一种核-壳双层微球及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种核-壳双层微球及其制备方法，具体涉及一种缩酮或其衍生物-聚乳酸或聚乳酸-羟基乙酸共聚物核-壳双层微球及其制备方法。
【背景技术】
[0002]随着生物技术的发展，蛋白、多肽类药物在临床应用也越加广泛，蛋白、多肽类药物具有高活性、特异性强、低毒性、生物功能明确、有利于临床应用等特点；但是其也具有半衰期短、稳定性差、通透性不好等缺点，并且蛋白、多肽类药物使用剂量一般很小，需要长期给药，口服会经过肝脏代谢，发生首过效应使大部分药物失活，影响疗效，因此将其制备成缓释制剂而注射使用是一种有效的途径。
[0003]微球制剂是近年来发展起来的药物新剂型，药物分散在基质材料中，经过固化而形成固体实心小球。注射给药后，药物随着骨架降解、溶蚀会缓慢释放出来，以达到缓释的目的。但由于微球表面的粗糙、多孔及表面含有部分药物，因此在释放时会有部分药物快速扩散出来，使体内的血药水平陡然升高，从而产生不良反应，即为突释现象。
[0004]聚乳酸-羟基乙酸共聚物(以下简称PLGA)是目前应用最广泛的生物可降解高分子材料，其是由丙交酯与乙交酯随机聚合而成，具有良好的生物相容性、无毒及可降解性。在蛋白、多肽类药物制剂研究中，大部分选用PLGA作为载体材料。但PLGA也具有一定缺陷性，即PLGA降解产物为乳酸与羟基乙酸，酸性物质的积累会对组织产生一定刺激性，甚至会产生炎症；另一方面，蛋白、多肽类药物包埋于PLGA之中，其降解所产生的酸性环境会对蛋白或多肽的活性产生影响；再者多数PLGA微球表面具有孔隙，存在突释及包封率低的缺点。
[0005]为解决蛋白药物在载体材料中不稳定的问题，CN103977410采用聚缩酮(以下简称PCADK)与其他聚合物材料混合作为混合基质，采用复乳-溶剂挥发法来制备长效制剂。由于聚缩酮降解产物为中性，与其它材料混合可降低其它材料尤其是PLGA降解所产生酸性对蛋白药物的影响，但复乳法里的油水界面很容易使蛋白多肽类药物聚集，从而发生构象变化，以致变性。同时该方法制备的微球表现较粗糙，首日突释现象明显，接近15%。
[0006]因此，有必要研发一种可解决突释现象且包封率高的药物新剂型。
【发明内容】
[0007]本发明针对现有技术的不足，提供一种可解决突释现象且包封率高的核-壳双层微球的制备方法。
[0008]具体来说，本发明提供了如下技术方案:
[0009]—种核-壳双层微球的制备方法，步骤如下:
[0010](I)制备两种单独的油相，分别是油相A:含有药物、聚缩酮或其衍生物的有机溶液；油相B:含有聚乳酸或聚乳酸-羟基乙酸共聚物的有机溶液；
[0011]合并、混合油相A和油相B，高速搅拌得到A/B相，即ο/ο相；
[0012]所述聚缩酮或其衍生物与聚乳酸或聚乳酸-羟基乙酸共聚物重量比9:1-1:9，优选为6:4-2:8，更优选为3:7-2:8 ；
[0013](2)合并、混合步骤(I)得到的A/B相和溶液C，形成乳剂，即o/o/w相；
[0014]所述溶液C是重量百分比浓度为0.5-10%的氯化钠和重量百分比浓度为0.5-5%的表面活性剂的水溶液；
[0015](3)将步骤⑵得到的乳剂低速搅拌l_5h，得到固化微球；
[0016](4)将步骤(3)得到的固化微球进行离心、洗涤、冷冻干燥，得到核-壳双层微球。
[0017]进一步，所述步骤(I)中的药物为生物大分子药物，包括蛋白多肽类大分子药物、核酸、抗体、疫苗和多糖中的一种。
[0018]进一步，所述步骤(I)中的油相A与油相B中聚合物质量浓度分别为5-20%，优选为 10-15%。
[0019]进一步，所述步骤(I)中的聚缩酮通过1，4-环己烷二甲醇与2，2_ 二甲氧基丙烷聚合而成，具有缩酮单元结构，缩酮单元中含有两个氧原子，其重均分子量为2000?
