专利名称：抗细小核糖核酸病毒的化合物和组合物,它们的药物用途,及其合成原料的制作方法
技术领域：
本发明涉及某些类似肽的和模拟肽的化合物，这些化合物可有利地抑制细小核糖核酸病毒3C蛋白酶，特别是鼻病毒3C蛋白酶的酶促活性，并可延缓在细胞培养物中病毒的生长。本发明还涉及这些化合物在药物组合物中的用途和对鼻病毒感染的治疗学上的治疗。本发明进一步涉及合成这些化合物的方法和在这些合成中适用的化合物。
细小核糖核酸病毒感染可以通过抑制蛋白水解3C酶来治疗。这些酶是细小核糖核酸病毒自然成熟所需要的。它们负责将基因组、大的多聚蛋白质自动催化裂解成必需的病毒蛋白。3C蛋白酶家族的成员是半胱氨酸蛋白酶，其中巯基最经常地裂解谷氨酰胺-甘氨酸酰胺键。3C蛋白酶的抑制作用被认为是阻滞了多聚蛋白质的蛋白水解性裂解，这反过来又会通过干扰病毒颗粒的产生来延缓病毒的成熟和复制。因此，利用选择性的可被特异性识别的小分子抑制这种半胱氨酸蛋白酶的加工应该是治疗这种性质的病毒感染和尤其是治疗普通感冒的一个重要和适用的方法。
最近已经发现了细小核糖核酸病毒3C蛋白酶的酶促活性的一些小分子抑制剂(即，抗细小核糖核酸病毒的化合物)。见，例如1999年1月5日授与Webber等人的美国专利第5,856,530号；1997年12月16日由Dragovich等人提交的美国专利申请第08/991,282号；1997年12月16日由Webber等人提交的美国专利申请第08/991,739号；和1999年4月29日由Dragovich等人提交的美国专利申请第09/301,977号。也可见Dragovich等人的“不可逆人鼻病毒3C蛋白酶抑制剂的以结构为基础的设计、合成和生物学的评价”，医药化学杂志(J.Med.Chem.)(1999)，第42卷，第7号，1203-1212，1213-1224；和Dragovich等人的“不可逆人鼻病毒3C蛋白酶抑制剂的固相合成”，生物有机与医药化学(Bioorg.&Med.Chem.)(1999)，第7卷，589-598。但是仍然期望发现作为特别有效的抗细小核糖核酸病毒剂的小分子化合物。
其它相关的半胱氨酸蛋白酶如组织蛋白酶的抑制剂已在例如1994年12月20日授予Zimmerman等人的美国专利第5,374,623号；1996年3月12日授予Mallamo等人的美国专利第5,498,616号；和WIPO国际公布号WO94/04172，WO95/15749，WO97/19231和WO97/49668中有所叙述。仍然需要靶向细小核糖核酸病毒3C半胱氨酸蛋白酶的且具有所需要的药物特性，如高度特异性的抑制剂。
这些目的通过发现下列通式I的化合物已经达到 其中Y是-N(Ry)-，-C(Ry)(Ry)-或-O-，其中每个Ry独立地是H或较低烷基；
R1是未取代的或取代的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、或-C(O)R16，其中R16是未取代的或取代的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、杂环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基或胺；R2和R8每个独立地是H、F或未取代的或取代的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基；R3和R9每个独立地是H或未取代的或取代的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、-OR17、-SR17、-NR17R18、-NR19NR17R18或-NR17OR18，其中R17，R18和R19每个独立地是H、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基或酰基；R4是适当的有机部分；R5、R6和R7每个独立地是H、F或低级烷基；m是0或1；p是从0至5的整数；A1是CH或N；每个A2独立地代表C(R10)(R11)，N(R12)，S，S(O)，S(O)2或O，其中每个R10、R11和R12独立地是H或低级烷基；每个A3独立地代表C(R10)(R11)，N(R12)，S，S(O)，S(O)2或O，其中每个R10、R11和R12独立地是H或低级烷基；当p是1、2、3或4时，A4是N(R13)，C(R10)(R11)或O，当p是0(即A3不存在)时，A4是N(R13)(R14)，C(R10)(R11)(R12)和O(R14)，假如当p是0和A4是O(R14)时，A1不是CH，其中每个R10、R11和R12独立地是H或低级烷基，每个R13是H、烷基、芳基或酰基，和每个R14是H、烷基或芳基。
假如不超过两个杂原子连续地出现在上述由A1、(A2)m、(A3)p、A4和C＝O形成的环中，当A2存在(即m＝1)时在环中的每个虚线表示一个单键和当A2不存在(即m＝0)时在环中的每个虚线表示一个氢原子。
除了式I化合物以外，本发明的抗细小核糖核酸病毒剂还包括这些化合物的药物前体、药物活性代谢物和药物上可接受的盐和溶剂化物。
在式I的优选的实施方案中，R2和R8不都是氢，和R3和R9不都是氢。在式I的另一个优选的实施方案中R2是选择性被卤素取代的苄基；R3是较低的烷基；R4是Cbz，和R7、R8和R9每个是H。
在优选的实施方案中，R1是取代的亚甲基，例如，-CH2NR20R21，-CH2OR20，-CH2OC(O)R20，-CH2ON20R21或-CH2SR20，其中R20和R21每个独立地选自H，选择性取代的烷基，环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和-C(O)R22，其中R22选自选择性取代的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、杂环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、和胺，选择性地R20、R21和R22中的任意两个与它们所结合的原子一起形成一个4-7员环。在替换的优选实施方案中，R1是-CR23＝CR24R25或-C≡CR26，其中，R23、R24、R25和R26每个独立地选自H和选择性取代的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基。在另一个优选的实施方案中，R1是-C(O)R16基团，其中R16是-NR27R28，而R27和R28是每个独立地选自H和选择性取代的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基，或R27和R28与它们所结合的氮原子一起形成一个4-7员杂环。在另一个优选的实施方案中，R1是单或双环杂芳基或芳基。
特别优选的化合物是如式I-a所描述的化合物 其中R1至R6，A1至A4，m、p和Y是如上所定义的。
在式I-a的化合物的优选的实施方案中，R1选自单环和双环杂芳基和芳基。
在式I-a中的R2优选地选自未取代的和取代的苄基，优选苄基、单取代的苄基和二取代的苄基，其中取代基独立地选自低级烷基、低级烷氧基和卤素。
R3优选地是选择性取代的烷基(例如2-丙基、2-甲基-2-丙基，或2-甲基-1-丙基)或芳基甲基(例如未取代或取代的苯基甲基或萘基甲基)。
R4优选地是选自-[C(O)]n-R15的适当的有机部分，其中n是0或1和R15是选择性取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基、烷氧基，环烷氧基，芳氧基或杂芳氧基。在特别优选的实施方案中，R4是苄氧基羰基、芳基羰基或杂芳基羰基，更优选的是杂芳基羰基，其中杂芳基部分是具有一至三个选自O、N和S的杂原子的五员杂环，更优选具有至少一个氮杂原子和至少一个氧杂原子的五员杂环(例如未取代或取代的1，2-噁唑基(即，异噁唑基)，1，3-噁唑基(即，噁唑基)或噁二唑基(1，2，3-噁二唑基，1，2，4-噁二唑基或1，2，5-噁二唑基)。当杂芳基部分是噁二唑基时，未取代的和单甲基取代的1，2，4-噁二唑基是优选的。在特别优选的实施方案中，杂芳基部分是未取代的或被一个或两个甲基和/或卤素(F、Cl、Br或I)(氯和氟是优选的)所取代的3-异噁唑基或5-异噁唑基。
优选地，部分 选自-CH2CH2C(O)NH2；-CH2CH2C(O)NH-烷基；-CH2NHC(O)CH3；和 其中n是1或2。该部分更优选地是 在优选的实施方案中，化合物、药物前体，药物上可接受的盐和药物活性代谢物和溶剂化物具有相当于在H1-HeLa细胞培养测定中的EC50小于或等于100μM的抗细小核糖核酸病毒活性。
本发明也涉及如式II，优选子式II-a的中间体，这些中间体适用于式I的某些化合物的合成中 其中q是从0至5的整数，优选1或2；A11是C、CH或N；A12和每个A13独立地选自C(R61)(R62)，N(R63)，S，S(O)，S(O)2和O，其中每个R61、R62和R63独立地是H或低级烷基；A14是NR64，其中R64是H、烷基、芳基或酰基，和R64优选地是酰胺氮的适当的保护基团，假定不超过两个杂原子连续地存在于由A11、A12、(A13)P，A14和C＝O形成的式II中的上述环中；R141和R142独立地是H、F或低级烷基或R142不存在；虚线表示可选择的化合价键，当这种键存在时，R142不存在和A11是C；R51是H、烷基、芳基或酰基，优选酰胺氮的保护基团；R52、R53和R54每个独立地选自H、羟基、烷基、酰基、芳基、杂芳基、羰基或羟基的适当的保护基团，OR57和NR57R58，其中R57选自烷基、芳基和Si(R59)3，R58选自烷基、芳基、烷氧基、芳氧基和Si(R59)3，其中每个R59独立地是烷基或芳基；或R52、R53和R54中任意两个一起形成＝O；和R55和R56每个独立地是H或氮的适当的保护基。
R52、R53和R54中至少一个是NR57R58的式II化合物是优选的。在式II-a优选的实施方案中，R52和R53一起形成＝O和R54选自烷基、酰基、芳基、杂芳基、OR57和NR57R58，其中R57和R58如上所定义。在另一个优选的实施方案中，R52是H，R53是OH和R54选自烷基、酰基、芳基、杂芳基、OR57和NR57R58，其中R57和R58如上所定义。
本发明也涉及式II和II-a的化合物的药物上可接受的盐。
本发明还涉及含有治疗学上有效量的至少一种式I的化合物，或它们的药物前体、药物学上可接受的盐，药物活性代谢物或溶剂化物(统称为，“活性剂”)的药物组合物。此外，本发明涉及通过施用治疗学上有效量的至少一种这样的活性剂来抑制细小核糖核酸病毒3C蛋白酶的方法。发明详述根据本领域中的常规用法， 用于本文中的结构式中表示部分或取代基与核心或骨架结构连接点的键。
如在本文中所用的，“烷基”是指饱和的和/或不饱和的碳原子和氢原子的直链或支链单价基团，如甲基(Me)、乙基(Et)，丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、乙烯基、戊烯基、丁烯基、丙烯基、乙炔基，丁炔基、丙炔基、戊炔基、己炔基等。除非另外指明，这些基团可以是未取代的(即只含有碳和氢)或是被一个或多个适当的取代基(例如一个或多个卤素，如F、Cl、Br或I，其中F和氯是优选的)所取代的。“低级烷基”是指在其链上具有1至4个碳原子的烷基。
“环烷基”是指含有3至14个碳环原子，其中每个碳原子可以是饱和的或不饱和的非芳香单价单环、双环或三环基团。除非另外指明，这些基团可以是未取代的或是被一个或多个适当的取代基所取代的。环烷基的说明性实例包括下列部分 “杂环烷基”是指饱和的或不饱和的，含有3至18个环原子，包括1至5个选自氮、氧和硫的杂原子的非芳香单价单环、双环或三环基团。除非另外指明，这些基团可以是未被取代的或是被一个或多个适当的取代基所取代的。杂环烷基的说明性实例包括下列部分 “芳基”是指含有6至18个碳环原子的芳香单价单环、双环或三环基团。除非另外指明，这些基团可以是未被取代的或是被一个或多个适当的取代基所取代的。芳基的说明性实例包括以下部分 “杂芳基”是指含有4至18个环原子，包括1至5个选自氮、氧和硫的杂原子的芳香单价单环、二环或三环基团。除非另外指明，这些基团可以是未被取代的或是被一个或多个适当的取代基所取代的。杂芳基的说明性实例包括以下部分 “杂环基”是指杂芳基或杂环烷基。
“酰基”是指-C(O)-R基，其中R是适当的取代基。
“硫酰基”是指-C(S)-R基，其中R是适当的取代基。
“磺酰基”是指-SO2R基，其中R是适当的取代基。
“羟基”是指-OH基。
“胺”或“氨基”是指-NH2基团。“选择性取代的”胺是指-NH2基团，其中没有、有一个或两个氢原子被适当的取代基所置换。二取代的胺可以具有桥型取代基，即，形成包括胺氮的杂环结构。
“烷基氨基”是指-NHRa基，其中Ra是烷基。
“二烷基氨基”是指-NRaRb基，其中Ra和Rb每个独立地是烷基。
“烷氧基”是指-ORa基，其中Ra是烷基。烷氧基的示例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基等。“低级烷氧基”具有1-4个碳原子的烷基部分。
“烷氧基羰基”是指-C(O)ORa，其中Ra是烷基。
“烷基磺酰基”是指-SO2Ra，其中Ra是烷基。
“烷基氨基羰基”是指-C(O)NHRa，其中Ra是烷基。
“二烷基氨基羰基”是指-C(O)NRaRb，其中Ra和Rb每个独立地是烷基。
“巯基”是指-SH基。
“烷硫基”是指-SRa基，其中Ra是烷基。
“羧基”是指-C(O)OH基。
“氨基甲酰基”是指-C(O)NH2基。
“芳氧基”是指-ORc，其中Rc是芳基。
“杂芳氧基”是指-ORd，其中Rd是杂芳基。
“芳硫基”是指-SRc，其中Rc是芳基。
“杂芳硫基”是指-SRd，其中Rd是杂芳基。
术语“适当的有机部分”是指对本领域技术人员来说，例如通过常规试验可识别的对本发明的化合物的抑制活性没有不利影响的任何有机部分。适当的有机部分的说明性实例包括，但不限于，羟基、烷基、氧代基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、酰基、磺酰基、巯基、烷硫基、烷氧基、羧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基甲酰基、芳硫基、杂芳硫基等。
术语“取代基”或“适当的取代基”是指如通过常规试验可被本领域技术人员识别或选择的任何适当的取代基。这些适当的取代基的说明性实例包括羟基、卤素、氧代基、烷基、酰基、磺酰基、巯基、烷硫基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基甲酰基、芳氧基、杂芳氧基、芳硫基、杂芳硫基等。
术语“选择性取代”旨在明确地表示指定的基团是未取代的或是被一个或多个适当的取代基取代的，除非选择性取代基被明确地指定，在这种情况下该术语表示该基团是未取代的或被指定的取代基所取代。各种基团如所指出的可以是未取代的或取代的(即，它们被选择性取代)。
“药物前体”是指在生理条件下或通过溶剂化作用或代谢作用转化成具有药物活性的特定的化合物的化合物。
“药物活性代谢物”是指特定的化合物在身体中通过代谢作用产生的药理活性化合物。
“溶剂化物”是指特定化合物保留这种化合物的生物效力的药物上可接受的溶剂化物形式。溶剂化物的实例包括本发明的化合物与水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸或乙醇胺相结合。
“药物上可接受的盐”是指保留特定化合物的游离酸和碱的生物效力并且不是在生物学上或其它方面不良的盐。药物上可接受的盐的实例包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、丁炔-1，4-二醇化物、己炔-1，6-二醇化物、苯甲酸盐、氯代苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。
如果本发明的化合物是碱，所需要的盐可以用本领域熟知的任何适当的方法制备，包括用无机酸，如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，或用有机酸，如乙酸、马来酸、丁二酸、扁桃酸、延胡索酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖苷酸，如葡糖醛酸或半乳糖醛酸、α-羟基酸，如柠檬酸或酒石酸、氨基酸，如天冬氨酸或谷氨酸、芳香酸，如苯甲酸或肉桂酸、磺酸，如对甲苯磺酸或乙磺酸等处理该游离碱。
如果本发明的化合物是酸，所需要的盐可以用本领域熟知的任何适当的方法制备，包括用无机或有机碱，如胺(伯胺、仲胺或叔胺)；碱金属或碱土金属氢氧化物等处理游离酸。适当的盐的说明性实例包括从氨基酸如甘氨酸和精氨酸；氨；伯胺、仲胺和叔胺；和环形胺，如哌啶、吗啉和哌嗪衍生的有机盐，以及从钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂衍生的无机盐处理该游离酸。
