专利名称：一种紫杉醇磁性纳米脂质体的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种抗癌药物脂质体制剂及其制备方法，尤其涉及紫杉醇脂质 体的制备方法。
背景纟支术
紫杉醇[5"是近20年来抗肺瘤药物领域的重大发现，分子式为C47H5^4N ，分子
质量853. 9，具有高度亲脂性，不溶于水，血浆蛋白结合率89。/。-98%,终末半衰 期平均值为5. 3-17. 4h，主要经肝脏代谢，肾脏清除仅5%。此药于1983年开始 用开卵巢癌和乳腺癌的临床研究，1992年经FDA批准上市。它作用机理独特， 可促进微管蛋白装配成微管，但抑制微管的解聚，从而导致细胞死亡，从而 导致维管束的排列异常，使纺锤体失去正常功能导致细胞死亡，其对多种肿 瘤有治疗效果，尤其对乳腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌及黑色素瘤治疗效果 更突出。紫杉醇主要从红豆杉中提取，但红豆杉中紫杉醇含量并不高，如紫 杉醇含量最高的树皮中含量也^f又为0. 01 %-0. 02 % ,提取lkg的紫杉醇需要 15-30吨树皮，〗旦紫杉醇的市场需求量却4支高，目前美国的年需求为300kg, 而且以每年20%的速度增长。 现有的上市剂型为注射型，以聚羟乙基蓖麻油乙醇(l:l)为溶剂，浓度为6g/L 的紫杉醇注射液，在4'C下可稳定5个月，使用前用右旋葡糖苷等稀释至稀释到 0.3- 1. 2mg/ml，用药量为135 mg/m2。由于溶剂及紫杉醇本身的毒副作用阻碍 了其在临床上的进一步应用。为改变这一现状，研究人员对紫杉醇进行了生产 及药物剂型改变的研究。在生产上实现其它工艺生产紫杉醇，如合成法、生物 技术法、真菌发酵法等。药剂学方面的改性方法有前体药物法、乳剂法、脂质 体法、和环糊精包埋等。其中脂质体法可以提高药物的给药量，实现药物在体内的緩慢释放，增加了药物在体内的代谢时间，同时，因脂质体可以使用水作 溶剂，避免了因使用有机溶剂产生的毒副作用，具有4交好的发展前景。
目前，紫杉醇尚未有具有4交好靶向效果的靶向制剂。
发明内容
本发明的目的就是为了克服目前没有较好的靶向作用的制剂的缺点，提供 紫杉醇磁性纳米脂质体，本发明还提供了这种磁性脂质体的制备方法。 本发明的制备方法
1、 FeA纳米石兹核的制备
以共沉淀法制备Fe304磁性纳米粒子，在反应体系中加入一定体积pH为8-12 的氨水，不断搅拌下滴加Fe"、 Fe,昆合液(按Fe"/Fe、2-G的比例混合)， 并用pH=12的氨水保持体系pH值，同时施加超声作用。铁盐溶液滴加完毕 后，继续搅拌反应一段时间，于恒温水浴熟化，之后用去离子水离心清洗，
至检测无cr存在为止，再用无水乙醇洗涤，在清洗的过程中施加超声作用。
溶液真空千燥，研磨，即得Fe304磁性纳米粒子粉末。经研究其显著影响因 素和适合的反应条件为沉淀剂氨水的用量以铁盐混合液与氨7jc体积比为 1: 8最佳，維持反应体系pH=10,并施加氮气保护；铁盐溶液浓度以1. Omol 1 为宜，且Fe、Fe'、l: 2,在合成阶段和清洗阶段分别施加超声处理，合成 阶段适宜的超声条件声强为348 w. cm—2、处理次数6次；清洗阶段适宜的 超声条件声强为276 w. crrT2、处理次数4次。可以制得平均粒径在10nm 左右、质量磁化率为9. 05 x 10—2 m3 kg—的Fe304磁性纳米粒子。
2. Fe3()4磁性纳米粒子表明改性
