一种紫杉醇白蛋白结合型冻干制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医药领域，具体地说，涉及一种紫杉醇白蛋白结合型冻干制剂及 其制备方法。
【背景技术】
[0002] 紫杉醇药物是治疗转移性乳腺癌的主要用药。自上世纪九十年代中期以来，多项 II、III期研究均肯定了紫杉醇药物对转移性乳腺癌的疗效，并与多柔比星进行比较，其至 疾病进展时间（TTP)与生存期较多柔比星略优或相似。
[0003] 已有紫杉醇白蛋白纳米制剂由聚乙二醇为代表构成聚合物包膜，其空间结构在传 递药物致靶向部位后会阻碍药物的释放与细胞靶向；聚乙二醇类物质与配体的连接不稳定 且在人体内迅速降解，致使药物靶向性低、稳定性差、安全性降低，不利于临床使用。
【发明内容】
[0004] 本发明利用独特的纳米技术使紫杉醇与白蛋白结合，提供一种使用方便，具有较 好的安全性、有效性及良好临床应用前景的纳米级药物制剂及其制备方法。
[0005] 本发明具体的技术方案如下：
[0006] 本发明的紫杉醇白蛋白结合型冻干制剂，由包括紫杉醇、分散剂、溶剂的原料，采 用白蛋白结合纳米微粒方法制备而成，紫杉醇白蛋白结合型冻干制剂平均粒径小于220nm。
[0007] 其中，所述紫杉醇与所述分散剂的质量比为1:7~1:10,优选为1:8~ 1:9。
[0008] 所述分散剂为人血白蛋白、牛血白蛋白中的一种或二种任意比例的混合。
[0009] 所述溶剂为三氯甲烷、无水乙醇、注射用水中的一种或多种任意比例的混合。在本 发明中溶剂优选使用无水乙醇-三氯甲烷质量比1 : 4。
[0010] 本发明还提供了上述紫杉醇白蛋白结合型冻干制剂的制作方法，包括以下步骤： 将所述分散剂溶于水中配制咸水相，所述紫杉醇溶于所述溶剂中配制成油相；将所述水相 与所述油相混合高速剪切后均质，再经溶剂蒸发，冷冻干燥，制得所述紫杉醇白蛋白结合型 冻干制剂。
[0011] 所述分散剂在配制咸水相之前，优选先进行除菌过滤。本发明对除菌过滤的过程 没有特殊的限定，只要能达到除茵过滤杂质的效果都在本发明的保护范围之内。
[0012] 本发明将所述紫杉醇溶于所述溶剂中配制成油相。本发明对所使用的溶剂量没有 具体的限定，根据本领域的常规技术，能达到紫杉醇溶解效果的溶剂量都在本发明的保护 范围之内。在本发明中紫杉醇和溶剂的质量比为1 : 4-6,优选为1 : 5。配制好的油相若 不能立即用于后续步骤，优选将其置于1~l〇°C保存。
[0013] 本发明将所述水相与所述油相混合高速剪切。其高速剪切的具体步骤为：将所述 水相进行降温，优选降至2°C~5°C进行高速剪切，更优选为2°C-3°C进行高速剪切。水相 高速剪切l-5min后向水相中加入油相，继续高速剪切lmin~5min，优选为lmin-3min。本 申请中高速剪切的速度为3000-4000rpm，优选为3500rpm。
[0014] 高速剪切后的初乳进行均质。均质过程在低温下进行，优选温度为0°C~8°C;均 质压力在5000-25000psi范围内，优选为10000-20000psi，更优选为13000-18000psi。根 据不同压力设置不同的循环次数。在本发明均质压力下均质1~10个循环，优选为4-8个 循环。
[0015] 均质结束后，以0~8°C注射用水稀释均质料液至紫杉醇用药浓度，进行溶剂蒸 发。优选使用刮板式薄膜蒸发器蒸发，视蒸发情况选择薄膜蒸发循环。本发明优选进行薄膜 蒸发1~8个循环。蒸发条件为转速350rpm，真空度50mbar，进料速度lL/min，温度30°C。
[0016] 将薄膜蒸发后收集的浓缩液进行冷冻干燥，制备成本发明的紫杉醇白蛋白结合型 冻干制剂。其中冷冻干燥的具体步骤为：冻干机板温预先降至〇°c，采用下表程序进行冻 干，制得紫杉醇白蛋白结合型冻干制剂：
[0017]
[0018] 为了保证产品纯度，在本发明中溶剂蒸发步骤后，还包括除菌过滤的步骤。具体 为，将料液经薄膜蒸发后收集的浓缩液搅拌均匀后，经0. 2iim滤器除菌过滤。
[0019] 与其他剂型紫杉醇相比，本发明新型靶向化疗药物紫杉醇白蛋白结合型冻干制剂 可在肿瘤局部产生更高的紫杉醇浓度，且注射时间短，可通过gp60穿胞途径及结合于肿瘤 细胞外间质的富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（SPARC)途径来提高肿瘤外药物浓度。研究显 示，在肺癌、胰腺癌等肿瘤中，本品联合其他治疗亦显示出良好的安全性和有效性。本发明 缩小紫杉醇粒径至纳米级水平，解决了溶解度问题，使人血白蛋白吸附在紫杉醇表面，利用 人血白蛋白表面电性与立体结构来组织紫杉醇颗粒的聚集，并加强其靶向性，在血管外广 泛分布与组织结合，缩短给药时间，降低不良反应，提高疗效，提高临床使用的适用性。
