专利名称：一种多烯紫杉醇脂质制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种多烯紫杉醇脂质制剂及其制备方法。
背景技术：
多烯紫杉醇(Docetaxel， Taxotere )是一种半合成的抗肿瘤药物，是FDA批 准的紫杉烷类抗癌药物之一。多烯紫杉醇是从欧洲紫杉树针叶中提取的无活性前体
(二萜紫杉垸io-脱乙酰基浆果赤霉素in)开始半合成制得的，其化学结构与紫杉
醇(Paclitaxel， Taxol )相比存在两个改变，其一是在紫杉酚B环的C-10位置 上用羧基代替乙酰基，其二是C-13侧链发生变化(例如在紫杉酚的侧链上用N-叔 丁氧基羰基代替N-苯甲酰基)。化学结构的差别导致多烯紫杉醇和紫杉醇的活性有 所不同，其细胞毒作用是紫杉醇的1. 3-12倍。
多烯紫杉醇属于微管解聚抑制剂，作用于微管/微管蛋白系统，促进微管双聚 体装配成微管，同时防止去多聚化过程而使微管稳定，使细胞发生G2/M期阻滞， 从而抑制癌细胞的有丝分裂和增殖，这种作用机理导致它与紫杉醇相比具有较少的 严重的副反应。临床研究表明，多烯紫杉醇对各种肿瘤疾病具有良好的抗癌活性， 对于治疗乳腺癌、非小细胞肺癌、胰腺癌、软组织肉瘤、头颈癌、胃癌、卵巢癌和 前列腺癌等有很好的疗效。
多烯紫杉醇(Taxotere②)由法国安万特公司开发，1996年获得FDA批准，用 于蒽环类药物化疗失败后的局部晚期或转移性乳腺癌，1999年被批准局部晚期或转 移性非小细胞肺癌(NSCLC)的二线应用，2002年11月被FDA批准与顺铂联合使用， 用于不能切除的、局部晚期或转移性NSCLC患者(之前未接受化疗)的治疗。之后， Taxotere1皮批准与泼尼松联合应用于非雄激素依赖的(耐激素的)转移性前列腺癌 患者的治疗，与多柔比星和环磷酰胺联用也被批准用于可手术的、结节阳性 (node-positive)乳腺癌患者的辅助治疗。
由于多烯紫杉醇水溶性差，目前临床使用的主要有冻干粉针和水针注射剂。目 前市售的多烯紫杉醇(Taxotere )采用聚山梨醇酯80 (吐温80) /乙醇作为溶媒， 其规格为含有20mg (0.5ml)或80mg (2.0ml)多烯紫杉醇(无水的)单次剂量小 瓶，每ml含有40mg的多烯紫杉醇(无水的)和1040mg的吐温80。 1&又(^6^ 要求使用前稀释，因此配有无菌无热原的单次剂量稀释液，为含有13%乙醇的注射用水。 吐温80和乙醇主要用于增加多烯紫杉醇的溶解度，但该溶媒的存在可引起溶 血及严重过敏反应，如低血压和/或支气管痉挛和/或全身性疹/红斑。为降低过敏 反应的发生率和严重度，临床需预先给予类固醇和其它组胺阻断药物，但是这种前 驱给药法也存在一些不良反应，例如库欣(Cushing' s)综合征、传染性并发症、 高血糖症、高血压和精神病的效应(包括类固醇诱导的精神病)等，尤其是在长期 给药时，溶剂也促进增塑剂从聚氧乙烯(PVC)袋和管中溶出，并可能产生与这些 试剂有关的其它不良反应，例如神经疾病和肿瘤细胞耐药性。不良反应限制了该药 物在临床上的应用，因此，通过新的给药系统或制剂来提高多烯紫杉醇的溶解特性， 进一步提高其生物利用度，降低其毒性是十分必要的。
发明内容
本发明的目的是提供一种多烯紫杉醇脂质制剂及其制备方法。 本发明提供的多烯紫杉醇脂质制剂，包括如下组分多烯紫杉醇、聚乙二醇-
