5－(e)－溴乙烯基尿嘧啶类似物和相关的嘧啶核苷作抗病毒剂及其使用方法

专利名称：5－(e)－溴乙烯基尿嘧啶类似物和相关的嘧啶核苷作抗病毒剂及其使用方法
技术领域：
本发明涉及嘧啶核苷化合物及其在治疗水痘-带状疱疹病毒、非洲淋巴细胞瘤病毒和卡波西肉瘤病毒感染也称之为HV-8的感染和这些病毒感染的相关并发症的用途。本发明的另一方面，也描述了使用一种或多种核苷化合物增加5-氟尿嘧啶(FU)在癌症患者体中的停留或其代谢/分解代谢的半衰期的用途。
背景技术：
尽管人类的细菌感染通过使用不断增加的可用抗生素药剂已经更容易控制和治疗，但是对病毒感染的控制和治疗却仍然十分困难并且可治疗的病毒很少。所以重点寻找治疗病毒感染的药剂已经列为研究的首位。会引起麻烦的病毒是水痘-带状疱疹病毒、EB病毒和卡波西肉瘤病毒。
水痘-带状疱疹病毒(VZV)是疱疹病毒家族的一员，它是最初感染(水痘)和复发疾病(带状疱疹)的主要成因剂。Snoeck等，“水痘-带状疱疹病毒的化学疗法”Intl.J.Antimicrob.Agents1994，4，211-226。在具有免疫能力的患者中，水痘病程一般是良性的，但是在免疫妥协患者，特别是患有获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的患者、移植受者和癌症患者中，VZV感染就会威胁到生命。Snoeck等，“目前水痘-带状疱疹病毒感染疗法的药理途径。治疗的指导。”，Drugs1999，57，187-206；和Lee，P.J.和Annunziato，P.“目前对带状疱疹的控制”Infections in Medicine1998，15，709-713。
目前对感染VZV的患者和处于危险期的具有免疫能力的患者如怀孕妇女或早产婴儿的治疗主要是以阿昔络韦(ACV)为主。参见，Whitley，R.J.“水痘-带状疱疹病毒感染的治疗途径”，J.Infect.Dis.1992，166，增刊，151-57；Shepp等“严重的免疫妥协患者的水痘-带状疱疹病毒的治疗阿昔络韦与阿糖腺苷的随机比较”New Engl.J.Med.1986，314，208-212；Whitley等，“在免疫妥协宿主中传播的带状疱疹阿昔络韦与阿糖腺苷的对照试验”，J.Infect.Dis.1992，165，450-455。尽管如此，阿昔络韦的功效及其口服的低生物利用度(De Miranda和Blum，“阿昔络韦在静脉内或口服给药后的药物动力学”J.Antimicrob.Chemother.1983，12，增刊，B29-37)以及药物抗性病毒菌株的出现(参见，Pahwa等，“AIDS儿童中与阿昔络韦抗性有关的水痘-带状疱疹持续感染”J.Am.Med.Assoc.1988，260，2879-2882；Linnemann等，“在AIDS患者延长的阿昔络韦治疗中抗阿昔络韦的水痘-带状疱疹病毒的出现”AIDS1990，4，577-579；Jacobson等，“在慢性阿昔络韦治疗患有获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者后抗阿昔络韦的水痘-带状疱疹病毒的感染”Ann.Intern.Med.1990，112，187-191)已经促使人们开发治疗VZV感染的新化合物。
在开发新化合物的尝试过程中，已发现(E)-5-(2-溴乙烯基)尿嘧啶(BVU)类似物，如(E)-5-(2-溴乙烯基)-2′-脱氧尿苷(BVDU)和1-β-D-阿糖呋喃基-(E)-5-(2-溴乙烯基)尿嘧啶(BVaraU)具有潜在的抗VZV活性。参见，例如DeClercq等，“(E)-5-(2-溴乙烯基)-2′-脱氧尿苷一种潜在和可选择的抗疱疹药剂”Proc.Natl.Acad.Sci.USA1979，76，2947-2951和Machida等，“1-β-D-阿糖呋喃基-(E)-5-(2-卤乙烯基)尿嘧啶的抗疱疹病毒和抗细胞作用”Antimicrob.Agents Chemother.1981，20，47-52。尽管如此，BVDU由嘧啶核苷磷酸化酶代谢的稳定性和最近BvaraU与抗癌药剂5-FU的药物反应造成好几例患有癌症和带状疱疹患者的死亡，已经显示出它们的潜在缺陷并限制了它们的使用。Desgranges等Biochem.Pharmacol.1983，32，3583；David，S.，“在日本死亡带来的详细临床试验”Nature1994，369，697和Watabe等，“新抗病毒剂5-氟尿嘧啶的抗癌药物前体索利夫定的药物致死反应”Yakugaku Zasshi1997，117，910-921。致力于这些问题的结果是找到了好几个令人感兴趣的核苷，如4′-硫-BVDU和碳环类似物carba BvdU。Dyson等，“一些4′-硫-2′-脱氧核苷类似物的合成和抗病毒活性”，J.Med.Chem.1991，34，2782-2786和Herdewijn，等，“(E)-5-(2-卤代乙烯基)-2′-脱氧尿苷和(E)-5-(2-卤代乙烯基)-2′-脱氧胞苷的碳环类似物的合成和抗病毒活性”J.Med.Chem.1985，28，550-555。然而，尽管这些carba衍生物抗降解并且在细胞培养基中具有相当于那些母体化合物的抗病毒活性，但是它们在体内却作用很差。Spadari等，“5-碘-2′-脱氧-L-尿苷和(E)-5-(2-溴乙烯基)-2′-脱氧-L-尿苷由第一类型的单纯疱疹病毒的胸腺嘧啶脱氧核苷激酶选择性磷酸化、抗疱疹活性和细胞毒性研究”Mol.Pharmacol.1995，47，1231-1238。
L-β-BVOddU最初是由Krzystof等发现它具有抗HSV-1复制的抑制活性。尽管该化合物是已知的，但它治疗VZV的潜在用途却没有被报道过。参见，Krzystof等，Boiorganic and Medical Chemistry LetterV014(22)2667-2672。
EB病毒(EBV)是人类的一种重要的病原体，它与单纯疱疹病毒(HSV)有关。Elliot Kieff，Virology，第三版，由B.N.Fields编辑，D.M.Knipe，P.M.Howley等，EB病毒及其复制，第74章，第2343-2396页和Alan B.Rickinson和Elliot Kieff，出处同上，第75章，第2397-2446页。EBV是Lumphocryptovirs属的嗜淋巴细胞成员，并且属于gammaherpesvirinae的亚科。也属于这个科的其他人类病毒的新成员是与卡波西肉瘤有关的疱疹病毒(KSHV/HHV8)。Chang等，Science，2661865-1869(1994)；Cesarman等，N.Eng.J.Med.3321186-1191(1995)；Soulier等，Blood，861276-1280(1995)。已鉴别出EBV有两种亚型并且它们的基因组几乎是相同的，但还不清楚EBV相关疾病与EBV亚型的关系。Abdul-Hamid等，Virology，190168-175(1992)和Sample等，J.Virol.，644084-4092(1990)。EBV裂解的基因组是由60mol％鸟嘌呤和腺嘧啶组成的线型、双股、172Kbp DNA。该基因组已被测序并发现它能够编码许多病毒特异性蛋白，它包括EBV裂解性感染过程中病毒DNA合成所涉及的好几种酶。在体外，EBV的感染一般局限于B-淋巴细胞，尽管表皮细胞也能被感染。Sixbey等，Nature，306408-483(1983)。在人类中，在B-淋巴细胞和T-淋巴细胞以及表皮细胞中也能够检测到这种病毒基因组。这种EBV基因组是以线型裂解复制的并且也能够以超螺旋环状DNA潜伏。在裂解的感染细胞中EBV基因组的表达与潜伏的感染细胞的表达是很不相同的。一旦复制裂解的DNA，在细胞中就只能表达EBV特异性DNA聚合酶、脱氧核糖核酸酶和dThd激酶。细胞培养基的研究表明了在裂解感染过程中EBV特异性DNA聚合酶对EBV DNA复制的重要作用，但是对潜伏感染细胞中超螺旋EBV DNA的保持没有作用。在潜伏感染或转化的细胞中表达了一组独特的EBV蛋白，包括EBVNA 1和有时为EBNA LP、2、3A、3B、3C、LMP1以及LMP2。Elliot Kieff，Virology第三版，由B.N.Fields，D.M.Kinpe，P.M.Howley等编辑的，EB病毒及其复制，第74章，第2343-2396页和Alan B.Rickinson和Kieff，出处同上第75章，第H2397-2446页。
在结构上，EBV类似于其他疱疹病毒，它有包含在壳包核酸中的双股DNA基因组，该壳包核酸被含有病毒糖蛋白的脂质包膜所包围。间层蛋白占据了包膜和壳包核酸之间的空间。
婴儿最初感染EBV好象几乎没有症状，用血清学确认青春期或成人生活早期最初感染的比例(在一些研究中高达50％)表现为感染性单核细胞增多症(IM)也称之为“接吻病”。EBV的传染主要通过唾液，尽管一些感染是通过输血传染的。在感染性单核细胞增多症急性期患者中分泌EBV的百分率很高(＞85％)。在十九世纪七十年代中期，已确认了EBV会引起患有X-相关免疫缺陷男孩患有致命性的IM/X相关的淋巴细胞增生综合征(XLP)。Sullivan和Wood，(Immunodeficiency Rev.，1325-347(1989)。人们也发现致命的EBV感染与没有有效疗法的非家族性单吞噬细胞综合征(VAHS)有关。Alan B.Rickinson和Elliot Kieff，Virology，第三版，由B.N.Fields，D.M.Kinpe，P.M.Howley等编辑的，EB病毒及其复制，第75章，第2397-2446页和Craig等，Am.J.Clin.Path.，97189-194(1992)。
EB病毒也被认为是B-细胞增生疾病的致病剂，并且它与AIDS患者中各种疾病状态包括罕见的渐进性类单核细胞增多症综合征或口头粘膜白斑病有关。EBV也与某些类型的癌症如Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、Hodgkin疾病、EBV相关T-细胞淋巴瘤和鼻T-细胞淋巴瘤有关。某些患者特别是免疫系统受到抑制的患者如AIDS患者和接受免疫抑制剂治疗的器官移植患者特别容易受到EBV症状的影响，尤其是发展为EBV相关的淋巴瘤。
Chu等在PCT申请PCT/US95/01253中描述了许多用于治疗B型肝炎病毒和EB病毒感染的L-核苷类似物。在该PCT申请中公开的一种药剂2′-氟-5-甲基-β-L-阿糖呋喃尿苷(L-FMAU)显示出很好的抗EBV活性。值得注意的是当L-FMAU的5-甲基被溴取代时，其抗EBV活性下降。
在培养基中好几个化合物已经显示出在对细胞生长无毒性的浓度抗EBV复制的活性。它们包括阿昔络韦(ACV)、甘西络韦(DHPG)、喷西络韦、D-FMAU及其类似物、5-溴乙烯基dUrd、膦酰甲酸酯和硫代膦酸酯低核苷酸。参见，Lin等，Antimicrob.Agents and Chemo.(2月)32(2)265-267(1988)；Lin等，Antimicrob.Agents and Chemo.32(7)1068-1072(1988)；Cheng等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，802767-2770(1983)；Datta等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，775163-5166(1980)；Datta等，Virology，11452-59(1981)；Lin等，Antimicrob.Agents and Chemo.311431-1433(1987)；Olka和Calendar，Virology，104219-223(1980)；Lin等，J.Virol.，5050-55(1984)；Yao等，Antimicrob.Agents and Chemo.371420-1425(1993)和Yao等，Biochem.Pharm.，(51)941-947(1996)。
PCT申请PCT/US97/20647(WO 98/20879)描述了许多5-取代的β-L-OddU类似物在治疗EBV、VZV和HV-8中的用途。也公开了在所列系列化合物中5-溴和5-碘化合物是最具活性的。
发明目的本发明的一个目的是提供治疗和/或预防由非洲淋巴细胞瘤病毒(EBV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)和卡波西肉瘤病毒(HV-8)引起患者感染及其相关状况和/或病态的化合物、药用组合物和方法。
本发明的另外一个目的是提供增加癌症患者体内5-氟尿嘧啶的停留或代谢的/分解代谢半衰期方法的具体实施方案。
附图的简要描述

图1表示了在本说明书实施例部分所述的合成L-BDVU的化学反应图解。
图2表示了在本说明书实施例部分所述的合成L-FBVAU和L-FBVRU的化学反应图解。
图3表示了在本说明书实施例部分所述的合成5-BV-SddU的化学反应图解。
图4表示了在本说明书实施例部分所述的合成D-5-BV-OddU的化学反应图解。
图5表示了在本说明书实施例部分所述的合成5-取代的L-二氧戊环基尿嘧啶类似物的化学反应图解。
