专利名称：乙肝基因疫苗转移因子和免疫核糖核酸及工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于一种防治肝炎的特异免疫药物和工艺。
乙型肝炎(HB)是全球性传染病，全世界现有乙肝病毒表面抗原(HBBAg)慢性携带者在3亿以上，我国已超过1亿，因此国内外都非常重视乙型肝炎的防治，已研制出多种疫苗用于乙肝的预防，并获得较好的预防效果，在治疗方面，由于至今尚无针对乙肝病毒的特效药物，免疫治疗已成为乙型肝炎的主要治疗方法之一，过去使用的免疫核糖核酸和转移因子，是一种非特异的免疫治疗药物，近年研制出的用血源疫苗免疫动物而制备的，能针对乙肝病毒的特异免疫核糖核酸(HB-IRNA)和转移因子(HB-TF)，用于临床已取得较好的疗效，但这种药物在原料来源、制造工艺，使用效能等方面还存在不少缺点，为克服这些缺点，我们采用高新技术产品，研制了新型的抗乙肝免疫新药——基因疫苗免疫核糖核酸和转移因子，(G.HB-IRNA和G.HB-TF)。并设计了联合制造新工艺。
G.HB-IRNA和G.HB-TF联合制造工艺如下a)、用转移基因细胞B4a分泌的乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白经纯化制成的重组疫苗，或用其它高效基因工程乙肝疫苗或与血源疫苗混合，按5-60ug/只免疫猪、猴、羊、牛;
b)、在动物抗体高峰期，剖杀动物取出脾脏和淋巴组织，捣碎研磨成匀浆;
c)、反复冻融，在超声条件下(35-60千赫)破细胞膜;
d)、放入透析袋对水(D.W)透析或放入超滤器进行超滤;
e)、透外液或超下液过HB抗原或抗体柱吸收抑制因子;
f)、吸收后按已有的TF制造技术，最终制成G.HB-TF;
g)、留下的透内或超上匀浆加入0.1-0.8%曲里通×100表面活性剂，在超声条件下进一步破坏细胞核膜后，按已有的IRNA制造技术，最终制成G.HB-IRNA，这样通过一次加工，可同时获得两个产品。
这种G.HB-TF和G.HB-IRNA与目前使用的HB-TF和HB-IRNA比较具有如下优点1、过去使用HB-TF和HB-IRNA均是用人血清，制成的血源性HB疫苗免疫动物而制造的，因而来源有限，加之制备过程复杂，成本高，价格昂贵，难以满足需要，而本发明制成的G.HB-TF和G.HB-IRNA是采用高技术产品，基因工程乙肝疫苗而制造的，它可无限量的制造，来源丰富，制造方便，成本低，价格便宜。
2、过去是采用单一工艺生产的，一次只能出一个产品，而本发明是采用联合工艺一次加工而成，一次可生产出G.HB-TF和G.HB-IRNA两个产品，这样能进一步提高工效，降低成本。
3、用高新技术产品，基因工程乙肝疫苗制造的G.HB-TF和G.HB-IRNA的成功率明显高于血源疫苗制造的HB-TF和HB-IRNA。
4、由于本发明选用了高性能基因工程乙肝疫苗来制造TF和IRNA它的活性将高于过去的HB-TF和HB-IRNA，这从90年的第七届国际病毒性肝炎会议的资料中已有佐证“含两个亚型的疫苗较单一亚型者免疫原性增强，含前S1.2蛋白的疫苗可增强HBsAg的免疫原性和减少无反应性，使免疫应答出现早，抗体滴度高，持续时间长”。我国91年的资料进一步证明“基因重组疫苗的阳性出现率明显高于血源疫苗，免疫一个月后，前者的几何平均滴度(GMT)是429.7mIU，而后者仅有207.4mIU，6个月后前者可达628mIU，且抗体阴性率高达100%”。
5、如果将G.HB-TF和G.HB-IRNA与乙肝疫苗协同使用，将会产生更好的预防效果。
上述优点已充分显示，本发明的实施和G.HB-TF和G.HB-IRNA的出现将为乙型肝炎的防治提供一种效果好、生产简便、成本低的新型免疫药剂，它将成为第二代的抗乙肝免疫新药。
权利要求
1.一种用基因工程疫苗制造的防治乙肝的转移因子(G.HB-TF)和免疫核糖核酸(G.HB-IRNA)其特征是，用高新技术生产的基因工程疫苗免疫动物，以联合制造的新工艺加工而成，它的原料可无限量生产，加工方便，同时该药物活性高，出现早、持续时间长，免疫一个月后抗体几何平均滴度(GMT)为492.7mIU，六个月达628mIU阳性率高达100%。
2.一种用基因工程疫苗制造的G.HB-TF和G.HB-IRNA的制造工艺，它是根据TF存在于细胞质而IRNA存在于细胞核的特点和利用高新技术产品，基因工程疫苗设计建立的联合新工艺，其特征是a)、用转基因细胞B4a分泌的乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白经纯化制成的重组疫苗，或用其它高效基因工程乙肝疫苗或与血源疫苗混合，按5-60ug/只免疫猪、猴、羊、牛;b)、在动物抗体高峰期，剖杀动物取出脾脏和淋巴组织，捣碎研磨成匀浆;c)、反复冻融，在超声条件下(35-60千赫)破细胞膜;d)、放入透析袋对水(D.W)透析或放入超滤器进行超滤;e)、透外液或超下液过HB抗原或抗体柱吸收抑制因子;f)、吸收后按已有的TF制造技术，最终制成G.HB-TF;g)、留下的透内或超上匀浆加入0.1-0.8%曲里通×100表面活性剂，在超声条件下进一步破坏细胞核膜后，按已有的IRNA制造技术，最终制成G.HB-IRNA，这样通过一次加工，可同时获得两个产品。
3.一种用基因工程疫苗制造的防治乙型肝炎的G.HB-TF和G.HB-IRNA的用途，其特征是除能用于乙型肝炎的治疗外，而且还能用于乙型肝炎的预防，特别是与乙肝疫苗，协同使用预防效果更好。
全文摘要
本发明涉及一种基因工程疫苗制造的防治乙肝的转移的因子和免疫核糖核酸及工艺。乙肝是病毒性肝炎中危害十分严重的传染病，目前世界有慢性携带者3亿以上，我国已超过1亿。不少患者发展为肝硬化或肝癌。以往的抗乙肝转移因子和免疫核糖核酸，虽具有较好的防治效果，但它来源有限，工艺复杂，价格昴贵，活性和成功率不高，为克服之不足我们采用高技术产品设计了这种免疫新药和工艺，它是用处理动物脏器采用联合新工艺一次制造而成，将成为第二代抗乙肝新药。
文档编号A61K35/28GK1098315SQ93111640
公开日1995年2月8日 申请日期1993年8月4日 优先权日1993年8月4日
发明者姜光斗, 易泳梅, 姜高分, 姜促激 申请人:姜光斗