专利名称：一种注射用紫杉醇白蛋白亚微粒及其制备方法
技术领域：
本发明属于药物制剂领域，特别涉及一种注射用紫杉醇白蛋白亚微粒及其制备方法。
背景技术：
紫杉醇(paclitaxel，Taxol)是从红豆杉属植物紫杉的树干和树皮中提取开发得到的天然活性成分，是迄今为止唯一的具有独特抗微管作用机制的抗肿瘤药，广泛的被应用于乳腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌和前列腺癌等的治疗。尽管紫杉醇的抗肿瘤作用于上世纪60年代就被人们所认识，但直到1992年才由美国百时美-施贵宝公司成功开发成紫杉醇注射液(泰素)并应用于临床，原因之一在于其水溶性非常低。市售紫杉醇注射液所用的溶剂系统为聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL,CrEL)乙醇( 1 1，V/V)，在临床给予治疗剂量的情况下，CrEL可导致严重的呼吸性窘迫、低血压、血管性水肿和全身性荨麻疹等过敏反应，并有肾毒性和神经毒性。因此在滴注紫杉醇注射液数小时前，需使用苯海拉明、 地塞米松等抗组胺剂，临床使用非常不便。近年来，人们一直在为开发不含CrEL的紫杉醇新剂型而不断的努力。USM39686、 US6537579、US6749868、US2006121119、CN97199720. 9、CN03108361. 7 和 CN200610077006. 4
等公开了一种制备紫杉醇白蛋白纳米颗粒的方法。该方法将含紫杉醇的有机相(如氯仿、 二氯甲烷等)和白蛋白水溶液经高压勻质处理后，产生纳米乳，经0. 22um微孔滤膜过滤灭菌后，真空蒸发除去有机溶剂后，冷冻干燥得到紫杉醇白蛋白纳米颗粒。其中用到与水不相互混溶且对人体具有较高毒性的有机溶剂(如氯仿、二氯甲烷等)。整个制备工艺较为复杂，高压勻质过程进一步提高了制剂的制备成本。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题就是针对现有的注射用紫杉醇白蛋白纳米颗粒在制备过程中使用毒性较高有机溶剂，导致具有较高毒性的有机溶剂残留，并且制备工艺相对复杂，制备成本较高的不足，而提供一种注射用紫杉醇白蛋白亚微粒及其制备方法，该紫杉醇白蛋白亚微粒不使用毒性高的有机溶剂，制备方法较为简单，制备成本相对较低。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之一是一种注射用紫杉醇白蛋白亚微粒，包括紫杉醇1 10% W/W)，白蛋白10 80 % (W/W)，禾口冻干保护剂 10 85%(W/W)。在本发明一个效果较好的实施方式中，所述紫杉醇白蛋白亚微粒包括紫杉醇4 6%(W/W)，白蛋白35 60% (W/W)，和冻干保护剂 ；35 60% (W/W)。
本发明中，所述的白蛋白可以是不同动物来源的白蛋白，如人血白蛋白、牛白蛋白等，可生物降解且无明显的抗原性即可，从制剂学的角度上看，优选人血清白蛋白。本发明中，所述的冻干保护剂是本领域常规的冻干过程中使用的保护剂。冻干保护剂主要保护活性物质白蛋白，这种物质在冻干过程中起保护作用，在干燥后起支撑作用， 因此称为冻干保护剂，又可称为支架剂。本发明所述的冻干保护剂较佳的选自以下物质中的一种或一种以上1)糖类物质葡萄糖、乳糖、半乳糖、果糖、右旋糖酐、甘露醇、山梨醇、 蔗糖、海藻糖等；幻氨基酸类物质甘氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、精氨酸、赖氨酸等。本发明的注射用紫杉醇白蛋白亚微粒中，如有必要还可含有适量的pH调节剂，以满足2010年版《中国药典》对注射剂的要求，这个对本领域技术人员来说是比较容易做到的，主要包括盐酸、氢氧化钠、柠檬酸盐、磷酸盐、醋酸盐缓冲液等中的一种或其以任何比例混合的混合物。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之二是一种所述的注射用紫杉醇白蛋白亚微粒的制备方法，包括以下步骤1)将紫杉醇加入叔丁醇中，搅拌溶解后作为有机相；2)将白蛋白及冻干保护剂加入到水或pH值在6. 0 8. 5的缓冲液中，搅拌溶解后作为水相；3)在搅拌的条件下将有机相加入到水相中，搅拌溶解后将所得的澄明溶液通过微孔滤膜法过滤除菌，置于洁净的容器中；4)将过滤除菌后的溶液在_30°C _50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干，即得。本发明中，步骤1)所述的有机相中紫杉醇的浓度较佳的是每1毫升叔丁醇含 0.5 5毫克紫杉醇。步骤2、所述的水相中白蛋白和冻干保护剂浓度较佳的分别是每1毫升溶液中含 1 20毫克白蛋白，含1 20毫克冻干保护剂。步骤2、所述的缓冲液较佳的选自柠檬酸盐、磷酸盐和醋酸盐缓冲液中的一种或多种。步骤幻所述的搅拌条件为实验室或生产线上常用的搅拌方式，能够达到混勻的目的即可，可以采用手工搅拌、磁力搅拌、电动搅拌器、高速剪切机进行搅拌。为了使有机相和水相快速混合均勻，可优选转速不低于500转/分钟的方式进行搅拌。步骤3)所述的有机相和水相的比例(V/V)较佳的为1 4 4 1。步骤幻所述的微孔滤膜法较佳的是通过0. 22 μ m微孔滤膜过滤除菌。所述的容器优选西林瓶。