专利名称：一种紫杉醇脂质制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种紫杉醇脂质制剂及其制备方法。
背景技术：
20世纪60年代后期美国科学家从太平洋紫杉的树皮中分离提取出了一种化学 结构新颖(单体双萜类化合物)的药物，将其命名为紫杉醇(Paclitaxel) 。 80 年代初，紫杉醇被发现具有独特的抗肿瘤作用(即促进癌细胞分裂过程中微管蛋白 的聚集，稳定微管，最终造成癌细胞凋亡)，从而受到国际医药界的普遍重视。1992 年紫杉醇被美国FDA正式批准用于晚期卵巢癌、肺癌、子宫癌等治疗，商品名为 Taxol ,是目前世界上最好的抗癌药物之一。我国于90年代初仿制成功，商品名 有泰素《、紫素@等，在我国的肿瘤临床治疗中，紫杉醇己经成为首选的化疗药物。 同时，因其药理作用机制独特，紫杉醇对风湿性关节炎、中风、早老性痴呆症也显 示出良好的治疗前景。
紫杉醇及其制剂的发展受到原料的限制。目前，商业用紫杉醇是从红豆杉的树 皮中提取的，这种方法的缺憾是树皮资源匮乏(每生产lkg紫杉醇，需16. 67t树皮， 采剥1500 2000棵大树)，而且威胁植物生存，如不加以遏制终将导致濒危物种的 灭绝。红豆杉资源的匮乏及生态保护的限制，必然导致紫杉醇生产的阻滞，因而广 辟生产途径，解决紫杉醇资源贫乏问题变得十分迫切。目前世界各国都在寻找新的 紫杉醇生产途径，主要集中在合成、半合成、结构改造、组织培养、真菌研究以及 天然资源的利用和发展(栽培)等方面。
除了资源匮乏，水溶性低的问题也限制了紫杉醇的临床应用。紫杉醇水溶性很 低(溶解度仅为0.006mg/ml) ， 口服几乎不吸收，临床应用的主要是紫杉醇注射液。 目前在国内、外上市的注射剂主要是用表面活性剂聚氧乙烯蓖麻油(Crem叩hor EL) 与无水乙醇(1:1)作为混合溶媒制成的制剂，注射给药前用生理盐水或5%葡萄糖 溶液稀释到给药浓度。该制剂存在的主要问题如下-
①毒性和致敏性主要是聚氧乙烯蓖麻油导致的过敏反应，包括支气管痉挛、 呼吸急促、疲倦、低血压等；在生产过程中容器、注射器、输液袋与聚氧乙烯蓖麻 油接触会浸出大量的增塑剂邻苯二甲酸二乙基乙酯，也导致过敏反应。因此临床应用时一般预先用糖皮质激素和抗组胺药来阻止过敏反应的发生，这给应用过程带来 不便，也给患者带来很大的痛苦。
② 稀释后的不稳定性当该制剂被稀释至0.3-1.2g/L时，若超过24h，会出现 颗粒性沉淀，影响紫杉醇的吸收利用，而且分析表明该沉淀已不是紫杉醇。
③ 配伍变化临床常用的60种药物与紫杉醇配伍会引起输液混浊，某些药物 与紫杉醇竞争结合血浆蛋白，使毒性增加。
针对以上问题，为了降低紫杉醇的全身毒性和溶媒的毒副作用，提高紫杉醇的 用药安全性和顺应性，有必要对紫杉醇的剂型进行改造。近年来，国内外药学工作 者对紫杉醇的药用剂型进行了大量的研究和探讨，主要集中在两大方面
① 提高紫杉醇的水溶性，减少制剂中的CremophorEL:例如可溶性半合成紫杉 醇衍生物的研究，即在紫杉醇上连接一些水溶性基团，制成水溶性前药。水溶性前 药在生理条件下水解释放出紫杉醇，不需要Cremophor的增溶作用，还能够降低药 物的全身清除率。但是水溶性前药一般不稳定，在一定程度上还会影响紫杉醇的药 效，因此还没有正式商品化。
