本发明涉及一种含透明质酸或其盐的复配组合物及其应用，具体涉及一种功能多元、功效立体的含透明质酸或其盐的复配组合物及其应用，属于护肤品
技术领域：
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背景技术：
：从古至今，皮肤白皙、紧致弹润、没有皱纹等年轻化的外观是爱美人士追求的终极目标。为了实现上述目标，护肤品领域有许多种办法，比如：果酸换肤法，该方法是利用小分子羟基酸如甘醇酸、柠檬酸、醋酸、水杨酸、扁桃酸、辛酰水杨酸、苹果酸、杏仁酸等与皮肤接触，进行皮肤角质的剥离，促使老化角质脱落，加速角质细胞及少部分上层表皮细胞的更新速度，促进真皮层内弹性纤维增生，提高皮肤亮度、改善毛孔粗大、提高皮肤弹性，但是这种方法对皮肤屏障会造成极大的损害，增加皮炎、湿疹和敏感肌的发生率。其次，使用美白剂，如烟酰胺、杜鹃花酸、传明酸、抗坏血酸、苯乙基间苯二酚、光甘草定等化学成分，这些成分的作用机理有抗氧化、抑制酪氨酸酶活性、减少黑色素合成和转运等，通过这些作用起到皮肤亮泽的目的，但是这些化学物质有的有细胞毒性，有的易引起皮肤过敏，增加罹患敏感肌的几率。近年来，一些小分子肽类物质通过传导信号来调节皮肤内生物活性因子，达到间接美白、年轻化的作用，但是这种方式的原料不仅价格非常昂贵，且因为小分子肽类穿越皮肤屏障的原因，导致起效速度非常缓慢。透明质酸是由d-葡萄糖醛酸及n-乙酰葡糖胺的双糖单位组成的酸性多糖，是皮肤和其它组织中广泛存在的天然生物分子，具有极好的保湿作用，被国际上称为理想的天然保湿因子，此外透明质酸还具有较强的消皱功能，可增加皮肤弹性，延缓皮肤衰老，同时还能促进表皮细胞的增殖和分化、清除氧自由基，可预防和修复皮肤损伤。专利cn201610629387.6公开了一种透明质酸抗衰组合物及其制备方法和应用，将水解透明质酸或其盐(分子量70kda)、低分子量透明质酸或其盐、高分子量透明质酸或其盐进行组合，起到立体保湿、清除自由基、细胞修复、恢复皮肤弹性等抗衰老作用。但是该组合物不具有美白提亮肤色的作用，并且对混合以后的肤感没有详细描述。专利cn201510037950.6公开了一种蜂巢状透明质酸及其制备方法，将高分子量透明质酸或其盐(1000kda-2000kda)和低分子量透明质酸或盐(5kda-400kda)按3：7的比例混合，得到一种蜂巢状透明质酸结构，达到更好的补水效果，但是该组合不具备美白功能，也没有对该组合的肤感进行改善。专利cn109260095a公开了一种小分子玻尿酸原液，包括透明质酸钠交联聚合物、透明质酸钠、乙酰化透明质酸钠、水解透明质酸钠、有机溶剂和植物提取物，还包括聚谷氨酸钠、乙酰壳糖胺、edta二钠和甘油。该专利中的小分子玻尿酸原液主要发挥修复和保水功能，且在该专利的配方中，聚谷氨酸、乙酰壳糖胺、透明质酸钠、乙酰化透明质酸钠和水解透明质酸钠的用量均比较大，超出常规用量，造成了产品的成本非常高；且肤感粘腻，外观粘稠，并且该产品在美白提亮方面无明显效果。通过以上现有技术可以看出，目前常用的美白、紧致弹润的护肤品或多或少存在一定的问题，且没有同时具有美白提亮肤色、改善肤感的多功能组合物出现。技术实现要素：基于现有技术中的不足，本发明提供了一种含透明质酸或其盐的多元化功能性复配组合物，该复配组合物通过具有不同链段和分子片段的多糖的复配，达到了意想不到的美白提亮效果，且同时具有提高皮肤弹性、舒缓敏感肌肤、改善肤感等多元化功能，从多个维度平衡皮肤透明质酸的含量，改善因年龄增长而造成的体内透明质酸的流失。本发明具体技术方案如下：一种含透明质酸或其盐的复配组合物，该复配组合物包括以下重量百分含量的有效成分：乙酰壳糖胺15-30％，分子量2kda-4kda的水解透明质酸或其盐7-15％，分子量5kda-10kda的水解透明质酸或其盐5-10％，分子量100kda-300kda的透明质酸或其盐ⅰ30-45％，分子量1100kda-1800kda的透明质酸或其盐ⅱ2-10％，乙酰化透明质酸或其盐8～18％，γ-聚谷氨酸5-18％。