油反应而制备的。所得产物是混合物（CAS 号为61791-12-6):主要组分是其中蓖麻油甘油三酯的羟基被环氧乙烷乙氧基化从而形成 聚乙二醇醚的材料。次要组分是蓖麻油酸的聚乙二醇醚、聚乙二醇和甘油的聚乙二醇醚。 CremophorEL是合成的非离子型表面活性剂。其效用来自其在水性系统中稳定非极性材料 的乳液的能力。
[0006]据报道，CremophorEL?与过敏反应相关，静脉内施用含Crem〇Ph〇rEL?的环孢菌 素组合物与过敏反应相关，会引起从轻度皮肤反应到过敏反应和心脏衰竭的不良反应（环 孢素注射液（山地明? )药品说明书）。因此，需要不含Cremophor?的环孢菌素组合物。
【发明内容】
[0007] 有必要进一步开发这样的组合物，其不含有Cremophor?和乙醇。该组合物获得环 孢菌素治疗作用的同时，避免了Cremophor?.和乙醇的不良作用，进而避免了使用皮质类固 醇和/或抗组胺剂进行术前用药（皮质类固醇和/或抗组胺剂的使用会带来不良作用同 时，还会对合并用药的选择产生影响）。
[0008] 也有必要进一步开发这样的组合物，其通过皮下注射，避免了山地明浓缩液需稀 释可能带来的污染，同时给药时间短，避免长时间输注给药。
[0009] 本发明提供了一种用于皮下注射的不含Cremophor的环孢菌素缓释微球制剂，其 降低了环孢菌素的给药频率。本发明所叙的"微球"包括制剂学中类似球形的微囊或颗粒 微小的微囊。本发明的环孢菌素缓释微球制剂在体内的缓释周期可达到7-35天。
[0010] 本发明还提供了 一种环孢菌素缓释微球制剂的制备方法。
[0011] 本发明的环孢菌素缓释微球制剂，包括环孢菌素、乙交酯丙交酯共聚物，其质量百 分比为：环孢菌素0. 1% -18. 5%，乙交酯丙交酯共聚物71. 5% -99%。
[0012] 乙交酯丙交酯共聚物[poly(lactide-co-glycolide)即PLGA]是有乙交酯和丙 交酯以不同比例嵌段共聚而成的一种高分子材料，具有良好的生物相容性和可降解性，其 最终降解产物是二氧化碳和水。本发明中所述的乙交酯丙交酯共聚物是乙交酯：丙交酯为 25 :75~75 :25的共聚物，其分子量为2000~25000道尔顿，特性粘度为0. 1~0. 5dL/ g°
[0013] 为了实现环孢菌素缓释微球具有理想的载药量，使其在临床上应用成为一种 可能。发明人对环孢菌素的理化性质以及处方因素进行研究，结果发现，采用环孢菌素 0. 1% -18. 5%，乙交酯丙交酯共聚物71. 5% -99%的处方制备成缓释微球，可以实现载药 量为0. 5% -10. 8%的环孢菌素缓释微球，通过改变处方中乙交酯丙交酯共聚物的用量可 以对微球的载药量进行调节，方便临床用药。
[0014] 本发明所述的环孢菌素缓释微球制剂还包含质量百分比为0. 1-10. 0%的保护剂， 该保护剂选自人血清白蛋白、明胶、海藻糖、庶糖、硫酸接或甘露醇中的一种或任意两种或 两种以上的组合。
[0015] 发明人在研究过程中发现，保护剂的浓度在0. 1-10. 0%时，由于加入保护剂可提 高环孢菌素的稳定性；意外的发现，当保护剂的质量百分比为0. 1-10. 0%时，可增加缓释 微球的载药量。
[0016] 本发明所述的环孢菌素缓释微球制剂还包括质量百分比为0.01% -10.0%的助 悬剂，该助悬剂选自西黄蓍胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、明胶、果胶、脱乙酰甲壳素、甲基纤维 素、羧甲基纤维素钠、羟丙甲基纤维素、羟丙基纤维素、卡波姆、聚维酮、聚乙烯醇中的一种 或任意两种或两种以上的组合。若本发明采用复乳法（W/ 0 /W)制备环孢菌素缓释微球 时，由于环孢菌素难溶于水，助悬剂能以降低微粒的沉降速度并增加微粒亲水性。发明人在 研究过程中发现，当助悬剂浓度小于0. 01 %时，其增加包封率和缓释微球的载药量的作用 不明显，而当其浓度大于10.0%时会由于粘度过大而微球的制备带来困难。
[0017] 由于本发明处方组成合理，可以通过普通的缓释微球技术制备获得，该缓释微球 的缓释周期可以实现长达7-35天。采用复乳法（W/ 0 /W)制备环孢菌素缓释微球会有 更好的技术效果。
[0018] 在完成本发明的过程中，申请人发现以下制备方法会使上述缓释微球制剂获得更 佳的效果，该制各方法包括以下步骤：
[0019] a)将乙交酯丙交酯共聚物溶于有机溶剂，形成油相，其中有机溶剂为二氯甲烷、乙 酸乙酯中的一种或其组合；
[0020] b)将环孢菌素、保护剂、助悬剂溶于水，形成内水相；