发明的简要描述本发明涉及这样一种发现，即某些β-L-核苷类似物优选在尿嘧啶碱上含有5-乙烯基或5-卤代乙烯基基团的那些类似物，出人意料地具有抗EB病毒(EBV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)和卡波西肉瘤病毒(HV-8)的高活性。尤其是，本发明化合物显示出有效抑制这些病毒的复制(病毒生长)，并且对宿主细胞(即动物或人体组织)的毒性非常低。
本发明化合物首次用作抑制VZV、EBV和HV-8的生长和复制的药剂。这些药剂中的某些还用作抑制其他病毒(例如HSV)的生长或复制或者治疗其他病毒感染和/或相关疾病状态。其他药剂可以用作以测试为目的的生物探针或作为合成具有药理活性的相关核苷化合物的中间体或用来治疗癌症和其他疾病状态。
发现本发明化合物有抵抗患有EB病毒、水痘-带状疱疹病毒或卡波西肉瘤病毒(HV-8)感染及其并发症的动物特别是人的病毒感染特殊用途。本发明化合物非常有效的作为抗目前很少有真正治疗选择的疾病状态(特别是水痘-带状疱疹病毒)的治疗剂。本发明化合物可以单独使用或者与药剂或其他治疗方法一起使用。
本发明化合物是具有β-L-构型的5-取代二氧戊环(dioxalone)尿苷核苷类似物。优选，在各种情况中，尿嘧啶碱在5位被反式取代的乙烯基、氯乙烯基、溴乙烯基或碘乙烯基取代，特别优选在尿嘧啶碱的5位上被乙烯基或溴乙烯基取代，这要取决于所治疗的病毒感染。
本发明也涉及抑制EB病毒、水痘-带状疱疹病毒或卡波西肉瘤病毒的生长或复制的方法，它包括使所述病毒暴露于抑制有效量或浓度的至少一种所公开的核苷类似物。该方法可以用于对照试验例如测定相关抗-VZV、抗-EBV或抗HV-8化合物的活性以及测定患者VZV感染对本发明化合物中一种的敏感性的试验。该化合物优选用于治疗或预防人的VZV或EBV的感染。
按照本发明，在治疗方面涉及了治疗或预防患者优选人患者的VZV、EBV或HV-8感染的方法，包括向接受治疗的动物或人患者给药抗病毒有效量的一种或多种本发明化合物，以抑制这些病毒的生长或复制。在本发明优选的方法方面，本发明的组合物可用来预防或延迟患者的VZV、EBV或HV-8感染或相关状况或病毒并发症，其中所述的患者包括输过血的患者和免疫缺陷或免疫妥协的患者，例如AIDS患者和移植患者等。
基于这些新化学化合物的药用组合物包括以治疗病毒，通常是VZV、EBV或HV-8感染的治疗有效量一种或多种上述化合物，并任选与药学上可接受的附加剂、载体或赋型剂组合。
本发明组合物也可以药剂形式用作抑制VZV、EBV或HV-8生长或复制的预防剂。这些化合物很适合作抗VZV、抗EBV或抗HV-8的药剂。在某些药物剂型中，优选药物前体形式例如乙酰化核苷或含有磷酸酯的核苷。
不受理论的限制，可认为本发明化合物通过抑制病毒DNA合成成为能够引起链终止的病毒DNA来诱发它们对VZV、EBV或HV-8的生长或复制的抑制作用。出人意料的是本发明化合物证实了预期的抗VZV、抗EBV和/或抗HV-8活性。
本发明的另一方面，意外发现本发明一种或多种化合物与5-氟尿嘧啶(FU)共同给药治疗癌症和肿瘤意想不到地提高或增加了FU和相关药物前体的停留或代谢/分解代谢的半衰期至少三分之一，并且在某些例子中增加了FU代谢/分解代谢半衰期至少2倍。这是一个出人意料的结果。所以，本发明在治疗癌症和肿瘤方面，通过共同给药至少一种本发明化合物并优选L-β-5(E)-BVOddU能够减少癌症治疗中FU的给药(在给药频率上和/或用量上)。
本发明化合物是用本领域普通技术人员熟知的合成方法生产的并且包括下文详细描述的各种化学合成方法。
发明的详细描述下列定义将在整篇说明书中使用，以描述本发明。
整篇说明书中所用的术语“患者”描述为动物，优选人，用本发明组合物给它们提供治疗包括预防性治疗。对治疗那些对特殊动物如人患者来说是特殊的感染、状况或疾病状态，术语患者指的是那些特殊动物。
术语“水痘-带状疱疹病毒”(VZV)是用来描述水痘疱疹病毒(Herpesvirusvaricellae)，也称之为水痘或带状疱疹。VZV是一种疱疹病毒，在形态上，与单纯疱疹病毒是一致的，它会使人产生水痘(水痘)和带状疱疹。水痘起因于病毒的最初感染；带状疱疹起因于相同感染或再活化感染的二次侵入，这些感染大多数情况是已经潜伏了许多年。
在整篇说明书中使用术语“非洲淋巴细胞瘤病毒”或(EBV)来描述在Burkitt淋巴瘤的细胞培养基中所发现的疱疹病毒。在结构上，EBV类似于其他疱疹病毒-它有包含在壳包核酸中的双股DNA基因组，该壳包核酸被含有病毒糖蛋白的脂质包膜所包围。间层蛋白占据了包膜和壳包核酸之间的空间。EBV是感染性单核细胞增多症的致病剂。EB病毒也被认为是B-细胞增生疾病、淋巴细胞增生综合征、非家族性单一吞噬细胞综合征的致病剂，并且它与AIDS患者中各种疾病状态包括罕见的渐进性类单核细胞增多症综合征或口头粘膜白斑病有关。EBV也与某些类型的癌症如Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、Hodgkin疾病、EBV相关T-细胞淋巴瘤和鼻T-细胞淋巴瘤有关。某些患者特别是免疫系统受到抑制的患者如AIDS患者和接受免疫抑制剂治疗的器官移植患者特别容易受到EBV症状的影响，尤其是发展的EBV相关的淋巴瘤。
在整篇说明书中所用的术语“疱疹病毒8”或HV-8是描述被认为是AIDS患者卡波西肉瘤的致病剂的疱疹病毒。HV-8和HHV-8(人疱疹病毒8)是一种病毒或相同病毒。
整篇说明书中所用的术语“药学上可接受的衍生物”是描述核苷化合物的任何药学上可接受的盐或药物前体形式(如酯、磷酸酯或酯盐)，一旦给药于患者，它们会直接或间接地提供核苷化合物或核苷化合物的活性代谢物。一般来说，由于存在尿嘧啶碱，本发明化合物游离的核苷形式或乙酰化药物前体形式不容易成盐。但是，本发明核苷化合物的单-、双和三磷酸酯部分形式会在磷酸酯部分上成盐。药学上可接受的盐包括那些衍生于药学上可接受的无机或有机碱和酸的盐。在制药领域中熟知的许多其他酸中，适当的盐包括那些衍生于碱金属如钾和钠，碱土金属如钙、镁和铵的盐。
整篇说明书中所用的术语“酰基”描述核苷类似物在5′位上的基团(即在二氧戊环基部分的游离羟基位置)，它含有C1到C20个烃基，包括被取代的烃基，优选直链、支链或环状烷基链。在5′位上的酰基与5′羟基结合形成酯，给药后，它会裂解产生本发明的游离核苷形式。本发明的酰基用下面结构表示 其中R2是C1到C20烃基或取代的烃基，如直链、支链或环状烷基链、烷氧基烷基、芳氧基烷基，如苯氧基甲基、芳基、烷氧基等。优选的酰基是其中R2是C1到C3的那些。在包括甲磺酰基的其他基团中，本发明的酰基也包括例如衍生于苯甲酸和相关酸、3-氯苯甲酸、琥珀基、癸酸、己酸、月桂酸、豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸和油酸甲磺酸的那些酰基。本领域普通技术人员会认识到这些酰基在本发明中为合成目标药用化合物或作为本发明核苷的药物前体的用途。术语“醚基”是用来描述本发明化合物在R1的取代基，由此R1与所连接的糖合成子形成醚基。R1优选是C1到C20的烃基或被取代的烃基，更优选为烷基(不论是直链、支链还是环状)，包括C1到C3的烷基。
整篇说明书中所用的术语“磷酸酯”或“磷酸二酯”描述了在二氧戊环基(dioxanyl)部分或糖合成子的5′位的单磷酸酯基，将其二酯化，使得该磷酸酯基团成为中性，即带有中性电荷。本发明中所用的磷酸酯包括用下面结构所示的那些 或 其中R3、R5和R”选自于C1到C20直链、支链或环状烷基、烷氧基烷基、芳基氧基烷基，如苯氧基甲基、芳基和烷氧基等，R4是C1到C20直链、支链或环状烷基或酰基、烷氧基烷基、芳氧基烷基，如苯氧基甲基、芳基和烷氧基等。本发明药物前体形式所用的优选单磷酸酯是其中R3是C1到C20直链、支链烷基，更优选C1到C3烷基的那些单磷酸酯。
整篇说明书中所用的术语“抑制有效浓度”或“抑制有效用量”是描述能够实际上或显著地抑制易传染的病毒特别包括EBV、VZV和HV-8的生长或复制的本发明化合物的浓度或用量。整篇说明书中所用的术语“治疗有效量”或“治疗上有效量”是描述在治疗上能够有效治疗人EBV、VZV和HV-8感染和相关疾病包括癌症的本发明化合物的浓度或用量。
整篇说明书中所用的术语“预防有效量”是描述能够在预防上有效预防或延迟人的EBV、VZV和HV-8感染或相关疾病(尤其是EBV相关癌症或淋巴瘤和卡波西肉瘤)的发作的本发明化合物的浓度或用量。
术语“有效量”是指在其给药范围内本发明化合物的有效浓度或用量。
整篇说明书中所用的术语“L-构型”是描述本发明二氧戊环尿苷的非天然构型的化学构型。本发明化合物的糖部分的L-构型在大多数情况下都与大多数天然存在的核苷如胞苷、腺苷、胸腺嘧啶核苷、鸟嘌呤核苷和尿嘧啶核苷的核糖部分D-构型相反。术语“D-构型”指的是天然存在的核苷糖部分的天然构型。
整篇说明书中所用的术语“富含对映结构的”是描述包括至少大约95％、优选至少大约96％、更优选至少大约97％、甚至更优选至少大约98％、最优选至少大约99％的核苷的单一对映体的核苷。当L-核苷被说明书引用为参考时，除非另外说明，都认为核苷是富含对映结构的核苷。
术语“半衰期”用来描述在患者血流中通过代谢或分解代谢使活性剂浓度下降一半前发现活性剂的时间。在本发明中，通过共同给药有效量的至少一种本发明的化合物尤其是L-β-5(E)-BVOddU，把5-氟尿嘧啶(FU)的半衰期增加了至少三分之一并且在某些时候，增加了至少两倍(即增加至少大约100％或半衰期的两倍)。在人体中FU的半衰期大约是25分钟(通常在大约20-30分钟内变化，尽管在该范围外的变化也可以发现)。术语“停留”指的是在把FU与本发明的一种或多种化合物共同给药期间FU将在患者血流中停留的状况。术语5-氟尿嘧啶的“药物前体”是用来描述起5-氟尿嘧啶作用的化合物并包括象下列2-(1)四氢呋喃基-5-氟尿嘧啶(I)和5-氟嘧啶-2-酮(II)的化合物。 因此本发明也涉及下列结构的一组化合物 其中R是 CH2CH3， 或 X是H、F、Br、Cl、I或CH3和R1是H、C1到C20酰基或醚基、磷酸酯基、二磷酸酯基、三磷酸酯基或磷酸二酯基。
在本发明的这一方面，R优选是反式取代的乙烯基 其中X优选是H、Br或I，更优选H或Br，取决于所治疗的病毒感染。
本发明也涉及一种抑制水痘-带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒(EBV)或卡波西肉瘤病毒(HV-8)的生长或复制的方法，它包括使病毒暴露于抑制有效浓度的下列结构的化合物 其中 CH2CH3， 或 X是H、F、Br、Cl、I或CH3和R1是H、C1到C20的酰基或醚基、磷酸酯基、二磷酸酯基、三磷酸酯基或磷酸二酯基。
在本发明的该方法方面，R优选是反式取代的乙烯基 其中X优选是H、Br或I，更优选H或Br，取决于所治疗的病毒感染。当所治疗的病毒是EBV时，X最优选H。在所治疗的病毒是VZV或卡波西肉瘤病毒时，X最优选Br。
本发明也涉及一种治疗患有由水痘-带状疱疹病毒、EB病毒或卡波西肉瘤病毒引起感染的患者的方法，包括向所述该患者给药治疗有效浓度或用量的下列结构的化合物 其中R是 CH2CH3， or X是H、F、Br、Cl、I或CH3和R1是H、C1到C20的酰基或醚基、磷酸酯基、二磷酸酯基、三磷酸酯基或磷酸二酯基。
在本发明的该方法方面，R优选是反式取代的乙烯基 其中X优选是H、Br或I，更优选H或Br，取决于所治疗的病毒感染。当所治疗的病毒是EBV时，X最优选H。在所治疗的病毒是VZV或卡波西肉瘤病毒时，X最优选Br。
本发明组合物主要使用的是它们的抗病毒活性，具体来说是抗VZV、抗EBV和抗HV-8活性。本发明化合物也可以使用其他抗病毒活性。另外，也发现这些组合物可以在其他核苷或核苷酸类似物的化学合成中用作中间体，接着将所述类似物用作治疗剂或其他目的，包括生物试验中的标记物或生物探针。优选，这些化合物用作新的抗EBV、抗VZV或抗HV-8药剂。
一般来说，本发明最优选的抗病毒化合物包括对宿主细胞毒性较低并且对目标病毒活性较高的那些化合物。某些化合物以药剂形式可以用作预防剂。这些化合物非常适合作抗EBV、抗VZV或抗HV-8药剂。由于β-L-5-(E)溴乙烯基-OddU和β-L-5-(E)碘乙烯基-OddU对患者的毒性很低并且抗病毒活性优异，所以它们是特别有效的治疗和/或预防VZV和HV-8感染的抵抗-预防化合物。在EBV感染时，β-L-5-(E)乙烯基-OddU是优选的药剂。
由于本发明化合物对宿主细胞的低毒性，所以它们可以被预防性使用，这有利于预防EBV、VZV或HV-8感染或预防与病毒感染有关临床症状的出现。这样，本发明也包括预防性治疗病毒感染尤其是EBV、VZV和HV-8感染的方法。在本发明的这一方面，本发明组合物可以用于治疗、预防或延缓EBV、VZV或HV-8感染或EBV、VZV或HV-8相关疾病如淋巴瘤或癌症包括卡波西肉瘤在患者包括输过血和免疫缺陷或免疫妥协的患者如AIDS患者和移植患者等中发作。该方法包括向需要这种治疗的患者或处于EBV、VZV或HV-8相关症状或疾病发展危险的患者给药有效缓解、预防或延缓病毒感染发作的用量的本发明化合物。