进一步的，上述复配组合物中，优选包括以下重量百分含量的有效成分：乙酰壳糖胺24％，分子量2kda-4kda的水解透明质酸或其盐12％，分子量5kda-10kda的水解透明质酸或其盐6％，分子量100kda-300kda的透明质酸或其盐ⅰ38％，分子量1100kda-1800kda的透明质酸或其盐ⅱ4％，乙酰化透明质酸或其盐10％，γ-聚谷氨酸6％。当各有效成分选择该优选用量时，对酪氨酸酶的抑制作用增强，黑色素合成量减少，对成纤维细胞的增殖作用显著，从而使皮肤亮度增加、皮肤弹性改善等作用更为明显。进一步的，上述复配组合物中，所述水解透明质酸盐、透明质酸盐和乙酰化透明质酸盐中，所述的盐均指的是它们的可溶性金属盐，在护肤品中可用的有钠盐、钾盐、钙盐、锌盐等，常用的为钠盐。进一步的，上述复配组合物中，所述水解透明质酸或其盐、透明质酸或其盐ⅰ、透明质酸或其盐ⅱ属于不同分子量段的透明质酸类物质，所述乙酰化透明质酸或其盐是透明质酸或其盐的乙酰化衍生物。这些成分在现有技术中都有报道，可以从市场上购买，或者可以采用现有技术中报道的方法获得。例如，水解透明质酸可以采用芽孢杆菌a50cgmccno.5744发酵培养得到的芽孢杆菌透明质酸酶对透明质酸或其盐进行降解的方式得到，当然也可以采用其他现有技术中公开的方法得到。乙酰化透明质酸或其盐可以通过对透明质酸或其盐进行酰化改性的方式得到，例如采用专利cn109206537a中记载的方式得到，当然也可以采用其他的方式。在本发明中，所述乙酰化透明质酸或其盐的分子量为5kda-300kda，乙酰基含量为23wt％-29.5wt％。进一步的，所述乙酰壳糖胺化学名称为n-乙酰-d-氨基葡萄糖(nag)，其是选用植物来源发酵原料、采用非转基因安全菌种发酵得到的一种安全温和的小分子氨基单糖，具有优异的透皮吸收性，能提高皮肤的水合，是一种高品质的多功能保湿剂，同时它可以增强透明质酸合成酶(has)的活性，促进皮肤角质形成细胞与成纤维细胞对透明质酸的合成与分泌，提高皮肤内透明质酸含量。乙酰壳糖胺还可以袪除角质并维持表层角质细胞正常的新陈代谢，不健康的角质细胞代谢使得其表面糖蛋白纠结在一起，不易缩成小皮屑而脱落，nag可使角质细胞表面糖蛋白代谢正常化，让推进到最外层的角质层容易形成微小的鳞片状而自然脱落。进一步的，γ-聚谷氨酸(γ-polyglutamicacid，简称γ-pga)是由l-谷氨酸(l-glutamicacid)、d-谷氨酸(d-glutamicacid)通过谷氨酸单体α-氨基和γ-羧基交联结合形成的聚氨基酸化合物。它是一种无毒、对环境和人类无害的氨基酸聚合物，其分子量一般在100kda-1000kda之间，相当于500-5000个左右的谷氨酸单体。γ-聚谷氨酸在化妆品、护肤品中主要起到抗氧化作用，同时具有极强的保湿能力，可促进皮肤健康。实验发现，γ-聚谷氨酸还具有抑制透明质酸酶活性的作用，能够延长透明质酸类物质在体内的存留时间。本发明上述复配组合物中，2kda-4kda和5kda-10kda的水解透明质酸或其盐协同，能加强渗入肌肤的效果，使细胞充盈水分，角质层充分水合，皮肤屏障间隙增大，利于其他营养成分的吸收，100kda-300kda的透明质酸或其盐可以通过体内透明质酸受体cd44的主动运输，携带乙酰壳糖胺和聚谷氨酸进入皮肤深层发挥作用，1100kda-1800kda的透明质酸或其盐和乙酰化透明质酸或其盐停留在角质层和皮肤表面，起到保护皮肤和阻止体内水分挥发的作用，七种物质联合作用，能显著增加乙酰壳糖胺和γ-聚谷氨酸的美白提亮功效，协同复配，可以增加皮肤中透明质酸含量，显著提高人皮肤成纤维细胞的增殖率，使皮肤水润、莹亮、具有弹性，且强健皮肤屏障功能，意外地发现对敏感肌肤也有改善作用。进一步的，本发明上述复配组合物制备方法简单，将各有效成分混合均匀即可得到。各有效成分加入顺序没有要求，加入方式没有要求，可以一次性加入，可以分批或连续加入。