② 新的紫杉醇给药系统的研究主要是采用新的耙向载体如脂质体、微球、脂 质微球/囊、纳米粒、乳剂、毫微球等将其制成靶向制剂，从而提高紫杉醇在肿瘤 部位的浓度，降低血液及其它组织中的药物浓度，不仅可提高疗效，还可以降低全 身毒副作用。此外还采用环糊精包合、聚乙二醇衍生物等。
目前紫杉醇涂层支架己经进入了临床应用。美国波士顿科学公司开发的 TAXUSTM紫杉醇药物释放冠状动脉支架已经上市。这种药物释放支架覆盖有一种可 向动脉血管壁提供药物紫杉醇的聚合物载体，紫杉醇通过多种途径抑制支架内平滑 肌细胞过度增生而抑制再狭窄，聚合物载体黏附在支架上，置入后控制逐步释放， 使TAXUSTM支架成为具有突破性意义的药物释放支架。白蛋白结合紫杉醇纳米粒注 射混悬液(paclitaxel， ABRAXANE)也被美国FDA批准上市，用于转移性乳腺癌联 合化疗失败后或辅助化疗6个月内复发的乳腺癌。本品仅由白蛋白结合紫杉醇纳米 粒组成，不含有毒溶媒，因此用药剂量比Cremophor大，故可增强抗肿瘤作用。此 外，白蛋白是正常向细胞输注营养的蛋白质，在快速生长的肿瘤中积蓄。因而，白 蛋白结合的紫杉醇可定向释放至肿瘤细胞，提高药物的疗效。
但是，大多数紫杉醇靶向制剂目前尚处于实验研究阶段，其开发还有许多问题 有待解决，如脂质体靶向系统存在稳定性差、耙向分布不理想、工业化生产困难等缺点。因此，如何将治疗药物安全、高效、靶向性地导入人体内特定器官、组织，
并提高药物在靶组织内的浓度是目前研究的重点。
发明内容
本发明的目的是提供一种紫杉醇脂质制剂及其制备方法。
本发明提供的紫杉醇脂质制剂，包括如下组分紫杉醇、聚乙二醇-十二羟基 硬脂酸酯和磷脂；所述磷脂中磷脂酰胆碱含量大于80%。
所述制剂中还包括助溶剂；所述助溶剂为碳原子总数为三以下的一元醇、二元 醇或三元醇。
所述助溶剂具体可为无水乙醇、丙二醇、甘油中的至少一种。
所述制剂中还包括pH调节剂。
所述pH调节剂具体可为无水拧檬酸。
所述制剂可包括如下质量份的各组分紫杉醇O. 1-2，聚乙二醇-十二羟基硬脂 酸酯15-50，磷脂5-20，助溶剂30-80，无水柠檬酸0. 1-0. 2。
所述制剂具体包括如下质量份的各组分紫杉醇0.6，聚乙二醇-十二羟基硬脂 酸酯15-50，磷脂5-20，助溶剂30-80，无水柠檬酸O. 18。
当然，该所述制剂也可以仅由如下质量份的各组分组成紫杉醇0.6，聚乙二 醇-十二羟基硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶剂30-80，无水拧檬酸0. 18。
上述紫杉醇脂质制剂为淡黄色油状液体，稳定性良好，稀释后能自发乳化形成 粒径10-200nm的纳米粒子。
本发明还提供了一种制备所述的紫杉醇脂质制剂的方法，包括如下步骤
1) 将所述磷脂加入助溶剂，45-55"C加热溶解，得到溶液A;将紫杉醇、无水 柠檬酸和聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯加入助溶剂，常温溶解,得到溶液B;
2) 将溶液A和溶液B混合。
本发明还提供了一种紫杉醇纳米制剂，是用生理盐水溶液、葡萄糖水溶液或注 射用水将所述紫杉醇脂质制剂稀释5-100倍，优选稀释20倍，得到的纳米制剂。 上述紫杉醇纳米制剂可直接作为注射用剂。 以上紫杉醇纳米制剂的制备方法也属于本发明的保护范围。 发明人针对紫杉醇临床应用存在的问题，采用高纯度磷脂和一种新的增溶剂 Solutol HS15 (聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯)，制成一种新的脂质制剂，可以降 低毒性及过敏反应，同时该制剂在临用时用生理盐水溶液、葡萄糖溶液、或注射用水稀释后可自发乳化成纳米级的粒子，吸收效果大大增强，从而药效得以进一步提 高。