不受理论的限制，可以认为本发明化合物至少部分通过包括经病毒胸腺嘧啶核苷激酶磷酸化糖(即氧戊环烷基(dioxanyl))合成子的羟基位激活的机理对疱疹病毒是有效的。可以认为本发明化合物是由病毒激酶磷酸化，而不是人的胞质胸腺嘧啶核苷激酶，这暗示了与其他抗疱疹病毒核苷类似物相比独特的抑制机理。所建议的这种机理可以帮助解释本发明化合物抗这些病毒的意想不到的活性和对患者低毒性，有时没有毒性。
在本发明的另一方面，为患者提供了增加5-氟尿嘧啶(FU)在患者体中停留的抗癌方法，该方法包括与FU共同给药实际有效提高FU停留用量的至少一种本发明化合物和/或其活性代谢产物。一个意外的结果是相对于单独给药FU当与一种或多种本发明化合物共同给药时，FU的停留至少增加三分之一。有时，与本发明化合物共同给药的FU停留至少是单独给药FU所预期的两倍，这样，可以降低向癌症患者给药FU的频率和/或用量。这是一个意想不到的结果，明显优于现有方法。
本发明化合物可以用本领域普通技术人员熟知的合成方法生产，这些合成方法包括在下面实施例中非常详细解释的各种化学合成方法。一般，本发明化合物的合成是通过把预先合成好的核苷碱缩合到适当的二氧戊环或氧硫杂戊环基(oxathiolanyl)合成子上，最后产生具有所需L-构型核苷类似物。有时，对特殊核苷类似物来说，该合成路径可以不同于一般合成路径。其他化合物例如脱氧核糖核苷可以通过把适当的5-取代的尿嘧啶衍生物缩合到L-阿拉伯糖上，然后还原该糖2′位的溴或其他基团形成β-L-脱氧核苷类似物，进行合成。
在本发明各种组合物的化学合成过程中，本领域普通技术人员会不需要过多的试验实现本发明。特别是，本领域普通技术人员会想到在糖部分所需位置上的碱或取代基的所需位置引入特殊取代基应当进行的各种步骤。另外，在合成中的适当时候也会想到“保护”功能基团如羟基或氨基等以及“去保护”这些相同功能团所需的化学步骤。许多保护基团可以用于本发明。在把任一或多个酰基导入核苷5′位置(或尿嘧啶碱)时，可以使用本领域普通技术人员所熟知的标准技术。用本领域熟知方法也可以合成5′-单、双或三磷酸酯或磷酸二酯(作为中性药物前体形式)。
一般，本发明化合物的合成是首先合成适当二氧戊环基或氧硫杂戊环基(oxathiolanyl)合成子，然后将取代的碱缩合到二氧戊环基合成子上。合成本发明化合物的适当合成途径可以在所附流反应图解1-4中找到并且在实施例中对此进行了全面描述。各种等同合成途径也可以用于合成本发明化合物中。本发明化合物的具体合成如下所示。
化学。基于Holy方法(Holy，A.2′-脱氧-L-尿苷，从糖2-氨基噁唑啉经2，2′-无水核苷中间体的尿嘧啶2′-脱氧核苷的全合成。Nucleic Acid chemistry，improved and New Synthetic Procedures，Method and Techniques，第1部分；L.B.Townsend和R.S.Tipson，Eds.，Wiley，1978，第347-353页)和Heck反应(Dyer，R.L.E-5-(2-溴乙烯基)-2′-脱氧尿苷。从2′-脱氧-5-碘尿苷合成E-5-(2-溴乙烯基)-2′-脱氧尿苷。Nucleic Acid chemistry，improved and New SyntheticProcedures，Method and Techniques，第4部分；L.B.Townsend和R.S.Tipson，Eds.，Wiley，1978，第79-83页)，如反应图解1(图1)所示作一点改动，从L-阿拉伯糖经5-碘-2′-脱氧-L-尿苷完成5-(E)-溴乙烯基-2′-脱氧-β-L-尿苷(L-BVDU)的合成。
在3个步骤中从L-阿拉伯糖所得到的3′，5′-二-O-苯甲酰基-2，2′-脱水-L-尿苷(1)经用乙酰溴在乙腈中加热以81％的得率转化成2′-溴-2′-脱氧尿苷衍生物2。2′-溴衍生物2的还原性脱卤得到受保护的L-2′-脱氧尿苷3，它在回流的二噁烷中用碘和HNO3处理得到5-碘尿嘧啶类似物4，从2的得率为77％。用三苯基膦和醋酸钯催化二噁烷中化合物4与丙烯酸甲酯偶合。将所得到产物5(77％)用NaOH皂化，接着用HCl酸化得到游离酸，得率88％。在DMF中用N-溴琥珀酰亚胺(NBS)和碳酸钾处理化合物6得到所需化合物7(67％)。
2′-脱氧-2′-氟-β-L-阿糖呋喃核苷也可以用经L-FIAU合成L-BVDU所提到的相似方法制备，它是按照我们研究小组所报道过的方法从L-阿拉伯糖制备。参见Du等，“从L-阿拉伯糖实际合成L-FMAU”，NucleosidesNucleotides 1999。这样，将游离的5-碘尿嘧啶衍生物8在二噁烷中有Pd(OAc)2和Ph3P存在下用丙烯酸甲酯处理。用NaOH皂化接着用HCl酸化就得到10，将其在DMF中有N-溴琥珀酰亚胺和K2CO3存在下脱去羧基得到11(反应图解2)。至今为止已经开发出合成2′-脱氧-2′-氟-β-D-核糖核苷的好几种合成方法，包括用氟化剂如HF/二噁烷(Codington等，J.Org.Chem.1964，29，558-564)或KF/冠醚(Mengel等，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1978，17，525)打开2，2′-脱水核苷，用核酸碱(nucleobase)偶合适当保护的2-脱氧-2-氟呋喃糖苷(Mikhailopulo等，Carbohdr.Res.1995，278，71-89)，酶催化的葡糖基转移(Tuttle，J.J.Med.Chem.1993，36，119-123.163)，用氟化四正丁基铵(TBAF)亲核取代2′-O-三氟甲烷磺酰基阿糖核苷(参见，Ikehara等，Chem.Pharm.Bull.1981，29，1034-1038)和用二乙氨基氟化硫(DAST)将氟原子直接引入阿糖核苷上(Hayakawa等，Chem.Pharm.Bull.1990，38，1136-1139)。因为最后一种方法在相对大规模中能够达到可信的得率，所以它适合合成嘧啶2′-脱氧-2′-氟-L-核糖呋喃核苷(反应图解2)。于是，按照文献方法2，2′-脱水-L-尿可以从L-阿拉伯糖两步制备(Holy，A.2′-脱氧-L-尿苷。从糖2-氨基噁唑啉经2，2′-脱水核苷中间体全合成尿嘧啶2′-脱氧核苷。在Nucleic Acid Chemistry，Improved and New Synthetic Procedures，Methods and Techniques，第1部分；L.B.Townsend和R.S.Tipson，Eds.；Wiley，1978，di 347-353)，然后在DMF中处理3，4-二氢吡喃接着皂化得到12，总得率40％。再将12在吡啶中用DAST、p-TsOH和Ac2O连续处理得到主要中间体13，从EtOH中结晶后总得率41％。在回流的CH2Cl2中用ICl处理13(Robins等，J.Org.Chem.1983，48，1854-1862)，然后用饱和的NH3/MeOH氨解，得到5-碘尿嘧啶类似物14，将其在Pd(OAc)2存在下用丙烯酸甲酯处理得到15，得率76％，从15得到5-E-溴乙烯基尿嘧啶类似物17，总得率36％(图2，反应图解2)。
氧硫杂戊环和二氧戊环衍生物的合成是经Jin等所报道的偶合方法(Jin等，J.Org.Chem.1995，60，2621-2623)完成的。氧硫杂戊环糖部分是从二噻烷-1，4-二醇制得的(Jin等，J.Org.Chem.1995，60，2621-2623)而二氧戊环糖部分是分别从D-甘露糖(Kim等，J.Med.Chem.1992，35，1987-1995)和L-古洛糖酸g-内酯(Kim等，J.Med.Chem.1993，36，519-528)经较少的改进制得的。(卤代乙烯基)尿嘧啶是按照Jones等的方法制得的(Jones等，TetrahedronLett，1979，4415)。经5-甲酰基尿嘧啶与丙二酸稠合、接着卤代琥珀酰亚胺处理，氯化酯18在CH2Cl2中有TMSI存在下与全硅烷基化的5-E-溴乙烯基尿嘧啶反应得到所希望得到的顺式核苷为主的产物(由1H NMR测得顺反比为30∶1)得率87％。在EtOH中用NaBH4还原化合物19得到20，得率70％。值得注意的是尽管都知道酯的NaBH4还原是缓慢的，19的还原还得到了相当的得率，这可能是因为α-羟基的缘故(Mauger等，J.Chem.Soc.，Chem.Commun.1986，395；和Corsano等，J.Chem.Soc.，Chem.Commun.1971，1106)。经21与5-E-溴乙烯基尿嘧啶缩合接着还原也可以得到对映体23(图3，反应图解3)。两种对映体的物理数据是相对映的，包括旋光性。用TMSI作偶合促进剂也可以进行二氧戊环糖部分与适当尿嘧啶碱的糖基化。已知用TMSI-调节的手性氧硫杂戊环糖与在2-位的保护的羟甲基取代基偶合是非立体选择性的(Beach，J.Org.Chem.1992，57，2217-2219；和Humber等，Tetrahedron Lett.1992，32，4625-4628)。有趣的是，用TMSI稠合24得到大约3∶1比例的β-异构体和α-异构体，在偶合中该比例用不同的碱是不变的。在CH3CN中用TBAF将25和26去保护分别以高得率地得到游离的核苷27和28(图4，反应图解4)(参见，Lee等，J.Med.Chem.1999，42，1320-1328)。用相似方法也可以获得具有L-构型的二氧戊环糖基的5-E-卤代乙烯基尿嘧啶类似物36-41以合成27和28。所合成的核苷的E-构型可以通过1H NMR谱图中乙烯基质子的偶合常数(13.6Hz)鉴别出来并与可获得的D-异构体的物理数据比较，进行确认。
5-乙基、5-乙烯基和5-乙炔基尿嘧啶类似物可以按照Walker和其同事的方法(参见，Rahim等，J.Med.Chem.，1996，39，789-795)从L-5-I-OddU42合成(Lin等，J.Med.Chem.，1999，42，在印刷中)。将L-5-I-OddU转化为二对甲苯甲酰基保护的衍生物43，将其在50℃HMPA中有四乙烯基锡和四三苯基膦合钯存在下再转化为5-乙烯基尿嘧啶类似物。出人意料的是，在偶合反应中，将N3-对甲苯甲酰基除去保护得到单-对甲苯甲酰基保护的核苷44。接着，用饱和的NH3/MeOH将44除去保护得到L-二氧戊环5-乙烯基尿嘧啶类似物45，从43计算得率为70％，这是与文献得率(Rahim等，同上文)相比相当的得率。5-乙炔尿嘧啶类似物47也可以通过将保护的5-碘尿嘧啶核苷42与末端炔偶合制得(De Clercq等，J.Med.Chem.，1983，26，661-666)。在三乙胺中有氯化双三苯基膦L钯(II)和碘化铜(I)存在下将化合物46用三甲代甲硅烷基乙炔处理。所得到的偶合产物用乙醇的甲醇钠除去保护得到所需的产物47，得率为58％。在EtOH中用10％的Pd-C将47氢化得到定量得率的5-乙基尿嘧啶类似物48。
本发明的治疗方面涉及治疗患者的VZV、EBV和HV-8感染，包括向所治疗的患者给药抗病毒有效量的本发明化合物来抑制病毒的生长或复制。
在本发明优选的方法方面，本发明组合物用来预防或延缓患者的VZV、EBV或HV-8感染或相关状况和/或疾病的发作。该方法包括向这种患者给药预防有效量(一般与治疗有效量相同)的一种或多种本发明组合物，以延缓或预防VZV、EBV或HV-8感染或相关状况和/或疾病。
基于这些新化合物的药用组合物包括治疗病毒特别是VZV、EBV或HV-8感染的治疗有效量的上述化合物，任选与药学上可接受的添加剂、载体或赋型剂结合。本领域普通技术人员会想到治疗有效量将随着所治疗的感染或状况、严重程度、所用的治疗方案，所用药剂的药物动力学以及所治疗的患者(动物或人)而变化。
在本发明制药方面，本发明化合物优选与药学上可接受的载体混合制成制剂。一般，优选以口服形式给药药用组合物，但某些制剂可以经肠胃外、静脉内、肌肉内、经皮、颊、皮下、栓剂或其他途径给药。静脉内和肌肉内制剂优选以无菌盐水的形式给药。当然，本领域普通技术人员可以在说明书教导的范围内改良该制剂以提供更多使本发明组合物稳定或不损害它们的治疗活性的特殊途径给药的制剂。特别是，例如为使本发明化合物更容易溶于水或其他载体对其改良经本领域普通技术人员所熟知的很小改良(盐制剂、酯化等)可以容易实现。为了控制本发明化合物的药物动力学使其在患者体内达到最大有益作用，改良特殊化合物的给药途径和剂量方案也是本领域技术人员所熟知的。
在某些药学剂型中，优选化合物的药物前体形式具体包括本发明化合物的酰化(乙酰化的或其他)和醚衍生物、磷酸酯和各种形式的盐。本领域普通技术人员会想到怎样容易地将本发明化合物改良成药物前体形式，从而使活性化合物更容易被运送给宿主有机体或患者的目标部位。按程序操作者也会利用药物前体形式有利的药物动力学常数，合适时将该化合物运送到宿主有机体或患者目标部位使该化合物的所希望的作用最大化。
在本发明治疗有效制剂中所包括的化合物的用量是治疗感染或状况，在优选实施方案中，是EBV、VZV或HV-8感染特别是VZV感染的有效量。一般，在药物剂型中本发明化合物治疗有效量通常在大约0.1mg/kg到大约100mg/kg或更优选，稍微少于大约1mg/kg到大约25mg/kg的患者或更多，这将取决于所用的化合物、所治疗的状况或感染以及给药途径。当VZV、EBV、或HV-8感染时，优选以大约0.5mg/kg到大约25mg/kg的患者范围的用量给药，这取决于患者体内药剂的药物动力学。这种剂量范围一般在患者体内会产生大约0.05到大约100mg/cc血液的活性化合物的有效血液浓度。为了实现本发明的目的，本发明组合物的预防或防御有效量也在上述治疗有效量所列的相同浓度范围并且通常与治疗有效量相同。