在化合物、盐或溶剂化物是固体的情况下，本领域的技术人员应该理解本发明的化合物、盐和溶剂化物可以不同的晶体形式存在，所有这些均在本发明和特定的结构式的范围之内。
本发明的化合物可以单一的立体异构体、外消旋物和/或对映体和/或非对映体的混合物的形式存在。所有这些单一的立体异构体、外消旋物和它们的混合物均在本发明的宽范围之内。但是，优选地，本发明的化合物以光学纯的形式使用。
如在本文中所用的，“光学纯”是指化合物含有至少足够量的单一对映体以产生具有所需要的药理学活性的化合物。优选地，光学纯的本发明的化合物含有至少90％的单一异构体(80％对映体过量)，更优选至少95％(90％对映体过量)，更优选至少97.5％(95％对映体过量)，和最优选至少99％(98％对映体过量)。
优选地，式I的化合物和它们的药物上可接受的盐、药物前体，活性代谢物和溶剂化物具有相当于在H1-HeLa细胞培养测定中的EC50小于或等于100μM的抗细小核糖核酸病毒活性，更优选抗鼻病毒活性。
在优选的实施方案中，式I化合物是如上所定义的子式I-a。本发明的特别优选的实施方案具有式I-b 其中R1至R4如上所定义。在式I-b的特别优选的实施方案中，R1是单-或双-环杂芳基。优选地R2选自未取代的、单取代和二取代的苄基，其中取代基独立地选自低级烷基，低级烷氧基和卤素。R3优选地是烷基(例如2-丙基、2-甲基-2-丙基或2-甲基-1-丙基)或芳基甲基(例如未取代的或取代的苯基甲基或萘基甲基)。可变的R4优选的是苄氧基羰基、芳基羰基或杂芳基羰基，更优选的是杂芳基羰基，其中杂芳基部分是具有1至3个选自O、N和S的杂原子的五员杂环，更优选的R4是具有至少一个氮杂原子和至少一个氧杂原子的五员杂环(例如，未取代的或取代的1，2-噁唑基(即，异噁唑)，1，3-噁唑基(即，噁唑基)或噁二唑基(1，2，3-噁二唑基，1，2，4-噁二唑基或1，2，5-噁二唑基)；优选的噁二唑基是未取代的和单甲基取代的1，2，4-噁二唑基。在特别优选的实施方案中，杂芳基部分是3-异噁唑基和5-异噁唑基，它们是未取代的或被一个或两个选自甲基和卤素的取代基(其中氯和氟是优选的卤素取代基)所取代的。
在式I中Y基的变化产生式I-c(肽)、I-d(缩肽)和I-e(氧代亚甲基)，其中所有变量如前面所定义 式I-a的优选的实施方案示于下面的式I-f、I-g和I-h 在式I-c、I-e、I-f和I-h的化合物中，Ry优选的是H或甲基。优选的特定的化合物包括下列示例的那些化合物，特别是 另一方面，本发明涉及如式II的中间体，优选子式II-a，它们适用于式I的各种化合物的合成中 其中所有变量如上所定义。优选的R55和R56基是H和氮的适当的保护基，例如，Boc(叔丁氧基羰基)，Cbz(苄氧基羰基)，FMOC(芴-9-甲氧基羰基)，其它烷氧基羰基(例如，甲氧基羰基)和三苯甲基(三苯基甲基)。其它适当的氮保护基可很容易地由专业人员选择(见，例如，Greene和Wuts，化学合成中的保护基(Protecting Groups in Chemical Synthesis)(第三版)John Wiley & Sons，NY(1999))。R52、R53和R54优选的基团是H、烷氧基、羟基、羰基、OR59，和适当的羰基或羟基保护基。羟基的优选的保护基是叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)。
适于用作中间体的式II的优选实例包括下列化合物 和它们的药物上可接受的盐。
本发明也涉及抑制细小核糖核酸病毒3C蛋白酶活性的方法，包括将蛋白酶与有效量的式I化合物或它们的药物上可接受的盐、药物前体，药物活性代谢物或溶剂化物相接触。例如，通过施用式I化合物或它们的药物上可接受的盐、药物前体、药物活性代谢物或溶剂化物在哺乳动物组织中抑制细小核糖核酸病毒3C蛋白酶活性。更优选地，本方法的目的是抑制鼻病毒蛋白酶活性。
“治疗”是指至少缓解哺乳动物，如人的病症，是通过抑制一种或多种细小核糖核酸病毒3C蛋白酶，如人鼻病毒、人脊髓灰质炎病毒，人哥萨克病毒、脑心肌炎病毒、脑膜炎病毒和甲型肝炎病毒的活性来减轻病症的，并且包括(a)在哺乳动物中的预防性治疗，特别是当发现哺乳动物易患有此病症但还未被诊断出患有此病症时；(b)抑制此病症；和/或(c)全部或部分地减轻此病症。
本发明的化合物作为细小核糖核酸病毒3C蛋白酶抑制剂的活性可以用本领域技术人员熟知的任何适当的方法来测定，包括体内和体外测定。活性测定的适当的测定法的实例是在本文中叙述的抗病毒H1-HeLa细胞培养测定。
式I化合物和它们的药物上可接受的药物前体、盐、活性代谢物和溶剂化物的给药可以根据对本领域技术人员来说可利用的任意的通常可接受的给药方式来进行。适当的给药方式的说明性实例包括口服、鼻、肠胃外、局部、经皮和直肠给药。鼻内递送是优选的。
式I的本发明化合物或它们的药物上可接受的盐，药物前体，活性代谢物或溶剂化物可以作为本领域技术人员认为是适当的任何药物形式的药物组合物进行给药。适当的药物形式包括固体、半固体、液体或冻干制剂，如片剂、粉剂、胶囊、栓剂、悬浮液、脂质体和气雾剂。本发明的药物组合物也可包括适当的赋形剂、稀释剂、媒介物和载体，以及根据用途或给药方式所决定的其它药物活性剂。在优选的实施方案中，本发明的药物组合物是以悬浮液的形式经鼻内递送的。
药物组合物的适当的药物形式的可接受的制备方法可由本领域技术人员按常规确定。例如，药物制剂可以按照药物化学家的常规技术来制备，包括如混合、造粒和压缩(当对片剂形式来说是必要的时)，或混合、填充和适当地溶解成分等步骤，以产生所需要的产物，用于口服、肠胃外、局部、阴道内、鼻内、支气管内、眼内、耳内，和/或直肠给药。
固体或液体药物上可接受的载体、稀释剂、媒介物或赋形剂可用于药物组合物中。说明性的固体载体包括淀粉、乳糖、硫酸钙二水合物、白土、蔗糖、滑石粉、明胶、果胶、阿拉伯树胶、硬脂酸镁和硬脂酸。说明性的液体载体包括糖浆、花生油、橄榄油、盐水溶液和水。载体或稀释剂可以包括适当的缓释材料，如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，单独或与蜡一起使用。当使用液体载体时，制剂可以是糖浆、酏剂、乳液、软明胶胶囊、无菌注射液(例如溶液)或不含水的或含水的液体悬浮液。
药物组合物的剂量含有至少治疗上有效量的活性化合物(即，式I化合物或它的药物上可接受的盐、药物前体、活性代谢物或溶剂化物)，和优选地由一种或多种药物剂量单位构成。选定的剂量可以用任何已知或适当的给药方法向需要由抑制细小核糖核酸病毒3C蛋白酶活性介导的治疗的哺乳动物，例如，病人给药，包括局部外用，例如，以软膏或霜剂的形式；口服；直肠给药，例如，以栓剂的形式；肠胃外注射；或连续地阴道内、鼻内、支气管内、耳内、眼内输注。
“治疗学上有效的量”是指本发明的活性剂当向需要治疗的哺乳动物给药时，足以对通过抑制一种或多种细小核糖核酸病毒3C蛋白酶，如人鼻病毒、人脊髓灰质炎病毒、人哥萨克病毒、脑心肌炎病毒、脑膜炎病和甲型肝炎病毒的活性而得到缓解的病症进行治疗的量。本发明的给定化合物的治疗上有效的量随一些因素如特定的化合物，病症及其严重性，需要治疗的哺乳动物的特性而变化，该量可由专业人员按常规确定。
通过说明的方式，用于治疗鼻病毒感染的适于鼻输送本发明化合物的制剂可以包括为减小含有最终浓度从约0.01％至约2％的活性化合物，优选从0.2％至2％的悬浮液中颗粒尺寸而微粉化的式I化合物。
鼻用制剂的示例如下2.0％(重量)的微粉化的式I-a化合物；1.2％(重量)的微晶纤维素和羧甲基纤维素钠的混合物(例如Avicel RC/CL)；0.1％(重量)的聚山梨酯80；0.01％(重量)的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)；0.02％(重量)的苯扎氯铵溶液(50％(重量)BzCl)；5.0％(重量)的葡萄糖(无水)和配平物为纯水。一般合成式I的本发明的化合物可用本发明的方法有利地制得，包括如下所述的一般方法，在这些一般合成的每个中，其变体如上所定义。
在化学结构中立体化学不是指定的时，可以使用每种立体异构体，也使用下列缩写Boc(叔丁氧基羰基)，Ac(乙酰基)，Cbz(苄氧基羰基)和Tr(三苯甲基)。一般合成
图1 在该一般合成图中，氨基酸A(用标准多肽偶合条件和/或本领域熟知的方法制备)，其中P1是适当的氮保护基(例如Boc或Ac)和R是适当的有机部分(例如(Cbz-L-Leu-L-Phe-)，被转变成Weinreb酰胺B。化合物B用过量的金属有机试剂(例如烷基锂或Grignard试剂)处理以产生产物C。此时，如果必需C中存在的P1氮保护基可被更换成替换基团(例如Boc更换成Ac)。一般合成图2 上面描述了制备产物C可替换的方法。在该一般合成中，氨基酸D(用已知方法制备)，其中P1是适当的氮保护基(例如Boc或Ac)和P2是氮的适当的正交保护基(例如Cbz)，被转化成Weinreb酰胺E。化合物E用过量的金属有机试剂(例如烷基锂或Grignard试剂)处理产生中间体F。然后除去F中存在的P2保护基，和形成的胺G(或它的盐)用适当的有机部分(例如Cbz-L-Leu-L-Phe-)衍生(偶合)以提供产物C。如上所述，如果必需，此时C中存在的P1氮保护基可被更换成替换基团(例如Boc更换成Ac)。一般合成图3 在该一般合成方法中，氨基酸H(可商购的或用标准肽偶合条件和/或本领域熟知的方法制得)，其中P3是酰胺氮的适当的保护基(例如Tr)和R是任意适当的有机部分(例如Cbz-L-Leu-L-Phe-)，被转化成Weinred酰胺I。化合物I用过量的金属有机试剂(例如烷基锂或Grignard试剂)处理以产生产物J。如果必需，然后除去J中存在的P3保护基以提供产物K。一般合成图4 上面图示了产物J和K的可替换的合成方法。在该一般合成方法中，氨基酸L(可商购或用已知的方法制备)，其中P3是酰胺氮的适当的保护基(例如，Tr)和P2是氮的适当的正交保护基(例如Boc或Cbz)，被转化成Weinreb酰胺M。化合物M用过量的金属有机试剂(例如烷基锂或Grignard试剂)处理产生中间体N。然后除去N中存在的P2保护基和形成胺O(或它的盐)用适当的有机部分(例如，Cbz-L-Leu-L-Phe-)衍生(偶联)提供产物J。如上所述，如果必需，然后除去在J中存在的P3保护基提供产物K。一般合成图5 在该一般合成法中，氨基醇P(用已知方法制备)，其中P3是酰胺氮的适当的保护基(例如2，4-二甲氧基苄基)和P2是氮的适当的正交保护基(例如Boc或Cbz)，被氧化成醛Q。该中间体接着被进一步氧化成羧酸R，随后被转化成Weinreb酰胺S。化合物S用过量的金属有机试剂(例如烷基锂或Grignard试剂)处理产生中间体T。然后除去在T中存在的P3保护基和形成的酰胺U进一步去保护(通过除去P2保护基)以提供胺(或它的盐)V。然后用适当的有机部分(例如，Cbz-L-Leu-L-Phe-)将中间体V衍生(偶联)以提供产物W。一般合成图6 上面描述了产物W的可替换的制备方法。在该一般合成方法中，中间体T(如上所述)，其中P3是酰胺氮的适当的保护基(例如，2，4-二甲氧基苄基)和P2是氮的适当的正交保护基(例如Boc或Cbz)，通过除去P2保护基去保护产生胺(或它的盐)X。然后化合物X用适当的有机部分(例如Cbz-L-Leu-L-Phe-)衍生(偶联)提供中间体Y。然后除去Y中存在的P3保护基以提供产物W。一般合成图7 上面描述了产物W的额外的替换制备图。中间体T(如上制备)，其中P3是酰胺氮的适当的保护基(例如2，4-二甲氧基苄基)和P2是氮的适当的正交保护基(例如Boc或Cbz)被还原醇Z。然后除去Z中存在的P2保护基，形成的胺(或它的盐)AA用适当的有机部分(例如，Cbz-L-Leu-L-Phe-)衍生(偶联)以提供中间体BB。此时，如果必需，通过除去存在的任何保护基(除P3外的)和用适当的有机部分偶联任何和/或全部未保护的反应性官能团(例如胺或醇)可以进一步衍生BB以提供额外的中间体BB。当BB所有适当的衍生完成时，进行氧化反应产生酮Y。然后除去Y中存在的保护基P3以提供产物W。一般合成图8 在该方法中，氨基酸A(用标准肽偶合条件和/或方法制备)，其中P1是适当的氮保护基(例如Boc或Ac)和R是适当的有机部分(例如Cbz-L-Leu-L-Phe-)，被转化成重氮化合物CC。化合物CC，依次地，被转化成溴化物DD。该中间体使用羧酸部分进行置换反应以提供产物EE。此时，如果必需EE中存在的P1氮保护基可被更换成替换基团(例如Boc更换成Ac)。一般合成图9 在上述说明的方法中，氨基酸L(可商购或用已知的方法制备)，其中P3是酰胺氮的适当的保护基(例如Tr)和P2是氮的适当的正交保护基(例如Boc或Cbz)，被转化成重氮化合物FF。化合物FF，依次地，被转化成氯代物GG。该中间体用羧酸部分进行置换反应以提供中间体HH。然后将HH中存在的P2保护基除去，形成的胺(或它的盐)II用适当的有机部分(例如，Cbz-L-Leu-L-Phe-)衍生(偶联)以产生中间体JJ。然后除去JJ中存在的P3保护基以提供产物KK。
为了说明，实施例21和28的化合物的具体合成概述如下 为制备W1(化合物21)，醇P1(按照Dragovich等人，医药化学杂志(J.Med.Chem.)(1999，第42卷，1213中所述制备)被氧化产生醛Q1，将其依次转化成羧酸R1。该中间体不需纯化就可转化成Weinreb酰胺S1。将S1暴露于过量的2-锂苯并噻唑(从正丁基锂和苯并噻唑中产生)产生酮T1，接着从T1中除去2，4-二甲氧基苄基氮保护基产生U1，在酸性条件下除去存在U1中的Boc保护基和形成的胺盐(未示出)与可商购的Cbz-L-Leu-L-Phe-OH偶联以提供W1(化合物21)。
特定的化合物W8的合成如下 将酮T1(如上所述制备)还原成醇Z1(分离成1∶1的非对映体混合物)。在酸性条件下除去在Z1中存在的Boc保护基，形成的胺盐(未示出)与Boc-L-Val-L-Phe(4-F)-OH(用标准的肽偶联技术制备)偶联以提供中间体BB1(分离成1∶1的非对映体混合物)。也在酸性条件下除去BB1中存在的Boc保护基和形成的胺盐(未示出)用可商购的5-甲基异噻唑-3-碳酰氯衍生以产生中间体BB2(分离成1∶1的非对映体混合物)。将BB2氧化产生酮Y1，和随后从Y1中除去2，4-二甲氧基苄基氮保护基产生W2(化合物28)。
用来制备化合物21和28和式I的其它示范性化合物的详细步骤叙述于下列说明性实施例中。
质子磁共振(1HNMR)谱用Varian UNITYplus300或General ElectricQE-300光谱仪在300兆赫兹(MHz)的磁场下操作进行测定。化学位移用从内部四甲基甲硅烷标准每百万分的份数(ppm，δ)低磁场来报告。另外，1H NMR谱参照如下剩余质子溶剂信号CHCl3＝7.26ppm；DMSO＝2,49ppm；C6HD5＝7.15ppm。峰的多重性按如下标出s，单重峰；d，双重峰；t，三重峰；q，四重峰；br，宽共振；m，多重峰。偶合常数以赫兹给出。红外吸收(IR)谱用Perkin-Elmer1600系列FTIR光谱仪获得。元素微量分析用Atlantic Microlab Inc.，Norcross，GA进行测定和给出的所述元素的结果在理论值的±0.4％以内。
快速柱色谱用硅胶60(Merck Art 9385)进行。分析薄层色谱(TLC)使用预涂的硅胶60 F254(Merck Art 5719)板进行。熔点(mp)在Mel-Temp仪上测得和未校正。
除非另外说明所有反应是在轻微正氩气压下于隔膜密封的烧瓶中进行。所有商购试剂按从它们相应的供应商处得到的形式使用，下列除外四氢呋喃(THF)在使用前从钠-二苯甲酮羰游基中蒸馏；二氯甲烷(CH2Cl2)在使用前从氢化钙中蒸馏。Et2O是指二乙基醚。DMF是指N，N-二甲基甲酰胺。DMSO是指二甲基亚砜。MTBE是指叔丁基甲基醚。其它缩写包括CH3OH(甲醇)，EtOH(乙醇)，EtOAc(乙酸乙酯)，DME(乙二醇二甲基醚)，Ac(乙酰基)，Me(甲基)，Ph(苯基)，Tr(三苯基甲基)，Cbz(苄氧基羰基)，Boc(叔丁氧基羰基)，TFA(三氟乙酸)，DIEA(N，N-二异丙基乙基胺)，TMEDA(N，N，N’，N’-四甲基乙二胺)，AcOH(乙酸)，Ac2O(乙酸酐)，NMM(4-甲基吗啉)，HOBt(1-羟基苯并三唑水合物)，HATU[邻-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐]，EDC[1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐]，DCC(二环己基-碳化二亚胺)，DDQ(2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌)，DMAP(4-二甲基氨基吡啶)，Gln(谷氨酸)，Leu(亮氨酸)，Phe(苯丙氨酸)，Phe(4-F)(4-氟苯丙氨酸)，Val(缬氨酸)，氨基-Ala(2，3-二氨基丙酸)和(S)-Pyrrol-Ala[(2S，3’S)-2-氨基-3-(2’-氧代吡咯烷-3’-基)-丙酸]。此外，“L”代表天然存在的氨基酸。