Solutol⑧HS15，是一种新型的高性能、极低毒性的增溶剂，其优越性体现在
① 高增溶能力与聚山梨醇酯80的对比研究表明，Solutol HS15对疏水药物 的溶解能力随着溶剂浓度的增加而呈线性增加，而使用聚山梨醇酯80时，在达到 较高浓度时药物的溶解量并没有进一步增加。而另一实验表明，随着20%的 Solutol HS15的使用，不同药物如克霉唑、雌二醇、磺胺噻唑、心痛定、酰胺咪嗪、 吡罗昔康等的水溶性增加，根据分子结构不同其水溶解度被提高10-100因数，不 管化学结构或药物溶解的最大剂量怎样，胶粒的直径不变，均在13nm左右。 Soluto^HS15的这种高增溶能力使低容量高剂量的注射成为可能。
② 低组胺释放使用前无需使用抗组胺剂和类皮质激素。与聚山梨醇酯80相 比，静脉注射SolutoWHS15后，狗的血清组胺水平低很多倍，15min后聚山梨醇酯 80组的血清组胺水平大于50000nMo1，而Solutol HS15组仅为220nMol; 60min后 聚山梨醇酯80组的血清组胺水平为247 nMol，而Solutol HS15组仅为8nMo1。
③ 低溶血作用与聚山梨醇酯80的对比研究表明，虽然随着增溶剂浓度的增 加溶血作用增强，但是聚山梨醇酯80组的红血球溶解量高于Solutol HS15组10 倍以上，表明这种新的增溶剂具有较低的毒性和刺激性。
此外这种新的增溶剂还具有较高的生理耐受性、较低的粘度，并且可以采用蒸 汽灭菌法，无需昂贵的无菌制造工艺，目前该溶剂已收入德国药典，在美国和加拿 大已通过用于人体注射的审定。
本发明提供的紫杉醇脂质制剂由于选用了新型的增溶剂SolUtol HS15以及合 适的载体材料，大大提高了紫杉醇的溶解性，同时可避免使用Crera叩hor EL带来 的毒副作用，提高了紫杉醇制剂的安全性和顺应性；而且该制剂稀释后可自发乳化 形成纳米粒子，用于静脉注射，可以增加紫杉醇的体内吸收，并且通过控制其乳化 粒度的大小可达到肿瘤靶向的目的；本发明的制备工艺简单易行，适合工业化生产。
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。
图1为紫杉醇纳米制剂乳化后粒度检测结果-光强粒度多峰分布 图2为紫杉醇纳米制剂乳化后粒度检测结果-光强粒度正态分布具体实施方式
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。 实施例1、紫杉醇脂质制剂的制备
一、 紫杉醇脂质制剂的制备
1、 称取5g磷脂(德国Lipoid公司)和10g丙二醇，45"C水浴加热溶解，得 到溶液A。
2、 称取0.6g紫杉醇、15g HS15 (德国BASF公司)、5g甘油、0. 18g无水柠 檬酸、65g无水乙醇，常温溶解，得到溶液B。
3、 将溶液A和溶液B混合，室温搅拌、混合均匀，过滤，得到紫杉醇脂质制 剂，通氮气保护，密封保存。
二、 紫杉醇纳米制剂的制备
将步骤一制备的紫杉醇脂质制剂用20倍体积的生理盐水稀释，得到紫杉醇纳 米制剂。
