紫杉醇脂质纳米粒的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药品技术领域，尤其涉及一种紫杉醇脂质纳米粒的制备方法。
【背景技术】
[0002]开发难溶性药物如紫杉醇的口服制剂是药剂学的研究热点。紫杉醇口服制剂的生物利用度很低，如何改善紫杉醇在胃肠道的吸收，提高其生物利用度是开发紫杉醇口服制剂的关键。固体脂质纳米粒可以在一定程度上提高难溶性药物的口服吸收，但纳米粒口服后主要经Peyer结上的Μ细胞或胞饮作用转运，吸收较为有限。而常见吸收促进剂连续使用会给粘膜造成直接损伤，限制了其临床应用。穿膜肽是一类具有较强细胞膜穿透能力的多肽，在常规范围内几乎无毒性，可以促进多肽、蛋白质等难吸收药物在肠道粘膜的吸收。
【发明内容】
[0003]本发明就是针对上述问题，提供一种易于被肠道粘膜吸收的一种紫杉醇脂质纳米粒的制备方法。
[0004]为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案。
[0005]紫杉醇脂质纳米粒的制备方法，包括下步骤。
[0006](1)按照薄膜分散法制备紫杉醇固体脂质纳米粒。精密称取10mg紫杉醇、225mg大豆磷脂和225mg单硬脂酸甘油酯置于500mL茄型瓶，加入3mL氯仿振摇溶解真空旋蒸除去有机溶剂形成含药薄膜，抽真空过夜除去痕量有机溶剂。精密称取lOOmg泊洛沙姆188和lOOmg吐温80至10mL蒸馏水中形成水相。将水相加入到茄型瓶中水化形成均匀乳浊液，探头超声得到PTX-SLN粗品，低速离心，0.8 μ m滤膜过滤三次整粒，即得最终的PTX-SLN分散液。
[0007](2)采用孵育法制备SA-R8-PTX-SLN。精密称取10mgSA_R8，加入到5mLPTX_SLN分散液中，磁力搅拌过夜(4 °C)，即得SA-R8-PTX-SLN。
[0008](3)精密称取紫杉醇10mg置于100mL的容量瓶中，甲醇溶解定容，摇匀，得100 μ g/mL的PTX甲醇储备液。甲醇稀释配制成ΡΤΧ甲醇标准溶液。
[0009](4)取lmL载紫杉醇的SLN，置于透析袋中(分子量14，000),两端扎紧，分别加入100mL释放介质，37°C，100r/min条件下考察紫杉醇释放情况。取lmL透析介质，冻干，然后加入0.25mL甲醇，涡旋，高速离心，取上清液进样20 μ L。
[0010]作为一种优选方案，主要仪器，采用LC-2010型高效液相色谱仪；FA-2004型分析天平；HH-S恒温水浴锅，FB-1恒流泵；旋转蒸发仪；Nano-ZS90粒径仪；细胞破碎仪；TGL-16B台式离心机。
[0011]本发明有益效果。
[0012]本发明，采用长链脂肪酸对水溶性穿膜肽进行修饰，可以增加穿膜肽的两亲性，从而使其更容易插入到磷脂双分子层中。此外，修饰后的穿膜肽细胞摄取能力会明显增强。并且容易被肠道粘膜吸收。
【具体实施方式】
[0013]紫杉醇脂质纳米粒的制备方法，包括下步骤。
[0014](1)按照薄膜分散法制备紫杉醇固体脂质纳米粒。精密称取10mg紫杉醇、225mg大豆磷脂和225mg单硬脂酸甘油酯置于500mL茄型瓶，加入3mL氯仿振摇溶解真空旋蒸除去有机溶剂形成含药薄膜，抽真空过夜除去痕量有机溶剂。精密称取lOOmg泊洛沙姆188和lOOmg吐温80至10mL蒸馏水中形成水相。将水相加入到茄型瓶中水化形成均匀乳浊液，探头超声得到PTX-SLN粗品，低速离心，0.8 μ m滤膜过滤三次整粒，即得最终的PTX-SLN分散液。
[0015](2)采用孵育法制备SA-R8-PTX-SLN。精密称取10mgSA_R8，加入到5mLPTX_SLN分散液中，磁力搅拌过夜(4 °C)，即得SA-R8-PTX-SLN。
[0016](3)精密称取紫杉醇10mg置于lOOmL的容量瓶中，甲醇溶解定容，摇匀，得100 μ g/mL的PTX甲醇储备液。甲醇稀释配制成PTX甲醇标准溶液。
[0017](4)取lmL载紫杉醇的SLN，置于透析袋中(分子量14，000),两端扎紧，分别加入lOOmL释放介质，37°C，100r/min条件下考察紫杉醇释放情况。取lmL透析介质，冻干，然后加入0.25mL甲醇，涡旋，高速离心，取上清液进样20 μ L。