本发明上述复配组合物的各有效成分均是生物技术来源，安全性高，对皮肤刺激小，通过它们的搭配组合，具有美白提亮、提高皮肤弹性、修复舒缓肌肤、肤感丝滑的特点，并且具有较明显的抑制透明质酸酶活性的作用，能够从多个方面立体、持久的护肤，在护肤品中有较好的应用价值。进一步的，本发明提供了上述含透明质酸或其盐的复配组合物在护肤品中的应用。进一步的，所述护肤品可以是精华水、面膜、睡眠面膜、膏霜、酊剂、精华乳以及护肤品常见其他类型。这些类型可以根据现有技术中公开的方法进行选方和制备。进一步的，所述含透明质酸或其盐的复配组合物在护肤品中作为皮肤护理成分、作为肌肤美白提亮成分或作为肌肤抗衰老成分。进一步的，本发明还提供了一种护肤品，该护肤品中包括上述含透明质酸或其盐的复配组合物。该含透明质酸或其盐的复配组合物在护肤品中的含量大于等于0.1wt％时，表现出美白提亮肌肤、提高皮肤弹性、修复舒缓肌肤等功效，其用量一般为0.1-6wt％，优选为0.4～5wt％。所述护肤品的类型与前面所述定义一致。本发明的有益效果：1、本发明各成分为生物技术来源，对皮肤刺激性小，安全性更高，可以适合于各种肤质。2、本发明将5种不同类型的透明质酸类物质按照一定的比例复配，显著增加了乙酰壳糖胺和γ-聚谷氨酸的美白功效，7种物质协同复配用于皮肤美白提亮中，避免了如杜鹃花酸等常规美白成分可能带来的细胞毒性等不良作用。3、本发明通过对具有不同链段和分子片段的多糖的协同复配，可以显著提高人皮肤成纤维细胞的增殖率，促进合成和分泌胶原纤维、弹性纤维、透明质酸等细胞外基质，使皮肤水润、莹亮，具有弹性，且强健皮肤屏障功能，对敏感肌肤也有改善作用。4、本发明通过乙酰壳糖胺、不同分子片段透明质酸、γ-聚谷氨酸的复配，促进体内合成透明质酸的同时，减少透明质酸的降解，从而提高了皮肤的透明质酸含量，改善了护肤品的肤感，与单一透明质酸或简单复配透明质酸相比，使用时的肌肤感受度和吸收度更好，使用效果更佳。5、本发明所得复配组合物，在护肤品中的添加量少，仅为0.1～6％，因此大大降低了使用量，从而减低了成本，且能达到预期效果。具体实施方式为了更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。需要说明的是，本发明未详细说明的工艺参数、原料等均按照本领域常规技术手段进行。下述实施例中，所用乙酰壳糖胺来自于华熙生物科技股份有限公司，该产品的市售名称为hyafactortm-nag乙酰壳糖胺。所用不同分子量的水解透明质酸或其盐、不同分子量的透明质酸或其盐、乙酰化透明质酸或其盐、γ-聚谷氨酸也来自于华熙生物科技股份有限公司。实施例及对比例按照下表1的成分和含量选择复配组合物的配方，然后将各成分按比例混合，然后剪切混合均匀，过60目或100目筛，即得复配组合物。表1复配组合物配方(wt％)上表1中，如无特别说明，nag表示乙酰壳糖胺；水解ha表示分子量2kda-4kda的水解透明质酸；水解sh表示分子量5kda-10kda的水解透明质钠；shⅰ表示分子量100kda-300kda的透明质酸钠ⅰ；shⅱ表示透明质酸钠ⅱ；ac-ha表示乙酰化透明质酸，乙酰基含量为23％～29.5％；γ-pga表示γ-聚谷氨酸。效果验证通过以下试验，验证不同配方所得的复配组合物的性能。1、抑制酪氨酸酶活性采用多巴氧化法测定，取对数期b16黑色素细胞，pbs洗一遍，胰蛋白酶消化后调节细胞密度为5×104个/ml，加入6孔板，每孔2ml，培养过夜。后弃去旧培养液，设置样品组、模型组(forskolin)、对照组(细胞+培养基)、空白对照组(培养基)，每组三个平行。模型组加入forskolin至终浓度为20μm；样品组同时加入forskolin和实施例或对比例的复配组合物，forskolin终浓度为20μm，实施例或对比例的复配组合物的终浓度为0.5％。各组于细胞培养箱培养56小时。弃去培养液，pbs洗两遍，用500μl1.0％tritonx100裂解细胞，加入0.5％左旋多巴500μl，37℃反应4h，酶标仪490nm处测定各组酪氨酸酶含量，并按照下式计算酪氨酸酶抑制率。