洛伐他汀脂蛋白的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药品技术领域，尤其涉及一种洛伐他汀脂蛋白的合成方法。
【背景技术】
[0002]目前针对动脉粥样硬化主要是通过识别动脉粥样硬化不稳定斑块并及早临床干预，增强斑块的稳定性，然而多数药物治疗存在的主要问题即药物缺乏选择特异性致使药效降低。动脉粥样硬化疾病是严重危害人类健康的一大类疾病，致死率极高。基于此，通过构建具有靶向能力的载药系统，可以降低药物剂量，提高药物传递至病灶部位的浓度，从而有效发挥药物疗效。高密度脂蛋白是血浆中存在的内源性脂蛋白颗粒，具有许多重要的生理功能，例如胆固醇逆转运、抗炎、抗氧化和抗血栓等。鉴于HDL优良的生物特性和独特的结构特征，目前HDL已广泛地在体外重组并应用于抗癌抗菌药物传递系统中，这些仿生型的高密度脂蛋白载药系统在结构或组成上与天然的HDL类似，同时在体内表现出相似的生理功能。有报道发现AS斑块处大量聚集的巨噬细胞和泡沫细胞高度表达SR-ΒΙ受体，这为rHDL实现斑块递药提供理论基础。在前期已将体外重新构建的仿生脂蛋白，作为包载心血管药物的载体，体内外实验均证实该载体可以有效传递药物至斑块内，然而同时发现这种载药系统在体内到达斑块部位前，会被肝脏大量摄取，最终导致药物传送至靶区的量降低，从而降低了靶向效率。但是与之相应的维生素B6衍生物的合成方法还不完善，合成较为困难且合成条件要求较高。
[0003]现有的洛伐他汀脂蛋白的制备方法步骤复杂，效率低且成功率无法得到保障。
【发明内容】
[0004]本发明就是针对上述问题，提供一种操作简单，效率高且成功率高的一种洛伐他汀脂蛋白的制备方法。
[0005]为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案。
[0006]洛伐他汀脂蛋白的制备方法，包括下步骤。
[0007](1)称取处方量磷脂、十八胺等脂质材料药物，置于10mL氯仿甲醇混合溶剂的混合溶剂中溶解，50° C减压抽真空，旋转蒸发lOmin除去有机溶剂，室温冷却，液态脂质在烧瓶壁上形成一层均匀的脂质薄膜，放入恒温真空干燥箱，得到干燥的脂质薄膜。然后在已经形成脂质膜的烧瓶中注入15mL水合溶液进行水合，得到的脂质混悬液，用超声细胞破碎仪冰浴分散，得到的初乳经微孔滤膜过滤，即得LT-NLC混悬液。
[0008](2)甘油三酯为中性脂质，制备的LT-NLC的Zeta电位绝对值较低，因此考察加入正电荷脂质十八胺对粒径和电位的影响。固定磷脂用量为200mg，分别制备一系列不同十八胺/磷脂摩尔比1:1.5，1: 3，1: 5，1:7.2和无0L的LT-NLC。按“2.1 ”项下制备LT-NLC，考察不同0L/PC摩尔比对于LT-NLC粒径、电位的影响。
[0009](3)固定磷脂用量为200mg，调节三油酸甘油酯与磷脂的比例分别为1:5，1:10，1:13以及1:20，按“2.1”项下制备LT-NLC。
[0010](4)固定磷脂用量为50mg，分别制备药脂比为1:20、1:10、1:33、1:50的LT-NLC。按2.1项下制备LT-NLC，考察处方中不同药脂比对LT-NLC粒径、包封率的影响。作为一种优选方案，取0.2mg维生素B6溶解于5mlDMS0中，投入6倍摩尔当量的⑶I ;在30°C下，超声水浴反应半小时后，加入300ulDIEA及900ul腐胺。
[0011]作为一种优选方案，制备洛伐他汀仿生高密度脂蛋白，具体工艺如下:取5mLLT-NLC与15mg的载脂蛋白在4 °C磁力搅拌8小时，并透析除去胆酸钠，透析液为pH8.0Tris 即得。
[0012]本发明有益效果:本发明成功构建了透明质酸修饰的洛伐他汀仿生高密度脂蛋白载药系统，通过单因素考察，筛选出最优处方。同时，通过体外理化性质表征，结果表明该载体粒径分布均匀，Zeta电位为负，包封率和载药量均符合要求。透射电镜照片并证实HA包覆整个rHDL并在其表面形成致密的水化层。最后评价了该载体的体外释放行为，结果表明HA-LT-rHDL具有良好的缓释作用，因此可以作为有效的药物贮库，发挥长效治疗作用。
【具体实施方式】
[0013]洛伐他汀脂蛋白的制备方法，包括下步骤。
[0014](1)称取处方量磷脂、十八胺等脂质材料药物，置于10mL氯仿甲醇混合溶剂的混合溶剂中溶解，50° C减压抽真空，旋转蒸发lOmin除去有机溶剂，室温冷却，液态脂质在烧瓶壁上形成一层均匀的脂质薄膜，放入恒温真空干燥箱，得到干燥的脂质薄膜。然后在已经形成脂质膜的烧瓶中注入15mL水合溶液进行水合，得到的脂质混悬液，用超声细胞破碎仪冰浴分散，得到的初乳经微孔滤膜过滤，即得LT-NLC混悬液。
