专利名称：口服促神经生长肽及其制备方法
技术领域：
本发明涉及的是一种利用生物酶制备的口服促神经生长肽及其制备方法。
神经生长因子(NGF)是60年代末首先从小鼠颌下腺分离纯化获得的一种蛋白质。以后人们又从蛇毒人胎盘、牛精囊和豚鼠前列腺等脏器中发现也含有丰富的NGF，并相继得到纯化。1986年NGF的发现曾获得诺贝尔医学奖。80年代后，科学家们又发现，在脑中神经突触体上有与NGF结合的位点，当刺激神经元膜上的NGF受体时，可介导神经元的营养功能，由此证明NGF对中枢神经元的生长、存活，纤维的增生及递质特异性表现有独特的作用。1982年Tatemoto等人首先从猪脑中发现并提取分离出神经肽(NeuroGeptideNGP)，它对脑血管的收缩与舒张有影响。
据有关文献记载，哺乳类动物的脑及脑干是一个高度专门化的器官集合体。进化到人已是更为完善的器官，由于脑及脑干脊髓不同部位含有不同的神经肽(目前已知的有20余种)，它们对支配机体运动、感觉、内分泌等均有不同功能的相应神经肽NGP，且NGP是NGF中最重要的一种营养性多肽，具有广泛的生理作用，能刺激新生动物感官及交感神经节的发育，在组织培养中也能刺激交感神经节的生长。如促神经生长肽中的CCK-33肽及CCK-8肽(CCK指胆囊收缩素)广泛分布于动物的脑区，尤以大脑皮质中为多。CCK-8肽含量最高，在丘脑、脑干及脊髓中含量次之(为大脑皮质的1/20)，能使食欲迅速减退，抗肥胖效果好;P-物质在下丘脑、视前区和脑干中浓度较高，在小脑、大脑皮层等中也有分布，具有催涎作用可刺激垂体分泌催乳激素和生长激素;脑啡肽弥散于整个脑区、脊髓及外周神经节，β-内啡肽比较集中在丘脑-垂体平面以及延伸至间脑与桥脑前侧。但至今对于这些促神经生长肽的提纯分离，并将之制成口服制剂，用于医疗保健品未见诸报道。
本发明的目的是从哺乳类动物的脑及脑干中提取促神经生长肽并将之制成口服制剂，用于治疗脑的疾病与损伤。尤其治疗卒中、脑发育不良、脊髓空洞症早老性痴呆、脑和脊髓外伤等。
本发明的技术解决方案如下依照本发明制得的口服促神经生长肽，是取3-6个月健康哺乳动物的脑及脊髓，经过生物酶化处理后得神经多肽，然后加入右旋糖酐、甘露醇和乳糖。制成干燥颗粒后，装于药用胶囊中或制成片剂，然后瓶装。
依照本发明制备口服促神经生长肽的方法是取健康哺乳动物如猪、狗、人胎脑(经PCR方法检测无肝炎、梅毒、淋病、爱滋病)的脑及脊髓，取其不同的部位(如大脑、小脑、中脑、垂体、桥脑、脑干和脊髓)称其重量，按重量比13的比例加入三蒸水或0.95%的生理盐水，然后加入中性蛋白酶或胃蛋白酶、超氧化物歧化酶，进行消化沉淀，得沉淀物量为50mg左右加入0.5%的正辛醇20滴左右;将所得混合物置于匀浆机，在12000转/分的转速下匀浆3-5分钟，反复3-5次;置匀浆物于-20℃左右的环境中反复冻融6次以上，或超声打碎，使细胞裂解;然后在4℃左右的环境中，用离心机在4000转/分的转速下离心25-35分钟，弃沉淀物，取上清物;再在所取的上清物中加入5/1000的DNA酶及0.4U胰蛋白酶或中性蛋白铬蛋白酶47U于25℃的环境条件下，在PH值为76含钙的环境中裂解;将裂解物置于4℃的环境中，用8000转/分的转速进行离心30分钟左右。取上清物弃沉淀，再根据治疗目的的需要，取分子量的膜为3万的超滤膜进行超滤。再将超滤所得物置于90℃环境中变性15-20分钟过柱(目地为使其具有耐热稳定性)，再加赋型剂，除菌、干燥，赋型剂可以是右旋糖酐甘露醇和乳糖。干燥后的所得即为口服促神经生长肽粉末，可以将之装在药用胶囊中或制成片剂，瓶装室温保存仍具有稳定性和生物活性，可保存2-3年。
本发明的优点在于依照本发明的制备方法制得的口服促神经生长肽对治疗人体的脑疾病与损伤效果良好，特别是对于治疗卒中、脑发育不良、脊髓空洞症帕金森氏病、早老性痴呆，脑、脊髓损伤效果更好。
权利要求
1.一种口服促神经生长肽，其特征在于它由神经多肽、右旋糖酐、甘露醇和乳糖组成。
2.根据权利要求1所述的口服促神经生长肽的制备方法，其特征在于(1)取健康哺乳动物的脑及脊髓，称其重量，按重量比13的比例加入三蒸水或0.95%生理盐水，中性蛋白酶或胃蛋白酶，超氧化物歧化酶，消化沉淀;(2)在(1)的沉淀物中取每50mg加入0.5%的正辛醇20滴左右，将所得混合物在12000转/分的转速下匀浆3-5分钟，反复3-5次;(3)置(2)的匀浆物于-20℃左右的环境中反复冻融6次以上，或超声打碎，细胞裂解;(4)将(3)的所得物在4℃左右的环境条件下，在4000转/分的转速条件下离心25-35分钟;弃沉淀物，取上清物;(5)将(4)所得之上清物中加入5/1000的DNA酶及0.4U胰蛋白酶或中性蛋白酶铬蛋白酶47U，在PH值为7.6含钙环境下置25℃的环境条件下裂解;(6)将(5)的裂解物在4℃的环境条件下;用8000转/分的转速离心30分钟左右，取上清物;(7)将(6)所得之上清物5000～2万～10万分子量的超滤膜进行超滤，超滤后置90℃环境条件下变性15～20分钟;之后过柱;(8)将(7)所得变性物中加入右旋糖酐、甘露醇或乳糖赋型剂赋型，然后干燥成粉末，装胶囊或制成片剂，装瓶。
全文摘要
一种口服促神经生长肽及其制备方法，是利用生物酶分离方法从动物的脑及脊髓中制备口服促神经生长肽。该促神经生长肽由神经肽、右旋糖酐、甘露醇和乳糖组成，其制备方法包括哺乳动物脑及脊髓消化沉淀→匀浆→裂解→离心→裂解→离心→超滤→糖蛋白修饰→等制备过程，制得的口服促神经生长肽对人体的脑疾病和神经损伤有显著疗效。
文档编号A61K47/10GK1112443SQ9410606
公开日1995年11月29日 申请日期1994年5月27日 优先权日1994年5月27日
发明者徐飞 申请人:徐飞