氨基酸缩写的简化命名体系被用来标明一些中间体和最终产物。当命名化合物时，用斜体字印刷的氨基酸缩写代表在该残基的C-末端结合有酮部分[例如，Boc-AA-CH3＝Boc-AA-C(O)-CH3(甲基酮)]。实施例1Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-CH2SCH3 在0℃和氩气氛下，将TMEDA(0.81毫升5.37毫摩尔)和二甲基硫醚(0.49毫升，6.67毫摩尔)加入到正丁基锂(1.58M己烷溶液，3.4毫升，5.37毫摩尔)中，混合物搅拌5小时，同时升温至23℃，将反应混合物冷却至-40℃，加入Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-N(CH3)OCH3(按照在WIPO国际出版物第WO97/43305中所述制备)(0.85克，1.03毫摩尔)在9毫升THF中的溶液，根据起始物料的消耗(如TLC所指示的)混合物用15毫升2N AcOH在-40℃下淬灭和用过量的EtOAc萃取，水相的pH用固体Na2CO3调整成碱性，用EtOAc萃取，将有机层合并，连续用饱和NaHCO3和盐水洗，用MgSO4干燥，过滤和真空下浓缩，剩余物进行柱色谱(45％EtOAc/己烷)提供白色固体产物，产率60％。
1H NMR(CDCl3)δ0.86(m，6H)，1.31(m，1H)，1.53(m，2H)，1.75(m，1H)，2.00(s，3H)，2.27(m，3H)，3.06(m，2H)，3.15(m，2H)，3.93(m，1H)，4.54(m，1H)，4.70(m，1H)，4.90(m，2H)，6.50(m，1H)，6.95(d，1H，J＝7.0)，7.14-7.41(m，27H).HRMSC49H54N4O6S计算值(M+Cs).实测值，(C49H54N4O6S·0.50H2O)元素分析C，H，N.实施例2Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Gln)-CH2SCH3 将Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-CH2SCH3(0.30克，0.363毫摩尔)在0℃下加入到1∶1 CH2Cl2和TFA中并搅拌45分钟，反应混合物在真空下浓缩和用过量的EtOAc提取，该溶液用饱和NaHCO3和盐水洗两次，MgSO4干燥，过滤和真空下浓缩，剩余物用Et2O研制产生0.15克(71％产率)的白色固体产物。1H NMR(DMSO-d6)δ0.80(d，3H，J＝6.6)，0.83(d，3H，J＝7.0)，1.33(m，3H)，1.47(m，1H)，1.72(m，1H)，1.98(s，3H)，2.05(m，2H)，2.83(dd，1H，J＝14.0，8.0)，3.05(dd，1H，J＝14.0，4.4)，3.27(m，2H)，3.98(m，1H)，4.38(m，1H)，4.52(m，1H)，5.02(m，2H)，6.78(s，1H)，7.14-7.35(m，11H)，7.42(d，1H，J＝7.7)，8.03(d，1H，J＝7.7)，8.42(d，1H，J＝7.4).HRMSC30H40N4O6S计算值(M+H)，585.2747；实测值，585.2720.(C30H40N4O6S)元素分析C，H，N.实施例3Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-CH2O C(O)-(2，4，6-三甲基苯基) 中间体Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-CHN2的制备向Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-OH(如在下面实施例9中所述制备)在8毫升THF的溶液中加入NEt3(0.072克，99微升，0.71毫摩尔)，混合物冷却至-15℃，加入异丁基氯甲酸酯(0.097克，92微升，0.71毫摩尔)，搅拌10分钟后，将混合物冷却至-35℃，小心加入过量的在Et2O中的重氮甲烷(从Diazald中产生)，用2小时逐渐将搅拌着的反应混合物升温至23℃，然后加入AcOH淬灭任何过量的重氮甲烷，淬灭的混合物用水稀释，用过量的EtOAc萃取，有机层用盐水洗，MgSO4干燥，过滤和浓缩产生含有Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-OCH3(13％)的重氮酮(26％)的混合物如用1HNMR积分和MS[(M+H)565和555]所测得的。
中间体Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-CH2Br的制备向0℃的粗Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-CHN2(～0.095克，～0.17毫摩尔)在10毫升1∶1的苯CH2Cl2中的悬浮液加入0.2毫升48％HBr水溶液，搅拌1小时后加入另外0.2毫升48％HBr水溶液，在0℃额外2小时后，将反应混合物倒入水中，用大大过量的CH2Cl2萃取，有机相用水洗，Na2SO4干燥，过滤和浓缩，剩余物用80至100％EtOAc/己烷进行柱色谱梯度洗脱，产生0.034克(33％)的α-溴甲基酮黄色固体。1H NMR(CDCl3)δ0.86(d，3H，J＝6.3)，0.90(d，3H，J＝6.3)，1.36(m，1H)，1.55(m，2H)，1.91(s，3H)，3.01(dd，1H，J＝14.3，8.5)，3.17(dd，1H，J＝10.7，5.9)，3.48(dt，1H，J＝14.0，4.6)，3.84(m，1H)，4.04(m，2H)，4.27(dd，1H，J＝13.1，9.0)，4.61(m，1H)，4.85(m，1H)，5.04(m，2H)，5.11(m，1H)，6.48(m，1H)，6.57(d，1H，J＝7.0)，7.18(d，1H，J＝7.7)，7.22-7.42(m，10H).HRMS calcC29H37N4O6Br计算值(M+H)，617.1975；实测值，617.2001.(C29H37N4O6Br)元素分析C，H，N.
产物Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-CH2OClO-(2，4，6-三甲基苯基)的制备向搅拌着的溶于2毫升DMF中的Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-CH2Br(0.21克，0.34毫摩尔)溶液中加入KH(35重量％矿物油中的分散液；0.173克，1.02毫摩尔)，在23℃5分钟后，加入2，4，6-三甲基苯甲酸(0.057克，0.347毫摩尔)，混合物搅拌1小时，将混合物浓缩，用过量的EtOAc萃取，加入水，有机层连续用水，饱和NaHCO3水溶液和盐水洗，然后用Na2SO4干燥，过滤和浓缩，剩余物用柱色谱(70％EtOAc/己烷)纯化产生0.054克(22％)白色固体产物。
1H NMR(CDCl3)δ0.89(t，6H，J＝6.3)，1.42(m，1H)，1.56(m，2H)，2.05(s，3H)，2.32(s，3H)，2.35(s，6H)，3.03(dd，1H，J＝14.0，8.1)，3.16(m，1H)，3.67(m，2H)，4.14(m，1H)，4.59(m，1H)，4.65(m，1H)，4.86(m，2H)，5.06(m，2H)，5.23(d，1H，J＝7.0)，6.49(t，1H，J＝6.1)，6.71(d，1H，J＝6.6)，6.86(s，2H)，7.18-7.34(m，11H)，7.65(d，1H，J＝6.3).HRMS C39H48N4O8计算值(M+Na)，723.3370；实测值，723.3358.(C39H48N4O8·0.5H2O)元素分析C，H，N.实施例4Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Boc-氨基-Ala)-CH3
按照如下所述的制备Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Boc-氨基-Ala)-2-苯并噻唑(化合物6)的步骤，从Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Boc-氨基-Ala)-N(CH3)OCH3(按照webber等人药物化学杂志(J.Med.Chem.)(1998)，第41卷，2786中所述制备)和10当量的CH3Li合成得到白色固体标题化合物，产率44％，(75％按回收的Weinreb酰胺计)。1H NMR(CDCl3)(rotameric mixture)，δ0.88(m，6H)，1.38(s，9H)，1.43-1.63(m，3H)，2.20(s，3H)，3.05(m，2H)，3.26(m，1H)，3.46(m，1H)，3.58(m，1H)，4.16(m，1H)，4.47-4.59(m，1H)，4.62-4.75(m，1H)，5.06(m，2H)，5.10-5.20(m，1H)，5.37-5.50(m，1H)，6.86-6.96(m，1H)，7.22(m，5H)，7.34(m，5H).HRMS C32H44N4O7计算值(M+Cs)，729.2264；实测值，729.2231.实施例5Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-CH3 按照如下所述的制备Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-2-吡啶(化合物8)的步骤，从Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Boc-氨基-Ala)-CH3(化合物4)合成白色固体的标题化合物，产率85％。1H NMR(CDCl3)δ0.88(d，3H，J＝6.6)，0.90(d，3H，J＝6.6)，1.38(m，1H)，1.53(m，2H)，1.90(s，3H)，2.24(s，3H)，3.04(m，1H)，3.17(dd，1H，J＝13.6，6.6)，3.50(m，1H)，3.76(m，1H)，4.11(m，1H)，4.47(m，1H)，4.63(m，1H)，5.07(m，2H)，5.23 and 5.30(2d，1H，J＝5.9)，5.85(m，1H)，6.47(m，1H)，6.72(t，1H，J＝6.1)，7.13-7.41(m，10H).HRMS ealeC29H38N4O6S计算值(M+H)，539.2870；实测值，539.2852.(C29H38N4O6·1.0H2O)元素分析C，H，N.实施例6Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Boc-氨基-Ala)-2-苯并噻唑 向-78℃苯并噻唑(0.226克，1.67毫摩尔)在1.5毫升THF中的溶液加入正丁基锂(0.67毫升，2.5M己烷溶液)，反应混合物在-78℃搅拌30分钟，然后滴加Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Boc-氨基-Ala)-NCH3OCH3(按webber等人药物化学杂志(J.Med.Chem.)(1998)第41卷，2786中所述制备)在1.5毫升THF中的溶液，反应混合物在-78℃搅拌1小时，然后逐渐升温至23℃，当TLC表明大多数起始物料滴耗完时，反应混合物用水淬灭，用EtOAc萃取，将有机层合并，用Na2SO4干燥，过滤和真空下浓缩，剩余物使用梯度溶剂体系(30，50，80％EtOAc/己烷)进行柱色谱纯化产生白色固体，产率16％(26％按回收的起始物料计)。1HNMR(CDCl3)(rotameric mixture)δ0.90(t，6H，J＝5.9)，1.31(s，9H)，1.44(m，2H)，1.61(m，3H)，3.12(m，2H)，3.62-3.67(m，1H)，4.16(m，1H)，4.62-4.77(m，1H)，5.07-5.24(m，2H)，5.75-5.85(m，1H)，6.65-6.79(m，1H)，7.18(m，6H)，7.36(m，6H)，7.56(m，2H)，7.97(t，1H，J＝8.1)，8.17(d，1H，J＝7.0).HRMS C38H45N5O7S计算值(M+H)，716.3118；实测值，716.3100.(C38H45N5O7S·1.5H2O)元素分析C，H，N.实施例7Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Boc-氨基-Ala)-2-吡啶
利用上述制备Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Boc-氨基-Ala)-2-苯并噻唑(化合物6)的步骤，从Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Boc-氨基-Ala)-NCH3OCH3和2-锂吡啶(从2-溴吡啶和正丁基锂产生)合成标题化合物，产率83％。1H NMR(DMSO-d6)δ0.79(d，3H，J＝6.6)，0.82(d，3H，J＝6.6)，1.26(s，9H)，1.35(m，2H)，1.47(m，1H)，2.81(m，1H)，3.01(m，1H)，3.39(m，2H)，3.58(m，1H)，3.98(m，1H)，4.58(m，1H)，5.00(s，2H)，5.77(m，1H)，6.78(m，1H)，7.19(m，5H)，7.33(m，5H)，7.41(d，1H，J＝8.8)，7.68(dd，1H，J＝6.4，5.7)，7.91(m，1H)，8.01(m，1H)，8.24(d，1H，J＝7.7)，8.74(d，1H，J＝4.0).HRMS C36H45N5O7计算值(M+H)，660.3397；实测值，660.3384.(C36H45N5O7·0.5H2O)元素分析C，H，N.实施例8Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-2-吡啶 将Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Boc-氨基-Ala)-2-吡啶(化合物7)(0.04克，60.6微摩尔)溶于0.5毫升TFA中，溶液在0℃搅拌30分钟，然后在真空下浓缩，向形成的TFA盐中加入1毫升吡啶，接着加入0.5毫升Ac2O(过量)，混合物在23℃搅拌过夜，在真空下浓缩和进行柱色谱(1％CH3OH/CHCl3)产生0.023克(63％)白色固体。1H NMR(CDCl3)δ0.89(d，3H，J＝6.6)，0.91(d，3H，J＝6.6)，1.41(m，1H)，1.58(m，2H)，1.87(s，3H)，3.08(m，2H)，3.59(m，1H)，3.95(m，1H)，4.12(m，1H)，4.64(m，1H)，5.08(m，3H)，5.89(m，1H)，6.51(m，1H)，6.63(d，1H，J＝7.0)，7.19(m，5H)，7.35(m，5H)，7.49(m，1H)，7.85(m，1H)，8.01(d，1H，J＝7.7)，8.67(d，1H，J＝5.3).HRMS C33H39N5O6计算值(M+H)，602.2979；实测值，602.3002.实施例9Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-2-苯并噻唑 中间体Cbz-L-(N-氨基-Ala)-N(CH3)OCH3的制备向溶于30毫升CH2Cl2中的Cbz-L-(N-氨基-Ala)-OH(如在Webber等人，医药化学杂志(J.Med.Chem.)(1998)第41卷，2786中所述制备)(1.5克，5.36毫摩尔)加入EDC(1.08克，5.63毫摩尔)N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(0.55克，5.64毫摩尔)和4-甲基吗啉(1.35克，13.35毫摩尔)，反应混合物在23℃搅拌过夜，用250毫升CH2Cl2稀释和用50毫升1N HCl和50毫升水洗，有机层用Na2SO4干燥、过滤和真空下蒸发，剩余物用柱色谱(5％CH3OH/CHCl3)纯化产生1.35克(78％)粘稠油状酰胺产物。1H NMR(DMSO-d6)δ1.76(s，3H)，3.08(bs，3H)，3.12(m，2H)，3.70(s，3H)，4.60(bd，1H，J＝5.9)，5.01(s，2H)，7.34(m，5H)，7.43(d，1H，J＝7.7)，7.90(m，1H).