活性化合物的给药可以在每天连续(静脉滴注)给药到多次口服给药(例如Q.I.D.)的范围并且可以包括口、局部、胃肠外、肌肉内、静脉内、皮下、经皮(它可以包括渗透促进剂)、颊和栓剂给药等途径的给药。肠包衣口服片也可以用来提高化合物口服给药途径的生物利用度。最有效的剂型决定于所选的具体药剂的药物动力学以及患者疾病的严重程度。口服剂型是特别优选的，因为容易给药和患者容易适应。
为了制备本发明的药用组合物，首先将治疗有效量的一种或多种本发明化合物优选与药学上可接受的载体混合，按照常规制药配制技术生产剂型。载体可以采取各种不同的形式，取决于例如口腔给药或胃肠外给药所需的制剂形式。在制备口服剂型的药用组合物时，可以使用任何常用药用介质。这样，对口服液体制剂如悬浮液、酏剂或溶液，可以使用适当的载体和添加剂包括水、乙二醇、油类、醇类、矫味剂、防腐剂、着色剂等。对固体口服制剂如粉剂、片剂、胶囊，以及固体制剂如栓剂，可以使用适当的载体和添加剂包括淀粉、糖载体、如右旋糖、甘露醇、乳糖和相关载体、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。如果需要的话，用常规技术将片剂或胶囊进行肠包衣或持续释放。使用这些剂型可以显著提高该化合物在患者体内的生物利用度。
对胃肠外制剂，载体一般包括无菌水或氯化钠水溶液，也可以包括其他成分，包括帮助分散的那些成分。当然，所用的无菌水保持无菌，组合物和载体也必须灭菌。也可以制备成注射悬浮液，其中可以使用适当的液体载体、悬浮剂等。
脂质体悬浮液(包括对病毒抗原为目标的脂质体)也可以用常规方法制成药学上可接受的载体。这些载体适合于运送本发明核苷化合物的游离的核苷、酰基核苷或磷酸酯药物前体形式。
在本发明特别优选的技术方案中，化合物和组合物可用于治疗、预防或延缓哺乳动物的病毒感染的发作，尤其是人的EBV、VZV和HV-8感染的发作。在该优选技术方案中，该化合物可用来治疗EBV、VZV和HV-8感染，特别是人的VZV感染。为了治疗、预防或延缓EBV、VZV和HV-8感染的发作，该组合物可以口服剂型大约250mg到大约500mg或更多至少一天一次优选一天最多四次给药。本发明组合物优选口服，但也可以胃肠外、局部或以栓剂形式给药。
本发明组合物由于其对宿主细胞的低毒性，所以有利于在预防学上用于预防EBV、VZV或HV-8感染或预防与病毒感染相关临床症状的出现。所以，本发明也包括预防性治疗病毒感染尤其是EBV、VZV和HV-8感染的方法。在本发明的这一方面，该组合物可用来预防或延缓患者EBV、VZV或HV-8感染或EBV、VZV或HV-8相关疾病如淋巴瘤或癌症包括卡波西肉瘤的发作，这些患者包括输过血的和有免疫缺陷或免疫妥协的患者如AIDS患者和移植患者等。该预防性方法包括向需要这种治疗的患者或处于形成EBV、VZV或HV-8相关症状或疾病危险期的患者给药有效缓解、预防或延缓病毒感染发作用量的本发明化合物。在本发明预防性治疗中，优选所用的抗病毒化合物应当是对患者低毒的并优选无毒的。本发明在这方面特别优选所用的化合物应当是抗病毒最有效的并且应当对患者具有最小毒性。当β-L-BVOddU和β-L-BVIOddU和本发明相关化合物用于治疗EBV、VZV或HV-8感染时，这些化合物可以在与有效治疗相同剂量范围(即对口服剂型大约250mg到大约500mg或更多，每天一次到四次)作为预防剂给药，从而预防EBV、VZV或HV-8的增生或另一方面，延长表现出临床症状的EBV、VZV或HV-8感染的发作。
另外，本发明化合物也可以单独给药或与其他药剂包括本发明的其他化合物一起给药。本发明的某些化合物可以通过降低其他化合物的代谢、分解代谢或失活来有效提高本发明某些药剂的生物活性，所以为了这种预期作用必须共同给药。
在特别优选的治疗VZV的药用组合物和方法中，向患有这类感染的患者给药抑制有效量的β-L-BVOddU和β-L-BVIOddU，以治疗这种感染和缓解这类感染的症状。
如上所述，本发明化合物可以单独给药或者与其他药剂一起给药，这些药剂具体来说包括本发明的其他化合物或另外公开的可用于治疗EBV、VZV和HV-8感染的化合物，例如在PCT/US97/20647(WO 98/20879)中所公开的那些化合物，该文献被本文引用为参考文献。可以与本发明化合物结合使用的其他化合物包括在美国专利5,565,438所公开的那些如β-L-FMAU和相关化合物，该文献被本文引用为参考文献。可以与本发明化合物结合治疗VZV、EBV、HV-8感染和相关状况和疾病的其他化合物包括下列美国专利中任何一个或多个所公开的那些，这些美国专利在本文都被引用为参考文献US 5,885,957；US 5,643,891；US 5,521,163；US 5,356,882；US 5,079,235；US 5,886,013；US 5,840,728；US 5,714,516；US 5,597,824；US 5,424,295；US 5,216,142；US 5,079,235；US 5,055,458；US 5,036,072；US 5,036,071；US 5,028,596；US 4,287,188；US 4,863,906；US 4,777,166；US 4,714,701；US 4,652,580；US 4,596,798；US 4,963,555；US 4,210,638；US 5,683,990；US 5,602,130；US 5,086,044和US 5,276,020等。上述引用的专利所公开的化合物都可以用于与本发明化合物组合来增加它们抗EBV、VZV和/或HV-8的活性或治疗曲线并且在某些情况与本发明化合物组合产生协同作用。优选与本发明化合物一起使用的次级或加成化合物是通过本发明化合物相同机理不抑制EBV、VZV或HV-8的那些化合物。本发明的某些化合物可以通过减少其他化合物的代谢或失活来有效提高本发明某些药剂的生物活性，所以为了这种预期作用而必须将其共同给药。
在本发明治疗VZV感染的特别优选的药用组合物和方法中，向患有这种感染的患者给药抑制有效量的β-L-BVOddU或β-L-IVOddU来治疗这种感染并缓解这种感染的症状。
因为不受理论的限制，可以认为本发明化合物主要通过对抑制病毒DNA合成的作用诱发了它们对病毒生长或复制的抑制作用。
现在用下列实施例描述本发明，这些实施例只是用来详细说明。本领域普通技术人员应当理解到这些实施例无论如何不是用来限定并且在不脱离本发明精神和范围内可以对这些实施例进行各种具体改变。
实施例一般方法。熔点是在Mel-temp II上测定的并未校正。在Bruker400AMX光谱仪以400MHz用Me4Si作内标记录1H NMR。每百万(ppm)的部分记录为化学位移(δ)并且信号为s(单峰)、d(双重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)或br s(宽单峰)。在Nicolet 510P FT IR光谱仪上测定IR谱。在JascoDIP-370数码旋光仪上测定旋光性。在从Analtech Co.购买的Uniplate(硅胶)上进行TLC。使用SilicaGel-60(220-440目)快速色谱层析或SilicaGel G(TLC级＞440目)真空快速柱色谱层析进行柱色谱分离。在Beckman DU 650分光光度计上得到UV谱。由Atlantic Microlab，Inc.，Norcross，GA进行元素分析。
3′，5′-二-O-苯甲酰基-2′-溴-2′-脱氧-L-尿苷(2)。将乙酰溴(6.7mL，90.6mmol)加入60℃的1(11.00g，25.3mmol)的乙腈(220mL)悬浮液中。将反应在60℃持续5小时，然后减压除去溶剂。将残余物从甲醇中重结晶得到2(10.50g，81％)白色固体熔点169-170℃；[α]D+25.2(c1.00，CHCl3)；UV(MeOH)λmax246nm；1H NMR(CDCl3)δ9.32(s，1H，NH，D2O可交换的)，8.12-8.00(m，4H，芳H)，7.66-7.43(m，6H，芳H)，7.44(d，1H，H-6，J＝8.2Hz)，6.36(d，1H，H-1′，J＝5.4Hz)，5.61(dd，1H，H-5，J＝8.2和1.7Hz)，5.52(app.t，1H，H-3′，J＝5.5)，4.84-4.66(m，4H，H-2′，H-4′和H-5′)；对C23H19BrN2O7分析计算C，53.61；H，3.71；Br，15.51；N，5.44。测得C，53.49；H3.73；Br，15.58；N，5.46。
3′，5′-二-O-苯甲酰基-2′-脱氧-L-尿苷(3)。将氢化三正丁基锡(4.9mL，17.5mmol)和AIBN(200mg，1.2mmol)加入2(3.00g，5.8mmol)的干甲苯(100mL)悬浮液中。将反应混合物加热到100℃并搅拌2小时，然后减压除去溶剂得到白色固体，将其溶于乙腈。用己烷冲洗溶液并用乙腈萃取己烷层。浓缩合并的乙腈层得到白色固体(2.45g，定量得率)，不再纯化将其用于下面反应熔点217-218℃；1H NMR(CDCl3)δ9.00(s，1H，NH，D2O可交换的)，8.09-8.00(m，4H，芳H)，7.64-7.45(m，7H，芳H和H-6)，6.41(dd，1H，H-1′，J＝8.3，5.6Hz)，5.65-5.59(m，2H，H-3′和H-5)，4.75(dd，1H，H-5′，J＝12.2和3.3Hz)，4.70(dd，1H，H-5″，J＝12.2和3.6Hz)，4.56(app.dd，1H，H-4′，J＝5.8，3.0)，2.77(ddd，1H，H-2′α，J＝14.4，5.6和1.7Hz)，2.33(ddd，1H，H-2′β，J＝14.4，8.3和6.6Hz)。
3′，5′-二-O-苯甲酰基-2′-脱氧-5-碘-L-尿苷(4)。将3(1.00g，2.3mmol)、碘(1.16g，4.6mmol)、二噁烷(60mL)和1N HNO3(40mL)的混合物回流1小时。蒸去溶剂后，用乙醚冲洗固体并过滤。将残余物溶于氯仿中，在NaSO4上干燥并浓缩得到4白色固体(1.00g，77％)熔点190-191℃；[α]D+102.6(c1.00，CHCl3)；UV(CHCl3)λmax244.5，282.5nm；1H NMR(CDCl3)δ8.97(s，1H，NH，D2O可交换的)，8.08-8.04(m，4H，芳香H)，7.97(s，1H，H-6)，7.64-7.45(m，6H，芳香H)，6.39(dd，1H，H-1′，J＝8.4，5.5Hz)，5.64(d，1H，H-3′，J＝6.4Hz)，4.76(m，1H，H-5′)，4.59(m，1H，H-4′)，2.80(dd，1H，H-2′α，J＝14.2，5.5)，2.32(ddd，1H，H-2′β，J＝14.2，8.4和6.4Hz)；对C23H19IN2O7分析计算C，49.13；H，3.40；I，22.57；N，4.98。测得C，48.96；H，3.38；I，22.64；N，5.01。
3′，5′-二-O-苯甲酰基-E-5-(2-甲氧羰基乙烯基)-2′-脱氧-L-尿苷(5)。向刚刚蒸馏过的三乙胺(0.9mL)的干二噁烷(80mL)溶液中加入三苯基膦(115mg，0.4mmol)和乙酸钯(II)(49mg，0.2mmol)，并将该混合物回流10分钟。将所得到的暗黑红溶液冷却到回流温度以下并加入一份丙烯酸甲酯(0.8ml，8.9mmol)，马上接着干燥4(2.50g，4.4mmol)。加入又一份三乙胺(0.3ml)后，将搅拌着的混合物缓缓回流4小时。在塞力特硅藻土填料上过滤反应混合物，用二氯甲烷冲洗；减压除去溶剂得到棕色糖浆状物，将其用快速硅胶色谱(己烷-乙酸酯1∶1)纯化得到1.78g(77％)的5白色固体熔点171-172℃；[α]D+104.9(c0.20，CHCl3)；UV(CHCl3)λmax242.0，300.0nm；1HNMR(CDCl3)δ9.96(s，1H，NH，D2O可交换的)，8.08-8.02(m，4H，芳香H)，7.84(s，1H，H-6)，7.64-7.43(m，6H，芳H)，7.12(d，1H，乙烯基H，J＝15.8Hz)，6.91(d，1H，乙烯基H，J＝15.8Hz)，6.39(dd，1H，H-1′，J＝8.4，5.5Hz)，5.64(d，1H，H-3′，J＝6.4Hz)，4.78(m，1H，H-5′)，4.61(m，1H，H-4′)，3.73(m，3H，OCH3)，2.85(m，1H，H-2′α)，2.33(m，1H，H-2′β)；对C27H24N2O9分析计算C，62.31；H，4.65；N，4.65。测得C，62.41；H，4.74；N，4.93。