十二羟基硬脂酸酯和磷脂；所述磷脂中磷脂酰胆碱含量大于80%。
所述制剂中还包括助溶剂；所述助溶剂为碳原子总数为三以下的一元醇、二元
醇或三元醇。
所述助溶剂具体可为无水乙醇、丙二醇、甘油中的至少一种。 所述制剂中还可包括PH调节剂。 所述pH调节剂具体可为无水柠檬酸。
所述制剂可包括如下质量份的各组分多烯紫杉醇O. 1-5，聚乙二醇-十二羟基 硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶剂30-80，无水柠檬酸0. 1_0. 2。
所述制剂具体可包括如下质量份的各组分多烯紫杉醇l，聚乙二醇-十二羟基 硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶剂30-80，无水柠檬酸O. 18。
当然，该所述制剂也可以仅由如下质量份的各组分组成多烯紫杉醇l，聚乙 二醇-十二羟基硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶剂30-80，无水柠檬酸O. 18。
上述多烯紫杉醇脂质制剂为淡黄色油状液体，稳定性良好，稀释后能自发乳化 形成粒径为10-200nm范围的纳米粒子。
本发明还提供了一种制备所述的多烯紫杉醇脂质制剂的方法，包括如下步骤
1)将所述磷脂加入助溶剂，45-55X:加热溶解，得到溶液A;将多烯紫杉醇、 无水柠檬酸和聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯加入助溶剂、常温溶解，得到溶液B;2)将溶液A和溶液B混合。
本发明还提供了一种多烯紫杉醇纳米制剂，是用生理盐水溶液、葡萄糖水溶液 或注射用水将所述多烯紫杉醇脂质制剂稀释5-100倍，优选稀释20倍，得到的纳 米制剂。
上述多烯紫杉醇纳米制剂可直接作为注射用剂。 以上多烯紫杉醇纳米制剂的制备方法也属于本发明的保护范围。 发明人针对多烯紫杉醇临床应用存在的问题，采用高纯度磷脂和一种新的增溶 剂SolutoWHS15 (聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯)，制成一种新的脂质制剂，可以 降低毒性及过敏反应，同时该制剂在临用时用生理盐水溶液、葡萄糖水溶液、或注 射用水稀释后可自发乳化成纳米级的粒子，吸收效果大大增强，从而药效得以进一 步提高。
Solutol HS15，是一种新型的高性能、极低毒性的增溶剂，其优越性体现在
① 高增溶能力与吐温80的对比研究表明，Solutol HS15对疏水药物的溶解 能力随着溶剂浓度的增加而呈线性增加，而使用吐温80时，在达到较高浓度时药 物的溶解量并没有进一步增加。而另一实验表明，随着20%的Solutol HS15的使用， 不同药物如克霉唑、雌二醇、磺胺噻唑、心痛定、酰胺咪嗪、吡罗昔康等的水溶性 增加，根据分子结构不同其水溶解度被提高10-100因数，不管化学结构或药物溶 解的最大剂量怎样，胶粒的直径不变，均在13nm左右。Solutol HS15的这种高增 溶能力使低容量高剂量的注射成为可能。
② 低组胺释放使用前无需使用抗组胺剂和类皮质激素。与吐温80相比，静 脉注射SolutoWHS15后，狗的血清组胺水平低很多倍，15min后吐温80组的血清 组胺水平大于50000nMo1，而Solutol HS15组仅为220nMol; 60min后吐温80组的 血清组胺水平为247 nMol，而Solutol HS15组仅为8nMo1。