(C15H21N3O5·0.50H2O)元素分析C，H，N.
中间体Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基Ala)-N(CH3)OCH3的制备向溶于20毫升CH3OH中的Cbz-L-(N-Ac-氨基-Ala)-NCH3OCH3(0.87克，2.69毫摩尔)加入0.4克10％Pd/C，于23℃在H2气氛(气球)下将黑色悬浮液搅拌2小时，然后过滤和浓缩以一定产率产生0.51克L-(N-Ac-氨基Ala)-N(CH3)OCH3油状物，该物料不需进一步纯化马上使用。
将商购的二肽Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(1.0克，2,43毫摩尔)溶于25毫升CH2Cl2和6-7滴DMF中，加入N-羟基丁二酰亚胺(0.29克，2.52毫摩尔)接着(根据同种性)加入DCC(0.526克，2.55毫摩尔)，在23℃搅拌大约2小时后，将混合物直接过滤至L-(N-Ac-氨基Ala)-N(CH3)OCH3(0.51克，2.70毫摩尔)在10毫升CH2Cl2的溶液中。反应混合物在23℃搅拌12小时，在真空下除去溶剂，剩余物用柱色谱(5％饱和甲醇NH3在CHCl3中的溶液)进行纯化，产生1.26克(89％)白色固体的三肽。
IR(KBr)3300，3067，2955，1657，1537，1262cm-1.1H NMR(DMSO-d6)δ0.79(d，3H，J＝6.6)，0.82(d，3H，J＝6.6)，1.31(m，2H)，1.47(m，1H)，1.77(s，3H)，2.79(dd，1H，J＝13.6，8.8)，3.00(dd，1H，J＝14.0，4.4)，3.10(s，3H)，3.27(m，2H)，3.67(s，3H)，3.96(m，1H)，4.51(m，1H)，4.91(m，1H)，5.01(s，2H)，7.17(m，5H)，7.33(m，5H)，7.43(d，1H，J＝8.1)，7.82(t，1H，J＝5.9)，7.87(d，1H，J＝7.7)，8.19(bd，1H，J＝7.7).(C30H41N5O7·0.50H2O)元素分析C，H，N.
中间体-Cbz-L-Leu-Phe-L-CN-Ac-氨基-Ala)-N(CH3)OCH3的可选择的制备方法向Cbz-L-(N-Ac-氨基-Ala)-OH(如在webber等人药物化学杂志(J，Med，Chem.)(1998)，第41卷，2786中所述制备)(1.10克，4.62毫摩尔)在20毫升的3∶6∶1 CH3OH∶AcOH∶H2O中的溶液中加入1克10％Pd/C，混合物在23℃用气球在H2气氛下搅拌3小时，过滤除去催化剂，滤液在真空下浓缩，以99％的产率产生氨基酸AcOH盐，该物料不需纯化就可使用。
1H NMR(CD3OD)δ1.97(s，3H)，3.54(dd，1H，J＝13.8，6.1)，3.63-3.75(m，2H).
将商购得到的Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(1.9克，4.61毫摩尔)溶于20毫升CH2Cl2和4毫升DMF的混合物中，向该溶液中加入N-羟基丁二酰亚胺10.53克，4.61毫摩尔，一旦溶解后，加入DCC(0.951克，4.61毫摩尔)，反应混合物在23℃搅拌3小时，此时，将混合物直接过滤至L-(N-Ac-氨基-Ala)-ONa(将L-(N-Ac-氨基Ala)-OH.AcOH 10.95克，4.61毫摩尔)在0℃溶于1毫升1∶1 DMF和加入9.21毫升1N NaOH水溶液中制得溶液，反应混合物在23℃搅拌2小时，然后在高真空下除去溶剂，剩余物分配在150毫升1N HCl和500毫升的EtOAc中，过滤并收集形成的任意固体，然后有机相用水洗，Na2SO4干燥，过滤和浓缩，将固体合并，用柱色谱(0.01％AcOH/5％CH3OH/CHCl3)纯化产生68％的三肽Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-OH白色固体。1H NMR(CD3OD)δ0.84(d，3H，J＝6.6)，0.88(d，3H，J＝6.6)，1.40(m，2H)，1.56(m，1H)，1.91(s，3H)，2.95(dd，1H，J＝13.8，9.7)，3.22(dd，1H，J＝14.0，4.8)，3.47(dd，1H，J＝13.6，7.7)，3.64(dd，1H，J＝13.6，4.0)，4.07(dd，1H，J＝7.9，5.0)，4.41(m，1H)，4.58(m，1H)，5.07(m，2H)，7.14-7.34(m，10H).HRMS C28H36N4O7计算值(M+H)，541.2662；实测值，541.2678.541.2678.
在-20℃下向Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-OH(0.64克，1.19毫摩尔)在2毫升THF和2毫升CH2Cl2中的溶液中加入1-甲基哌啶(0.12克，1.21毫摩尔)和异丁基氯代甲酸酯(0.163克，1.19毫摩尔)，将混合物搅拌10分钟，滴加N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(0.116克，1.19毫摩尔)和1-甲基哌啶(0.12克，1.21毫摩尔)在3毫升CH2Cl2中的溶液，将反应混合物升温至23℃并额外搅拌3小时，混合物在真空下浓缩，用过量的EtoAc提取，用水洗，有机层用Na2SO4干燥，过滤和在真空下浓缩，剩余物用柱色谱(5％CH3OH/CHCl3)纯化产生白色固体，产率59％。
产物Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-2-苯并噻唑的制备该化合物按上面所述制备Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Boc-氨基-Ala)-2-苯并噻唑(化合物6)的方法从苯并噻唑和Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-N(CH3)OCH3制得，产率21％。1H NMR(CDCl3)δ0.90(m，6H)，1.38(s，1H)，1.57(m，2H)，1.88(s，3H)，3.05-3.23(m，3H)，3.55-3.72(m，1H)，4.16(m，2H)，4.70(m，1H)，5.10(m，2H)，5.78-5.90(m，1H)，6.81(m，1H)，7.15(m，5H)，7.35(m，6H)，7.55(m，3H)，7.95(t，1H，J＝8.0)，8.15(d，1H，J＝7.0).HRMSC35H39N5O6S计算值(M+Na)，680.2519；实测值，680.2549.实施例10Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-C(O)NHCH3 中间体[1-(乙酰基氨基甲基)-3-氰基-2-氧代-3-(三苯基-λ5-亚膦基(phosphanylidene))丙基]氨基甲酸苄基酯的制备该中间体通常按照Wasserman等人有机化学杂志(J.Orp.Chem.)(1994)，第59卷，4364的方法制备，更详细地说，在0℃下向(3-乙酰基氨基-2-苄氧基羰基氨基丙酸(1，40克，5.0毫摩尔，(当量)在CH2Cl2(50毫升)中的溶液加入EDC(1.00克，5.25毫摩尔)，1.05当量)和DMAP(61毫克，0.5毫摩尔，0.1当量)，用20分钟向酸溶液中滴加(氰基亚甲基)三苯基膦(如在Freudenreich等人美国化学会志(J.Am.Chem.Soc.)(1984)第106卷，3344中所述制备)在CH2Cl2(16毫升)中的溶液，在0℃搅拌2小时后，将反应混合物分配在去离子水(30毫升)和CH2Cl2(3×50毫升)中，合并的有机层用盐水(30毫升)洗，MgSO4干燥、过滤和浓缩，剩余物用快速柱色谱(5％CH3OH在CH2Cl2中)纯化产生[1-(乙酰基氨基甲基)-3-氰基-2-氧代-3-(三苯基-λ5-亚膦基)丙基]-氨基甲酸苄基酯(1.98克，70％产率)无色泡沫。Rf＝0.40(10％CH3OH在CH2Cl2中).IR(cm-1)3312，2175，1716，1437.1H NMR(CDCl3)δ1.91(s，3H)，3.66-3.79(m，2H)，5.04-5.06(m，1H)，5.10(s，2H)，5.94(br s，1H)，6.21(br s，1H)，7.26-7.70(m，21H).
中间体[1-(乙酰基氨基甲基)-2-甲基氨基甲酰基-2-氧代乙基]氨基甲酸苄基酯的制备
在-78℃下将[1-(乙酰基氨基甲基)-3-氰基-2-氧代-3-(三苯基-λ5-亚膦基)丙基]-氨基甲酸苄基酯(569.9毫克，1.01毫摩尔，(当量)在CH2Cl2(11毫升)中的溶液用臭氧处理3小时，然后，冷的溶液用氩气吹洗30分钟直至颜色从绿变到黄，加入DIEA(0.211毫升，1.21毫摩尔，1.2当量)和甲基胺盐酸盐(75.1毫克，1.11毫摩尔，1.1当量)，在-78℃1.5小时后，加入第二份DIEA(0.25毫升，1,43毫摩尔，1,4当量)和甲基胺盐酸盐(80.0毫克，1.18毫摩尔，1.17当量)，在-78℃继续搅拌2.5小时或更长，减压下除去挥发物，剩余物用快速柱色谱(5％CH3OH在CH2Cl2中)纯化产生[1-(乙酰基氨基甲基)-2-甲基氨基甲酰基-2-氧代乙基]氨基甲酸苄基酯(55.8毫克，17％产率)浅黄色固体。
Rf＝0.23(10％CH3OH在CH2Cl2中).IR(cm-1)3302，1709，1658，1539.1H NMR(CDCl3)(旋转异构体混合物)δ1.89，1.95(2s，3H)，2.77和2.89(2d，3H，J＝5.2)，3.47-3.54(m，1H)，3.61-3.69(m，1H)，4.29(m，1H)，5.10(s，2H)，6.64(br s，1H)，6.85(br s，1H)，7.06(br s，1H)，7.34(s，5H).产物Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-C(O)NHCH3的制备将1N HCl(水溶液)(0.17毫升，1.0当量)加入到[1-(乙酰基氨基甲基)-2-甲基氨基甲酰基-2-氧代乙基]氨基甲酸苄基酯(55.8毫克，0.17毫摩尔，1当量)在无水乙醇(5毫升)中的溶液中，用Ar吹洗后，加入5％Pd/C(42毫克)，混合物在氢气氛下搅拌5小时，过滤除去催化剂和滤液浓缩后，剩余物溶于DMF(2.0毫升)中，将其加入到商购得到的Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(70.1毫克，0.17毫摩尔，1.0当量)，EDC(36毫克，0.19毫摩尔，1.1当量)，HOBT(26毫克，0.19毫摩尔，1.1当量)和DIEA(66毫克，0.51毫摩尔，3.0当量)在DMF(1.5毫升)中的溶液中，在23℃搅拌4小时后，减压除去挥发物，剩余物用CH2Cl2(20毫升)提取，连续用1N HCl(5毫升)，饱和NaHCO3(5毫升)和盐水(5毫升)洗，有机层用MgSO4干燥、过滤和浓缩，剩余物用快速柱色谱(5％CH3OH在CH2Cl2中)纯化产生Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-C(O)NHCH3(34.6毫克，35％产率)无色晶状固体。
Rf＝0.19(5％CH3OH在CH2Cl2中).IR(cm-1)3292，1633，1454，1429.1H NMR(CD3OD)δ0.75-0.91(m，6H)，1.05-1.60(4m，3H)，1.88，1.91(2s，3H，旋转异构体)，2.70(d，3H，J＝13.2)，2.85-3.13(m，3H)，3.55-3.61(m，IH)，3.97-4.09(m，2H)，4.38-4.62(m，3H)，5.48(s，2H)，7.15-7.35(m，10H).
实施例11Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-C(O)-哌啶 中间体[1-(乙酰基氨基甲基)-2，3-二氧代-3-哌啶-1-基丙基]氨基甲酸苄基酯的制备在-78℃将[1-(乙酰基氨基甲基)-3-氰基-2-氧代-3-(三苯基-λ5-亚膦基丙基)氨基甲酸苄基酯(如在实施例10中制备)(572毫克，1.01毫摩尔，1当量)在CH2Cl2(11毫升)中的溶液用臭氧处理2小时，冷的溶液用Ar吹洗10分钟直至颜色以绿变黄，用1分钟滴加哌啶(0.110毫升，1.12毫摩尔，1.1当量)，在-78℃继续搅拌15分钟，减压除去挥发性物质，剩余物用快速柱色谱(5％CH3OH在CH2Cl2中)纯化产生[1-(乙酰基氨基甲基-2，3-二氧代-3-哌啶-1-基-丙基)氨基甲酸苄基酯(120.7毫克，32％产率)无色泡沫。
Rf＝0.30(EtOAc).IR(cm-1)3304，1720，1639，1537.1H NMR(CDCl3)δ1.59(br s，7H)，1.97(s，3H)，3.22-3.91(m，7H)，4.54-4.58(m，1H)，5.09(s，2H)，6.28(br s，1H)，6.67(br s，1H)，7.34(s，5H).产物Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-(10)哌啶的制备用与制备化合物10类似的方法，将[1-(乙酰基氨基甲基)-2，3-二氧代-3-哌啶-1-基丙基]氨基甲酸苄基酯(54.4毫克，0.14毫摩尔，1当量)去保护和与Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(59.4毫克，0.14毫摩尔，1.0当量)偶合，色谱后(5％CH3OH在CH2Cl2中)，得到Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-C(O)-哌啶(10.5毫克，12％产率)无色薄膜。
Rf＝0.40(5％CH3OH in CH2Cl2).IR(cm-1)3302，1657，1537.1H NMR(CDCl3)δ0.80-0.97(m，6H)，1.34-1.98(m，9H)，3.09-3.19(m，2H)，3.37-4.20(m，5H)，4.54-4.79(m，3H)，5.05-5.22(m，2H)，5.95-6.58(m，3H)，7.12-7.46(m，10H).MS(FAB)636(MH+)，658(MNa+).实施例12Cbz-L-Leu-L-Phe-D-(N-Ac-氨基-Ala)-C(O)-哌啶 作为合成化合物11的副产物，得到Cbz-L-Leu-L-Phe-D-(N-Ac-氨基-Ala)-C(O)-哌啶(16.7毫克，18％产率)无色晶状固体。
Rf＝0.36(5％CH3OH in CH2Cl2).IR(cm-1)3310，1651，1537.1H NMR(CDCl3)δ0.88(br s，6H)，1.39-1.82(m，8H)，1.93(s，3H)，2.99-3.02(m，1H)，3.15-3.22(m，1H)，3.40-3.75(m，6H)，4.07-4.12(m，2H)，5.07-5.18(m，4H)，6.27-6.57(2m，2H)，7.18-7.36(m，10H)，7.53-7.60(m，2H).MS(FAB)636(MH+).实施例13Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-2-噻唑 中间体Cbz-L(N-Ac-氨基-Ala)-2-噻唑的制备用上述制备Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Boc-氨基-Ala)-2-苯并噻唑(化合物6)的方法的稍加改进的形式，进行Cbz-L-(N-Ac-氨基-Ala)-N(CH3)OCH3(如在上述实施例9中制备)和5当量的2-噻唑阴离子(从噻唑和正丁基锂产生)之间的反应，然后用水将反应淬灭，接着用10％柠檬酸将混合物酸化，用EtOAc萃取，干燥(Na2SO4)、浓缩和剩余物用柱色谱使用2-5％CH3OH/CHCl3梯度洗脱进行纯化产生白色固体产物，产率87％。
1H NMR(CDCl3)δ1.88(s，3H)，3.88(m，2H)，5.12(m，2H)，5.55(m，1H)，6.11(m，1H)，6.23(d，1H，J＝6.6)，7.36(m，5H)，7.75(d，1H，J＝2.9)，8.05(d，1H，J＝2.9).HRMS C16H17N3O4S计算值(M+H)，348.1018；实测值，348.1028.产物Cbz-L-Leu-L-Phe-L(N-Ac-氨基-Ala)-2-噻唑的制备向Cbz-L-(N-Ac-氨基-Ala)-2-噻唑(0.225克，0.65毫摩尔)在5毫升CH2Cl2中的溶液加入5毫升30％HBr/AcOH，将混合物搅拌1.5小时后浓缩，剩余物用Et2O彻底洗和干燥，以一定的产率产生L-(N-Ac-氨基-Ala)-2-噻唑·氢溴酸盐。1HNMR(CD3OD)δ1.85(s，3H)；4.00(m，2H)；5.20(m，1H)；8.17(m，2H)。
向-20℃的Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(0.267克，0.65毫摩尔)在5毫升THF中的溶液加入Et3N(0.197克，1.95毫摩尔)和异丁基氯甲酸酯(89毫克，0.65毫摩尔)，搅拌10分钟后将反应混合物冷却至-40℃和加入L-(N-Ac-氨基-Ala)-2-噻唑·氢溴酸盐的DMF(2毫升)溶液，将反应混合物升温至23℃，搅拌1小时后，用水淬灭和用CHCl3萃取，有机层用盐水洗，Na2SO4干燥，过滤和浓缩，剩余物用柱色谱使用2-5％的CH3OH/CHCl3梯度洗脱纯化，产生白色固体产物，产率64％(2步)。