E-5-(2-羧基乙烯基)-2′-脱氧-L-尿苷(6)。向5(4.25g，8.2mmol)的THF(25mL)溶液中加入2M NaOH(25mL)并在室温将混合物搅拌90分钟。在tlc显示出起始物质消失后，将溶剂体积减压蒸发减少到一半，用乙醚(3×20mL)冲洗所得到的混合物。在冰浴中冷却水溶液并加入浓盐酸(约5.0mL)调至pH为2。过滤所沉淀的固体、用水和丙酮冲洗并干燥得到2.15g(88％)6的白色固体熔点230℃(分解)；[α]D+2.8(c0.20，DMF)；UV(MeOH)λmax206.0，300.0nm；1H NMR(DMSO)δ12.21(bs，1H，COOH，D2O可交换的)，11.62(s，1H，NH，D2O，可交换的)，8.38(s，1H，H-6)，7.28(d，1H，乙烯基H，J＝16.0Hz)，6.76(d，1H，乙烯基H，J＝16.0Hz)，6.12(app.t，1H，H-1′，J＝6.3Hz)，5.19(m，2H，OH-3′和OH-5′，D2O可交换的)，4.24(m，1H，H-3′)，3.78(m，1H，H-4′)，3.61(m，2H，H-5′)，2.16(m，2H，H-2′)；对C12H14N2O7·0.25H2O分析计算C，47.61；H，4.82；N，9.25。测得C，47.73；H，4.98；N，9.19。
E-5-(2-溴乙烯基)-2′-脱氧-L-尿苷(7)。向6(200mg，0.67mmol)的DMF(1mL)溶液中加入碳酸钾(190mg，1.48mmol)并在室温将悬浮液搅拌15分钟。在20分钟内滴加N-溴琥珀酰亚胺(130mg，0.73mmol)的DMF(1mL)溶液。将所得到的悬浮液在抽吸下马上过滤并用DMF充分冲洗固体。将合并的滤液和洗液真空蒸干完全除去DMF，将残余物用硅胶快速色谱(甲醇-氯仿1∶10)纯化得到150mg(67％)7的白色固体熔点156℃(分解)；[α]D-19.4(c0.20，MeOH)；UV(MeOH)λmax245.0nm(ε1889)(pH2)，243nm(ε2145)(pH7)，253.5nm(ε2079)(pH11)；E-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)-(2-脱氧-2-氟-β-L-阿糖呋喃基)尿嘧啶(9)。将Ph3P(40mg，0.15mmol)、Pd(OAc)2(20mg，0.08mmol)和Et3N(0.4mL，2.8mmol)的1，4-二噁烷(15mL)混合物回流形成暗红色溶液，然后冷却到刚刚低于回流温度。向其中加入丙烯酸甲酯(0.36mL，4.0mmol)，接着加入8(300mg，0.8mmol)的二噁烷(10mL)溶液和Et3N(0.15mL)。将混合物回流0.5小时，然后经塞力特硅藻土填料过滤，用二噁烷冲洗。将合并的滤液蒸干并在硅胶柱上纯化(9∶1CHCl3∶MeOH)得到9白色泡沫(145mg，54％)UV(MeOH)λmax299.0nm；1H NMR(DMSO-d6)δ11.79(s，1H，NH，D2O可交换的)，8.35(s，1H，H-6)，7.41(d，1H，Ha，J＝15.9Hz)，6.90(d，1H，Hb，J＝15.8Hz)，6.14(dd，1H，H-1′，J1’，F＝14.2Hz)，5.81(d，1H，3′-OH，D2O可交换的)，5.25(t，1H，D2O可交换的5′-OH)，5.10(dt，JF-H＝52.6Hz，1H，H-2′)，4.26(dt，JF-H＝19.8Hz，1H，H-3′)，3.84(m，1H，H-4′)，3.69(dm，2H，H-5′)；对C13H15FN2O7·0.8H2O分析计算C，45.30；H，4.82；N，8.13。测得C，45.55；H，4.56；N，8.03。
E-5-(2-羰基乙烯基)-(2-脱氧-2-氟-β-L-阿糖呋喃基)尿嘧啶(10)。在室温将9(135mg，0.41mmol)的2N NaOH溶液(5mL)的溶液搅拌1.5小时，然后在冰浴中冷却。用12N盐酸仔细调节到约pH1并搅拌10分钟。过滤收集白色沉淀并用水和丙酮冲洗得到10白色粉末(96mg，74％)熔点284℃(分解)；UV(MeOH)λmax298.0，268.0nm(sh)；1H NMR(DMSO-d6)δ11.80(s，1H，NH，D2O可交换的)，8.28(s，1H，H-6)，7.31(d，1H，Ha，J＝15.8Hz)，6.79(d，1H，Hb，J＝15.9Hz)，6.12(dd，1H，H-1′，J1’，F＝14.0Hz)，5.90(d，1H，3′-OH，D2O可交换的)，5.23(t，1H，5′-OH，D2O可交换的)，5.08(dt，1H，JF-H＝52.7Hz)，4.27(dt，1H，H-3′，JF-H＝19.6Hz)，3.81(m，1H，H-4′)3.65(dm，2H，H-5′)；对C2H3FN2O·1.6H2O分析计算C，41.76；H，4.70；N，8.12。测得C，41.41；H，4.37；N，7.93。
E-5-(2-溴乙烯基)-(2-脱氧-2-氟-β-L-阿糖呋喃基)尿嘧啶(11)。在室温将10(80mg，0.25mmol)和KHCO3(100mg，1.0mmol)的DMF(1.5mL)悬浮液搅拌20分钟。向其中加入N-溴琥珀酰亚胺(53mg，0.3mmol)的DMF(1.0mL)溶液。在室温将混合物搅拌1.5小时然后过滤，用甲醇冲洗。将滤液蒸干并在制备TLC(6∶1CHCl3∶MeOH)上纯化。与乙醚共蒸发后，得到11白色泡沫(47mg，53％)熔点284℃(分解)；[α]D-59.4(c0.17，MeOH)；UV(H2O)λmax250.0nm(ε15800)(pH2)，2500nm(ε14600)(pH7)，254.0nm(ε15900)(pH11)。
1-(3，5-二-O-乙酰基-2-脱氧-2-氟-β-L-核糖呋喃基)尿嘧啶(13)。在0℃向2，2′-脱水-L-尿苷(17.0g，0.075mol)163的DMF(300mL)和3，4-二氢吡喃(180mL)的悬浮液中加入对甲苯磺酸(14.0g)。在0℃将混合物搅拌4小时得到透明溶液。用Et3N(30mL)将其中和，然后蒸干。将残余物溶于EtOAc，用饱和NaHCO3冲洗并干燥(MgSO4)。除去溶剂得到残余物，将其用己烷研制并过滤。用己烷冲洗滤饼并干燥得到保护的2，2′-脱水-L-尿苷白色固体27.5g(93％)，在室温搅拌所述固体在(23.0g，58.5mmol)在MeOH(300mL)和1N NaOH(100mL)中的悬浮液2小时，然后用稀醋酸中和。将混合物蒸干并将残余物装载到硅胶填料上，用EtOAc洗脱得到12白色固体22.6g(94％)UV(MeOH)λmax263.0nm；在N2下，向-60℃搅拌过的12(20.6g，0.05mol)和CH2Cl2(300mL)和吡啶(50mL)混合物中加入DAST(25.0g，0.155mol)。将其缓缓加热到室温，然后回流4小时。用饱和的NaHCO3和冰水终止反应，然后用CH2Cl2(100mL×3)萃取，用饱和NaHCO3冲洗并干燥(MgSO4)。除去溶剂得到暗棕色糖浆(18.9g)，将其再溶于MeOH(300mL)中。向其中加入对甲苯磺酸(6g)并在室温将混合物搅拌3小时。用吡啶(50mL)将其中和，与吡啶(2×50mL)共同蒸发，然后再溶于吡啶中(100mL)。向其中加入Ac2O(20mL)并在室温将混合物搅拌20小时。除去溶剂并从EtOH中重结晶得到1 3白色固体6.9g(总41％)UV(MeOH)λmax257.0nm；1H NMR(CDCl3)δ8.62(s，1H，NH，D2O可交换的)，7.33(d，1H，H-6，J＝8.1Hz)，5.72(dd，1H，H-1′，J1’，2’＝2.0Hz，J1’，F＝25.0Hz)，5.70(d，1H，H-5，J＝8.1Hz)，5.30(ddd，1H，H-2′，J2’，F＝52.2Hz)，5.08(ddd，1H，H-3′，J3’，F＝17.9Hz)，4.31(m，3H，H-4′，H-5′)，2.07，2.03(2s，6H，Ac)。
5-碘-2′-脱氧-2′-氟-β-L-尿苷(14)。在回流下将13(3，3g，0.01mol)和ICl(2.4g，0.015mol)和CH2Cl2(100mL)混合物搅拌5小时。然后将其用CH2Cl2(150mL)稀释，用NaHSO4(100mL×3)、饱和NaHCO3(50mL×2)连续冲洗并干燥(MgSO4)。除去溶剂得到保护的FIRU白色泡沫4.1g(90％)，将其用NaOMe/MeOH处理。在乙醚中研制，接着在水中重结晶得到14白色固体熔点217-218℃；[α]D+9.41(c0.36，MeOH)；UV(H2O)λmax285.5nm(ε8660)(pH1)，283.5nm(ε8190)(PH7)，277.0nm(ε6450)(PH11)；1H NMR(DMSO-d6)δ11.75(s，1H，NH，D2O可交换的)，8.54(s，1H，H-6)，5.86(bd，1H，H-1′，J1’F＝16.8Hz)，5.62(d，1H，3′-OH，D2O可交换的)，5.41(t，1H，5′-OH，D2O可交换的)，5.04(dd，1H，H-2′，J2’，F＝53.1Hz)，4.18(dm，1H，H-3′，J3’，F＝23.4Hz)，3.90(m，1H，H-4′)，3.72(m，2H，H-5′)；对C9H10FIN2O5分析计算C，29.05；H，2.71；N，7.53。测得C，29.11；H，2.85；N，7.33。
E-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)-1-(2-脱氧-2-氟-β-L-核糖呋喃基)尿嘧啶(15)。将PPh3(125mg，0.47mmol)、Pd(OAc)2(63mg，0.25mmol)、Et3N(1.25mL)和1，4-二噁烷(30mL)混合物在回流下搅拌10分钟，然后冷却到刚刚在回流温度以下。向其中加入丙烯酸甲酯(1.13mL，12.6mmol)接着加入14(930mg，2.50mmol)和1，4-二噁烷(10mL)。将该混合物回流0.5小时，然后经塞力特硅藻土填料过滤，并用二噁烷冲洗。将合并后的滤液蒸干并将残余物用硅胶柱色谱(9∶1CHCl3∶MeOH)纯化得到纯白色泡沫15(630mg，76％)UV(MeOH)λmax299.5，264，0nm；1H NMR(CDCl3)δ11.73(s，1H，NH，D2O可交换的)，8.51(s，1H，H-6，j＝8.1Hz)，7.29(d，1H，Ha，J＝15.9Hz)，6.79(d，1H，Hb，J＝15.9Hz)，5.88(d，1H，H-1′，J1’，F＝16.9Hz)，5.62(d，1H，3′-OH，D2O可交换的)，5.48(t，1H，5′-OH，D2O可交换的)，5.04(dd，1H，H-2′，J2’F＝52.8Hz)，4.16(dm，1H，H-3′，J3’，F＝24.3Hz)，3.90(m，3H，H-4′)，3.72(m，2H，H-5′)，3.68(s，3H，COOMe)。
E-5-(2-羧基乙烯基)-1-(2-脱氧-2-氟-β-L-核糖呋喃基)尿嘧啶(16)。在室温下将化合物15(560mg，1.70mmol)在NaOH溶液(2N，5mL)中搅拌1.5小时，然后用水(20mL)稀释，并用Dowex 50W×8(H+)树脂中和。将混合物过滤并用水和丙酮冲洗。将合并后的滤液蒸干得到淡白色固体，将其用Et2O研制得到16纯白色固体(450mg，84％)UV(MeOH)λmax298.0，267.0nm(sh)；1HNMR(CDCl3)δ11.70(s，1H，NH，D2O可交换的)，8.49(s，1H，H-6，j＝8.1Hz)，7.22(d，1H，Ha，J＝15.9Hz)，6.73(d，1H，Hb，J＝15.9Hz)，5.89(d，1H，H-1′，J1’F＝16.8Hz)，5.86(d，1H，3′-OH，D2O可交换的)，5.62(bs，1H，5′-OH，D2O可交换的)，5.05(dd，1H，H-2′，J2’F＝52.9Hz)，4.18(dm，1H，H-3′，J3’，F＝24.1Hz)，3.89(m，3H，H-4′)，3.74(m，2H，H-5′)。
E-5-(2-溴乙烯基)-1-(2-脱氧-2-氟-β-L-核糖呋喃基)尿嘧啶(17)。向化合物16(190mg，0.6mmol)和KHCO3(240mg，2.4mmol)的DMF(10mL)悬浮液中加入N-溴代琥珀酰亚胺(130mg，0.72mmol)。在室温将该混合物搅拌5小时，然后蒸干。将残余物在硅胶柱上(9∶1CHCl3∶MeOH)接着制备TLC(9∶1CHCl3∶MeOH)上纯化。将产物与Et2O共蒸发得到白色固体90mg(43％)熔点80-83℃；[α]D+14.43(c0.2，MeOH)；UV(H2O)λmax249.0nm(ε13100)，290.0nm(ε9660)(pH1)，249.5nm(ε11500)，292.5nm(ε8810)(pH7)，249.0(ε13800)，290.0nm(sh)(pH11)。
