Ahu-377半钙盐晶型及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及一种NEP抑制剂AHU-377半钙盐晶型及其制 备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 中性内肽酶（EC3. 4. 24. 11 ;脑啡肽酶；必肽酶；NEP)是一种可以在芳族氨基酸的 氨基末端上裂解各种肽底物的包含锌的金属蛋白酶。这种酶的底物非限制性地包括心钠素 (ANF，也被称为ANP)、脑钠肽（BNP)、met和leu脑啡肽、缓激肽、神经激肽A和P物质。
[0003]ANF是一族血管舒张、利尿和抗高血压的肽类，一种形式--ANF99-126是在心脏 扩张情况中由心脏释放的循环肽激素。ANF的功能是维持盐和水的体内平衡以及调节血压。 ANF在循环中被至少两个过程迅速灭活：受体-介导的清除和在NEP进行的酶灭活。NEP抑 制剂增强了实验动物进行药理学ANF注射后的低血压、利尿、促尿钠排泄和血浆ANF响应。 通过两种特定的NEP抑制剂进行的ANF的增强，1988年，美国专利US4749688中一般性地公 开了可以用NEP来增强ANF。同年，美国专利US4740499中公开了噻奥芬（thiorphan)和凯 拉托芬也可以用于增强心房肽的应用。此外，NEP抑制剂可降低血压和发挥ANF-样作用如 在一些形式的实验性高血压中的利尿和增加环鸟苷3'，5'_单磷酸（cGMP)排泄的作用。因 为ANF的抗体将抵消血压的降低，所以NEP抑制剂的抗高血压作用是通过ANF介导的。长 期和不进行控制的高血压血管疾病最终将导致靶器官如心和肾的各种病理学改变。持续的 高血压也能导致中风的发生率增加。因此，强烈需要对抗高血压治疗的功效进行评估，即对 除了血压降低以外的其它心血管终点事件进行检查以进一步发现联合治疗的益处。
[0004] 1993年，GaryKsander等在美国专利US5217996中公开了一类联芳基取代的4-氨 基丁酸衍生物，该类化合物被发现具有明显的NEP抑制活性，其中最具代表性的一个化合 物为N-(3-羧基-1-氧代丙基）-(4S)-对-苯基苯基甲基）-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯 (又称AHU-377)。
[0006] 在实际生产制备过程中AHU-377通常以油状物出现，不利于保存及后续药物开 发。AHU-377粗品经叔丁醇酯化、氢氧化钠碱水解后得到的AHU-377钠盐经二氯甲烷/正 己烷重结晶后聚集状态不明，而且经发明人深入研究发现AHU-377钠盐吸湿性相当大，物 质不稳定且不利于储存，因此，AHU-377作为药物活性成分，其产品质量、物质稳定性、储存 或称量等均存在很大问题，其钠盐也没有解决上述问题，虽然美国专利US5217996也公开 了AHU-377还可以制备成各种盐型化合物，例如碱金属盐、碱土金属盐、胺盐、烷基胺盐、羟 烷基胺盐等，但是，主要还是从AHU-377含有一个羧基的化学结构上推断得出，并未实际得 至IJ各种除钠盐之外的其它盐型化合物，不能解决AHU-377产品质量差、物质不稳定、难以储 存及称量等问题。
[0007] 此外，该药的应用对象为有高血压和心衰类心血管疾病的病人，钠的摄入也会增 加心血管负担，因此十分有必要将钠盐更换成其他盐型，或其他类对心血管无害或有益的 盐类如钙盐等。钙离子对心血管的有益作用被广泛认同，钙离子降血压的作用可能由以下 机制所致：1、钙的膜稳定作用，钙结合在细胞膜上，可降低细胞膜通透性，提高兴奋阈，能使 血管平滑肌松弛；2、钙自身可阻断钙通道，使细胞外的钙离子不能进入细胞内；3、血钙高 可对抗高钠所致的排钾增加，而钾离子对稳定细胞膜起重要作用。人维持足够的高钙摄入， 可对抗高钠的有害作用；4、有学者认为，40%的血压升高与甲状旁腺有关。