1H NMR(CD3OD)δ0.86(d，3H，J＝6.3)，0.90(d，3H，J＝6.3)，1.37(m，2H)，1.58(m，1H)，1.83(s，3H)，2.93(m，1H)，3.20(m，1H)，3.64(m，1H)，3.81(m，1H)，4.07(m，1H)，4.66(m，1H)，5.09(m，2H)，5.63(m，1H)，7.14(m，5H)，7.33(m，5H)，8.09(d，1H，J＝2.9)，8.17(d，1H，J＝2.6).HRMS C31H37N5O6S计算值(M+H)，608.2543；实测值，608.2565.(C31H37N5O6S·0.50H2O)元素分析C，H，N.实施例14Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-C≡CH 在无水条件下，将10当量的乙炔基镁溴化物(0.5MTHF溶液，12毫升)加入到Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-N(CH3)OCH3(如在实施例9中制备)(0.35克，0.60毫摩尔)在3毫升THF中的溶液中，反应混合物在45℃搅拌1.5小时，然后将混合物倒入25毫升1N HCl中，用50毫升EtoAc萃取二次，有机层用25毫升水洗，Na2SO4干燥、过滤和浓缩至留下剩余物，用柱色谱(EtoAc)纯化产生白色固体，产率67％。1H NMR(DMSO-d6)δ0.80(t，6H，J＝7.7)，1.29(m，2H)，1.48(m，1H)，1.79(s，3H)，2.80(m，1H)，3.05(dt，1H，J＝13.9，4.1)，3.25(m，1H)，3.48(m，1H)，3.98(m，1H)，4.35(m，1H)，4.57(m，1H)，4.87(d，1H，J＝7.7)，5.00(s，2H)，7.21(m，6H)，7.34(m，5H)，7.92(m，2H)，8.59(t，1H，J＝7.9).HRMS C30H36N4O6计算值(M+Cs)，681.1689；实测值，681.1664.实施例15Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-CH＝CH2 该化合物用与所述的产生Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-C≡CH(化合物14)的方法类似的步骤以22％的产率从Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ma)-N(CR3)OCH3(如在实施例9中所述制备)和乙烯基镁溴化物制得。1H NMR(DMSO-d6)δ0.80(t，6H，J＝7.5)，1.27(m，2H)，1.43(m，1H)，1.76(s，3H)，2.80(m，1H)，3.07(m，1H)，3.23(m，1H)，3.45(m，1H)，4.00(m，1H)，4.48(m，1H)，4.62(m，1H)，5.00(s，2H)，5.81(d，1H，J＝11.4)，6.19-6.66(m，1H)，7.20(m，5H)，7.34(m，5H)，7.41(d，1H，J＝8.5)，7.77(m，1H)，8.03(d，1H，J＝7.0)，8.39(d，1H，J＝7.4).(C30H38N4O6)元素分析C，H，N.实施例16Cbz-L-(N-Ac-氨基-Ala)-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-CH＝CH2 中间体Cbz-L-(N-Ac-氨基-Ala)-L-Phe-OH的制备使用在实施例9中所述的从Cbz-L-Leu-L-Phe-OH和L-(N-Ac-氨基-Ala)-ONa制备Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-OH的一般步骤，从Cbz-L-(N-Ac-氨基-Ala)-OH(如在Webber等人药物化学杂志(J.Med.Chem.(1998)，第41卷，2786中所述制备)和L-苯丙胺酸的钠盐以50％的产率合成Cbz-L-(N-Ac-氨基-Ala)-L-Phe-OH白色固体。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.77(s，3H)，2.90(dd，1H，J＝13.8，8.6)，3.05(dd，1H，J＝13.6，4.8)，3.20(m，2H)，4.09(m，1H)，4.38(m，1H)，5.00(m，2H)，7.19-7.34(m，11H)，7.88(m，1H)，8.07(d，1H，J＝8.1).中间体Cbz-L-(N-Ac-氨基-Ala)-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-N(CH3)OCH3的制备
用在实施例9中叙述的从Cbz-L-Leu-L-Phe-OH和L-(N-Ac-氨基-Ala)-N(CH3)OCH3制备Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-N(CH3)OCH3的一般步骤从Cbz-L-(N-Ac-氨基-Ala)-L-Phe-OH和L-(N-Ac-氨基-Ala)-N(CH3)OCH3合成了Cbz-L-(N-Ac-氨基-Ala)-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-N(CH3)OCH3白色固体，产率81％。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.77(s，6H)，2.79(dd，1H，J＝13.8，9.4)，2.99(dd，1H，J＝14.0，6.6)，3.10(s，3H)，3.19(m，2H)，3.29(m，2H)，3.68(s，3H)，4.05(m，1H)，4.44(m，1H)，4.89(m，1H)，5.01(m，2H)，7.20(m，5H)，7.34(m，6H)，7.84(m，2H)，8.02(d，1H，J＝7.7)，8.28(m，1H).
(C29H38N6O8·1.0H2O)元素分析C，H，N.产物的制备用所述的制备化合物14的方法从Cbz-L-(N-Ac-氨基-Ala)-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-N(CH3)OCH3和乙炔基镁溴化物合成了Cbz-L-(N-Ac-氨基-Ala-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-CH＝CH2白色固体，产率25％。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.76(s，3H)，1.79(s，3H)，2.79(m，1H)，3.05(m，1H)，3.18(m，2H)，3.43(m，1H)，3.50(m，1H)，4.04(m，1H)，4.36(m，1H)，4.56(m，1H)，4.88(d，1H，J＝4.0)，5.01(m，2H)，7.22(m，6H)，7.34(m，5H)，7.80(m，1H)，7.93(m，1H)，8.12(t，1H，J＝8.6)，8.61(t，1H，J＝8.1).HRMSC29H33N5O7计算值(M+Cs)，696.1434；实测值，696.1408.实施例17Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-C≡CCH2OCH3
用所述的制备化合物6的步骤，从Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-N(CH3)OCH3(如在实施例9中所述制备)和甲基丙炔基醚锂阴离子(在23℃从正丁基锂和甲基丙炔基醚产生)合成了标题化合物，产率19％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.80(t，6H，J＝7.4)，1.28(m，2H)，1.47(m，1H)，1.79(s，3H)，2.80(m，1H)，3.05(m，1H)，3.27(s，3H)，3.33(m，1H)，3.50(m，1H)，4.00(m，1H)，4.32(s，2H)，4.36(m，1H)，4.57(m，1H)，5.01(s，2H)，7.22(m，6H)，7.34(m，5H)，7.96(m，2H)，8.58(m，1H).HRMS C32H40N4O7计算值(M+Cs)，725.1951；实测值，725.1978.实施例18Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-CH2OCH2CH2Ph 中间体Bu3SnCH2OCH2CH2Ph的制备将氢化钾(35重量％矿物油中，2.29克，20.0毫摩尔，2.0当量)在己烷(10毫升)中搅拌5分钟，然后停止搅拌，让固体沉降，用吸管除去大部分己烷层，真空下降去剩余溶剂，形成的KH粉末悬浮在THF(20毫升)中，加入苯乙醇(1.22克，10.0毫摩尔，1当量)(引起气体逸出)，在23℃搅拌2.5小时后形成较厚的沉淀，将混合物冷却至0℃，用10分钟经套管加入碘甲烷三丁基锡(按照Seit2等人合成通讯(Synth.Commun.)(1983)第13卷，129制备)在THF(15毫升)中的溶液，混合物升温至23℃保持3.5小时，然后冷却至-78℃，反应用饱和NH4Cl水溶液(25毫升)淬灭，升温至23℃并用Et2O(200毫升)萃取，有机萃取物用MgSO4干燥、过滤和浓缩，剩余物用快速柱色谱(己烷)纯化产生三丁基-苯乙氧基甲基-锡酸盐无色液体(3.73克，88％产率)。
Rf＝0.63(4％EtOAc在己烷中).IR(cm-1)2955，2924，2852，1464，1082.1H NMR(CDCl3)δ0.90(t，J＝7.2，15H)，1.31(sextet，J＝7.4，6H)，1.50(quintet，J＝7.4，6H)，2.86(t，J＝7.0，2H)，3.54(t，J＝7.0，2H)，3.75(s，2H)，7.15-7.33(m，5H).13C NMR(CDCl3)δ9.01，13.66，27.28，29.12，36.36，61.94，76.38，125.94，128.17，128.91，139.50.产物Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-CH2OCH2CH2Ph的制备将三丁基-苯乙氧基甲基-锡酸盐(0.443克，1.02毫摩尔)在THF(10毫升)中的溶液冷却至-78℃，加入正丁基锂(2.5M己烷中，0.41毫升)，混合物搅拌15分钟，加入Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-N(CH3)OCH3(如在实施例9中所述制备)(0.10克，0.17毫摩尔)，用1.5小时将反应混合物升温至0℃，然后倒入100毫升EtOAc中，该溶液用30毫升10％柠檬酸水溶液，30毫升水、3毫升盐水洗，MgSO4干燥、过滤和浓缩，剩余物用柱色谱(梯度洗脱，3-5％CH3OH/CHCl3)纯化，产生0.014克(13％)白色固体。1H NMR(DMSO-d6)δ0.79(t，6H，J＝6.8)，1.30(m，2H)，1.48(m，1H)，1.76(s，3H)，2.80(t，2H，J＝6.8)，2.86(m，1H)，2.99(dd，1H，J＝13.2，4.0)，3.24-3.42(m，2H)，3.56(t，2H，J＝6.8)，4.01(m，1H)，4.10(m，2H)，4.34(m，1H)，4.47(m，1H)，5.00(m，2H)，7.13-7.33(m，10H)，7.40(d，1H，J＝8.5)，7.72(t，1H，J＝5.5)，8.03(d，1H，J＝7.4)，8.32(d，1H，J＝7.4).HRMSC37H46N4O7计算值(M+Cs)，791.2421；实测值，791.2439.(C37H46N4O7)元素分析C，H，N.实施例19Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-CH2OCH3
用与在制备化合物18中所述相似的步骤，从Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-N(CH3)OCH3(如在实施例9中所述制备)和三丁基-甲氧基甲基锡酸盐(如在C.R.Hebd.Seances.Acaol.Sci.Ser.C(1970)，第270卷，2080中所述制备)合成了白色固体的标题化合物，产率26％。
1HNMR(CDCl3)δ0.90(t，6H，J＝6.6)，1.45(m，1H)，1.62(m，1H)，2.01(s，3H)，3.17(m，1H)，3.25(m，1H)，3.48(s，3H)，3.88-4.05(m，1H)，4.12(m，1H)，4.20(m，1H)，4.34(m，1H)，4.82(m，1H)，4.85-4.95(m，1H)，5.05(m，1H)，5.10(m，2H)，5.83(m，1H)，6.45(m，1H)，6.55(t，1H，J＝7.4)，7.05(m，1H)，7.40(d，1H，J＝8.5)，7.18-7.43(m，10H).HRMS C30H40N4O7计算值(M+H)，569.2975；实测值，569.2991.(C30H40N4O7)元素分析C，H，N.实施例20Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln-2-苯并噻唑 中间体Boc-L(Tr-Gln)-2-苯并噻唑的制备在-78℃向苯并噻唑(1.63毫升，14.9毫摩尔，3.5当量)在THF(100毫升)中的溶液加入正丁基锂(9.31毫升，14.9毫摩尔，3.5当量)，混合物在-78℃搅拌30分钟，在-78℃向上述混合物中加入Boc-L-(Tr-Gln)-N(CH3)OCH3(如在Dragovich等人，药物化学杂志(J.Med.Chem.)(1998)，第41卷，2806中所述制备)(2.26克，4.25毫摩尔，1当量)在THF(50毫升)中的溶液，在-78℃搅拌2小时后，将反应混合物分配在饱和NH4Cl(100毫升)和EtOAc(2×100毫升)中，合并的有机层用Na2SO4干燥和浓缩，剩余物用快速柱色谱(25％EtOAc在己烷中)纯化产生Boc-L-(Tr-Gln)-2-苯并噻唑(0.987克，35％产率)浅黄色泡沫。
Rf＝o.24(25％EtOAc在己烷中).IR(cm-1)3394，1696，1489，1165.1H NMR(CDCl3)δ1.46(s，9H)，1.59-1.64(m，1H)，2.07-2.09(m，1H)，2.44-2.53(m，2H)，5.61(m，1H)，7.08(s，br.1H)，7.25-7.33(m，16H)，7.55-7.63(m，2H)，8.00-8.03(m，1H)，8.16-8.19(m，1H).(C36H35N3O4S)元素分析C，H，N.中间体Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-2-苯并噻唑的制备将Boc-L-(Tr-Gln)-2-苯并噻唑(0.156克，0.26毫摩尔，1.0当量)溶于1，4-二噁烷(3毫升)中，加入HCl在1，4-二噁烷(4.0M，3毫升)中的溶液，反应混合物在室温搅拌3小时，然后减压下除去溶剂，剩余物溶于DMF(5毫升)中，冷却至0℃，依次加入Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(0.160克，0.39毫摩尔，1.5当量)，DIEA(0.136毫升，0.78毫摩尔，3当量)和HATU(0.148克，0.39毫摩尔，1.5当量)，反应混合物在0℃搅拌40分钟，然后在减压下除去溶剂，剩余物用CH2Cl2(50毫升)提取，依次用0.5NHCl(50毫升)，饱和NaHCO3(50毫升)，水(50毫升)和盐水(50毫升)洗，有机层用MgSO4干燥、过滤和浓缩，剩余物用快速柱色谱(2％CH3OH在CH2Cl2中)纯化产生Cbz-L-Leu-L-Phe-L(Tr-Gln)-2-苯并噻唑10.170克，74％产率)。Rf＝0.24(5％CH3OH在CH2Cl2中).IR(cm-1)3295，1654，1226.1H NMR(CDCl3)δ0.77-0.91(m，6H)，1.31-1.37(m，1H)，1.42-1.46(m，1H)，1.48-1.58(m，3H)，2.02-2.18(m，1H)，2.38-2.42(m，2H)，2.83-3.18(m，2H)，4.09-4.13(m，1H)，4.56-4.59(m，1H)，4.88-4.97(m，2H)，5.68-5.72(m，1H)，6.42-6.47(m，1H)，6.56(d，1H，J＝7.5)，7.07-7.35(m，25H)，7.54-7.59(m，2H)，7.96-8.01(m，2H)，8.10-8.14(m，1H).C53H53N5O6S)元素分析C，H，N.产物的制备在23℃将三异丙基甲硅烷(0.077毫升，0.376毫摩尔)和三氟乙酸(3毫升)依次加入到Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-2-苯并噻唑(0.150克，0.17毫摩尔)在CH2Cl2(3毫升)中的溶液中产生亮黄色溶液，反应混合物在23℃搅拌30分钟，此时溶液变成无色，减压下除去挥发性物质、形成的固体用Et2O(10毫升)研制，过滤和空气干燥产生Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln-2-苯并噻唑(0.058克，49％产率)浅黄色固体。Rf＝0.50(10％CH3OH在CH2Cl2中).mp＝192-195℃.IR(cm-1)3298，1659，1526，1238.1H NMR(CDCl3)δ0.68-0.81(m，6H)，1.22-1.30(m，2H)，1.42-1.48(m，1H)，1.98-2.07(m，1H)，2.15-2.24(m，3H)，2.68-2.79(m，1H)，3.00-3.05(m，1H)，3.93-3.95(m，1H)，4.60-4.64(m，1H)，4.99(s，2H)，5.42-6.46(m，1H)，6.81(s，1H)，7.15-7.37(m，13H)，7.63-7.71(m，2H)，7.87-7.90(m，1H)，8.26-8.29(m，1H)，8.70-8.72(m，1H).(C35H39N6O5S)元素分析C，H，N.实施例21Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻唑 中间体Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-H(Q1)的制备将三氧化硫-吡啶复合物(2.55克，16.0毫摩尔，4当量)在DMSO(60毫升)中的溶液缓慢地加入到在10-17℃冷却的Boc-L(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-丙氨醇(P1)(如在Dragovich等人药物化学杂志(J.Med.Chem.)(1999)，第42卷，1213中所述制备)(1.64克，4.00毫摩尔，1当量)和Et3N(2.01毫升，14.4毫摩尔，3.6当量)的混合物中，反应混合物在23℃搅拌1.5小时，将混合物在0℃缓慢用水(80毫升)淬灭，然后用EtOAc(2×150毫升)萃取，合并的有机层用5％柠檬酸(200毫升)和盐水(200毫升)洗，然后用MgSO4干燥和浓缩，形成的白色泡沫不需进一步纯化就可使用。中间体Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-OH(K1)的制备向Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-H(1.63克，4.00毫摩尔，1当量)在叔丁醇(50毫升)和2-甲基-2-丁烯(12毫升)中的溶液用额外的漏斗加入NaClO2(3.32克，36.68毫摩尔，9.17当量)和NaH2PO4(3.32克，27.68毫摩尔，6.92当量)在水(20毫升)中的溶液，混合物在23℃搅拌过夜，混合物用Et2O(80毫升)洗，水层用1N HCl酸化至pH3，然后用10％CH3OH/CH2Cl2(2×100毫升)萃取，合并的有机层用水(100毫升)洗，Na2SO4干燥和浓缩产生Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-OH(1.11克，66％)白色泡沫，该物料不需进一步纯化就可使用。1H NMR(CDCl3)δ1.44(s，9H)，1.66-1.75(m，1H)，1.78-1.88(m，1H)，2.18-2.31(m，2H)，2.75-2.85(m，1H)，3.22-3.40(m，2H)，3.81(s，6H)，4.45(s，2H)，4.52-4.56(m，1H)，6.46-6.49(m，2H)，7.13(d，1H，J＝7.5).中间体Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-N(CH3)OCH3(S1)的制备在-20℃下将异丁基氯甲酸酯(0.340克，2.62毫摩尔，1当量)加入到Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-OH(1.11克，2.62毫摩尔，1当量)和NMM(0.570毫升，5.24毫摩尔，2当量)在CH2Cl2(40毫升)中的溶液中，反应混合物在-20℃搅拌20分钟，然后加入N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(0.257克，2.62毫摩尔，1当量)，形成的混合物在-20℃搅拌1小时，在23℃搅拌2小时，然后分配在水(100毫升)和CH2Cl2(2×100毫升)中，合并的有机层用Na2SO4干燥和浓缩，剩余物用快速柱色谱纯化(2％CH3OH/CH2Cl2)产生Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-N(CH3)OCH3(0.869克，71％产率)白色泡沫。