(2S，5R)-E-5-(2-溴乙烯基)-1-[(1′R，2′S，5′R)-基羧基-1.3-氧硫杂戊环-5-基]尿嘧啶(19)。在室温向(E)-5-溴乙烯基尿嘧啶(257mg，1.18mmol)的CH2Cl2(3mL)的悬浮液加入TBDMSOTf(0.72mL，3.13mmol)和2，4，6-可力丁(0.42mL，3.11mmol)。将反应混合物搅拌30分钟。向所得到的溶液中缓慢滴加18(362mg，1.15mmol)的CH2Cl2(8mL)溶液，接着加入TMSI(0.19mL，1.3mmol)。将该混合物在室温搅拌3小时，然后用饱和的Na2S2O3溶液结束反应。将有机层用盐水冲洗、干燥(MgSO4)、过滤并浓缩。将残余物经硅胶(己烷∶EtOAc，3∶1)色谱分离得到19白色固体端基异构混合物(β∶α＝30∶1，由1HNMR测定)，将其从EtOAc和己烷中重结晶得到19(500mg，87％)白色固体熔点128-129℃；[α]D+6.6(c0.28，CHCl3)；UV(MeOH)λmax248.5，292.0nm；1HNMR(CDCl3)δ8.47(s，1H，H-6)，7.41(d，1Ha，J＝13.7Hz)，6.78(d，1H，Hb，J＝13.7Hz)，5.46(s，1H，H-2′)，4.85-4.78(m，1H，H-5′)，3.43(dd，1H，H-4′，J＝12.1，4.7Hz)，3.16(dd，1H，H-4′，J＝12.1，7.5Hz)，2.06-1.40(m，7H)，1.15-1.00(m，2H)，0.96-0.91(m，6H)，0.81(d，3H，J＝6.8Hz)；对C20H27BrN2O4S·0.1C6H14分析计算C，49.88；H，5.77；N，5.65；S，6.35；Br，15.83。
测得C，49.59；H，5.99；N5.46；S，6.26；Br，15.85。
(2S，5R)-E-5-(2-溴乙烯基)-1-(2-羟基甲基-1，3-氧硫杂戊环-5-基)尿嘧啶(20)。在0℃向19(153mg，0.313mmol)的10mL的EtOH的溶液中分批加入NaBH4(24mg，0.626mmol)并在室温将该混合物搅拌6小时。在那时，加入NaBH4(24mg，0.626mmol)并再搅拌6小时。用HOAc中和反应混合物并用CH2Cl2(2×10mL)萃取。将有机层干燥(MgSO4)、过滤并浓缩。残余物用经硅胶柱色谱(CHCl3∶MeOH，30∶1)纯化得到20(73mg，70％)白色固体，将其从己烷-CH2Cl2-MeOH中重结晶熔点155℃(分解)；[α]D+62.4(c0.21，MeOH)；UV(MeOH)λmax251.0nm(ε15400)，291.5(ε13100)(pH7)，249.0(ε16600)，292.0nm(ε1260)(pH2)，254.0(ε16600)，248.5nm(sh)(pH11)。
(2S，5R)-E-5-(2-溴乙烯基)-1-[(1′R，2′S，5′R)-孟基羧基-1.3-氧硫杂戊环-5-基]尿嘧啶(22)。在室温向(E)-5-溴乙烯基尿嘧啶(250mg，1.15mmol)的CH2Cl2(2mL)的悬浮液中加入TBDMSOTf(0.7mL，2.53mmol)和2，4，6-可力丁(0.4mL，2.27mmol)。将该反应混合物搅拌30分钟。向所得到的溶液中缓慢滴加21(380mg，1.15mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液，接着加入TMSI(0.18mL，1.27mmol)。将该混合物在室温搅拌3小时，然后用饱和的Na2S2O3溶液结束反应。将有机层用盐水冲洗、干燥(MgSO4)、过滤并浓缩。将残余物经硅胶色谱(己烷∶EtOAc，3∶1)分离得到白色固体端基异构混合物(β∶α＝27∶1，由1HNMR测定)，将其从EtOAc和己烷中重结晶得到22(456mg，81％)白色固体熔点124-126℃；[α]D-97.2(c0.34，CHCl3)；UV(MeOH)λmax248.5，292.0nm；1HNMR(CDCl3)δ8.47(s，1H，H-6)，8.27(s，NH)，7.42(d，1Ha，J＝13.7Hz)，6.78(d，1H，Hb，J＝13.7Hz)，5.46(s，1H，H-2′)，4.84-4.78(m，1H，H-5′)，3.44(dd，1H，H-4′，J＝12.1，4.7Hz)，3.18(dd，1H，H-4′，J＝12.1，7.1Hz)，2.08-1.41(m，7H)，1.13-0.86(m，8H)，0.78(d，3H，J＝6.9Hz)；对C20H27BrN2O4S分析计算C，49.28；H，5.58；Br，16.39；N，5.75；S，6.85。测得C，49.38；H，5.67；Br，16.47；N5.66；S，6.47。
(2S，5S)-E-5-(2-溴乙烯基)-1-(2-羟基甲基-1，3-氧硫杂戊环-5-基)尿嘧啶(23)。在0℃向22(124mg，0.254mmol)的8mL的EtOH的溶液中分批加入NaBH4(19mg，0.508mmol)并在室温将该混合物搅拌6小时。在那时，加入NaBH4(19mg，0.508mmol)并再搅拌6小时。用HOAc中和反应混合物并用CH2Cl2(10mL×2)萃取。将有机层干燥(MgSO4)、过滤并浓缩。残余物用硅胶柱色谱(CHCl3∶MeOH，30∶1)分离得到23(54mg，64％)白色固体，将其从己烷-CH2Cl2-MeOH中重结晶熔点154℃(分解)；[α]D-60.2(c0.56，MeOH)；UV(MeOH)λmax250.5(ε12700)，290.0(ε10700)(pH7)，249.5(ε14100)，292.5nm(ε10800)(pH2)，254.0(ε14100)，258.0nm(sh)(pH11)。
(2S，5R)-E-5-(2-溴乙烯基)-1-[2-[[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基]-1.3-二氧戊环-5-基]尿嘧啶(25)和(2R，5S)-E-5-(2-溴乙烯基)-1-[2-[[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基]-1.3-二氧戊环-5-基]尿嘧啶(26)。在室温向(E)-5-溴乙烯基尿嘧啶(420mg，1.94mmol)的CH2Cl2(20mL)的悬浮液中加入TBDMSOTf(1.2mL，5.13mmol)和2，4，6-可力丁(0.67mL，5.1mmol)。将该反应混合物搅拌30分钟。向所得到的溶液中缓慢滴加24(775mg，1.94mmol)的CH2Cl2(20mL)溶液，接着加入TMSI(0.31mL，2.14mmol)。将该混合物在室温搅拌3小时，然后用饱和的Na2S2O3溶液结束反应。将有机层用盐水冲洗、干燥(MgSO4)、过滤并浓缩。将残余物经硅胶色谱(己烷∶EtOAc，4∶1)分离得到α-异构体26(164mg，15％)白色固体和β-异构体25(519mg，48％)白色泡沫，将其从CH2Cl2和己烷中重结晶得到25熔点64-66℃；[α]D+22.6(c0.46，CHCl3)；UV(MeOH)λmax249.5，293.0nm；1H NMR(CDCl3)δ8.24(s，NH)，7.70-7.30(m，10H，Ph-H)，7.32(d，1H，J＝13.6Hz，Ha)，6.30(ps t，2H，J＝2.9，1.6Hz，H-5)，6.29(d，1H，J＝13.6Hz，Hb)，5.10(ps t，1H，H-2′，J＝3.4，3.3Hz)，4.20-4.15(m，2H，H-4′)，3.95(dd，1H，H-2″，J＝11.7，3.2Hz)，3.89(dd，1H.H-2″，J＝11.7，3.5Hz)，1.09(s，9H，1Bu)；对C26H29BrN2O5Si分析计算C，56.01；H，5.24；Br，14.33；N，5.02。测得C，55.79；H，5.41；Br，14.18；N4.98。
26熔点148-150℃；[α]D-1.7(c1.29，CHCl3)；UV(MeOH)λmax249.5，293.0nm；1H NMR(CDCl3)δ8.21(s，NH)，7.69-7.39(m，10H，Ph-H)，7.28(d，1H，J＝13.6Hz，Ha)，6.68(d，1H，J＝13.6Hz，Hb)，6.28(dd，1H，H-5′，J＝5.2，2.0Hz)，5.55(ps t，1H，H-2′，J＝3.1，2.9Hz)，4.41(dd，1H，H-4′，J＝9.7，5.2Hz)，4.04(dd，1H，H-4′，J＝9.7，2.0Hz)，3.74(dd，1H，J＝11.7，2.8Hz)，3.70(dd，1H，J＝11.7，3.4Hz，H-2″)，1.07(s，9H，1Bu)；对C26H29BrN2O5Si分析计算C，56.01；H，5.24；Br，14.33；N，5.02。测得C，55.75；H，5.23；Br，14.58；N5.01。
(2R，5R)-E-5-(2-溴乙烯基)-1-[2-(羟基甲基)-1，3-二氧戊环-5-基)尿嘧啶(27)。在室温用氟化四正丁基铵(1M的THF溶液)(0.6mL，0，6mmol)处理25(278mg，0.499mmol)的CH3CN(15mL)溶液1小时。混合物浓缩后，将残余物经硅胶柱色谱(CHCl3∶MeOH，20∶1)纯化得到27(151mg，95％)白色固体熔点176-177℃；[α]D+6.5(c0.47，MeOH)；UV(MeOH)λmax249.5(ε15600)，291.0nm(ε11700)(pH7)，248.5(ε16300)，291.5nm(ε11800)(pH2)，253.5(ε16500)，284.5nm(sh)(pH11)。
(2R，5S)-E-5-(2-溴乙烯基)-1-[2-(羟基甲基)-1，3-二氧戊环-5-基)尿嘧啶(28)。在室温用氟化四正丁基铵(IM的THF溶液)(0.3mL，0.3mmol)处理26(140mg，0.251mmol)的CH3CN(10mL)溶液1小时。混合物浓缩后，将残余物经硅胶柱色谱(CHCl3∶MeOH，20∶1)纯化得到28(72mg，90％)白色固体熔点75-78℃；[α]D-2.8(c0.4，MeOH)；UV(MeOH)λmax250.0(ε13900)，292.0nm(ε10600)(pH7)，249.5(ε14400)，291.5nm(ε10800)(pH2)，254.0(ε14100)，284.0nm(sh)(pH11)。
使用合成27和28的相似方法来从29合成二氧戊环5-(E)-卤代乙烯基尿嘧啶核苷。
(2S，5S)-E-5-(2-氯乙烯基)-1-[2-[[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基]-1.3-二氧戊环-5-基]尿嘧啶(30)和(2S，5R)-E-5-(2-氯乙烯基)-1-[2-[[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基]-1.3-二氧戊环-5-基]尿嘧啶(31)。
30(50％)白色泡沫；[α]D-12.2(c0.29，CHCl3)；UV(MeOH)λmax292.0nm；1H NMR(CDCl3)δ8.2(s，NH)，7.70-7.35(m，10H，Ph-H)，7.20(d，1H，J＝13.3Hz，Ha)，6.30(dd，1H，J＝4.5，2.8Hz，H-5)，6.00(d，1H，J＝13.3Hz，Hb)，5.10(ps t，1H，H-2′，J＝3.41，3.36Hz)，4.20-4.15(m，2H，H-4′)，3.95(dd，1H，H-2″，J＝11.7，3.3Hz)，3.90(dd，1H.H-2″，J＝11.8，3.5Hz)，1.08(s，9H，1Bu)；对C26H29ClN2O5Si分析计算C，60.87；H，5.70；N，5.46。测得C，61.00；H，5.93；N5.29。
31(26％)熔点62-63℃；[α]D27+3.9(c0.31，CHCl3)；UV(MeOH)λmax292.0nm；1H NMR(CDCl3)δ8.18(s，NH)，7.69-7.27(m，10H，Ph-H)，7.32(d，1H，J＝13.3Hz，Ha)，6.40(d，1H，J＝13.3Hz，Hb)，6.28(dd，1H，H-5′，J＝5.2，2.0Hz)，5.55(ps t，1H，H-2′，J＝3.1，2.9Hz)，4.41(dd，1H，H-4′，J＝9.7，5.3Hz)，4.05(dd，1H，H-4′，J＝9.7，2.1Hz)，3.74(dd，1H，J＝11.6，2.7Hz)，3.70(dd，1H，J＝11.7，3.4Hz，H-2″)，1.07(s，9H，1Bu)；对C26H29ClN2O5Si分析计算C，60.44；H，5.74；N，5.42。测得C，60.20；H，5.56；N5.37。
(2S，5R)-E-5-(2-溴乙烯基)-1-[2-[[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基]-1.3-二氧戊环-5-基]尿嘧啶(32)和(2S，5R)-E-5-(2-溴乙烯基)-1-[2-[[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基]-1.3-二氧戊环-5-基]尿嘧啶(33)。