酪氨酸酶抑制率(％)＝(模型组-样品组)/(模型组-空白对照组)×100表2复配组合物对b16细胞酪氨酸酶活性的影响样品酪氨酸酶活性抑制率(％)实施例168.2实施例278.4实施例367.3实施例465.3实施例565.9实施例660.5对比例143.3对比例211.6对比例32.1对比例438.7对比例528.6对比例639.5对比例712.1对比例830.2对比例925.7对比例1022.8由上表的数据可知，实施例1-6的复配组合物对酪氨酸酶的活性抑制率均大于60％，显著优于对比例1-10的复配组合物，在6个实施例中，以实施例2复配组合物的酪氨酸酶活性抑制率最强，在10个对比例中，以对比例1的酪氨酸酶的活性抑制率最强，但因为对比例1中各成分用量选择不当，表现出来的抑制效果远低于各实施例的组合物。2、黑色素生成实验在6孔细胞培养板上以密度为5×104细胞/孔接种b16黑色素细胞悬液，每孔2ml，培养24h，设置样品组、模型组(forskolin)、对照组(细胞+培养基)、空白对照组(培养基)，每组三个平行。模型组加入浓度为20μm的forskolin；样品组同时加入forskolin和实施例或对比例的复配组合物，forskolin终浓度为20μm，实施例或对比例的复配组合物的终浓度为0.5％。镜检观察细胞内黑色素颗粒了解细胞状态。胰蛋白酶消化细胞，在细胞计数后添加500μl0.1mol/l(含10％dmso)naoh溶液裂解，80℃加热30min后酶标仪测定450nm吸光度，测定细胞内黑色素含量，按照下式计算黑色素抑制率。黑色素抑制率(％)＝(模型组-样品组)/(模型组-空白对照组)×100表3复配组合物对b16细胞黑色素抑制的影响样品黑色素抑制率(％)实施例188.2实施例292.1实施例387.3实施例485.3实施例585.9实施例680.3对比例150.3对比例220.9对比例315.7对比例442.4对比例539.6对比例645.5对比例725.1对比例841.7对比例938.2对比例1032.5从上表数据可以看出，实施例1-6的复配组合物黑色素抑制率均大于80％，显著优于对比例1-10的复配组合物，在6个实施例中，以实施例2的复配组合物的黑色素抑制率最强。3、对成纤维细胞增殖的影响将冻存的人成纤维细胞(hsf)复苏，在60mm直径培养皿中培养48h，传代至100mm直径培养皿中继续培养24h至80％融合，将生长旺盛的hsf细胞用胰酶消化后，调节细胞密度为5×104/ml，接种于96孔细胞培养板。设置样品组、对照组(细胞+培养基)、空白对照组(无细胞+培养基)，样品组和对照组每孔加入100μl细胞悬液，置二氧化碳培养箱37℃、5％co2常规培养24h后，弃去培养液，样品组换成100μl含0.5％实施例及对比例样品的溶液，对照组和空白对照组加入相同量的无血清培养液。每组设6个平行孔，置二氧化碳培养箱37℃、5％co2培养48小时。每孔加入10μl的wst-1溶液，置二氧化碳培养箱37℃、5％co2避光培养2h，酶标仪450nm下测吸光度，按下式计算相对增殖率(rgr)。rgr＝a/a0×100％式中：rgr——相对增殖率，％；a——样品组吸光度，扣除空白对照组；a0——对照组吸光度，扣除空白对照组。表4复配组合物对成纤维细胞增殖的影响样品细胞相对增殖率(％)实施例1115.89实施例2125.21实施例3113.45实施例4116.82实施例5112.24实施例6109.38对比例1104.56对比例298.4对比例3103.35对比例498.3对比例5101.01对比例6103.01对比例7102.86对比例899.85对比例9101.57对比例10102.35人皮肤成纤维细胞是组成皮肤真皮的主要结构成分，其可合成和分泌胶原纤维、弹性纤维、网状纤维、透明质酸等细胞外基质，对于保持皮肤强度和弹性、修复损伤等具有重要作用。