Rf＝0.16(5％CH3OH在CH2Cl2中).IR(cm-1)3413，1671，1508，1258.1H NMR(CDCl3)δ1.42(s，9H)，1.59-1.69(m，2H)，2.13-2.20(m，1H)，2.30-2.38(m，1H)，2.51-2.95(m，1H)，3.18-3.22(m，5H)，3.77(s，3H)，3.80(s，6H)，4.41(s，2H)，4.64-4.69(m，1H)，5.39(d，1H，J＝9.3)，6.42-6.44(m，2H)，7.11(d，1H，J＝8.7).(C23H35N3O7·0.25H2O)元素分析C，H，N.中间体Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻唑(T1)的制备在-78℃下向苯并噻唑(0.815毫升，7.47毫摩尔，3.5当量)在THF(80毫升中的溶液中加入正丁基锂(1.6M己烷溶液，4.7毫升，7.47毫摩尔，3.5当量)，混合物在-78℃搅拌30分钟，在-78℃下向上述混合物中加入Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-N(CH3)OCH3(0.869克，1.87毫摩尔，1当量)在THF(30毫升)中的溶液，在-78℃搅拌2小时后，将反应混合物分配在饱和NH4Cl(100毫升)和EtOAc(2×50毫升)中，合并的有机层用Na2SO4干燥和浓缩，剩余物用快速柱色谱纯化(2％CH3OH/CHCl3)产生Boc-L-[(-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻唑(0.872克，86％产率)浅黄色泡沫。
Rf＝0.43(5％CH3OH在CH2Cl2中).IR(cm-1)3402，1698，1503，1258.1H NMR(CDCl3)δ1.42(s，9H)，1.89-1.96(m，1H)，2.17-2.23(m，1H)，2.43-2.48(m，1H)，2.71-2.74(m，1H)，3.20-3.28(m，3H)，3.78(s，6H)，4.40(s，2H)，5.55-5.60(m，1H)，5.93(d，1H，J＝7.8)，6.39-6.44(m，2H)，7.09(d，1H，J＝8.1)，7.52-7.60(m，2H)，7.97-8.00(m，1H)，8.15-8.17(m，1H).(C28H33N3O6S·0.20H2O)元素分析C，H，N.中间体Boc-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻唑(U1)的制备向Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻唑(0.406克，0.75毫摩尔，1当量)在CH3CN(10毫升)和水(1毫升)中的悬浮液加入DDQ(0.34克，1.5毫摩尔，2当量)，反应混合物在60℃搅拌5小时，然后用CH2Cl2(50毫升)稀释，依次用饱和NaHCO3(40毫升)和盐水(40毫升)洗，有机层用Na2SO4干燥和浓缩，剩余物用快速柱色谱(2％CH3OH/CH2Cl2)纯化产生Boc-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻唑(0.214克，80％)白色泡沫。
Rf＝0.28(10％CH3OH在CH2Cl2中).IR(cm-1)3295，1693，1167.1HNMR(CDCl3)δ1.44(s，9H)，1.75(s，2H)，2.12-2.17(m，2H)，2.66-2.70(m，1H)，3.04-3.43(m，2H)，5.60(m，1H)，5.81(m，2H)，7.52-7.61(m，2H)，7.99(d，1H，J＝8.4)，8.17(d，1H，J＝7.8).(C19H23N3O4S)元素分析C，H，N.产物(W1)的制备将Boc-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻唑(0.200克，0.56毫摩尔，1.0当量)溶于1，4-二噁烷(3毫升)中，加入HCl在1，4-二噁烷(4.0M，3毫升)中的溶液，反应混合物在室温搅拌3小时，然后减压下除去溶剂，剩余物溶于CH3CN(6毫升)中，冷却至0℃，依次加入Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(0.347克，0.84毫摩尔，1.5当量)，NMM(0.246毫升，2.24毫摩尔，4当量)和HATU(0.319克，0.84毫摩尔，1.5当量，反应混合物在0℃搅拌40分钟，然后减压下除去溶剂，剩余物提取至CH2Cl2(50毫升)中，依次用0.5N HCl(50毫升)、饱和NaHCO3(50毫升)，水(50毫升)和盐水(50毫升)洗，有机层用MgSO4干燥，过滤和浓缩，剩余物用快速柱色谱(2％CH3OH/CH2Cl2)纯化产生Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻唑(0.142克，37％产率)。
Rf＝0.20(5％CH3OH在CH2Cl2中).mp＝108-111℃.IR(cm-1)3284，1662，1531，1244.1H NMR(CDCl3)δ0.81-0.88(m，6H)，1.40-1.44(m，1H)，1.55-1.59(m，2H)，1.89-2.00(m，2H)，2.10-2.17(m，2H)，2.48-2.52(m，2H)，3.09-3.18(m，2H)，3.35-3.37(m，2H)，4.11-4.19(m，1H)，4.80-4.85(m，1H)，5.05-5.10(m，2H)，5.25(d，1H，J＝8.1)，5.68-5.70(m，1H)，6.18(s，br 1H)，7.07-7.37(m，10H)，7.52-7.61(m，2H)，7.97-8.00(m，1H)，8.07-8.09(m，1H)，8.15-8.18(m，1H).(C37H41N5O6S)元素分析C，H，N.实施例22Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-2-噻唑 将Boc-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-2-噻唑(以在实施例21中所述的合成Boc-L[(S)-Pyyol-Ala]-2-苯并噻唑相类似的方式从Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-N(CH3)OCH3、正丁基锂和噻唑制得)(0.065克，0.19毫摩尔，1.0当量)溶于1，4-二噁烷(3毫升)，加入HCl在1，4-二噁烷(4.0M，3毫升)中的溶液，反应混合物在23℃搅拌3小时，然后在减压下除去溶剂，剩余物溶于在0℃冷却着的CH3CN(6毫升)，然后依次加入Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(0.118克，0.29毫摩尔，1.5当量)，NMM(0.084毫升，0.76毫摩尔，4当量)和HATU(0.110克，0.29毫摩尔，1.5当量)，反应混合物在0℃搅拌40分钟，然后在减压下除去溶剂，剩余物提取至CH2Cl2(50毫升)中，依次用0.5NHCl(50毫升)，饱和NaHCO3(50毫升)，H2O(50毫升)和盐水(50毫升)洗，有机层用MgSO4干燥，过滤和浓缩，剩余物用快速柱色谱(2％CH3OH/CH2Cl2)纯化产生Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-2-噻唑(0.057克，48％产率)。Rf＝0.48(10％CH3OH在CH2Cl2中).mp＝83-85℃.IR(cm-1)3284，1661，1536，1247.1H NMR(CDCl3)δ0.85-0.86(m，6H)，1.39-1.44(m，1H)，1.52-1.58(m，2H)，2.00-2.07(m，4H)，2.43(m，2H)，3.01-3.21(m，3H)，3.32-3.34(m，2H)，4.14(m，1H)，4.85-4.87(m，1H)，5.08(s，2H)，5.29-5.32(m，1H)，5.59(m，1H)，6.55(s，br 1H)，7.16-7.22(m，5H)，7.33(s，5H)，7.69(d，1H，J＝1.5)，8.00(d，1H，J＝1.5).(C33H39N5O6S·0.50H2O)元素分析C，H，N.实施例23Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-2-吡啶 在23℃将HCl在1，4-二噁烷(4.0M，1毫升)中的溶液加入到在1毫升1，4-二噁烷中的Boc-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-2-吡啶以在实施例21中所述的Boc-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻唑的合成相类似的方式从Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-N(CH3)OCH3，正丁基锂和吡啶制得)(0.063克，0.19毫摩尔，1当量)，2小时后，减压下除去挥发性物质，剩余物和Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(0.056克，0.23毫摩尔，1.2当量)溶于CH3CN(1毫升)和在0℃冷却，然后依次加入NMM(0.083毫升，0.91毫摩尔，4.8当量)和HATU(0.060克，0.23毫摩尔，1.2当量)，反应混合物在0℃搅拌2小时，然后在减压下除去挥发性物质，剩余物溶于CH2Cl2(70毫升)中，然后用1N HCl(70毫升)饱和NaHCO3水溶液(70毫升)和盐水(70毫升)洗，合并的有机层用Na2SO4干燥、浓缩和剩余物用快速柱色谱(梯度洗脱2-4％CH3OH/CH2Cl2)纯化提供Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-2-吡啶(0.060克，50％)白色泡沫。Rf＝0.28(5％CH3OH在CH2Cl2中).IR(cm-1)3279，2954，1690，1660，1531.1H NMR(CDCl3)δ0.85-0.86(m，6H)，1.38-1.43(m，2H)，1.51-1.63(m，2H)1.94-2.06(m，4H)，2.39-2.52(m，2H)，3.04-3.20(m，3H)，3.33-3.34(m，1H)，4.17-4.19(m，1H)，4.85-4.87(m，1H)，5.09-5.10(m，2H)，5.33-5.36(m，1H)，5.89(m，1H)，7.10-7.17(m，4H)，7.34(m，4H)，7.45-7.52(m，3H)，7.75-7.86(m，2H)，7.99(d，1H，J＝7.8)，8.65(d，1H，J＝4.2).(C35H41N5O6·0.35H2O)元素分析C，H，N.实施例24Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(S)-Pyrrol(-Ala)-CH3 中间体Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-CH3的制备在-40℃下将CH3Li(1.0M THF溶液，5.97毫升，5.79毫摩尔，3.5当量)加入到Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-N(CH3)OCH3(如在实施例21中所述制备)在THF(15毫升)中的溶液，混合物在-40℃搅拌1小时，然后分配在饱和NH4Cl(50毫升)和EtOAc(2×50毫升)中，合并的有机层用Na2SO4干燥和浓缩，剩余物用快速柱色谱(2％CH3OH/CH2Cl2)纯化产生Boe-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-CH3(0.366克，48％产率)浅黄色泡沫。Rf＝0.53(50％EtOAc在己烷中).IR(cm-1)3307，1674，1509，1159.1H NMR(CDCl3)δ1.43(s，9H)，1.78-1.86(m，1H)，2.00-2.14(m，2H)，2.20-2.32(m，4H)，2.40-2.50(m，1H)，3.14-3.22(m，2H)，3.78(s，6H)，4.19-4.25(m，1H)，4.38(s，2H)，6.09(d，1H，J＝6.6)，6.43-6.45(m，2H)，7.10(d，1H，J＝7.8).(C22H32N2O6)元素分析C，H，N.中间体Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[N-2，4-二甲氧基苄基]-(S)-Pyrrol-Ala-CH3的制备将Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-CH3(0.230克，0.55毫摩尔，1.0当量)溶于1，4-二噁烷(3毫升)中，加入HCl在1，4-二噁烷中的溶液(4.0M，3毫升)，反应混合物在室温搅拌3小时，然后在减压下除去溶剂，剩余物溶于CH3CN(6毫升)中，冷却至0℃，然后依次加入Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(0.340克，0.83毫摩尔，1.5当量)，NMM(0.242毫升，2.20毫摩尔，4当量)和HATU(0.314克，1.5当量)，反应混合物在0℃搅拌40分钟，减压下除去溶剂，剩余物提取至CH2Cl2(50毫升)中，依次用0.5N HCl(50毫升)，饱和NaHCO3(50毫升)，水(50毫升)和盐水(50毫升)洗，有机层用MgSO4干燥、过滤和浓缩，剩余物用快速柱色谱(梯度洗脱，0→2％CH3OH/CH2Cl2)纯化产生Cbz-L-Leu-L-Phe-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-CH3(0.304克，779％产率)被一些不能分离的杂质污染。
Rf＝0.30(50％EtOAc在己烷中).IR(cm-1)3295，1663，1510，1261.1H NMR(CDCl3)δ0.88(s，3H)，0.90(s，3H)，1.42-1.67(m，6H)，1.72-1.80(m，1H)，1.83-1.94(m，1H)，2.04-2.20(m，5H)，3.08-3.19(m，2H)，3.79(s，6H)，4.22-4.26(m，2H)，4.30-4.40(m，2H)，4.81-4.88(m，1H)，5.08-5.10(m，2H)，5.23(m，1H)，6.42-6.45(m，2H)，6.80(d，1H，J＝8.1)，7.06-7.10(m，1H)，7.18-7.19(m，5H)，7.33-7.34(m，5H)，8.45(m，1H).产物的制备向Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-CH3(0.300克，0.42毫摩尔，1当量)在CH3CN(10毫升)和水(1毫升)中的悬浮液中加入DDQ(0.190克，0.84毫摩尔，2当量)，反应混合物在60℃搅拌5小时，然后用CH2Cl2(50毫升)稀释和依次用饱和NaHCO3水溶液(40毫升)和盐水(40毫升)洗，有机层用Na2SO4干燥和浓缩，剩余物用快速柱色谱(2％CH3OH在CH2Cl2中)纯化产生Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-CH3(0.073克，27％)白色泡沫。