32(58％)熔点62-65℃；[α]D29-19.0(c0.8，CHCl3)；UV(MeOH)λmax249.5，292.5nm；1H NMR(CDCl3)δ8.24(s，NH)，7.70-7.30(m，10H，Ph-H)，7.32(d，1H，J＝13.6Hz，Ha)，6.30(ps t，2H，J＝2.9，1.6Hz，H-5)，6.29(d，1H，J＝13.6Hz，Hb)，5.10(ps t，1H，H-2′，J＝3.4，3.3Hz)，4.20-4.15(m，2H，H-4′)，3.95(dd，1H，H-2″，J＝11.7，3.2Hz)，3.89(dd，1H.H-2″，J＝11.7，3.5Hz)，1.09(s，9H，1Bu)；对C26H29BrN2O5Si分析计算C，56.01；H，5.24；Br，14.33；N，5.02。测得C，56.14；H，5.25；Br，14.41；N4.92。
33(20％)熔点147-149℃；[α]D+1.4(c0.76，CHCl3)；UV(MeOH)λmax249.5，293.0nm；1H NMR(CDCl3)δ8.21(s，NH)，7.69-7.39(m，10H，Ph-H)，7.28(d，1H，J＝13.6Hz，Ha)，6.68(d，1H，J＝13.6Hz，Hb)，6.28(dd，1H，H-5′，J＝5.2，2.0Hz)，5.55(ps t，1H，H-2′，J＝3.1，2.9Hz)，4.41(dd，1H，H-4′，J＝9.7，5.2Hz)，4.04(dd，1H，H-4′，J＝9.7，2.0Hz)，3.74(dd，1H，J＝11.7，2.8Hz)，3.70(dd，1H，J＝11.7，3.4Hz，H-2″)，1.07(s，9H，1Bu)；对C26H29BrN2O5Si分析计算C，56.01；H，5.24；Br，14.33；N，5.02。测得C，55.98；H，5.21；Br，14.50；N，4.92。
(2S，5R)-E-5-(2-碘乙烯基)-1-[2-[[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基]-1.3-二氧戊环-5-基]尿嘧啶(34)和(2S，5R)-E-5-(2-碘乙烯基)-1-[2-[[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基]-1.3-二氧戊环-5-基]尿嘧啶(35)。
34(56％)熔点74-76℃；[α]D-24.0(c0.23，CHCl3)；UV(MeOH)λmax254.0，298.5nm；1H NMR(CDCl3)δ8.10(s，NH)，7.71-7.37(m，10H，Ph-H)，7.33(d，1H，J＝14.6Hz，Ha)，6.64(d，1H，J＝14.6Hz，Hb)，6.29(dd，1H，J＝4.3，3.0Hz，H-5)，5.10(ps t，1H，H-2′，J＝3.41，3.35Hz)，4.18(s，1H，H-4′)，4.17(d，1H，J＝1.7Hz，H-4′)，3.95(dd，1H.H-2″，J＝11.8，3.2Hz)，3.89(dd，1H，H-2″，J＝11.7，3.6Hz)，1.09(s，9H，1Bu)；对C26H29IN2O5Si分析计算C，51.66；H，4.48；N，4.63。测得C，51.66；H，4.92；N4.61。
35(28％)熔点146-147℃；[α]D27+2.3(c0.42，CHCl3)；UV(MeOH)λmax254.0，297.5nm；1H NMR(CDCl3)δ8.15(s，NH)，7.69-7.40(m，10H，Ph-H)，7.28(d，1H，J＝14.6Hz，Ha)，7.02(d，1H，J＝14.6Hz，Hb)，6.27(dd，1H，H-5′，J＝5.1，1.9Hz)，5.55(ps t，1H，H-2′，J＝3.04，2.99Hz)，4.40(dd，1H，H-4′，J＝9.7，5.2Hz)，4.04(dd，1H，H-4′，J＝9.7，1.9Hz)，3.76-3.71(m，2H，H-2″)，1.07(s，9H，1Bu)；对C26H29BrN2O5Si分析计算C，51.66；H，4.48；N，4.63。测得C，51.75；H，4.98；N，4.61。
(2S，5S)-E-5-(2-氯乙烯基)-1-[2-(羟基甲基)-1，3-二氧戊环-5-基)尿嘧啶(36)。熔点193-194℃；[α]D-4.0(c0.37，MeOH)；UV(MeOH)λmax246.5(ε17800)，291.0nm(ε12500)(pH7)，246.0(ε18400)，290.5nm(ε12500)(pH2)，250.5(ε18100)，284.5nm(sh)(pH11)。
(2S，5R)-E-5-(2-氯乙烯基)-1-[2-(羟基甲基)-1，3-二氧戊环-5-基)尿嘧啶(37)。熔点101-102℃；[α]D+2.4(c0.28，MeOH)；UV(MeOH)λmax247.0(ε13300)，291.5nm(ε9550)(pH7)，246.5(ε13700)，291.5nm(ε9670)(pH2)，252.0(ε13900)，283.0nm(sh)(pH11)。
(2S，5S)-E-5-(2-溴乙烯基)-1-[2-(羟基甲基)-1，3-二氧戊环-5-基)尿嘧啶(38)。熔点176-178℃；[α]D-6.5(c0.27，MeOH)；UV(MeOH)λmax249.0(ε17000)，291.0nm(ε13000)(pH7)，249.0(ε17200)，290.5nm(ε12300)(pH2)，253.0(ε16700)，285.0nm(sh)(pH11)。
(2S，5R)-E-5-(2-溴乙烯基)-1-[2-(羟基甲基)-1，3-二氧戊环-5-基)尿嘧啶(39)。熔点76-78℃；[α]D+2.5(c0.2，MeOH)；UV(MeOH)λmax250.0(ε16000)，290.0nm(ε12400)(pH7)，250.0(ε16500)，290.0nm(ε12200)(pH2)，254.5(ε16800)，290.0nm(sh)(pH11)。
(2S，5S)-E-5-(2-碘乙烯基)-1-[2-(羟基甲基)-1，3-二氧戊环-5-基)尿嘧啶(40)。熔点162℃(分解)；[α]D-6.5(c0.27，MeOH)；UV(MeOH)λmax253.0(ε16000)，296.5nm(ε11900)(pH1)，255.0(ε20700)，290.0nm(sh)(pH2)，255.5(ε16600)，290.0nm(sh)(pH11)。
(2S，5R)-E-5-(2-碘乙烯基)-1-[2-(羟基甲基)-1，3-二氧戊环-5-基)尿嘧啶(41)。熔点60℃(分解)；[α]D+2.5(c0.2，MeOH)；UV(MeOH)λmax255.5(ε15400)，297.0nm(ε12400)(pH7)，256.5(ε22400)，290.0nm(sh)(pH2)，257.5(ε16200)，290.0nm(sh)(pH11)。
(2S，5R)-5-碘-N3-对-甲苯甲酰基-1-[2-(对-甲苯甲酰基羟基甲基)-1，3-二氧戊环-5-基]尿嘧啶(43)。向42(208mg，0.61mmol)的吡啶(10mL)溶液中加入N-乙基二异丙基胺(0.23mL，1.28mmol)和p-TolCl(0.25mL，1.83mmol)，然后将混合物在室温搅拌3小时。用水终止反应并浓缩至干。将残余物溶于EtOAc并用水冲洗，将有机层干燥、过滤并浓缩。残余物经硅胶色谱(己烷∶EtOAc，1∶1)分离得到43(335mg，95.3％)灰白色固体熔点166-168℃；[α]D+18.1(c0.36，CHCl3)；UV(MeOH)λmax263.5nm；1H NMR(CDCl3)δ8.04(s，1H，H-6)，7.98(d，2H，J＝8.2Hz)，7.78(d，2H，J＝8.3Hz)，7.30(d，2H，J＝3.3Hz)，7.28(d，2H，J＝3.2Hz)，6.27(dd，1H，H-5′，J＝5.5，1.7Hz)，5.32(t，1H，J＝3.1Hz，H-2′)，4.74(dd，1H，H-4′，J＝17.6，3.3Hz)，4.62(dd，1H，H-4′，J＝12.9，2.9Hz)，4.33(dd，1H，H-4′，J＝10.4，1.7Hz)，4.22(dd，1H，H-4′，J＝10.5，5.6Hz)，2.43，2.42(2s，6H，CH3)；对C24H21IN2O7分析计算C，50.02；H，3.67；N，4.86。测得C，50.18；H，3.72；N，4.85。
(2S，5R)-E-5-(2-乙烯基)-1-[2-(羟甲基)-1，3-二氧戊环-5-基]尿嘧啶(44)。45(171mg，0.296mmol)、四乙烯基锡(0.13mL，0.681mmol)和四三苯基膦合钯(393mg，0.034mmol)和六甲基磷酰胺(4mL)混合物在75℃N2气下搅拌24小时。冷却到室温后，加水(25mL)并用EtOAc(2×25mL)萃取混合物。将合并后的有机萃取液干燥、过滤并浓缩得到44(83.4mg，78.6％)灰白色固体，将其用饱和的氨甲醇溶液在室温处理24小时。浓缩后，残余物经柱色谱(CHCl3∶MeOH，20∶1)纯化得到45(31mg，88.8％)白色固体44UV(MeOH)λmax284.0nm；1H NMR(CDCl3)δ8.18(s，NH)，7.92(d，2H，J＝8.2Hz)，7.52(s，1H，H-6)，7.24(d，2H，J＝8.2Hz)，6.37(dd，1H，H-5′，J＝5.5，2.0Hz)，6.80(dd，1H，J＝17.6，11.2Hz)，5.96(dd，1H，H-，J＝17.6，1.6Hz)，5.30(t，1H，J＝3.1Hz，H-2′)，5.12(dd，1H，H-4′，J＝11.1，1.6Hz)，4.71(dd，1H，H-4′，J＝12.5，3.2Hz)，4.59(dd，1H，H-4′，J＝12.5，3.1Hz)，4.27(dd，1H，H-4′，J＝10.3，2.1Hz)，4.22(dd，1H，H-5′，J＝10.3，5.5Hz)，2.42(s，3H，CH3)；45熔点210-211℃；[α]D-19.2(c0.18，MeOH)；UV(MeOH)λmax235.5(ε14000)，287.5nm(ε10300)(pH7)，238.5(ε16800)，279.5nm(ε13700)(pH2)，240.5(ε15300)，285.0nm(ε7850)(pH11)。
(2S，5S)-5-碘-1-[2-(乙酰氧基甲基)-1.3-二氧戊环-5-基]尿嘧啶(46)。将化合物42(302mg，0.888mmol)的吡啶溶液用DMAP(催化剂)处理并将Ac2O(0.2mL，2.14mmol)在室温处理2小时。加入冰块终止反应并将混合物浓缩。将残余物溶于CH2Cl2并用稀HCl、饱和的NaHCO3和盐水冲洗。过滤和浓缩后，将残余物经硅胶色谱(CHCl3∶MeOH，40∶1)分离得到46(288mg，85％)，将其从CH2Cl2和己烷中重结晶熔点234-236℃；[α]D+10.9(c0.14，50％CHCl3/MeOH)；UV(MeOH)λmax282.5nm；1H NMR(DMSO-d6)δ11.79(s，NH，D2O可交换的)，7.92(s，1H，H-6)，6.20(d，1H，H-1′，J＝5.5Hz)，5.15(s，2H，H-2′)，4.39(d，1H，H-4′，J＝10.2Hz)，4.34(dd，1H，H-4′，J＝13.0，1.8Hz)，4.30(dd，1H，H-4′，J＝13.0，1.7Hz)，4.11(dd，1H，H-4′，J＝10.2，5.9Hz)；对C10H11BrN2O5分析计算C，37.64；H，3.47；Br，25.04；N，8.78。测得C，37.87；H，3.49；Br，25.21；N，8.65。
(2S，5S)-5-乙炔-1-[2-(羟甲基)-1，3-二氧戊环-5-基]尿嘧啶(47)。向46(167mg，0.437mmol)、(Ph3P)2PdCl2(6.6mg，0.00934mmol)和CuI(6.6mg，0.0344mmol)的无水TEA(18mL)悬浮液中加入三甲基甲硅烷基乙炔(0.5mL，3.54mmol)，并且将该混合物在50℃搅拌4.5小时。浓缩后，将残余物溶于CH2Cl2并用5％NaEDTA(2×50mL)和水冲洗。将有机层干燥、过滤并浓缩得到淡黄色糖浆状物(97mg，63％)，将其在室温用0.2N的NaOMe(5.5mL)处理2小时。将该混合物用HOAc中和、浓缩并经柱色谱纯化得到47(60mg，92％)纯白色固体熔点200℃(分解)；[α]D-12.6(c0.24，MeOH)；UV(MeOH)λmax228.0(ε10800)，285.5nm(ε13800)(pH7)，228.0(ε12800)，279.5nm(ε16200)(pH2)，235.0(ε12900)，282.5nm(ε10500)(pH11)。
(2S，5S)-5-乙基-1-[2-(羟甲基)-1，3-二氧戊环-5-基]尿嘧啶(48)。在室温H2气下在含有10％Pd-C(30mg)的EtOH(5mL)中搅拌47(50mg，0.21mmol)，然后过滤并用EtOH冲洗。将合并后的滤液蒸干并与乙醚共同蒸发并经硅胶色谱(CHCl3∶MeOH，20∶1)分离得到48(49.9mg，98％)白色固体熔点132-133℃；[α]D+16.5(c0.64，MeOH)；UV(MeOH)λmax266.0nm(ε13000)(pH7)，266.0(ε12300)(pH2)，266.0nm(ε10500)(pH11)。