[0015](2)甘油三酯为中性脂质，制备的LT-NLC的Zeta电位绝对值较低，因此考察加入正电荷脂质十八胺对粒径和电位的影响。固定磷脂用量为200mg，分别制备一系列不同十八胺/磷脂摩尔比1:1.5，1: 3，1: 5，1:7.2和无0L的LT-NLC。按“2.1 ”项下制备LT-NLC。
[0016](3)固定磷脂用量为200mg，调节三油酸甘油酯与磷脂的比例分别为1:5，1:10，1:13以及1:20，按“2.1”项下制备LT-NLC，考察磷脂与三油酸甘油酯比例对粒径、包封率的影响。
[0017](4)固定磷脂用量为50mg，分别制备药脂比为1:20、1:10、1:33、1:50的LT-NLC。按2.1项下制备LT-NLC，考察处方中不同药脂比对LT-NLC粒径、包封率的影响。作为一种优选方案，取0.2mg维生素B6溶解于5mlDMS0中，投入6倍摩尔当量的⑶I ;在30°C下，超声水浴反应半小时后，加入300ulDIEA及900ul腐胺。
[0018]透明质酸与LT-rHDL体积比对粒径和电位的影响较大，随着两者体积比增加，粒径先升高后降低且电位逐渐降低。当LT-rHDL过量时，即HA与LT-rHDL比例为1:2时，电位为正，当二者相当时，即两者比例为1:1时，虽呈现负电位，却由于较接近电中性，体系不稳定，粒径增加并易析出沉淀。当透明质酸过量时，电位持续下降，体系较稳定，由于透明质酸吸附在LT-rHDL表面，粒径较小。因此，在制备时必须保证透明质酸过量，考虑到最终载体的药物浓度和制剂的稳定性，采用HA溶液与LT-rHDL的体积比为1:1制备HA-LT-rHDL。
【主权项】
1.洛伐他汀脂蛋白的制备方法，其特征在于，包括下步骤: (1)称取处方量磷脂、十八胺等脂质材料药物，置于10mL氯仿甲醇混合溶剂的混合溶剂中溶解，50° C减压抽真空，旋转蒸发lOmin除去有机溶剂，室温冷却，液态脂质在烧瓶壁上形成一层均匀的脂质薄膜，放入恒温真空干燥箱，得到干燥的脂质薄膜；然后在已经形成脂质膜的烧瓶中注入15mL水合溶液进行水合，得到的脂质混悬液，用超声细胞破碎仪冰浴分散，得到的初乳经微孔滤膜过滤，即得LT-NLC混悬液； (2)甘油三酯为中性脂质，制备的LT-NLC的Zeta电位绝对值较低，因此考察加入正电荷脂质十八胺对粒径和电位的影响；固定磷脂用量为200mg，分别制备一系列不同十八胺/磷脂摩尔比 1:1.5，1: 3，1: 5，1:7.2 和无 0L 的 LT-NLC ;按 “2.1 ” 项下制备 LT-NLC ； (3)固定磷脂用量为200mg，调节三油酸甘油酯与磷脂的比例分别为1:5，1:10，1:13以及1:20，按“2.1”项下制备LT-NLC，考察磷脂与三油酸甘油酯比例对粒径、包封率的影响； (4)固定磷脂用量为50mg，分别制备药脂比为1:20、1:10、1:33、1:50的LT-NLC;按2.1项下制备LT-NLC，考察处方中不同药脂比对LT-NLC粒径、包封率的影响；作为一种优选方案，取0.2mg维生素B6溶解于5mlDMS0中，投入6倍摩尔当量的CDI ;在30°C下，超声水浴反应半小时后，加入300ulDIEA及900ul腐胺。2.根据权利要求1所述的洛伐他汀脂蛋白的制备方法，其特征在于:取5mLLT-NLC与15mg的载脂蛋白在4°C磁力搅拌8小时，并透析除去胆酸钠，透析液为pH8.0Tris即得。3.根据权利要求1所述洛伐他汀脂蛋白的制备方法，其特征在于:取0.2mg维生素B6溶解于5ml DMS0中，投入6倍摩尔当量的⑶I ;在30°C下，超声水浴反应半小时后，加入300ul DIEA 及 900ul 腐胺。
【专利摘要】洛伐他汀脂蛋白的制备方法属于药品技术领域，尤其涉及一种洛伐他汀脂蛋白的合成方法。本发明提供一种操作简单，效率高且成功率高的一种洛伐他汀脂蛋白的制备方法。洛伐他汀脂蛋白的制备方法，包括下步骤。（1）称取处方量磷脂、十八胺等脂质材料药物，置于10mL氯仿甲醇混合溶剂的混合溶剂中溶解。（2）甘油三酯为中性脂质，制备的LT-NLC的Zeta电位绝对值较低，因此考察加入正电荷脂质十八胺对粒径和电位的影响。（3）固定磷脂用量为200mg，调节三油酸甘油酯与磷脂的比例分别为1:5，1:10，1:13以及1:20。（4）固定磷脂用量为50mg，分别制备药脂比为1:20、1:10、1:33、1:50的LT-NLC。
【IPC分类】A61P9/10, A61K31/47, A61K47/42
【公开号】CN105311640
【申请号】CN201410376203
【发明人】史树元
【申请人】史树元
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2014年8月3日