三、 紫杉醇纳米制剂的粒径测定
用美国Brookhaven仪器公司的ZetaPALS激光动态光散射仪检测紫杉醇纳米制 剂的粒径。紫杉醇纳米制剂的平均粒径为43. 5nm。 实施例2、紫杉醇脂质制剂的制备
一、 紫杉醇脂质制剂的制备
1、 称取20g磷脂和10g无水乙醇，55。C水浴加热溶解，得到溶液A。
2、 称取0.6g紫杉醇、50g HS15、 0. 18g无水柠檬酸、20g无水乙醇，常温溶 解，得到溶液B。
3、 将溶液A和溶液B混合，室温搅拌、混合均匀，过滤，得到紫杉醇脂质制 剂，通氮气保护，密封保存。
二、 紫杉醇纳米制剂的制备
将步骤一制备的紫杉醇脂质制剂用20倍体积的注射用水稀释，得到紫杉醇纳 米制剂。
三、 紫杉醇纳米制剂的粒径测定
用美国Brookhaven仪器公司的ZetaPALS激光动态光散射仪检测紫杉醇纳米制 剂的粒径。紫杉醇纳米制剂的平均粒径为166.4nm。 实施例3、紫杉醇脂质制剂的制备 一、紫杉醇脂质制剂的制备1、 称取10g磷脂和10g丙二醇，5(TC水浴加热溶解，得到溶液A。
2、 称取0.6g紫杉醇、36gHS15、 15g甘油、0. 18g无水柠檬酸、29g无水乙醇， 常温溶解，得到溶液B。
3、 将溶液A和溶液B混合，室温搅拌、混合均匀，过滤，得到紫杉醇脂质制 剂，通氮气保护，密封保存。
二、 紫杉醇纳米制剂的制备
将步骤一制备的紫杉醇脂质制剂用20倍体积的生理盐水稀释，得到紫杉醇纳 米制剂。
三、 紫杉醇纳米制剂的粒径测定
用美国Brookhaven仪器公司的ZetaPALS激光动态光散射仪检测紫杉醇纳米制 剂的粒径。在25±0. rC的稳定环境下，粒径检测结果见图l和图2。结果表明， 紫杉醇纳米制剂的平均粒径为26.6nm，粒度分布均匀。
实施例4、紫杉醇脂质制剂的制备
一、 紫杉醇脂质制剂的制备
1、 称取12g磷脂和8g无水乙醇，45i:水浴加热溶解，得到溶液A。
2、 称取0.6g紫杉醇、36gHS15、 18g甘油、0. 18g无水柠檬酸、26g无水乙醇， 常温溶解，得到溶液B。
3、 将溶液A和溶液B混合，室温搅拌、混合均匀，过滤，得到紫杉醇脂质制 剂，通氮气保护，密封保存。
二、 紫杉醇纳米制剂的制备
将步骤一制备的紫杉醇脂质制剂用20倍体积的葡萄糖溶液稀释，得到紫杉醇 纳米制剂。
三、 紫杉醇纳米制剂的粒径测定
用美国Brookhaven仪器公司的ZetaPALS激光动态光散射仪检测紫杉醇纳米制 剂的粒径。紫杉醇纳米制剂的平均粒径为127nm。 实施例5、急性毒性试验
1、 实验动物及分组
健康昆明种小鼠(18-22g) 50只，雌雄各半。将小鼠随机分为5组，每组10只。
2、 紫杉醇注射液的制备
按质量比l:l配制Crem叩hor EL/无水乙醇，作为混合溶媒。将3g紫杉醇溶于500ml的CremophorEL/无水乙醇混合溶媒，得到紫杉醇注射液，作为对照组受试物。 3、给药
对照组(IO只小鼠)腹腔注射紫杉醇注射液，给药剂量为45mg/Kg。 实验组I (IO只小鼠)腹腔注射实施例l制备的紫杉醇脂质制剂，给药剂量 为45mg/Kg。
实验组II (IO只小鼠)腹腔注射实施例2制备的紫杉醇脂质制剂，给药剂量 为45mg/Kg。
实验组III (IO只小鼠)腹腔注射实施例3制备的紫杉醇脂质制剂，给药剂量 为45mg/Kg。
实验组IV (IO只小鼠)腹腔注射实施例4制备的紫杉醇脂质制剂，给药剂量 为45mg/Kg。
