质机中，W4(K)bar循环5次，W9(K)bar均质循环20次，得带乳光 的纳米混悬剂，使用Malvern 2000纳米粒度分析仪测得粒径226.5nm，多分散系数为0.13。
[0030] 将纳米混悬剂分为Ξ份，分别加入混悬剂重量4%的甘露醇、薦糖及海藻糖，揽拌溶 解后分装至7ml冻干粉针瓶中，每瓶2ml，放入冷冻干燥机中，冻干条件：室溫~-40°C4h，维 持-40°C化，一次升华化升溫至-0°C，保持化，继续化升溫至35°C，保持化，通过卡尔费休水 分测定仪检测冻干粉针水分，使用Malvern 2000纳米粒度分析仪检测粒径，从检测结果可 见，使用甘露醇作为冻干保护剂最佳。
[0031 ] 实施例2 将紫杉醇30mg置于烧杯中，加入二氯甲烧3ml及丙酬1.5ml使其溶解，用作油相;取叶酸 修饰的泊洛沙姆407 3Omg于另一烧杯中，注入12Omg甘油及5Om 1蒸馈水，揽拌使其充分溶 解，作为水相。室溫下，将油相缓慢滴加入水相，同时用高速匀浆5min，将初悬液旋转蒸发， 除去有机溶剂后，加入高压均质机中，W4(K)bar循环5次，W9(K)bar均质循环20次，得带乳光 的纳米混悬剂，使用Malvern 2000纳米粒度分析仪测得粒径213. Onm，多分散系数为0.075。 [0032] 实施例3 将紫杉醇50mg置于烧杯中，加入二氯甲烧3ml及丙酬1.5ml使其溶解，用作油相;取泊洛 沙姆188 50mg于另一烧杯中，注入lOOmg甘油及50ml蒸馈水，揽拌使其充分溶解，作为水相。 室溫下，将油相缓慢滴加入水相，同时用高速匀浆5min，将初悬液旋转蒸发，除去有机溶剂 后，加入高压均质机中，W400bar循环5次，W900bar均质循环20次，得纳米混悬剂，使用 Maivern 2000纳米粒度分析仪测得粒径254. Onm，多分散系数为0.077。
[0033] 实施例4 将紫杉醇30mg置于烧杯中，加入二氯甲烧3ml及丙酬1.5ml使其溶解，用作油相;取聚乙 締醇30mg于另一烧杯中，注入150mg憐脂及50ml蒸馈水，揽拌使其分散，作为水相。室溫下， 将油相缓慢滴加入水相，同时用高速匀浆5min，将初悬液旋转蒸发，除去有机溶剂后，加入 高压均质机中，WAOObar循环5次，WgOObar均质循环20次，得纳米混悬剂，使用Malvern 2000纳米粒度分析仪测得粒径290.6nm，多分散系数为0.195。
[0034] 实施例5 将紫杉醇30mg置于烧杯中，加入二氯甲烧3ml及丙酬1.5ml使其溶解，用作油相;取径丙 甲纤维素 E5 60mg于另一烧杯中，注入50ml蒸馈水，揽拌使其充分溶解，作为水相。室溫下， 将油相缓慢滴加入水相，同时用高速匀浆5min，将初悬液旋转蒸发，除去有机溶剂后，加入 高压均质机中，WAOObar循环5次，W90化ar均质循环20次，制得纳米混悬剂，使用Malvern 2000纳米粒度分析仪测得粒径243.8nm，多分散系数为0.087。
[0035] 紫杉醇纳米混悬剂(实施例1)的差示扫描热量分析 分别称取紫杉醇原料药、紫杉醇纳米混悬剂样品(经0.22μπι微孔膜过滤，并用蒸馈水反 复冲洗去表面活性剂后所得，2-3 mg)置于侣错锅上，W空侣错锅为参比池，升溫速度为10 °C/min，扫描范围为50 -300°C，测定载气为氮气。从结果（图2和图3)可见，紫杉醇原药在 216°C左右有一吸热烙融峰，240°C有一放热正峰，表明紫杉醇在高溫下分解，紫杉醇纳米混 悬剂用0.22WI1滤膜过滤后的粉末DSC图谱与紫杉醇原药的两个特征峰峰位几乎相同，说明 药物制成纳米混悬剂W后晶型未发生转化。
[0036] 紫杉醇纳米混悬剂(实施例1)药代动力学研究 取12只SD大鼠，体重为250g± 30g，随机分成两组，每组6只，给药前禁食12小时，自由饮 用生理盐水。给药前称重标号，两组大鼠分别按照lOmg/kg的剂量股静脉注射紫杉醇注射液 (PTX-INJ)和紫杉醇纳米混悬剂(PTX-N0)，分别于给药后5min，lOmin，15min，30min及1，2， 4，6，8，12，24h眼眶取血0.5ml，置1%肝素钢润洗过的离屯、管中，将血液W3000 rpm离屯、15 min取上层血浆，放置在-20°C冰箱冷冻保存备用。自冰箱中取出冷冻的待测血样，37°C水浴 中解冻后，取血浆样品10化1，加入内标烘诺酬溶液(2扣g/ml )50μ1混合30s后，用1ml乙酸满 旋提取5min，12000r/min离屯、lOmin，取上层萃取液，再重复上述步骤一遍，将萃取液合并， 于30°C水浴上用氮气吹干，残留物加入10化1流动相溶解后进样20μ1，进行HPLC测定。记录 各个时间点样品峰与内标峰的面积As、Ai，WR=As/Ai代入标准曲线方程计算测定浓度。 [00 37]药动学参数显示，紫杉醇纳米混悬剂的体内清除率(CL=2.05025±0.616)是注射 液(CL=0.5562 ± 0.190)的4倍，而药时曲线下面积(AUC=5.1955 ± 1.426)是注射液(AUC= 20.3428 ± 9.119)的1/4，纳米组在循环系统内的消除相半衰期（ti/2(e) = 5.6455 ± 2.941) 和平均滞留时间（MRT=3.19875 ± 3.718)较注射液组（ti/2(e) =3.7736 ± 1.352，MRT=2.7534 ±0.943)稍有延长，紫杉醇纳米混悬剂在血浆中的药物浓度较注射剂组低，提示紫杉醇纳 米混悬剂更有利于减轻药物不良反应，具有一定的缓释作用。