步骤4)所述的冷冻干燥机冻干时能够除去样品中的叔丁醇和水分，得到外形良好、质地疏松的冻干粉，较佳的可以进一步充氮，加塞，轧盖，然后保存。本发明所述的注射用紫杉醇白蛋白亚微粒，临用前加入注射用水、生理盐水、含缓冲盐的水溶液、或者葡萄糖注射液等溶媒，复溶后即形成粒径为100 eoonm的混悬液，每 Iml混悬液含紫杉醇可以为1 10mg，优选为5mg。因此本发明还提供包含上述注射用紫杉醇白蛋白亚微粒的注射液。本发明中，上述优选条件在符合本领域常识的基础上可任意组合，即得本发明各较佳实例。本发明除特别说明之外，所用的百分比都是重量百分比。本发明所用的原料或试剂除特别说明之外，均市售可得。相比于现有技术，本发明的有益效果如下在实验过程中，本发明人发现，当使用USM39686、US6537579、US6749868、 US2006121119、CN97199720. 9、CN03108361. 7、CN200610077006. 4 等专利提供的配方，采用
本发明的制备方法进行冷冻干燥后，加入生理盐水复溶后，紫杉醇未能有效的包裹于白蛋白中，放置池即出现药物颗粒沉淀，达不到临床使用要求。经过多次的试验，本发明人发现，在搅拌、与有机溶剂(叔丁醇)接触、冷冻干燥过程中，白蛋白有可能发生变性，导致冻干后不能包裹药物颗粒并分散于水中。加入合适的冻干保护剂(支架剂)可以保护白蛋白不产生变性，冻干后可获得适合静注的紫杉醇白蛋白亚微粒，且复溶后稳定性> 12h，完全能够满足临床使用的要求。与US5439686、US6537579、US6749868、US2006121119、CN97199720. 9、 CN03108361. 7、CN200610077006. 4等专利公开的制备方法相比，本发明采用了与水相互溶的更低毒性的有机溶剂叔丁醇，可在冻干过程中去除，增加了安全性。并且冻干前不必经过高压勻质，可形成澄明的溶液，简化了制备过程，且可通过0. 22 μ m的滤膜过滤灭菌，降低了制备成本。也不必经过真空蒸发除去有机相的过程，加快了冻干的过程，溶剂可进行回收利用，利于产业化生产。与市售紫杉醇注射液相比，本发明不使用聚氧乙烯蓖麻油，因此避免了其带来的过敏反应，也不需在滴注紫杉醇注射液前，使用抗组胺剂，临床使用方便。本发明的注射用紫杉醇白蛋白亚微粒具有制备工艺简单、可长期存放等优点。
具体实施例方式下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1称取紫杉醇50mg，溶于16ml叔丁醇作为有机相；称取400mg人血白蛋白，200mg甘露醇，200mg甘氨酸，溶于2細1注射用水作为水相。将有机相和水相在搅拌(500转/分钟) 的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。 将西林瓶在_30°C -50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后， 充氮、加塞、轧盖，即得。实施例2称取紫杉醇20mg，溶于20ml叔丁醇作为有机相；称取400mg人血白蛋白，IOOmg 葡萄糖，溶于80ml注射用水作为水相。将有机相和水相在搅拌(手工搅拌)的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶在-30°C -50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后，充氮、加塞、轧盖，即得。实施例3称取紫杉醇20mg，溶于20ml叔丁醇作为有机相；称取600mg人血白蛋白，500mg甘氨酸，溶于60ml注射用水作为水相。将有机相和水相在搅拌(1500转/分钟)的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶在-30°C -50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后，充氮、加塞、轧盖，即得。实施例4称取紫杉醇50mg，溶于20ml叔丁醇作为有机相；称取500mg人血白蛋白，500mg海藻糖，溶于60ml注射用水作为水相。将有机相和水相在搅拌(3000转/分钟)的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶在-30°C -50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后，充氮、加塞、轧盖，即得。实施例5称取紫杉醇30mg，溶于60ml叔丁醇作为有机相；称取120mg牛白蛋白，150mg右旋糖苷，溶于15ml注射用水作为水相。将有机相和水相在搅拌(10000转/分钟)的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22μπι微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶在-30°C -50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后，充氮、加塞、轧盖，即得。实施例6称取紫杉醇50mg，溶于20ml叔丁醇作为有机相；称取400mg人血白蛋白，IOOmg谷氨酸，IOOmg山梨醇，溶于20ml注射用水作为水相。