[0020] 本发明产品主要用于治疗联合化疗失败的转移性乳腺癌或辅助化疗后6个月内 复发的乳腺癌，本发明无需溶剂和预防用药，更有效，总体缓解率达54%以上，比其他溶剂 型紫杉醇高一倍，总体生存期及至肿瘤进展时间延长，明显提高给药剂量，更安全，毒性反 应更易控制，使用方便，具有较好的安全性、有效性及良好的临床应用前景。
【具体实施方式】
[0021] 下面将结合本发明中的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地 描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发 明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施 例，都属于本发明保护的范围。
[0022] 实施例1
[0023] ①水相配制：
[0024] 取经除菌过滤后人血白蛋白800g，加入2L注射用水，搅拌均匀后，待用；
[0025] ②油相配制
[0026] 精密称取紫杉醇100g，溶于无水乙醇-三氯甲烷混合溶剂500ml中（1 :4)，将其 置于2°C保存，待用；
[0027] ③油、水相初步混合
[0028] 取水相溶液置于低温冷却液中降温，待温度降至2°C时，高速剪切，剪切速度为 3000rpm，剪切时间为2min，边剪切边缓慢加入油相，待油相加入完毕后，继续高速剪切，剪 切速度为3000rpm，剪切时间为2min。
[0029] ④高压均质
[0030] 油、水相剪切后得到的初乳溶液由进料口加入到高压微射流均质机，在5000psi 压力情况下1个循环，在15000psi压力情况下2个循环，在22500psi压力情况下1个循环， 均质过程中循环管路料液需保持在〇_8°C温度范围内。
[0031] ⑤溶剂蒸发
[0032] 均质结束后，以1°C注射用水稀释料液至约2mg/ml(以紫杉醇理论浓度计），加 入刮板式薄膜蒸发器中蒸发，进行薄膜蒸发3个循环。蒸发条件为转速350rpm，真空度 50mbar，进料速度lL/min，温度 30°C。
[0033] ⑥除菌过滤
[0034] 蒸发浓缩后料液搅拌均匀后经0. 2ym滤器除菌过滤。
[0035] ⑦灌装、半加塞
[0036] 以紫杉醇100mg分装。
[0037] ⑧冷冻干燥
[0038] 冻干机板温预先降至0°C，采用下表程序进行冻干。
[0039]
[0040] ⑨冻干结束后，进氮气，充氮，压塞，出箱，乳盖。制备得到的紫杉醇白蛋白型冻干 制剂平均粒径小于220nm。
[0041] 实施例2
[0042] ①水相配制：
[0043] 取经除菌过滤后人血白蛋白900g，加入2L注射用水，搅拌均匀后，待用；
[0044] ②油相配制
[0045] 精密称取紫杉醇100g，溶于无水乙醇-三氯甲烷混合溶剂500ml中（1 : 4)，将其 置于:TC保存，待用；
[0046] ③油、水相初步混合
[0047] 取水相溶液置于低温冷却液中降温，待温度降至3°C时，高速剪切，剪切速度为 4000rpm，剪切时间为3min，边剪切边缓慢加入油相，待油相加入完毕后，继续高速剪切，剪 切速度为4000rpm，剪切时间为3min。
[0048] ④高压均质
[0049] 将油、水相剪切后得到的初乳溶液由进料口加入到高压微射流均质机，在5000psi 压力情况下2个循环，在15000psi压力情况下4个循环，在22500psi压力情况下4个循环， 均质过程中循环管路料液需保持在〇_8°C温度范围内。
[0050] ⑤溶剂蒸发
[0051] 均质结束后，以2°C注射用水稀释料液至约2mg/ml(以紫杉醇理论浓度计），加 入刮板式薄膜蒸发器中蒸发，进行薄膜蒸发5个循环。蒸发条件为转速350rpm，真空度 50mbar，进料速度lL/min，温度 30°C。
[0052] ⑥除菌过滤
[0053] 蒸发浓缩后料液搅拌均匀后经0. 2 y m滤器除菌过滤。
[0054] ⑦灌装、半加塞
[0055] 以紫杉醇l〇〇mg分装。
[0056] ⑧冷冻干燥
[0057] 冻干机板温预先降至0°C，采用下表程序进行冻干。
[0058]
[0059] ⑨冻干结束后，进氮气，充氮:压塞，
心箱，乳盖。制备得到的紫杉醇白蛋白型冻干 制剂平均粒径小于220nm。
[0060] 实施例3
[0061] ①水相配制：
[0062] 取经除菌过滤后人血白蛋白700g，加入2L注射用水，搅拌均匀后，待用；
[0063] ②油相配制
[0064] 精密称取紫杉醇100g，溶于无水乙醇-三氯甲烷混合溶剂500ml中（1 : 4)，将其 置于4°C保存，待用；
[0065]