③ 低溶血作用与吐温80的对比研究表明，虽然随着增溶剂浓度的增加溶血 作用增强，但是吐温80组的红血球溶解量高于Soluto^HS15组10倍以上，表明 这种新的增溶剂具有较低的毒性和刺激性。
此外这种新的增溶剂还具有较高的生理耐受性、较低的粘度，并且可以采用蒸 汽灭菌法，无需昂贵的无菌制造工艺，目前该溶剂已收入德国药典，在美国和加拿 大已通过用于人体注射的审定。
本发明提供的多烯紫杉醇脂质制剂由于选用了新型的增溶剂Solutol⑧HS15以及合适的载体材料，大大提高了多烯紫杉醇的溶解性，同时可避免使用吐温80带 来的毒副作用，提高了多烯紫杉醇制剂的安全性和顺应性；而且该制剂稀释后自发 乳化形成纳米粒子，用于静脉注射，可以增加多烯紫杉醇的体内吸收，并且通过控 制其乳化粒度的大小可达到肿瘤靶向的目的；本发明的制备工艺简单易行，适合工 业化生产。
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。
图1为多烯紫杉醇纳米制剂乳化后粒度检测结果-光强粒度多峰分布 图2为多烯紫杉醇纳米制剂乳化后粒度检测结果-光强粒度正态分布
具体实施例方式
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。 实施例1、多烯紫杉醇脂质制剂的制备
一、 多烯紫杉醇脂质制剂的制备
1、 称取5g磷脂(德国Lipoid公司)和10g无水乙醇，45。C水浴加热溶解， 得到溶液A。
2、 称取lg多烯紫杉醇、15gHS15 (德国BASF公司)、0. 18g柠檬酸、20g甘 油、50g无水乙醇，常温溶解，得到溶液B。
3、 将溶液A和溶液B混合，室温搅拌、混合均匀，过滤，得到多烯紫杉醇脂 质制剂，通氮气保护，密封保存。
二、 多烯紫杉醇纳米制剂的制备
将步骤一制备的多烯紫杉醇脂质制剂用20倍体积的葡萄糖溶液稀释，得到多 烯紫杉醇纳米制剂。
三、 多烯紫杉醇纳米制剂的粒径测定
用美国Brookhaven仪器公司的ZetaPALS激光动态光散射仪检测多烯紫杉醇纳 米制剂的粒径。多烯紫杉醇纳米制剂的平均粒径为76nm。 6个月后，再次检测多烯 紫杉醇纳米制剂的粒径，平均粒径为74nm，无明显变化。
实施例2、多烯紫杉醇脂质制剂的制备
一、多烯紫杉醇脂质制剂的制备
1、称取8g磷脂(德国Lipoid公司)和12g丙二醇，55'C水浴加热溶解，得 到溶液A。2、 称取lg多烯紫杉醇、30gHS15 (德国BASF公司)、0. 18g柠檬酸、50g无 水乙醇，常温溶解，得到溶液B。
3、 将溶液A和溶液B混合，室温搅拌、混合均匀，过滤，得到多烯紫杉醇脂 质制剂，通氮气保护，密封保存。
二、 多烯紫杉醇纳米制剂的制备
将步骤一制备的多烯紫杉醇脂质制剂用20倍体积的生理盐水稀释，得到多烯 紫杉醇纳米制剂。
三、 多烯紫杉醇纳米制剂的粒径测定
用美国Brookhaven仪器公司的ZetaPALS激光动态光散射仪检测多烯紫杉醇纳 米制剂的粒径。在25±0. 1'C的稳定环境下，粒径检测结果见图l和图2。结果表 明，多烯紫杉醇纳米制剂的平均粒径为18. 4nm。 6个月后，再次检测多烯紫杉醇纳 米制剂的粒径，平均粒径为23.8nm，无明显变化。
实施例3、多烯紫杉醇脂质制剂的制备
一、 多烯紫杉醇脂质制剂的制备