观察给药后实验组与对照组小鼠的毒性反应症状。
结果表明对照组小鼠表现出明显的毒性反应症状，四肢伏地、呼吸急促、瀕 临死亡，给药后4h即有小鼠死亡， 一周后小鼠死亡率为80%。注射紫杉醇脂质制剂 的4组小鼠毒性反应症状明显减轻，表现为反应迟缓、状态萎靡、体重减轻。实验 组I至实验组IV分别在给药后第2天、第2天、第3天、第3天才有小鼠死亡，给药后 一周小鼠死亡率分别为50%、 60%、 50%、 40%，明显低于对照组。
以上实验结果表明，与紫杉醇注射液相比较，紫杉醇脂质制剂的毒性有所降低， 安全性得以提高，从而为研究长效、低毒、安全性好的紫杉醇制剂奠定了基础。
权利要求
1、一种紫杉醇脂质制剂，包括如下组分紫杉醇、聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯和磷脂；所述磷脂中磷脂酰胆碱含量大于80％。
2、 如权利要求1所述的制剂，其特征在于所述制剂中还包括助溶剂；所述助 溶剂为碳原子总数为三以下的一元醇、二元醇或三元醇。
3、 如权利要求2所述的制剂，其特征在于所述助溶剂为无水乙醇、丙二醇、 甘油中的至少一种。
4、 如权利要求1至3中任一所述的制剂，其特征在于所述制剂中还包括pH调 节剂。
5、 如权利要求4所述的制剂，其特征在于所述pH调节剂为无水拧檬酸。
6、 如权利要求5所述的制剂，其特征在于所述制剂包括如下质量份的各组分:紫杉醇O. 1-2，聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶剂30-80，无水 柠檬酸0. 1-0.2。
7、 如权利要求6所述的制剂，其特征在于所述制剂包括如下质量份的各组分: 紫杉醇0.6，聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶剂30-80，无水柠 檬酸O. 18。
8、 一种制备权利要求7所述的紫杉醇脂质制剂的方法，包括如下步骤1) 将所述磷脂加入助溶剂，45-55。C加热溶解，得到溶液A;将紫杉醇、无水柠 檬酸和聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯加入助溶剂，常温溶解,得到溶液B;2) 将溶液A和溶液B混合。
9、 一种制备紫杉醇纳米制剂的方法，是用生理盐水溶液、葡萄糖水溶液或注射 用水将权利要求1至7中任一所述的紫杉醇脂质制剂稀释5-100倍，优选稀释20倍， 得到的纳米制剂。
10、 一种紫杉醇纳米制剂，是用权利要求9所述方法制备得到的。
全文摘要
本发明公开了一种紫杉醇脂质制剂及其制备方法。本发明的紫杉醇脂质制剂，包括如下组分紫杉醇、聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯和磷脂。本发明提供的紫杉醇脂质制剂，提高了紫杉醇制剂的安全性和顺应性，该制剂稀释后可自发乳化形成纳米粒子用于静脉注射，增加紫杉醇的体内吸收，并且可达到肿瘤靶向的目的。本发明的制备工艺简单易行，适合工业化生产。
文档编号A61K9/127GK101632636SQ20081011697
公开日2010年1月27日 申请日期2008年7月22日 优先权日2008年7月22日
发明者张小宁, 晚 王, 邬月明, 文 邰, 郝艳丽 申请人:清华大学