将已制好的Fe^磁性纳米粒粉末加入到已调好PH值的100mL氨水中，加热 搅拌至某一温度，緩慢加入一定量的油酸，保温20min,冷却，用i兹铁将絮 状沉淀吸住，倾去废液。余下的絮沉物加入一定量丙酮处理，除去多余的 油酸及丙酮，即得产品。考察不同的pH值、油酸用量及改性温度对改性效果的影响。pH值选择范围为pH=6-10;油酸用量为油酸f兹粉 (W/W)=l: 1. 5-1: 5;温度考察范围在40-80°C。结果表明，pH=9，油酸用量 为油酸:磁粉=1:2,温度为7(TC时有较理想的表面改性效果。油酸的包覆过 程需要吸收能量，在7(TC以下，随着温度的升高油酸吸附量增大，至7(TC 时达到平衡，再随着温度继续升高，解吸的速度也迅速增大甚至大于吸附 速度，使吸附量反而下降。 紫杉醇磁性纳米脂质体的制备
油相(硬脂酸)、表面活性剂(吐温-80)、助表面活性剂(乙醇)在73土2 。C水浴中混合，滴加入一定量的蒸馏水，形成透明体系，迅速加入分散好 的磁液，搅拌均匀，形成含磁悬液，将该混悬液注入置于冰浴中的水分散， 得到产品粒子悬液，将悬液透析清洗，冷冻干燥，即得磁性固体脂质纳米 粒产品。较理想的紫杉醇磁性固体脂质纳米粒给药体系的制备条件为硬 脂酸为0.5g, K(硬脂酸/(Tween80+乙醇))=1:8,吐温80:乙醇水 =9. 8: 39. 3: 50. 9,硬脂酸改性磁粒=1: 1 (W/W),紫杉醇用量为100mg,所制 得的紫杉醇磁性固体脂质纳米粒平均粒径为150-170nm,包封药量为98.29 mg,药物包封率为98. 29%(w/w)。 4.体内外》兹耙向性
本发明的紫杉醇磁性纳米脂质体，体外释放实验表明，具有足够的磁响应 性，其在外加磁场的作用下可以顺利的到达并聚集在靶部位。在体外磁导 向定位实验中，在设定的磁场范围(0. 4T、 0. 6T、 0. 8T)、作用时间(10-120min) 条件下，所制备的紫杉醇磁性固体脂质纳米粒子显示出良好的体外磁靶向 性，尤其是在磁场强度为0. 8T，作用时间为30min时，可以达到在靶区的 100%滞留率。
体内的靶向实验分别给予大鼠紫杉醇脂质体和紫杉醇磁性纳米脂质体，在肝
部位施加O. 5T的磁场，处死后测定耙部位的紫杉醇浓度，实验证明耙部位与非靶向部位存在显著差别(P<0. 2)。 5.靶向治疗棵鼠胂瘤
取对数生长期的SPCA-I细胞，注射棵鼠前肢腋下，待胂瘤生长至6mm时， 将棵鼠随机分为六组，分别给予注射药物分别为l)尾静脉注射生理盐水 (NS)组；2)尾静脉注射空白脂质体(LPS); 3 )尾静脉紫杉醇脂质体(Taxol -LPS ); 4 )尾静脉注射磁性空白脂质体(Mag - LPS ); 5 )尾静脉注射磁性 靶向脂质体(Taxol-Mag),体外不施加磁场；6 )尾静脉注射磁性靶向脂 质体(Taxol-Mag )，体外施加》兹场，f兹场强度为0. 5特斯^立(T )。注射的 紫杉醇磁性纳米脂质体乳液中紫杉醇的含量为，注射量为0. 05ml/10g。重 量抑瘤率为
分组
抑制率(％ )
生理盐水组
0. 316
空白脂质体 -8. 01
紫杉醇脂质体 10. 10
磁性脂质体 1. 74
磁性紫杉醇脂质体(无磁场) 19. 16
磁性紫杉醇脂质体(加磁场) 27. 53
重(g)
0.718 ±
0. 775 ± 0. 350
0. 645 ± 0. 257
0. 705 ± 0. 165
0. 580 ± 0. 066
0. 520 ± 0. 189*
注 *为P < 0. 05,相对生理盐水。从已有的试验结果我们可以看到磁性脂质体作为 一种药物剂型还是有较大的发
展前景的。
权利要求