1、 称取12g磷脂(德国Lipoid公司)和12g丙二醇，5(TC水浴加热溶解，得 到溶液A。
2、 称取lg多烯紫杉醇、36g HS15 (德国BASF公司)、6g甘油、0. 18g柠檬 酸、34g无水乙醇，常温溶解，得到溶液B。
3、 将溶液A和溶液B混合，室温搅拌、混合均匀，过滤，得到多烯紫杉醇脂 质制剂，通氮气保护，密封保存。
二、 多烯紫杉醇纳米制剂的制备
将步骤一制备的多烯紫杉醇脂质制剂用20倍体积的注射用水稀释，得到多烯 紫杉醇纳米制剂。
三、 多烯紫杉醇纳米制剂的粒径测定
用美国Brookhaven仪器公司的ZetaPALS激光动态光散射仪检测多烯紫杉醇纳 米制剂的粒径。多烯紫杉醇纳米制剂的平均粒径为126. 9rnn。 6个月后，再次检测 多烯紫杉醇纳米制剂的粒径，平均粒径为101. 9nm，无明显变化。
实施例4、多烯紫杉醇脂质制剂的制备
一、多烯紫杉醇脂质制剂的制备
1、称取20g磷脂(德国Lipoid公司)和10g无水乙醇，45。C水浴加热溶解，得到溶液A。
2、 称取lg多烯紫杉醇、50gHS15 (德国BASF公司)、0. 18g柠檬酸、20g无 水乙醇，常温溶解，得到溶液B。
3、 将溶液A和溶液B混合，室温搅拌、混合均匀，过滤，得到多烯紫杉醇脂 质制剂，通氮气保护，密封保存。
二、 多烯紫杉醇纳米制剂的制备
将步骤一制备的多烯紫杉醇脂质制剂用20倍体积的葡萄糖溶液稀释，得到多 烯紫杉醇纳米制剂。
三、 多烯紫杉醇纳米制剂的粒径测定
用美国Brookhaven仪器公司的ZetaPALS激光动态光散射仪检测多烯紫杉醇纳 米制剂的粒径。多烯紫杉醇纳米制剂的平均粒径为178nm。 6个月后，再次检测多 烯紫杉醇纳米制剂的粒径，平均粒径为181nm，无明显变化。
实施例5、急性毒性试验
1、 实验动物及分组
健康昆明种小鼠(18-22g) 100只，雌雄各半。将小鼠随机分为10组，每组IO只。
2、 多烯紫杉醇注射液的制备
按市售多烯紫杉醇注射液规格配制每ml含40mg多烯紫杉醇和1040mg吐温80的 样品，用含13%乙醇的注射用水稀释4倍，得到多烯紫杉醇注射液，作为对照组受试 物。
3、 给药
对照组I (IO只小鼠)腹腔注射多烯紫杉醇注射液，给药剂量为100mg/Kg。 对照组II (IO只小鼠)腹腔注射多烯紫杉醇注射液，给药剂量为150mg/Kg。 实验组I (IO只小鼠)腹腔注射实施例l制备的多烯紫杉醇脂质制剂，给药 剂量为100mg/Kg。
实验组II (IO只小鼠)腹腔注射实施例l制备的多烯紫杉醇脂质制剂，给药 剂量为150mg/Kg。
实验组III (IO只小鼠)腹腔注射实施例2制备的多烯紫杉醇脂质制剂，给药 剂量为100mg/Kg。
实验组IV (IO只小鼠)腹腔注射实施例2制备的多烯紫杉醇脂质制剂，给药剂量为150mg/Kg。
实验组V (IO只小鼠)腹腔注射实施例3制备的多烯紫杉醇脂质制剂，给药 剂量为100mg/Kg。
实验组VI (IO只小鼠)腹腔注射实施例3制备的多烯紫杉醇脂质制剂，给药 剂量为150mg/Kg。
实验组VH (IO只小鼠)腹腔注射实施例4制备的多烯紫杉醇脂质制剂，给药 剂量为100mg/Kg。
实验组VIII (IO只小鼠)腹腔注射实施例4制备的多烯紫杉醇脂质制剂，给药 剂量为150mg/Kg。
观察给药后实验组与对照组小鼠的毒性反应症状。