10000ο
[0020]进一步，所述步骤(I)中的聚缩酮衍生物为醇类衍生物，优选为二醇类衍生物，其重均分子量为2000?100000。
[0021]进一步，所述步骤(I)中的聚乳酸-羟基乙酸共聚物为未封端的丙交酯-乙交酯共聚物，其特性粘度为0.1?0.35dl/g ;其重均分子量为4000?45000 ;所述丙交酯与乙交酯的摩尔比为50:50?75:25。
[0022]进一步，所述步骤(I)中的聚乳酸-羟基乙酸共聚物为未封端的丙交酯-乙交酯共聚物，其特性粘度为0.4?0.9dl/g ;其重均分子量为50000?145000 ;所述丙交酯与乙交酯的摩尔比为65:35?90:10
[0023]进一步，所述步骤⑴的有机溶液，所述有机溶液中的有机溶剂是二氯甲烷、乙酸乙酯、庚烷、丙酮、乙腈及氯仿中的至少一种。
[0024]进一步，所述步骤(2)的表面活性剂为聚乙烯醇、二 -乙基己基琥珀酸酯磺酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基纤维素、聚乙二醇、聚山梨酯、司盘和泊洛沙姆中的一种。
[0025]本发明还提供一种上述制备方法制备的核-壳双层微球，所述核-壳双层微球包括核和包围在所述核周围的壳，所述核是以聚缩酮或其衍生物为载体材料包裹药物构成，所述壳是聚乳酸-羟基乙酸共聚物构成。
[0026]本发明另提供一种上述制备方法制备的核-壳双层微球，所述核-壳双层微球包括核和包围在所述核周围的壳，所述核是以聚缩酮或其衍生物为载体材料包裹药物构成，所述壳是聚乳酸构成。
[0027]本发明采用聚缩酮或其衍生物作为内核，药物分散在其中，外层PLGA或PLA包裹，双层微球实现零级释药和脉冲式给药，解决了普通微球突释较为严重的情况，使得药物可以在体内保持较为恒定速率释放。
【附图说明】
[0028]图1为本发明实施例一中的载有胰岛素的PCADK-PLGA核-壳双层微球的扫描电镜照片；
[0029]图2为本发明实施例一中的载有胰岛素的PCADK-PLGA核-壳双层微球的光学显微镜照片；
[0030]图3为本发明实施例一中的载有胰岛素的PCADK-PLGA核-壳双层微球的体外释放曲线；
[0031 ] 图4为本发明实施例二中的载有牛血清白蛋白的PCADK-PLGA核-壳双层微球的扫描电镜照片；
[0032]图5为本发明实施例二中的载有牛血清白蛋白的PCADK-PLGA核-壳双层微球的光学显微镜照片；
[0033]图6为本发明实施例二中的载有牛血清白蛋白的PCADK-PLGA核-壳双层微球的体外释放曲线；
[0034]图7为本发明对比例一中的载有胰岛素的PCADK单层微球的扫描电镜照片；
[0035]图8为本发明对比例一中的载有胰岛素的PCADK单层微球的体外释放曲线。
【具体实施方式】
[0036]本发明提供了用于制备可以延迟特性释放物质如小分子药物、蛋白质和多肽或活性成分的微球的方法。
[0037]步骤如下:
[0038](I)制备两种单独的油相，分别是油相A:含有药物、聚缩酮或其衍生物的有机溶液；油相B:含有聚乳酸或聚乳酸-羟基乙酸共聚物的有机溶液；
[0039]合并、混合油相A和油相B，高速搅拌得到A/B相，即ο/ο相；
[0040]所述聚缩酮或其衍生物与聚乳酸或聚乳酸-羟基乙酸共聚物重量比9:1-1:9，优选为6:4-2:8，更优选为3:7-2:8 ；
[0041](2)合并、混合步骤(I)得到的A/B相和溶液C，形成乳剂，即o/o/w相；
[0042]所述溶液C是重量百分比浓度为0.5-10%的氯化钠和重量百分比浓度为0.5-5%的表面活性剂的水溶液；
[0043](3)将步骤(2)得到的乳剂低速搅拌l_5h，得到固化微球；
[0044](4)将步骤(3)得到的固化微球进行离心、洗涤、冷冻干燥，得到核-壳双层微球。
[0045]在本发明中，步骤(I)被认为是重要的，本发明先分别制备油相A和油相B，再将油相A加到油相B中，得到A/B相，即油包油乳剂，具体混合为:在13500rpm高速剪切的条件下，逐滴地将油相A滴加到油相B中，由于油相A与油相B中的聚合物质量浓度分别为15%和10%，且B相体积远大于A相，当油相A滴加到油相B中时，可在一定时间内形成o/ο液滴。本发明总聚合物最佳质量浓度为10-15%，当超过20%甚至更高时，聚合物溶液较粘稠，有机溶剂较难挥发，两种聚合物材料易混合在一起，不易发生相分离，且A相与B相聚合物质量浓度具有一定浓度差更有利于相分离的发生，从而形成双层微球。
[0046]下面通过实施例进一步详细说明本发明核-壳双层微球。
[0047]实施例一
[0048]载有胰岛素的PCADK-PLGA核-壳双层微球
[0049](I)制备两种单独的油相，分别是油相A:含有15mg的胰岛素和90mg的PCADK的二氯甲烷0.6ml，具体为将胰岛素通过超声、涡旋等方法溶解或分散于溶有PCADK的二氯甲烷中；油相B:含有210mg的PLGA的二氯甲烷2.1ml ；
[0050]合并、混合油相A和油相B，13500rpm高速剪切30s得到A/B相(ο/ο);
[0051 ] 所述PCADK与PLGA重量比为3:7 ;
[0052]其中油相A中聚合物质量浓度为15% (w/v);
[0053]其中油相B中聚合物质量浓度为10% (w/v);
[0054](2)合并、混合步骤(I)得到的A/B相和溶液C，形成乳剂；
[0055]所述溶液C即是水相，具体的溶液C是重量百分比浓度为0.5-10%的氯化钠和重量百分比浓度为0.5-5%的表面活性剂的水溶液，所述水溶液的体积为100-500mL ;
[0056]本发明中A/B相和水相溶液C的混合，具体混合时，在1500rpm搅拌下，将A/B相滴加到水相C中，形成o/o/w相；
[0057](3)将步骤⑵得到的乳剂200rpm低速搅拌l_5h，得到固化微球；
[0058](4)将步骤(3)得到的固化微球进行离心、洗涤、冷冻干燥，得到核-壳双层微球。
[0059]其中PCADK或其衍生物通过1，4_环己烷二甲醇与2，2_ 二甲氧基丙烷聚合而成，具有缩酮单元结构，缩酮单元中含有两个氧原子，其重均分子量为2000?10000，优选为6000?9000 ;进一步的，聚缩酮衍生物主要指醇类衍生物，尤其为二醇类衍生物。
[0060]本发明所用的PL