生物数据抗VZV的活性病毒生长抑制的测定。将病毒以30-40pfu/孔接种在12孔平板上融合病毒允许的细胞中。在37℃吸附1小时后，用含有10％透析过的FBS和被试验化合物的培养基以各种剂量替换接种物。每种剂量作双份试验。在感染后72小时收获被感染的细胞。对HSV病毒，进行空斑数降低测定来测定病毒的生长。ID50被定义为与未处理的对照组相比能够抑制50％空斑形成的剂量。对VZV和EBV来说，通过“冷冻-融化”来溶解被感染的细胞并用蛋白酶K和RN酶处理溶解物。然后将DNA经过已有描述的狭线印迹(Yao等，Biochem.Pharmacol.51941-947)。通过与32P标记的病毒特殊基因的DNA片段杂交来测定病毒DNA。放射自显影结果是通过PersonalDensitometer SI(Molecular Dynamics.，Sunnyvale，CA)定量的。剥离相同膜并与人β-肌动蛋白基因片段再杂交。接着由病毒DNA/人肌动蛋白DNA使病毒DNA的量正常化。相对于没有处理的对照组抑制50％的病毒DNA合成被测试化合物的浓度被定义为IC50。上述测试的结果如列于下表1中。
抗EBV活性方法细胞培养在该试验中使用产生源于人P3HR1细胞的细胞系H1的高得率EBV。细胞是在用10％透析过的胎牛血清和100μg/ml的卡那霉素补充的RPMI培养基中培养的并在37℃含5％CO2湿润培养箱生长。
H1细胞暴露于药物将H1细胞保持在开始处理前2天的对数生长期。以每孔2×105个细胞的密度接种在24孔平板上的用或不用药物处理的2ml新鲜培养基中接种H1细胞并在37℃培养5天。药物处理期后，将细胞沉淀并用狭线印迹测定法来测定药物对EBV DNA的抑制作用。
狭线印迹测定法将用各种核苷类似物(如下所述)处理过的总共4×105H1细胞在400μl的10mM Tris-HCl(pH7.5)溶液中通过冷冻和融化3次来进行裂解。该细胞裂解液在37℃用RNA酶A(最终浓度50μg/ml)处理30分钟，然后用蛋白酶K(最终浓度100μg/ml)在55℃处理2小时。在pH8.2调节最终浓度到0.4NNaOH/10mM EDTA使样本变性。在100℃的水浴加热10分钟后，用多支管将该样品印迹在正电荷的尼龙膜上。然后将α-32P-dCTP标记的EBVECORIC片段用作DNA杂交的探针。在剥离EBV ECORIC探针后，用人的Alu DNA(BAMH1片段)再探查相同膜。用光密度计分析放射自显影结果。按照EBV DNA与Alu DNA的比例对照于没有处理的对照H1细胞测定处理过的H1细胞中EBV DNA的量。在除去Alu DNA探针后，用相同膜通过与线粒体DNA探针再杂交来测定对线粒体的毒性。参见，例如Yao等，Antimic.Agents and Chemo.，7月，1993，第1420-1425页；Yao等，Biochem.Pharm.，第51卷，941-947(1996)(EBV测定)；Doong等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第88卷，8495-8499(10月，1991)；和Bridges等，Biochem.Pharm.，第51卷，731-736(细胞毒性和mtDNA测定)。
细胞毒性数据细胞毒性的测定。在补充20％透析过的FBS的EPMI培养基中CEM细胞以每ml2.5×104个细胞生长。当细胞双倍时，以1ml/孔将其接种到24孔平板上。以各种稀释过的剂量加入被试药物。在37℃5％CO2下生长3天后，收获细胞并使用Coulter计数器技术。细胞毒性IC50被定义为与没有处理的对照组相比能够抑制50％细胞生长的剂量。
表1
L-β-5′VoddU、L-β-5′BVOddU及其类似物的抗病毒活性化合物 IC501(μM) 细胞毒性(μM)2VZV HSV-l EBVL-β-VOddU＞50 36 0.016 ＞100L-β-BVOddU 0.07 36 ＞l00D-β-VOddU26 ＞50 ＞100L-α-BVOddU ＞30 ＞50 ＞100D-α-BVOddU ＞30 ＞50 ＞100L-β-乙炔基OddU ＞30 ＞50 1.84 ＞100D-BVDU0.05 ＞100L-BVDU＞100 ＞100L-β-BVSddU 12.5＞50 ＞100D-ara-BVU ＞100(索利夫定)0.0007＞l00L-β-IVOddU 0.03533 4.1 ＞100L-α-IVOddU ＞30 ＞50 ＞100L-β-ClVOdd 0.15 18 ＞l00L-α-ClVOddU ＞30 ＞50 ＞l00L-BVF-araU＞30 ＞50 ＞l00L-BV2′F-dU ＞30 ＞50 ＞l00L-IOddU 17 70 0.1 ＞100L-BrOddU ＞30 ＞100 0.2 ＞100喷西络韦30.14 18 ＞100阿昔络韦3213.6 ＞l00lIC50被定义为抑制50％病毒生长的浓度。
2在CEM细胞中进行细胞毒性试验。
3临床批准的。
5-氟尿嘧啶停留(半衰期)的增加给BDF1鼠以20mg/kg的浓度经口引入L-5-溴乙烯基二氧戊环尿嘧啶(β-L-5BVOddU)、D-5-溴乙烯基阿拉伯糖苷尿嘧啶(D-BVArU)或盐水对照溶液。引入两小时后，将5-氟尿嘧啶(FU)以200mg/kg的浓度腹膜内给药。1小时后，将鼠杀死并用19F-NMR测定FU的代谢物。对照鼠在-20(ppm)区后显示出分解代谢物氨基酸，但是在分解代谢物氨基酸中D-BVArU下降了并且L-BVOddU抑制了大约100％的分解代谢物氨基酸。NMR数据在+(ppm)区也显示出了一些合成代谢物，可能是核苷。这些结果证实了BV类似物延缓了FU的分解。所以，在治疗癌症中与FU或FU的药物前体共同给药任一或多种β-L核苷化合物来提高这些药剂的有效性是有益的和出人意料的。
本领域普通技术人员应当理解前述说明书和实施例是实施本发明的详细描述，而不是限定。在不脱离下列权利要求书所限定的本发明的精神和范围下可以对本文所述的细节加以改动。
权利要求
1.一种治疗由非洲淋巴细胞瘤病毒、水痘-带状疱疹病毒或卡波西肉瘤病毒引起患者病毒感染的方法，包括向该患者给药治疗有效量的下列结构的化合物 其中R是 CH2CH3， 或 X是H、F、Br、Cl、I或CH3和R1是H、C1到C20酰基或醚基、磷酸酯基、二磷酸酯基、三磷酸酯基或磷酸二酯基。
2.一种预防或延缓由非洲淋巴细胞瘤病毒感染、水痘-带状疱疹病毒感染或HV-8感染所引起患者感染发作的方法，包括向所述患者给药下列结构的化合物 其中R是 CH2CH3， 或 X是H、F、Br、Cl、I或CH3和R1是H、C1到C20酰基或醚基、磷酸酯基、二磷酸酯基、三磷酸酯基或磷酸二酯基。
3.一种治疗、预防或延缓患者的与EB病毒相关的淋巴瘤或癌症或卡波西肉瘤发作的方法，包括向处于与EB病毒相关的淋巴瘤或癌症或卡波西肉瘤危险期的患者给药治疗有效量的下列通式的化合物 其中R是 CH2CH3， 或 X是H、F、Br、Cl、I或CH3和R1是H、C1到C20酰基或醚基、磷酸酯基、二磷酸酯基、三磷酸酯基或磷酸二酯基。
4.按照权利要求1-3中任一的方法，其中R是 X是H、Cl、Br或I。
5.按照权利要求1-4中任一的方法，其中R是H、Br或I。
6.按照权利要求1-5中任一的方法，其中R1是H、C1到C20酰基、磷酸酯基或磷酸二酯基。
7.按照权利要求1-6中任一的方法，其中R1是H、C1到C20酰基或磷酸基。
8.按照权利要求1-7中任一的方法，其中所述的病毒感染是由水痘-带状疱疹病毒引起的，R是 ，R1是H，而X是Cl、Br或I。
9.按照权利要求8所述的方法，其中X是Br或I。
10.按照权利要求1-7中任一的方法，其中所述的病毒感染是EB病毒感染。
11.按照权利要求10的方法，其中R是 或
12.按照权利要求10的方法，其中R1是H而X是Cl。
13.按照权利要求1的方法，其中所述的病毒感染是HV-8病毒感染。
14.按照权利要求11的方法，其中R是 而X是Cl、Br或I。
15.按照权利要求13或14的方法，其中R1是H、C1到C20酰基、磷酸酯基或磷酸二酯基。
16.按照权利要求13-15中任一的方法，其中X是Br或I。
17.按照权利要求13-16中任一的方法，其中R1是H、C1到C20酰基或磷酸酯基。
18.按照权利要求13-17中任一的方法，其中R是 而X是Br或I。
19.按照权利要求16的方法，其中R1是H。
20.按照权利要求13-19中任一的方法，其中X是Br。
21.一种用于治疗由非洲淋巴细胞瘤病毒、水痘-带状疱疹病毒或卡波西肉瘤病毒所引起患者病毒感染的组合物，包括向所述患者给药下列结构的化合物 其中R是 CH2CH3， 或 X是H、F、Br、Cl、I或CH3和R1是H、C1到C20酰基或醚基、磷酸酯基、二磷酸酯基、三磷酸酯基或磷酸二酯基。
22.一种用于预防或延缓由非洲淋巴细胞瘤病毒感染、水痘-带状疱疹病毒感染或HV-8感染所引起患者感染发作的组合物，包括向所述患者给药下列结构的化合物 其中R是 CH2CH3， 或 X是H、F、Br、Cl、I或CH3和R1是H、C1到C20酰基或醚基、磷酸酯基、二磷酸酯基、三磷酸酯基或磷酸二酯基。
23.一种用于预防或延缓患者的与EB病毒相关的淋巴瘤或癌症或卡波西肉瘤发作的组合物，包括向处于与EB病毒相关的淋巴瘤或癌症或卡波西肉瘤危险期的患者给药治疗有效量的下列通式的化合物 其中R是 CH2CH3， 或 X是H、F、Br、Cl、I或CH3和R1是H、C1到C20酰基或醚基、磷酸酯基、二磷酸酯基、三磷酸酯基或磷酸二酯基。
24.按照权利要求21-23中任一的组合物，其中R是 式)，X是H、Cl、Br或I。
25.按照权利要求21-24中任一的组合物，其中R是H、Br或I。
26.按照权利要求21-25中任一的组合物，其中R1是H、C1到C20酰基、磷酸酯基或磷酸二酯基。
27.按照权利要求21-26中任一的组合物，其中R1是H、C1到C20的酰基或磷酸酯基。
28.按照权利要求21-27中任一的组合物，其中所述的病毒感染是由水痘-带状疱疹病毒引起的，R是 ，R1是H，而X是Cl、Br或I。
29.按照权利要求28所述的方法，其中X是Br或I。
30.按照权利要求1-7中任一的组合物，其中所述的病毒感染是EB病毒感染。
31.按照权利要求30的方法，其中R是 或
32.按照权利要求30的方法，其中R1是H而X是Cl。
33.按照权利要求21-27中任一的组合物，其中所述的病毒感染是HV-8病毒感染。
34.按照权利要求33的组合物，其中R是 而X是Cl、Br或I。
35.按照权利要求33或34的组合物，其中R1是H、C1到C20酰基或磷酸酯基。
36.按照权利要求33-35中任一的组合物，其中X是Br或I。
37.按照权利要求33-36中任一的组合物，其中R1是H、C1到C20酰基或磷酸酯基。
38.按照权利要求33-37中任一的组合物，其中R1是H，R是而X是Br或I。
39.按照权利要求33-37中任一的组合物，其中R1是H。
40.按照权利要求33-39中任一的组合物，其中X是Br。
41.一种增加5-氟尿嘧啶或5-氟尿嘧啶的前体药物在癌症患者体内停留的方法，包括向该患者给药抗癌有效量的5-氟尿嘧啶的同时共同给药有效量的至少一个下列化学结构的化合物 其中R是 CH2CH3， 或 X是H、F、Br、Cl、I或CH3和R1是H、C1到C20酰基或醚基、磷酸酯基、二磷酸酯基、三磷酸酯基或磷酸二酯基。
42.按照权利要求41的方法，其中R是 X是Br。
43.按照权利要求41或42的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的药物前体选自于由2-(1)四氢呋喃基-5-氟尿嘧啶和5-氟嘧啶-2-酮组成的组中。
44.一种用于增加5-氟尿嘧啶或5-氟尿嘧啶的药物前体在癌症患者体内停留的治疗癌症患者的组合物，该组合物含有抗癌有效量的5-氟尿嘧啶或5-氟尿嘧啶的前体药物和有效量的至少一个下列化学结构的化合物 其中R是 CH2CH3， 或 X是H、F、Br、Cl、I或CH3和R1是H、C1到C20的酰基或醚基、磷酸酯基、二磷酸酯基、三磷酸酯基或磷酸二酯基。
45.按照权利要求44的组合物，其中R是 而X是Br。
46.按照权利要求44或45的组合物，其中所述的5-氟尿嘧啶的药物前体选自于由2-(1)四氢呋喃基-5-氟尿嘧啶和5-氟嘧啶-2-酮组成的组中。
全文摘要
本发明涉及嘧啶核苷化合物及其治疗水痘－带状疱疹病毒、非洲淋巴细胞瘤病毒和卡波西肉瘤病毒也称之为HV－8的感染和这些病毒感染的相关并发症的用途。本发明的另一方面，也描述了使用一种或多种核苷化合物增加5－氟尿嘧啶(FU)在患者体内的停留或其半衰期的用途。
文档编号C07H19/06GK1420773SQ00812426
公开日2003年5月28日 申请日期2000年7月20日 优先权日1999年7月21日
发明者郑永齐, 朱重光, 李凌, 崔容硕 申请人:耶鲁大学, 佐治亚大学研究基金会