结果表明给药剂量为100mg/kg时，对照组小鼠表现出明显的毒性反应症状， 四肢伏地、呼吸急促、状态萎靡，给药后3天有小鼠死亡， 一周后小鼠死亡率为20%; 而注射多烯紫杉醇脂质制剂的4组小鼠毒性反应症状较轻，表现为反应迟缓、状态 萎靡、体重减轻，给药后一周小鼠无死亡。
给药剂量为150mg/kg时，对照组小鼠给药后l天出现死亡， 一周后小鼠死亡率 为70%;而注射多烯紫杉醇脂质制剂的4组小鼠毒性反应症状有所减轻，实验组II、 IV、 VI、 VE1分别在给药后第2天、第3天、第2天、第3天开始有小鼠死亡，给药后一 周小鼠死亡率分别为40%、 50%、 50%、 40%，低于对照组。
以上实验结果表明，与多烯紫杉醇注射液相比较，多烯紫杉醇脂质制剂的毒性 有所降低。
权利要求
1、一种多烯紫杉醇脂质制剂，包括如下组分多烯紫杉醇、聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯和磷脂；所述磷脂中磷脂酰胆碱含量大于80％。
2、 如权利要求l所述的制剂，其特征在于所述制剂中还包括助溶剂；所述助 溶剂为碳原子总数为三以下的一元醇、二元醇或三元醇。
3、 如权利要求2所述的制剂，其特征在于所述助溶剂为无水乙醇、丙二醇、 甘油中的至少一种。
4、 如权利要求1至3中任一所述的制剂，其特征在于所述制剂中还包括pH调 节剂。
5、 如权利要求4所述的制剂，其特征在于所述pH调节剂为无水拧檬酸。
6、 如权利要求5所述的制剂，其特征在于所述制剂包括如下质量份的各组分 多烯紫杉醇0.1-5，聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶剂30-80， 无水柠檬酸0. 1-0.2。
7、 如权利要求6所述的制剂，其特征在于所述制剂包括如下质量份的各组分 多烯紫杉醇l，聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶剂30-80，无水 柠檬酸O. 18。
8、 一种制备权利要求7所述的多烯紫杉醇脂质制剂的方法，包括如下步骤1) 将所述磷脂加入助溶剂，45-55t:加热溶解，得到溶液A;将多烯紫杉醇、无 水柠檬酸和聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯加入助溶剂、常温溶解，得到溶液B;2) 将溶液A和溶液B混合。
9、 一种制备多烯紫杉醇纳米制剂的方法，是用生理盐水溶液、葡萄糖水溶液或 注射用水将权利要求1至7中任一所述多烯紫杉醇脂质制剂稀释5-100倍，优选稀释 20倍，得到的纳米制剂。
10、 一种多烯紫杉醇纳米制剂，是用权利要求9所述方法制备得到的。
全文摘要
本发明公开了一种多烯紫杉醇脂质制剂及其制备方法。本发明的多烯紫杉醇脂质制剂，包括如下组分多烯紫杉醇、聚乙二醇-十二羟基硬脂酸酯和磷脂。本发明提供的多烯紫杉醇脂质制剂，提高了多烯紫杉醇制剂的安全性和顺应性，该制剂稀释后可自发乳化形成纳米粒子用于静脉注射，增加多烯紫杉醇的体内吸收，并且可达到肿瘤靶向的目的。本发明的制备工艺简单易行，适合工业化生产。
文档编号A61K9/127GK101632637SQ20081011697
公开日2010年1月27日 申请日期2008年7月22日 优先权日2008年7月22日
发明者张小宁, 晚 王, 邬月明, 文 邰, 郝艳丽 申请人:清华大学