Rf＝0.13(5％CH3OH在CH2Cl2中).IR(cm-1)3285，1661，1544，1261.1H NMR(CDCl3)δ0.82-0.90(m，6H)，1.24-1.37(m，3H)，1.55-1.64(m，2H)，1.74-1.96(m，4H)，2.09(s，3H)，2.35(m，1H)，3.10-3.12(m，1H)，3.28-3.32(m，1H)，4.09-4.16(m，1H)，4.35(m，1H)，4.79-4.84(m，1H)，5.02-5.14(m，2H)，5.22(d，1H，J＝6.9)，5.99(s，1H)，6.94-6.96(m，1H)，7.20-7.24(m，5H)，7.35(s，5H)，7.94-7.96(m，1H).(C31H40N4O6·0.50H2O)元素分析C，H，N.实施例25Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻吩 向Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻吩(用与在实施例24中所述的Cbz-L-Leu-L-Phe-L[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-CH3的合成相类似的方式从Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-N(CH3)OCH3，正丁基锂和苯并噻吩制得)(0.09克，0.12毫摩尔，1当量)在CH3CN(10毫升)和水(1毫升)中的悬浮液中加入DDQ(0.066克，0.30毫摩尔，2，4当量)，反应混合物在60℃搅拌5小时，然后用CH2Cl2(50毫升)冲稀，依次用饱和NaHCO3水溶液(40毫升)和盐水(40毫升)洗，有机层用Na2SO4干燥和浓缩，剩余物用快速柱色谱(2％CH3OH在CH2Cl2中)纯化产生Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻吩(0.055克，69％)白色泡沫。Rf＝0.52(10％CH3OH在CH2Cl2中).IR(cm-1)3287，1663，1514，1255.1H NMR(CDCl3)δ0.77-0.82(m，6H)，1.26-1.32(m，2H)，1.47-1.53(m，2H)，1.61-1.81(m，2H)，2.10-2.20(m，2H)，2.32-2.36(m，1H)，2.73-2.81(m，1H)，2.87-2.94(m，1H)，3.06-3.15(m，2H)，3.97-4.03(m，1H)，4.50-4.55(m，1H)，5.00(m，2H)，5.32-5.37(m，1H)，6.97-7.10(m，5H)，7.28-7.40(m，6H)，7.46-7.58(m，2H)，7.65(s，1H)，8.02-8.08(m，2H)，8.40(s，1H)，8.69(d，1H，J＝8.1).(C38H42N4O6)元素分析C，H，N.实施例26Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-Ph 用与在实施例24中所述的Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-CH3的合成相类似的方式从Boc-L-[(N-2，4-二甲基氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-N(CH3)OCH3和PhLi制得标题化合物。Rf＝0.25(5％MeOH在CH2Cl2中).IR(cm-1)3280，1696，1643.1H NMR(CDCl3)δ0.79-0.92(m，7H)，1.34-1.44(m，1H)，1.48-1.89(m，5H)，2.06-2.18(m，1H)，2.27-2.38(m，1H)，2.44-2.56(m，1H)，2.98-3.35(m，3H)，4.11-4.21(m，1H)，4.76-4.85(m，1H)，5.06(d，1H，J＝12.3)，5.12(d，1H，J＝12.3)，5.28(d，1H，J＝9.0)，5.47-5.56(m，1H)，6.38(s，1H)，7.08-7.20(m，5H)，7.29-7.42(m，5H)，7.44-7.52(m，2H)，7.56-7.63(m，2H)，7.93-7.98(m，2H).(C36H42N4O6·0.50H2O)元素分析C，H，N.实施例27Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln-CH2OC(O)-(2，6-二氯苯基) 中间体Cbz-L-(Tr-Gln)-NH2的制备在约-15℃下向5.22克商购得到的Cbz-L-(Tr-Gln)OH(10.0毫摩尔)在100毫升THF中的溶液中加入3.0毫升Et3N(21.6毫摩尔)，接着缓慢加入1.64克的异丁基氯代甲酸酯(12.0毫摩尔)，在过滤除去形成的固体之前将反应混合物搅拌40分钟。然后向滤液中加入从5.0克Dia2ald(23毫摩尔)产生重氮甲烷在乙醚中的溶液和5.0克KOH，在23℃搅拌24小时，减压下蒸发除去溶剂后，剩余物用快速柱色谱纯化，用CH2Cl2/CH3OH(100∶1，600毫升；100∶2，600毫升；100∶3，600毫升)洗脱，产生5.37克产物(98％产率)1H NMR(CDCl3)δ7.15-7.40(m，20H)，7.02(s，1H)，5.90(d，1H)，5.35(m，1H)，5.10(s，2H)，4.15(m，1H)，2.25-2.55(m，2H)，2.10(m，1H)，1.80(m，1H).中间体Cbz-L-(Tr-Gln)-CH2Cl的制备在0℃向4.8克Cbz-L-(Tr-Gln)-CHN2(8.8毫摩尔)在200毫升无水Et2O和30毫升THF中的溶液缓慢加入50毫升1.0M HCl在Et2O中的溶液，反应在15分钟后干净地完成，减压下蒸发除去溶剂后，得到的产物不需进一步纯化直接用于下一步。
1H NMR(CDCl3)δ7.15-7.40(m，20H)，6.95(s，1H)，5.95(d，1H)，5.10(s，2H)，4.40(m，1H)，4.20(s，2H)，2.25-2.50(m，2H)，2.00-2.25(m，1H)，1.75-1.95(m，1H).中间体Cbz-L-(Tr-Gln)-CH2OC(O)-(2，6-二氯苯基)的制备将2，40克Cbz-L-(Tr-Gln)-CH2Cl(4.3毫摩尔)，1.07克的2，6-二氯苯甲酸(5.6毫摩尔)和1.5克氟化铯(10毫摩尔)于65℃在20毫升DMF中搅拌3.5小时，然后加入150毫升的EtOAc，混合物用盐水洗四次，用Na2SO4干燥，减压下除去溶液，剩余物用快速柱色谱纯化(用己烷/EtOAc3∶1，800毫升；2∶1，1800毫升洗脱)产生1.80克产物(59％产率)。1HNMR(CDCl3)δ7.15-7.40(m，23H)，6.90(s，1H)，5.90(d，1H)，5.15(s，2H)，4.85-5.10(dd，2H)，4.45(m，1H)，2.35-2.65(m，2H)，2.15-2.35(m，1H)，1.90-2.10(m，1H).中间体Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-CH2OC(O)-(2，6-二氯苯基)的制备将Cbz-L-(Tr-Gln)-CH2OC(O)-(2，6-二氯苯基)(0.90克，1.0毫摩尔)溶于50毫升EtOH和20毫升THF中，加入～200毫克10％Pd/C和5.0毫升1.0M HCl在Et2O中的溶液，将混合物在23℃下暴露下来自气球中的H24小时，过滤除去固体，滤液减压下浓缩，剩余物不需进一步纯化直接用于下一步。
在0℃，向0.70克Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(1.70毫摩尔)和0.40克Et3N(4.0毫摩尔)在50毫升CH2Cl2中的溶液加入0.75克BOP试剂(1.70毫摩尔)。将混合物搅拌50分钟后与上面制得的产物相混合，在23℃搅拌42小时后，减压下除去溶剂，剩余物用快速柱色谱纯化(用1∶1的己烷/EtoAc混合物洗脱)产生0.88克产物(二步共72％产率)。1HNMR(DMSO-d6)δ7.90-8.70(m，3H)，7.10-7.50(m，29H)，4.75-5.20(m，4H)，4.55(m，1H)，4.30(m，1H)，4.00(m，1H)，2.70-3.20(m，2H)，0.70-2.50(m，13H).产物Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln-CH2OC(O)-(2，6-二氯苯基)的制备在0℃，向0.80克Cbz-L-Leu-L-Phe-L(Tr-Gln)-CH2OC(O)-(2，6-二氯苯基)在24毫升CH2Cl2中的溶液中缓慢加入8毫升TFA，将黄色混合物搅拌2小时，然后加入NaHCO3(固体)淬灭TFA直至黄色消失，分离出有机层，固体用CH2Cl2彻底洗，合并的有机层浓缩，剩余物用制备型TLC纯化(用10∶1 CH2Cl2/CH3OH洗脱)产生100毫克产物(17％产率)1H NMR(CH3OH-d4)δ7.10-7.50(m，13H)，4.00-5.20(m，7H)，2.70-3.25(m，2H)，1.75-2.50(m，4H)，1.20-1.70(m，3H)，0.90(m，6H).LC/MS(APCI)727(M+1)/729＝3/2；537(M-二氯苯甲酸).实施例28(5-甲基异噁唑-3-羧基)-L-Val-L-Phe(4-F)-L-[(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻唑 中间体Boc-L-(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-丙氨醇-2-苯并噻唑(Z1)的制备向在-20℃冷却着的Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻唑(T1)(如在实施例21中所述制备)(0.252克，0.54毫摩尔，1当量)的溶液中加入NaBH4(0.010克，0.27毫摩尔，0.5当量)，反应混合物在-20℃搅拌20分钟，然后分配在饱和水(50毫升)和CH2Cl2(2×50毫升)中，有机层用MgSO4干燥、过滤和浓缩，剩余物用快速柱色谱(梯度洗脱，0→2％CH3OH在CH2Cl2中)产生Boc-L-(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-丙氨醇-2-苯并噻唑(0.199克，68％产率)白色泡沫。
1H NMR(CDCl3)(异构体混合物)δ1.35(s)，1.46(s)，1.88-1.97(m)，2.04-2.10(m)，2.23-2.28(m)，2.52-2.60(m)，2.66-2.74(m)，3.16-3.28(m)，3.78(s)，3.80-3.84(m)，4.22-4.26(m)，4.38-4.51(m)，5.17-5.18(m)，5.66-5.68(m)，5.73-5.76(m)，5.87-5.89(m)，6.27-6.29(m)，6.41-6.47(m)，7.07-7.15(m)，7.37-7.43(m)，7.47-7.52(m)，7.92(d，J＝7.8)，8.01(d，J＝6.9).(C28H35N3O6S)元素分析C，H，N.中间体Boc-L-Val-V-Phe(4-F)-L-(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-丙氨醇-2-苯并噻唑(BB1)的制备
将Boc-L-(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-丙氨醇-2-苯并噻唑(0.199克，0.37毫摩尔，1.0当量)溶于1，4-二噁烷(3毫升)中，加入HCl在1，4-二噁烷中的溶液(4.0M，3毫升)，反应混合物在23℃搅拌3小时，然后减压下除去溶剂，剩余物溶于CH3CN(15毫升)，冷却至0℃，依次加入Boc-L-Val-L-Phe(4-F)-OH(用与在实施例9中所述的制备Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(N-Ac-氨基-Ala)-OH相类似的方式从Boc-L-Val-OH和4-氟苯丙氨酸钠盐制备)(0.202克，0.56毫摩尔，1.5当量)、NMM(0.163毫升，0.148毫摩尔，4当量)和HATU(0.213克，0.56毫摩尔，1.5当量)，反应混合物在0℃搅拌40分钟，然后减压下除去溶剂，剩余物提取至CH2Cl2(50毫升)中，依次用0.5N HCl(50毫升)饱和NaHCO3水溶液(50毫升)、水(50毫升)和盐水(50毫升)洗，有机层用MgSO4干燥、过滤和浓缩，剩余物用快速柱色谱纯化(2％CH3OH在CH2Cl2中)产生Boc-L-Val-L-Phe(4-F)-L-(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-丙氨醇-2-苯并噻唑(0.280克，94％产率)。
Rf＝0.59(10％CH3OH in CH2Cl2).IR(cm-1)3279，1644，1158.1H NMR(CDCl3)(异构体混合物)δ0.51(d，J＝6.6)，0.67(d，J＝6.6)，0.9(d，J＝6.9)，0.95(d，J＝6.6)，1.46(s)，1.47(s)，1.59-1.65(m)，2.08-2.13(m)，2.87-3.18(m)，2.94-2.96(m)，3.02-3.05(m)，3.18-3.28(m)，3.90-4.01(m)，4.23-4.46(m)，4.88(m)，5.07-5.12(m)，5.98(m)，6.24-6.25(m)，6.47-6.53(m)，6.63-6.74(m)，6.77-6.89(m)，6.97-7.00(m)，7.11-7.20(m)，7.36-7.53(m)，7.87-8.00(m)，8.12(m)，8.76(m).(C42H52FN5O8S·0.50H2O)元素分析C，H，N.中间体(5-甲基异噻唑-3-羧基)-L-Val-L-Phe(4-F)-L-(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-丙氨醇-2-苯并噻唑(BB2)的制备将Boc-L-Val-L-Phe(4-F)-L-(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-丙氨醇-2-苯并噻唑(0.280克，0.35毫摩尔，1.0当量)溶于1，4-二噁烷(3毫升)中，加入HCl在1，4-二噁烷中的溶液(4.0M、3毫升)，反应混合物在23℃搅拌3小时，然后减压下除去溶剂，剩余物溶于CH2Cl2(15毫升)中，冷却至0℃，加入2，4，6-三甲基吡啶(0.093毫升，0.70毫摩尔，2当量)和5-甲基异噁唑-3-酰氯(0.076克，0.525毫摩尔，1.5当量)，反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后分配在饱和的水(50毫升)和CH2Cl2(2×50毫升)中，合并的有机层用Na2SO4干燥和浓缩，剩余物用柱色谱纯化(2％CH3OH在CH2Cl2中)产生(5-甲基异噁唑-3-羧基)-L-Val-L-Phe(4-F)-L-(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-丙氨醇-2-苯并噻唑(0.182克，65％产率)白色泡沫。Rf＝0.55(10％CH3OH在CH2Cl2中).IR(cm-1)3281，1643，1539，1209.1H NMR(CDCl3)(异构体混合物)δ0.57(d，J＝6.9)，0.74(d，J＝6.9)，0.83-0.87(m)，0.95-0.99(m)，1.58-1.64(m)，1.72-1.78(m)，1.94-2.02(m)，2.12-2.26(m)，2.44-2.53(m)，2.89-3.09(m)，2.21-3.28(m)，3.73(s)，3.80(s)，4.17-4.49(m)，4.91-4.94(m)，5.05-5.16(m)，5.92(d，J＝4.6)，6.20(d，J＝6.3)，6.42-6.48(m)，6.63-6.69(m)，6.74-6.80(m)，6.93-6.99(m)，7.02-7.18(m)，7.35-7.52(m)，7.88-8.00(m)，8.16(d，J＝7.5)，8.74(d，J＝5.7).(C42H47FN6O8S·0.50H2O)元素分析C，H，N.中间体(5-甲基异噁唑-3-羧基)-L-Val-L-Phe(4-F)-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻唑(Y1)的制备向Dess-Martin全碘烷(0.114克，0.27毫摩尔，1.2当量)在CH2Cl2(7毫升)中的溶液中加入(5-甲基异噁唑-3-羧基)-L-Val-L-Phe(4-F)-L-(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-丙氨醇-2-苯并噻唑(0.182克，0.22毫摩尔，1当量)在CH2Cl2(3毫升)中的溶液，反应混合物在室温搅拌2小时，然后分配在饱和的水(50毫升)和CH2Cl2(2×50毫升)中，合并的有机层用Na2SO4干燥、浓缩，剩余物进行快速柱色谱纯化(2％CH3OH在CH2Cl2中)产生(5-甲基异噁唑-3-羧基)-L-Val-L-Phe(4-F)-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻唑(0.168克，94％产率)白色泡沫。
Rf＝0.51(10％CH3OH在CH2Cl2中).IR(cm-1)3288，1645，1509，1209.1H NMR(CDCl3)δ0.97(d，3H，J＝6.9)，1.02(d，3H，J＝6.6)，2.06-2.39(m，6H)，2.51(s，3H)，3.16-3.17(m，3H)，3.25-3.30(m，2H)，3.83(s，6H)，4.39-4.45(m，2H)，4.47-4.49(m，1H)，4.89-4.96(m，1H)，5.58-5.64(m，1H)，6.42-6.51(m，3H)，6.78-6.88(m，3H)，7.02-7.22(m，3H)，7.54-7.64(m，2H)，8.00-8.03(m，1H)，8.19-8.21(m，1H)，8.96(d，1H，J＝5.7).
(C42H45FN6O8S·2.6H2O)元素分析C，H，N.产物(W2)的制备向(5-甲基异噁唑-3-羧基)-L-Val-L-Phe(4-F)-L-[(N-2，4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]-2-苯并噻唑(0.132克，0.16毫摩尔，1当量)在CH3CN(10毫升)和水(1毫升)中的悬浮液加入DDQ(0.132克，0.58毫摩尔，3.6当量)，反应混合物在60℃搅拌5小时，然后用CH2Cl2(50毫升)稀释和依次用饱和NaHCO3水溶液(40毫升)和盐水(40毫升)洗，有机层用Na2SO4干燥和浓缩，剩余物用快速柱色谱纯化(梯度洗脱，2→4％CH3OH在CH2Cl2中)产生(5-甲基异噁唑-3-羧基)-L-Val-L-Phe(4-F)-L-[(S)-Pyrrol-Aal]-2-苯并噻唑(0.011克，11％)白色泡沫。
Rf＝0.43(10％CH3OH在CH2Cl2中).IR(cm-1)3284，1682，1265.1H NMR(CDCl3)δ0.91(d，3H，J＝6.6)，0.95(d，3H，J＝6.6)，2.08-2.28(m，5H)，2.51-2.56(m，5H)，3.03-3.21(m，2H)，3.43-3.46(m，2H)，4.33-4.38(m，1H)，4.89-4.96(m，1H)，5.71-5.81(m，1H)，6.45(s，1H)，6.52(s，br 1H)，6.79-6.85(m，2H)，6.87-6.94(m，1H)，7.13-7.17(m，2H)，7.55-7.64(m，2H)，8.01-8.06(m，1H)，8.18-8.21(m，1H)，8.31(d，1H，J＝6.6).HRMS MCs+795.1259.