[0038]紫杉醇纳米混悬剂(实施例1)的组织分布研究 48只小鼠随机分成2组，每组24只，给药前禁食12小时，自由饮水，分别按照lOmg/kg的 剂量尾静脉注射紫杉醇注射液和紫杉醇纳米混悬剂，分别于给药后5、15、30min和1、2、4、8、 12将小鼠处死，每个采样点取3只小鼠，取屯、、肝、脾、肺、肾组织，立即置-20°C冰箱保存至分 析。自冰箱中取出冷冻的待测组织，用生理盐水冲净后W滤纸吸去水分，称取各组织脏器 按0.3ml/100mg加入生理盐水，用高剪切乳化机高速旋转揽拌20s，捣碎得组织匀浆液。分 别取各组织脏器匀浆液，加入内标烘诺酬溶液巧化g/ml)50yl后满旋混匀30s，力日3ml无水 乙酸满旋提取2min后400〇1'/111；[]1离屯、1〇1]1；[]1。取11]11上层乙酸过滤，于40°(3水浴上氮气吹干， 残留物加入10化1流动相溶解后进样20μ1,进行HPLC测定。记录各个时间点样品峰与内标 峰的面积As、Ai，WR=As/Ai代入标准曲线方程计算测定浓度。
[0039]从下表可W看出，相对于市售紫杉醇注射液组的相对摄取率re值，除了屯、和肾W 夕h在其他组织中都大于1，特别是在肝脏和脾脏中AUC要高11倍左右。紫杉醇纳米混悬剂对 药物在屯、脏、肾脏组织中的药物蓄积没有显著性的影响。纳米混悬剂组在各组织中的药物 蓄积量由高到底分别为:肝〉脾〉肺〉肾〉屯、。实验结果表明，紫杉醇纳米混悬剂组能够降低紫 杉醇对屯、和肾的毒性，同时有效聚集到肝、脾等网状内皮丰富的组织中，祀向作用明显。
【主权项】
1. 一种含紫杉醇的纳米混悬剂，其主要成分为紫杉醇和稳定剂，按重量百分比计，紫杉 醇与稳定剂的比例为1:1~1:6,该混悬剂的粒径为200~280nm。2. 根据权利要求1所述的混悬剂，其中稳定剂包括表面活性剂和助稳定剂，且两者的比 例为重量百分比1:2~1:5,表面活性剂为泊洛沙姆、聚乙烯醇、卵磷脂、羟丙甲纤维素E5、聚 维酮K30中的一种;助稳定剂为甘油、磷脂、聚乙二醇中的一种。3. 权利要求1所述的混悬剂，其中还含有海藻糖、蔗糖或甘露醇作为冻干保护剂。4. 权利要求1所述的混悬剂，其表面活性剂为靶向修饰过的泊洛沙姆188或泊洛沙姆 407 〇5. 权利要求4所述的混悬剂，其表面活性剂的靶向修饰基团为叶酸。6. 根据权利要求4所述的混悬剂，其中助稳定剂为甘油，表面活性剂与助稳定剂的重量 比为1:2~1:5。7. 根据权利要求3所述的混悬剂，其冻干保护剂优选甘露醇，其含量占该混悬剂重量的 2-5% 〇8. 权利要求1中所述的混悬剂，其制备方法为通过沉淀法结合高压均质法制备，按以下 步骤进行： (1) 将紫杉醇溶于有机相中，再将表面活性剂和助稳定剂溶于水相，在匀浆机或超声设 备处理水相时，将油相以一定速度注入到水相中； (2) 将初悬液中有机溶剂除去后，通过高压均质机均质循环，制得纳米混悬剂。9. 权利要求8所述的混悬剂制备方法，其中有机溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇或丙 酮中一种或多种。10. 根据权利要求9所述的混悬剂制备方法，其中有机溶剂中二氯甲烷与丙酮，体积比 为 1:2〇
【专利摘要】本发明涉及药物制剂领域，具体涉及纳米紫杉醇及其冻干粉针的制备方法。本发明中纳米制剂，包括紫杉醇和稳定剂，紫杉醇与稳定剂的重量比例为1:1~1:6，粒径范围在200~280nm，制备冻干粉针时，需加入冻干保护剂的量为纳米制剂量的2~5%。本发明采用沉淀法结合高压均质法制备，该制备方法适合工业化生产。相比于市售紫杉醇注射剂，本发明改变了紫杉醇的体内分布，提高了紫杉醇的溶出速度，同时不改变其晶型，从而可减少毒副作用。
【IPC分类】A61K47/26, A61K47/34, A61K47/10, A61K9/10, A61K31/337, A61P35/00
【公开号】CN105456188
【申请号】CN201510851651
【发明人】陈卫, 张永丰, 孙小虎
【申请人】广东中盛药物研究院有限公司
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年11月30日