将有机相和水相在搅拌(2000转/分钟)的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶在_30°C _50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后，充氮、加塞、轧盖，即得。实施例7称取紫杉醇55mg，溶于20ml叔丁醇作为有机相；称取400mg牛白蛋白，210mg赖氨酸，溶于20ml注射用水作为水相。将有机相和水相在搅拌(5000转/分钟)的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶在-30°C -50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后，充氮、加塞、轧盖，即得。实施例8称取紫杉醇50mg，溶于16ml叔丁醇作为有机相；称取350mg牛白蛋白，IOOmg甘氨酸，IOOmg山梨醇，溶于2細1注射用水作为水相。将有机相和水相在搅拌(1000转/分钟) 的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。 将西林瓶在-30°C -50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后， 充氮、加塞、轧盖，即得。实施例9称取紫杉醇50mg，溶于16ml叔丁醇作为有机相；称取400mg人血白蛋白，50mg乳糖，溶于2細1注射用水作为水相。将有机相和水相在搅拌(1500转/分钟)的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶在-30°C -50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后，充氮、加塞、轧盖，即得。实施例10称取紫杉醇50mg，溶于IOml叔丁醇作为有机相；称取400mg人血白蛋白，IOOmg蔗糖，溶于32ml磷酸盐缓冲液(pH = 7. 4)中作为水相。将有机相和水相在搅拌(1000转/ 分钟)的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶在_30°C _50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后，充氮、加塞、轧盖，即得。实施例11称取紫杉醇50mg，溶于IOml叔丁醇作为有机相；称取IOOmg牛白蛋白，20mg果糖， 溶于20ml磷酸盐缓冲液(pH = 7. 4)中作为水相。将有机相和水相在搅拌(500转/分钟) 的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。 将西林瓶在-30°C -50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后， 充氮、加塞、轧盖，即得。实施例12称取紫杉醇30mg，溶于IOml叔丁醇作为有机相；称取50mg牛白蛋白，200mg胱氨酸，溶于IOml醋酸盐缓冲液(pH = 6. 0)中作为水相。将有机相和水相在搅拌(1500转/ 分钟)的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶在_30°C _50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后，充氮、加塞、轧盖，即得。实施例13称取紫杉醇10mg，溶于IOml叔丁醇作为有机相；称取50mg牛白蛋白，105mg半乳糖，溶于IOml注射用水中作为水相。将有机相和水相在搅拌(2500转/分钟)的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶在-30°C -50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后，充氮、加塞、轧盖，即得。实施例14称取紫杉醇ang，溶于IOml叔丁醇作为有机相；称取108mg人血白蛋白，90mg甘露醇，溶于IOml柠檬酸盐缓冲液(pH = 6. 8)中作为水相。将有机相和水相在搅拌(1800转 /分钟)的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶在_30°C _50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后，充氮、加塞、轧盖，即得。实施例15称取紫杉醇10mg，溶于20ml叔丁醇作为有机相；称取90mg人血白蛋白，50mg半胱氨酸，50mg葡萄糖，溶于25ml注射用水中作为水相。将有机相和水相在搅拌(3000转/分钟)的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶在_30°C _50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后，充氮、加塞、轧盖，即得。实施例16称取紫杉醇20mg，溶于20ml叔丁醇作为有机相；称取30mg牛白蛋白，250mg精氨酸，溶于30ml注射用水中作为水相，用0. IM盐酸溶液调pH为7.0。