[0021] c)将内水相与所述油相混合形成初乳，并将该初乳加入到含有表面活性剂的外水 相中形成复乳。所述的表面活性剂选自聚乙烯醇、泊洛沙姆、油酸钠、硬脂酸钠、吐温、或司 盘中的一种或任意两种或两种以上的组合。
[0022] d)持有机溶剂挥发后，得到包裹有环孢菌素的缓释微球。
[0023] 本发明缓释微球的制各方法a)步骤和b)步骤其目的是制备初乳所需的半成品， 所以制各方法a)步骤和b)步骤可以同时进行，可以不分先后顺序的进行。
[0024] 上述制各方法优选包括以下步骤：
[0025] 将乙交酯丙交酯共聚物溶于有机溶剂，制成所述乙交酯丙交酯共聚物浓度为 10% -40%(W/V)的油相，其中有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或其组合物。
[0026] 将环孢菌素、保护剂、助悬剂溶于水，形成环孢菌素浓度为5% -50%(W/V)的内 水相。
[0027] 将内水相与所述油相混合形成初乳，并将该初乳加入到含有表面活性剂的外水 相中形成复乳。所述的表面活性剂选自聚乙烯醇、泊洛沙姆、油酸钠、硬脂酸钠、吐温、或 司盘中的一种或任意两种或两种以上的组合。优选的表面活性剂为聚乙烯醇，其浓度为 0? 1% -5%(w/V)。
[0028] 持有机溶剂挥发后，得到包裹有环孢菌素的缓释微球。
[0029] 本发明中内水相和油相的体积比、外水相和初乳的体积比均会影响到最终缓释微 球制剂的粒径、载药量和药物的释放。发明人在研究过程中发现当内水相与油相的体积比 大于1 :5时虽然会提高微球的载药量，但药物的包封率会下降，造成药物的浪费；而当其体 积比小于1 :1〇〇时则会造成载药量的下降。当外水相与初乳的体积比小于20 :1时会由于 外水相的体积过小造成微球的固化缓慢，固化时间延长，大量的药物会进入水中，导致载药 量下降；当其体积比大于2000 :1时会由于外水相过大而使微球固化速度过快，影响微球的 球形度和外观。因此本发明中所述的内水相与油相的体积比为1 :5_1 :100,外水相与初乳 的体积比20 :1-2000 :1。
[0030] 本发明中的初乳可以采用高速搅拌、高压均质或超声破碎等方式制备，只要能够 保证初乳的粒径符合要求即可。所制备的初乳要存放在20°C以下的环境中以增加初乳的稳 定性。
【具体实施方式】
[0031] 实施例一
[0032] 称取800mg环孢素A和300mg明胶溶于5ml注射用水中，作为内水相；称取6g乙 交酯丙交酯共聚物溶于15ml的二氯甲烷中作为油相；将油相加入到内水相中，采用高速搅 拌（23000rpm) 30秒，得初乳，存放在200°C以下的环境中；将此初乳在搅拌的状态下加入到 6000毫升0.5%(W/V)的聚乙烯醇溶液得复乳，将此复乳持续搅拌3小时挥去二氯甲烷， 离心、洗涤、700目筛收集得到微球，收集的微球经过一定的温度和时间干燥后，采用150目 筛网分散，置于西林瓶中，-20度密封保存。微球粒径小于100微米。载药量为9.6%，包封 率为86. 0%。
[0033] 实施例二
[0034] 称取200mg环孢素A、300mg羧甲基纤维素钠和IOOmg蔗糖溶于5ml注射用水中， 作为内水相；称取12. 5g乙交酯丙交酯共聚物溶于50ml的二氯甲烷中作为油相；将油相加 入到内水相中，采用高速搅拌（25000rpm)30秒，得初乳，存放在200°C以下的环境中；将此 初乳在搅拌的状态下加入到5000毫升0.5%(W/V)的聚乙烯醇溶液得复乳，将此复乳持 续搅拌3小时挥去二氯甲烷，离心、洗涤、700目筛收集得到微球，收集的微球经过一定的温 度和时间干燥后，采用150目筛网分散，置于西林瓶中，-20度密封保存。微球粒径小于100 微米。载药量为0.45%，包封率32. 5%。
[0035] 实施例三
[0036] 称取150mg环孢素A、200mg羧甲基纤维素钠和150mg蔗糖溶于5ml注射用水中， 作为内水相；称取15g乙交酯丙交酯共聚物溶于50ml的二氯甲烷中作为油相；将油相加入 到内水相中，采用高速搅拌（21000rpm)45秒，得初乳，存放在200°C以下的环境中；将此初 乳在搅拌的状态下加入到4000毫升0.5%(W/V)的聚乙烯醇溶液得复乳，将此复乳持续 搅拌3小时挥去二氯甲烷，离心、洗涤、700目筛收集得到微球，收集的微球经过一定的温度 和时间干燥后，采用150目筛网分散，置于西林瓶中，-20度密封保存。微球粒径小于100微 米。载药量为30. 3%，包封率72. 5%。
[0037] 实施例四
[0038] 称取500mg环孢素A、300mg羧甲基纤维素钠和200mg鹿糖溶于5ml注射用水中， 作为内水相；称取15g乙交酯丙交酯共聚物溶于30ml的二氯甲烷中作为油相；将油相加入 到内水相中，采用高速搅拌（1500