[0018]作为一种优选方案，主要仪器，采用LC-2010型高效液相色谱仪；FA-2004型分析天平；HH-S恒温水浴锅，FB-1恒流泵；旋转蒸发仪；Nano-ZS90粒径仪；细胞破碎仪；TGL-16B台式离心机。
[0019]酚红的K-R溶液，在200?700nm进行紫外扫描，酚红的峰值分别为224，277，358和559nm，而空白SLN亦在200?700nm均有吸收，因此考虑采用HPLC方法测定酚红的含量。HPLC-UV方法测定红的过程中，选择224或277nm为测定波长，由于酚红出峰快，易于与溶剂峰重叠，因此选择358nm为测定波长。制剂在肠液中的稳定性、肠壁和管路对药物的吸附等均有可能影响实验结果。本实验考查了 4h内三种制剂在肠液中的稳定性、肠壁和管路对三种制剂的吸附情况，在4h内，三种制剂在肠液中保持稳定，肠壁和管路对制剂均无明显吸附，表明所建立的大鼠在体肠吸收方法准确可靠。固体脂质纳米粒可以改善难溶性药物的溶解度，以及通过内吞途径被胃肠道吸收，因此可以改善药物的口服吸收，本实验中制备的紫杉醇固体脂质纳米粒，与市售制剂(Taxol)相比，显著提高了紫杉醇的在体肠吸收(P〈0.05)。紫杉醇口服吸收差的主要原因之一是P-糖蛋白的外排作用，而SA-R8能够避免P-糖蛋白的外排作用，因此，SA-R8-PTX-SLN促进了 PTX的口服吸收。阳离子固体脂质纳米粒可以促进药物的吸收，SA-R8-PTX-SLN表面带正电，可以迅速吸附到表面带负电的胃肠道上皮细胞上，提高纳米粒局部药物浓度，从而提高药物的吸收。
【主权项】
1.紫杉醇脂质纳米粒的制备方法，包括下步骤； (1)按照薄膜分散法制备紫杉醇固体脂质纳米粒；精密称取10mg紫杉醇、225mg大豆磷脂和225mg单硬脂酸甘油酯置于500mL茄型瓶，加入3mL氯仿振摇溶解真空旋蒸除去有机溶剂形成含药薄膜，抽真空过夜除去痕量有机溶剂；精密称取lOOmg泊洛沙姆188和lOOmg吐温80至10mL蒸馏水中形成水相；将水相加入到茄型瓶中水化形成均匀乳浊液，探头超声得到PTX-SLN粗品，低速离心，0.8 μ m滤膜过滤三次整粒，即得最终的PTX-SLN分散液； (2)采用孵育法制备SA-R8-PTX-SLN;精密称取10mgSA_R8，加入到5mLPTX_SLN分散液中，磁力搅拌过夜(4 °C )，即得SA-R8-PTX-SLN ； (3)精密称取紫杉醇10mg置于100mL的容量瓶中，甲醇溶解定容，摇匀，得100μ g/mL的PTX甲醇储备液；甲醇稀释配制成PTX甲醇标准溶液； (4)取lmL载紫杉醇的SLN，置于透析袋中(分子量14，000)，两端扎紧，分别加入100mL释放介质，37°C，100r/min条件下考察紫杉醇释放情况；取lmL透析介质，冻干，然后加入0.25mL甲醇，涡旋，高速离心，取上清液进样20 μ L。2.根据权利要求1所述紫杉醇脂质纳米粒的制备方法，其特征在于，主要仪器，采用LC-2010型高效液相色谱仪；FA-2004型分析天平；HH_S恒温水浴锅，FB-1恒流泵；旋转蒸发仪；Nano-ZS90粒径仪；细胞破碎仪；TGL_16B台式离心机。
【专利摘要】紫杉醇脂质纳米粒的制备方法属于药品技术领域，尤其涉及一种紫杉醇脂质纳米粒的制备方法。本发明提供一种易于被肠道粘膜吸收的一种紫杉醇脂质纳米粒的制备方法。紫杉醇脂质纳米粒的制备方法，包括下步骤。（1）按照薄膜分散法制备紫杉醇固体脂质纳米粒。（2）采用孵育法制备SA-R8-PTX-SLN。精密称取10mgSA-R8，加入到5mLPTX-SLN分散液中，磁力搅拌过夜（4℃），即得SA-R8-PTX-SLN。（3）精密称取紫杉醇10mg置于100mL的容量瓶中，甲醇溶解定容，摇匀，得100μg/mL的PTX甲醇储备液。（4）取1mL载紫杉醇的SLN，置于透析袋中（分子量14,000），两端扎紧，分别加入100mL释放介质，37℃，100r/min条件下考察紫杉醇释放情况。取1mL透析介质，冻干，然后加入0.25mL甲醇，涡旋，高速离心，取上清液进样20μL。
【IPC分类】A61P35/00, A61K47/48, A61K9/51, A61K47/12, A61K31/337
【公开号】CN105311643
【申请号】CN201410376254
【发明人】孙仁
【申请人】孙仁
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2014年8月3日