1、采用微乳液-低温固化的方法制备紫杉醇磁性纳米脂质体，其过程如下油相(硬脂酸)、表面活性剂(吐温-80)、助表面活性剂(乙醇)在73±2℃水浴中混合，滴加入一定量的蒸馏水，形成透明体系，迅速加入分散好的磁液，搅拌均匀，形成含磁悬液，将该混悬液注入置于冰浴中的水分散，得到产品粒子悬液，将悬液透析清洗，冷冻干燥，即得磁性固体脂质纳米粒产品。
2、 权利要求1所述的磁性纳米脂质体，其配方为硬脂酸为5-10g，油酸 为1. 5-2. 5g, FeA为5-10g，吐温-80为6-12g,乙醇为2-5g,水为35-65g 时制备的脂质体粒子粒径在150nm 170nm之间，脂质体具有较好的稳定性 和磁响应性；当紫杉醇用量为lg时具有最大的药物包封率，为98. 29%(W/W)。
3、 权利要求1所述的磁性纳米脂质体，其脂质体内核为Fe304磁性纳米粒子， 可以借助外加磁场的作用将脂质体送到靶部位。
4、 权利要求1所述的紫杉醇磁性纳米脂质体的制备方法由以下步骤构成 (1)以铁盐和氨水共沉淀法制备Fe304磁性纳米粒子，经研究其显著影响因 素和适合的反应条件为沉淀剂氨水的用量以铁盐混合液与氨水体积比为 1: 8最佳，维持反应体系pH=10,并施加氮气保护；铁盐溶液浓度以1. Omol -L一1 为宜，且Fe":Fe'、l: 2,在合成阶段和清洗阶段分别施加超声处理，可以 制得平均粒径在10mn左右、质量磁化率为9. 05 x l(T2 m3 , kg—1的FeA磁性 纳米粒子；(2 )选择微乳液-低温固化法制备紫杉醇磁靶向固体脂质纳米粒给药系 统，结果如下油酸能有效地对Fe^磁性纳米粒子U兹核)进行表面亲油改 性，使其能很好地被脂质材料包埋，并保持稳定；较理想的紫杉醇磁性纳 米脂质体的制备条件为硬脂酸为Q. 5g, 改性的FeA粒子为0. 5g,吐温-80为0. 8g,乙醇为3.2g，水为4g,紫杉醇用量为100mg;所制得的紫杉醇/F兹性固体脂质纳米粒平均粒径200rnn左右，药物包封率为87. 70%(w/w), 可见微乳液-低温固化法是较理想的制备紫杉醇磁性固体脂质纳米粒的方法；(3) 对于制备的脂质体进行低温冷冻干燥，得到紫杉醇磁性固体纳米脂质 体；(4) 施加的聚乙二醇的量对实验结果的影响脂质体各组分的配比为Fe304 l.OOg,吐温-80 1.60g,乙醇6.40g,硬脂酸1. OOg,水8g混合反应制备 紫杉醇磁性纳米脂质体乳液后，倒入含有6g聚乙二醇-800的36ml生理盐 水组中，具有4交好的稳定性。
全文摘要
紫杉醇是近20年来抗肿瘤药物领域的重大发现，具有高度亲脂性，不溶于水。现有的上市剂型为注射型，以聚羟乙基蓖麻油∶乙醇(1∶1)为溶剂，使用前用右旋葡糖苷等稀释至稀释到0.3-1.2mg/ml。由于溶剂及紫杉醇本身的毒副作用阻碍了其在临床上的应用。目前，紫杉醇尚未有较好靶向效果的靶向制剂。本发明的目的就是提供紫杉醇磁性纳米脂质体靶向制剂，这种磁性脂质体的制备方法是采用微乳液-低温固化的方法制备，其过程如下油相(硬脂酸)、表面活性剂(吐温-80)、助表面活性剂(乙醇)在73±2℃水浴中混合，滴加入一定量的蒸馏水，形成透明体系，迅速加入分散好的磁液，搅拌均匀，形成含磁悬液，将该混悬液注入置于冰浴中的水分散，得到产品粒子悬液，将悬液透析清洗，冷冻干燥，即得磁性固体脂质纳米粒产品。
文档编号A61K47/02GK101590017SQ200810028379
公开日2009年12月2日 申请日期2008年5月29日 优先权日2008年5月29日
发明者吴新荣, 辛胜昌 申请人:广州军区广州总医院