使用本发明的示例性化合物进行的试验结果如下所述。
生化和生物学评价鼻病毒3C蛋白酶的抑制
制备各种化合物的贮备溶液(50mM，在DMSO中)；稀释液是在同一溶剂中。用下列标准色谱步骤制备从血清型14、16和2得到的重组鼻病毒3C蛋白酶(见Birch等人，“在大肠杆菌中表达的重组人鼻病毒14 3C蛋白酶的纯化”Protein Expr.Pur.(1995)，第6卷(5)，609-618)(1)用从Pharmacia得到的Q琼脂糖凝胶快速流动(Q Sepharose Fast Flow)进行离子交换；(2)用从Biorad得到的Affi-Gel Blue进行亲合色谱；和(3)用从Pharmacia得到的Sephadex G-100分级。每个测定样品均含有2％DMSO，50mM tris pH7.6，1mM EDTA，指定浓度的测试化合物，大约1μM底物，和50-100nM蛋白酶。KObS/I值是从加入酶而不是底物所引发的反应得到的。RVP活性是用荧光共振能量转移测定法测定的。底物是(N-末端)DABCYL-(Gly-Arg-Ala-Val-Phe-Gln-Gly-Pro-Val-Gly)-EDANS。在未切割的肽中，EDANS的荧光被邻近的DABCYL部分淬灭。当肽被切割时，解除淬灭，并以荧光信号的增强测得活性。数据使用标准非线性拟合程序(Enzfit)进行分析并列于下表中。在称作KObS/[I]的栏中所列表的数据是从酶起始实验的进展曲线中测得的。抗鼻病毒Hl-HeLa细胞培养测定在该细胞保护测定中，化合物保护细胞使其免受HRV感染的能力用XTT染料还原法测得，该方法在Weislow等人的J.Natl.CancerInst.(1989)，第81卷，577-586中有所叙述。
用感染复数(m.o.i)为0.13(病毒颗粒/细胞)的HRV-14感染或只用培养基模拟感染H1-HeLa细胞。将被感染或模拟感染的细胞以每毫升8×105细胞再悬浮，与适当浓度的待测试化合物一起进行培养。两天后，将XTT/PMS加入到测试板中，甲产生的量用分光光度法在450/650nm下进行定量。EC50值是作为在化合物处理的，病毒感染的细胞中甲产生的百分比增加至由不含化合物的、模拟感染的细胞所产生的甲的50％时的化合物浓度计算出来的。50％胞毒剂量(CC50)是作为在化合物处理的，模拟感染的细胞中甲产生的百分比减少至由不含化合物的、模拟感染的细胞所产生的甲的50％时的化合物浓度计算出来的。治疗指数(TI)是通过用EC50值除CC50值计算出来的。
用于该测定的所有人鼻病毒(HRV)株均购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)，除HRV血清型-14(由Institute for Molecular Virology，University of Wisconsin，Madison，Wisconsin的Robert Rueckert博士所构建的感染性cDNA克隆产生)外。HRV原种被繁殖并在H1-HeLa细胞(ATCC)中进行了病毒测定。细胞在含有10％胎牛血清的基本必需培养基(从Life Technologies(Gaithersburg，MD)商购)中生长。
HRV测定的测试结果列于下表中。抗哥萨克病毒细胞培养测定A-21(CAV-21)和B3(CVB3)型哥萨克病毒从美国典型培养物保藏中心(ATCC，Rockville，MD)购买。病毒原种被繁殖并在H1-HeLa细胞(ATCC)中进行了抗病毒测定。细胞在含有10％胎牛血清的基本必需培养基(LifeTechnologies，Gaithersburg，MD)中生长。
化合物28保护细胞使其免受CAV-21或CVB-3感染的能力用XTT染料还原法来测量。该方法在Weislow等人J.Natl.Cancer Inst.(1989)，第81卷，577-586中有述。用CAV-21或CVB3分别以0.025或0.075的感染复数(m.o.i)感染或只用培养基模拟感染H1-Hela细胞。H1-HeLa细胞以每孔4×104细胞置于96孔板中并与适当浓度的测试化合物一起培养。一天(CVB3)或两天(CAV-21)后，向测试板加入XTT/PMS，在450/650nm下用分光光度法对甲产生的量进行定量。EC50是作为在化合物处理的、病毒感染的细胞中产生的甲增加至由不含化合物的、未感染的细胞所产生的甲的50％时的化合物浓度计算出来的。50％胞毒剂量(CC50)是作为在化合物处理的、病毒感染的细胞中产生的甲减少至由不含化合物的、未感染的细胞所产生的甲的50％时的化合物的浓度计算出来的。治疗指数(TI)是通过用EC50除CC50计算出来的。抗艾可病毒和抗肠病毒细胞培养测定艾可病毒11型(ECHO11)是从ATCC(Rockville，MD)购买的。病毒原种被繁殖并在MRC-5细胞(ATCC)中进行了抗病毒测定。细胞在含有10％胎牛血清(Life Technologies，Gaithersburg，MD)的基本必需培养基中生长。
化合物28保护细胞使其不受ECHO11感染的能力用XTT染料还原法(Weislow等人，J.Natl.Cancer Inst.(1989)，第81卷，577-586)测量。用ECHO 11分别以0.003或0.004的m.o.i感染或只用培养基模拟感染MRC-5细胞。以每孔1×104细胞加入感染或未感染的细胞并与适当浓度的化合物一起培养。四天后，向测试板中加入XTT/PMS，在450/650nm下用分光光度法对甲产生的量进行定量。EC50是作为在用化合物处理的、病毒感染的细胞中产生的甲增加至由不含化合物的、未感染的细胞所产生的甲量的50％时的化合物浓度计算出来的。50％胞毒剂量(CC50)是作为在用化合物处理的、病毒感染的细胞中产生的甲减少至由不含化合物的、未感染的细胞所产生的甲的50％时的化合物浓度计算出来的。治疗指数(TI)是通过用EC50除CC50来计算的。
化合物抗70型肠病毒(EV70)的活性可以用在此部分的上文所述相同的测定法来测定。70型肠病毒(EV70)可以从美国典型培养物保藏中心ATCC(Rockville MD)得到。
得到的本发明的化合物的结果可以与用同样方式得到的对照化合物WIN51711，WIN52084和WIN54954(从Sterling-WinthropPharmaceuticals得到)，Pirodavir(从Janssen Pharmaceuticals得到)和Pleconaril(根据Diana等人，医药化学杂志(J.Med.Chem.)(1995)第38卷，1355中所述方法制备)的结果相比较。得到的测试化合物的抗病毒数据列于下表中。称号“ND”是指对该化合物来说该数值未测定，和称号“NA”是指不适用的。
表
注释aHRV＝指定血清型的人鼻病毒b3C蛋白酶抑制活性cCVB3＝哥萨克病毒B3dCAV-21＝哥萨克病毒A21eECHO-11＝艾可病毒11
尽管本发明已经用优选的实施方案和具体的实施例进行了叙述，但是本领域的技术业人员应该认识到能进行各种变化和改进而不脱离本发明的范围和精神。因此，应该理解，本发明不受前面详细说明的限制，但受所附的权利要求和其等价物所限定。
权利要求
1.如下式的化合物 其中Y是-N(Ry)，-C(Ry)(Ry)-，或-O-，其中每个Ry独立地是H或低级烷基R1是选自选择性取代的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基，杂芳基和-C(O)R16，其中R16选自选择性取代的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、杂环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基和胺；R2和R8每个独立地选自H、F和选择性取代的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基；R3和R9每个独立地选自H和选择性取代的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、-OR17、-SR17、-NR17R18、-NR19NR17R18，和-NR17OR18，其中R17、R18和R19每个独立地选自H、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和酰基；R4是适当的有机部分；R5、R6和R7每个独立地是H、F或低级烷基；m是0或1；p是0、1、2、3、4或5；A1是CH或N；当m是1时，A2选自C(R10)(R11)、N(R12)，S，S(O)，S(O)2和O；当p是0时，每个A3独立地选自C(R10)(R11)，N(R12)，S，S(O)，S(O)2和O；其中R10、R11和R12独立地是H或低级烷基；当p不是0时，A4选自N(R13)，C(R10)(R11)，和O，和当P是0时，A4选自N(R13)(R14)，C(R10)(R11)(R12)和O(R14)，假定当A4是O(R14)时，A1不是CH；其中R10、R11和R12每个独立地是H或低级烷基，R13是H、烷基、芳基或酰基，和R14是H、烷基或芳基；假定A1，(A2)m，(A3)p和A4一起不包括超过两个连续的杂原子；或它们的药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物，或药物上可接受的溶剂化物。
2.根据权利要求1的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R7、R8和R9每个都是H。
3.如下式的化合物 基中R1、R2、R3、R4、R5、R6、A1、A2、A3、A4、m、p和Y是如在权利要求1中所定义的；或它们的药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物。
4.根据权利要求3的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R1选自烷基和单环和双环杂芳基和芳基。
5.根据权利要求3的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R1是选自-CH2NR20R21，-CH2OR20，-CH2OC(O)R20，-CH2ONR20R21和-CH2S20，其中R20和R21每个独立地选自H和选择性取代的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和-C(O)R22，其中R22选自选择性取代的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、杂环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、和胺，或R20、R21和R22中任意两个与它们所结合的原子一起形成4-至7-员环。
6.根据权利要求3的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R1选自-CR23＝CR24R25，和C≡CR25，其中R23、R24、R25和R26每个独立地选自H和选择性取代的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基。
7.根据权利要求3的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R1是-C(O)R16，其中R16是-NR27R28，R27和R28每个独立地选自选择性取代的烷基，环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基，或R27和R28与它们所结合的氮原子一起形成4-至7-员的杂环。
8.根据权利要求3的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R2选自未取代的和取代的苄基。
9.根据权利要求8的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R2是被一个或多个独立地选自低级烷基、低级烷氧基和卤素的取代基取代的苄基。
10.根据权利要求3的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R3是选择性取代的烷基或芳基甲基。
11.根据权利要求10的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R3是选自2-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丙基，和未取代的和取代的苯甲基和萘甲基。
12.根据权利要求3的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R4选自苄氧基羰基、芳基羰基和杂芳基羰基。
13.根据权利要求12的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R4是杂芳基羰基，其中杂芳基部分是具有1至3个选自O、N和S的杂原子的五员杂环。
14.根据权利要求13的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R4是杂芳基羰基，其中杂芳基部分是具有至少一个氮杂原子和至少一个氧杂原子的五员杂环。
15.根据权利要求13的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R4是杂芳基羰基，其中杂芳基部分是未取代的或取代的1，2-噁唑基，1，3-噁唑基，1，2，3-噁二唑基，1，2，4-噁二唑基或1，2，5-噁二唑基。
16.根据权利要求13的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R4是杂芳基羰基，其中杂芳基部分是选自未取代的和单甲基取代的1，2，4-噁二唑基。
17.根据权利要求13的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R4是杂芳基羰基，其中杂芳基部分选自3-异噁唑基和5-异噁唑基，每个是未取代的或被一个或二个选自甲基和卤素的取代基取代的。
18.根据权利要求3的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中部分 选自-CH2CH2C(O)NH2；-CH2CH2C(O)NH-烷基；-CH2NHC(O)CH3；和 其中n是1或2。
19.根据权利要求18的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中所述的部分
20.根据权利要求19的如下式的化合物 或它们的药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物。
21.根据权利要求20的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中R1是单-或双-环杂芳基；R2是未取代的或取代的苄基；R3是2-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丙基或芳基甲基；和R4是苄氧基羰基，芳基羰基或杂芳基羰基。
22.权利要求1的化合物，选自 和它们的药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物和药物上可接受的溶剂化物。
23.根据权利要求1的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中Y是N(Ry)。
24.根据权利要求23的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中Ry是H或甲基。
25.根据权利要求23的如下式的化合物 或它们的药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物、或药物上可接受的溶剂化物。
26.根据权利要求1的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中Y是0。
27.根据权利要求3的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中Y是0。
28.根据权利要求1的化合物、药物前体、药物上可接受的盐，药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中Y是C(Ry)(Ry)-。
29.根据权利要求3的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物，其中Y是-C(Ry)(Ry)-。
30.根据权利要求1的化合物，具有相当于在H1-HeLa细胞培养测定中的EC50小于或等于100μM的抗细小核糖核酸病毒活性。
31.一种药物组合物，含有(a)一定治疗学上有效量的至少一种抗细小核糖核酸病毒剂，后者选自在权利要求1中所定义的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物和药物上可接受的溶剂化物；和(b)药物上可接受的载体、稀释剂、媒介物或赋形剂。
32.治疗哺乳动物的由细小核糖核酸病毒蛋白酶活性介导的病症的方法，包括向需要这种治疗的哺乳动物施用治疗学上有效量的至少一种在权利要求1中所定义的化合物、药物前体、药物上可接受盐、药物活性代谢物、或药物上可接受的溶剂化物。
33.抑制细小核糖核酸病毒3C蛋白酶活性的方法，包括将细小核糖核酸病毒3C蛋白酶与有效量的至少一种在权利要求1中所定义的化合物、药物前体、药物上可接受的盐、药物活性代谢物或药物上可接受的溶剂化物相接触。
34.如权利要求33中定义的方法，其中细小核糖核酸病毒3C蛋白酶是鼻病毒蛋白酶。
35.如下式的化合物 基中q是从0至5的整数；A11是C、CH或N；A12和每个A13独立地选自C(R61)(R62)，N(R63)，S，S(O)，S(O)2，和O，其中每个R61、R62和R63独立地是H或低级烷基；A14是NR64，其中R64是H、烷基、芳基或酰基；假定A11、A12、(A13)p和A14一起包括不超过两个连续的杂原子；R141和R142每个独立地是H、F或低级烷基，或R142不存在；和虚线表示一个选择性的化合价键；和当这种键存在时，R142不存在并且A11是C；R52、R53和R54每个独立地选自H、羟基、烷基、酰基、芳基、杂芳基、羰基或羟基的适当的保护基，OR57和NR57R58，其中R57选自烷基、芳基和Si(R59)3，和R58选自烷基、芳基、烷氧基、芳氧基和Si(R59)3，其中每个R59独立地是烷基或芳基；或R52、R53和R54中任意两个一起形成＝O，和R52、R53和R54中至少一个是NR57R58，和R55和R56每个独立地是H或氮的适当的保护基；或它们的药物上可接受的盐。
36.如下式的化合物 其中R51是H、烷基、芳基或酰基，和R52、R53、R54、R55、R56和q如在权利要求35中所定义，或它们的药物上可接受的盐。
37.根据权利要求36的化合物或药物上可接受的盐，其中R51是酰胺氮的保护基。
38.根据权利要求37的化合物或药物上可接受的盐，其中R55和R56每个独立地选自H和氮的适当的保护基。
39.选自下列的化合物
全文摘要
如式(I)的化合物,其中该式的变量如在本公开中所定义,可有利地抑制或阻滞细小核糖核酸病毒3C蛋白酶的生物活性。这些化合物,以及含有这些化合物的药物组合物,适用于治疗感染了一种或多种细小核糖核酸病毒,如RVP的病人或宿主。也叙述了制备这类化合物的中间体和合成方法。
文档编号C07K5/08GK1372566SQ00812356
公开日2002年10月2日 申请日期2000年8月3日 优先权日1999年8月4日
发明者P·S·德拉格维奇, 周茹, S·E·韦伯, T·J·普林斯, S·H·莱希, S·E·凯法特, 芮元金 申请人:阿格罗尼制药公司