将有机相和水相在搅拌 (1500转/分钟)的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶在_30°C _50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后，充氮、加塞、轧盖，即得。实施例17称取紫杉醇25mg，溶于20ml叔丁醇作为有机相；称取50mg人血白蛋白，425mg甘露醇，溶于25ml磷酸盐缓冲液(pH = 8.0)中作为水相。将有机相和水相在搅拌(3000转 /分钟)的条件下混合均勻，溶解澄明后经0. 22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶在_30°C _50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后，充氮、加塞、轧盖，即得。比较例1称取紫杉醇50mg，溶于16ml叔丁醇作为有机相；称取450mg人血白蛋白，溶于2細1注射用水作为水相。将有机相和水相在搅拌(1500转/分钟)的条件下混合均勻，溶解澄明后经0.22 μ m微孔滤膜过滤灭菌后，分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶在-30°C -50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水分后，充氮、加塞、轧盖，即得。下面通过试验例来进一步说明本发明的有益效果。试验例1复溶后粒径及稳定性试验取按实施例制备的紫杉醇白蛋白亚微粒，加注射用水复溶后(每Iml混悬液含5mg 紫杉醇)，采用Nicomp 380ZLS激光粒度测定仪(美国PSS公司)测定粒子的平均粒径及分布，结果见表1。表1.复溶后粒径测定及稳定性试验结果
权利要求
1.一种注射用紫杉醇白蛋白亚微粒，其特征在于，其包括紫杉醇1 10%(W/W)，白蛋白10 80% (W/W)，和冻干保护剂 10 85% (W/W)。
2.如权利要求1所述的紫杉醇白蛋白亚微粒，其特征在于，所述紫杉醇白蛋白亚微粒包括紫杉醇4 6%(W/W)，白蛋白35 60% (W/W)，禾口冻干保护剂 35 60% (W/W)。
3.如权利要求1所述的紫杉醇白蛋白亚微粒，其特征在于，所述的白蛋白是人血白蛋白或牛白蛋白。
4.如权利要求1所述的紫杉醇白蛋白亚微粒，其特征在于，所述的冻干保护剂选自以下物质中的一种或一种以上1)糖类物质葡萄糖、乳糖、半乳糖、果糖、右旋糖酐、甘露醇、 山梨醇、蔗糖和海藻糖；幻氨基酸类物质甘氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、精氨酸和赖氨酸。
5.如权利要求1所述的紫杉醇白蛋白亚微粒，其特征在于，所述的紫杉醇白蛋白亚微粒还含有pH调节剂。
6.一种如权利要求1 5任一项所述的注射用紫杉醇白蛋白亚微粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤1)将紫杉醇加入叔丁醇中，搅拌溶解后作为有机相；2)将白蛋白及冻干保护剂加入到水或pH值在6.0 8. 5的缓冲液中，搅拌溶解后作为水相；3)在搅拌的条件下将有机相加入到水相中，搅拌溶解后将所得的澄明溶液通过微孔滤膜法过滤除菌，置于洁净的容器中；4)将过滤除菌后的溶液在-30°C -50°C条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干，即得。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述的有机相中紫杉醇的浓度是每1毫升叔丁醇含0. 5 5毫克紫杉醇；步骤2、所述的水相中白蛋白和冻干保护剂浓度分别是每1毫升溶液中含1 20毫克白蛋白，含1 20毫克冻干保护剂。
8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤3)所述的搅拌条件是转速不低于 500转/分钟。
9.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤3)所述的有机相和水相的比例 (V/V)较佳的为1 4 4 1。
10.包含如权利要求1 5任一项所述的注射用紫杉醇白蛋白亚微粒的注射液。
全文摘要
本发明公开了一种注射用紫杉醇白蛋白亚微粒，其包括紫杉醇1～10％(W/W)，白蛋白10～80％(W/W)，和冻干保护剂10～85％(W/W)。还公开了其制备方法，包括以下步骤1)将紫杉醇加入叔丁醇中，搅拌溶解后作为有机相；2)将白蛋白及冻干保护剂加入到水或pH值在6.0～8.5的缓冲液中，搅拌溶解后作为水相；3)在搅拌的条件下将有机相加入到水相中，搅拌溶解后通过微孔滤膜法过滤除菌，置于洁净的容器中；4)在-30℃～-50℃条件下的温度下冻结，经冷冻干燥机冻干除去叔丁醇和水后即得外形良好、质地疏松的冻干粉。在使用时，将冻干粉加入注射用溶媒复溶，即可形成平均粒径在100～600nm的紫杉醇白蛋白亚微粒，具有制备工艺简单，不使用毒性较高的有机溶剂，可长期存放等优点。
文档编号A61P35/00GK102274190SQ20101019993
公开日2011年12月14日 申请日期2010年6月11日 优先权日2010年6月11日
发明者何军, 陆伟根, 陈辰 申请人:上海现代药物制剂工程研究中心有限公司