成纤维细胞活性的高低与其相应的产生的胶原蛋白、弹性纤维、透明质酸这些物质的量正相关，所以成纤维细胞的的增殖能力高低能够反应某种物质对皮肤状态的影响程度。以上实验结果表明实施例2样品组合物具有最好的促进成纤维细胞增殖的能力。实施例1-6所得组合物对成纤维细胞的增殖率均大于对比例。应用例1为了验证本发明含透明质酸或其盐的多元化功能性复配组合物在美白肌肤、提高肌肤弹性、改善肤感等方面的作用，将实施例2和对比例1的复配组合物制备成美白精华液，观察在肤色、皮肤弹性以及肤感等方面的改善作用。1、配制美白精华液美白精华液的配方如下表5所示，为了凸显复配组合物的功效，选用最基础的精华液配方进行实验。表5美白精华液配方原料名称％重量水至100甘油2丁二醇3海藻糖1复配组合物0.8防腐剂适量制备方法：1、配方量纯化水灭菌后备用；2、将复配组合物分散到甘油和丁二醇的混合溶液中，备用；3、将步骤2的分散液添加至纯化水中，搅拌溶解；4、依次投入配方中其他物料，添加灭菌纯化水至规定量，搅拌均匀即得，外观为无色透明澄清液体，ph值在5.5-7.0范围内。2、试验方法2.1选取志愿者选取志愿者30名，年龄25-45岁，男女不限。各志愿者主诉反映均有皮肤暗沉问题，其中有8名皮肤敏感者参加实验。2.2样品准备试验样品：实施例2制备得到的美白精华液；对照样品：对比例1制备得到的美白精华液。2.3试验方法试验采用半脸对照的方式，一侧使用试验样品，另一侧使用对照样品，早晚各一次。分别于样品使用前、使用后2周、4周拍摄高分辨照片，检测面部经皮水分散失量、皮肤弹性，分析光泽(亮)度的变化，重复测量3次取平均值。2.4所用仪器皮肤弹性测定仪mpa580(courage+khazaka公司，德国)、皮肤水分流失测定仪tewametertm300(courage+khazaka公司，德国)、visiacr(canfield，美国)。2.5试验结果2.5.1美白精华液对皮肤弹性的影响结果采用使用后r2值与涂抹前r2值的比值表示，以涂抹前的初始值设定为100％。涂后2周，使用实施例2的美白精华液的皮肤与涂抹前相比弹性增加13.32％，涂抹4周后弹性增加24.56％。而使用对照样品的皮肤弹性增加明显低于试验样品。结果如表6所示。表6美白精华液对皮肤弹性的影响使用前使用2周后使用4周后实施例2组100.00％113.32％124.56％对比例1组100.00％102.85％104.28％2.5.2美白精华液对皮肤水分散失的影响结果采用使用后tewl值与涂抹前tewl值的比值表示，以涂抹前的初始值设定为100％，涂后4周，使用实施例2的美白精华液与使用对比例1的美白精华液相比，经皮水分散失率显著降低，表明皮肤的屏障功能增强。结果如表7所示。表7美白精华液对皮肤水分散失的影响使用前使用2周后使用4周后实施例2组100.00％92.85％85.19％对比例1组100.00％98.87％96.98％2.5.3美白精华液对皮肤白度的影响以visiacr拍摄照片中选取标准光2拍摄的图片，用ipp软件计算lab值，用l值来表征皮肤的白度变化，结果采用使用后l值与使用前l值的比值表示，涂抹前的初始值设定为100％，使用后2周，实施例2组美白精华液与对比例1组相比，皮肤白度显著增加，使用后4周与对比例1组相比，白度提升8.5％，结果具显著性。结果如表8所示。表8美白精华液对皮肤白度的影响2.5.4主观使用感受评分在使用过程中，志愿者对肤色改善、吸收度、肤感、使用过程中的刺激性等方面进行记录和评价。肤色改善和吸收度评价标准如下表9所示：表9实验结束后，主观使用感受评分结果如下表10所示：表10美白精华液使用中的主观评价表注：肤色改善＝(有改善人数+显著改善人数)/总人数×100％吸收度＝吸收快的人数/总人数×100％在实验的过程中，30例志愿者没有反馈测试样品有刺激性，或干痒不适，8名敏感肌患者对本品也均耐受，表明本品安全无刺激，也可用于敏感肌。且以实施例2组的肤色改善程度、吸收度以及肤感最优。当前第1页12