甲状旁腺可产生 一种耐高热的多肽物质，这是引起高血压的罪魁祸首，被称为"致高血压因子"。"致高血压 因子"的产生受低钙饮食刺激，而高钙饮食可抑制其产生"致高血压因子"。现代研究证明， 中老年人多吃含钙丰富的食物可以预防动脉硬化，高血压病人在服用降压药的同时配合补 钙，还能更好地使过高的血压降到正常。所以，对于缺钙的人，长期大量地补充钙质，使血钙 保持正常水平，维持平滑肌细胞内外钙代谢的平衡，避免血管平滑肌的痉挛，从而达到有效 预防动脉血管硬化、降低血压的目的。因此，将AHU377的钠盐换成钙盐，不仅可以减少钠盐 带来的副作用，还可以带来额外的对心血管疾病的有益作用。
[0008] 虽然W02008031567也公开了AHU-377游离酸制备成钙盐的合成路线，如下所示：
[0010] 但是，本领域人员可以了解，上述常见的成盐反映技术路线是基于含有羧基的化 合物与钙盐成盐的一般技术路线，但是该技术路线并不能适合所有羧基化合物，也无从知 晓是否可以通过这个反映来制备出AHU377的钙盐。该技术路线无实施例支持，所以更加 不可知该技术路线是否可以产生晶型的钙盐。另外，该技术路线只有在特殊条件下成立， 尤其是合成路线中第二步，是AHU-377钠盐与CaC12发生的离子交换反应，如果不能创造 AHU-377钙盐或者氯化钠从体系析出的特殊条件，则上述合成路线则不成立。其次，从该通 用的技术路线，无法推测是否可以制备固体形式的AHU-377钙盐，所得钙盐是否为晶型，是 何种晶型。因此，该通用的技术路线无法得到AHU-377钙盐或结晶形式的AHU-337钙盐晶 体。
【发明内容】
[0011] 为了解决现有技术存在的问题，改善AHU-377或其钠盐的理化性质，发明人在深 入研究的基础上制备得到了AHU-377半钙盐晶型。通过将AHU-377制备成钙盐来改变 AHU-377或其钠盐的理化性质，例如结晶性、溶解性、吸湿性等。
[0012] 本发明第一方面提供一种AHU-377半钙盐晶型，其X射线粉末衍射图包括位于 12·70±0·2°，7·32±0·2°，15·90±0·2°和18·56±0·2°的衍射角（2Θ)处的峰，或其 X射线粉末衍射图包括位于4. 02±0. 2°，3. 62±0. 2°和17. 82±0. 2°的衍射角（2 Θ)处 的峰。
[0013]本发明第二方面提供一种AHU-377半钙盐三水合物晶型（指定为晶型I)，其X射 线粉末衍射图包括位于 12. 70±0. 2°，7. 32±0. 2°，15. 90±0. 2° 和 18. 56±0. 2° 的衍 射角（2Θ)处的峰。
[0014]作为进一步优选的方案，优选其X射线粉末衍射图还包括位于14. 74±0. 2°，15. 42±0·2°，7·82±0·2°，19·42±0·2°，16·64±0·2° 和 17·54±0·2° 的衍射角（2Θ)处 的峰。
[0015] 作为更进一步优选的方案，最优选其X射线粉末衍射图与图1中显示的衍射角 (2 Θ)处的峰基本上相同，其X射线粉末衍射数据如表1所示：
[0016]表1
[0018]本发明第三方面提供一种AHU-377半钙盐无水晶型（指定为晶型II)，其X射线粉 末衍射图包括位于4. 02±0. 2°，3. 62±0. 2°和17. 82±0. 2°的衍射角（2Θ)处的峰。
[0019] 作为进一步优选的方案，优选其X射线粉末衍射图还包括位于 20. 48±0· 2°，14. 50±0· 2° 和 19. 66±0· 2° 的衍射角（2Θ)处的峰。
[0020] 作为更进一步优选的方案，最优选其X射线粉末衍射图与图3中显示的衍射角 (2Θ)处的峰基本上相同，其X射线粉末衍射数据如表2所示：
[0021]表 2
[0023] 本文所使用的关于X射线衍射峰位置的术语"基本上相同的"意指考虑典型的峰 位置和强度可变性。例如，本领域技术人员将理解，峰位置（2Θ)将由于XRTO仪器不同， 而造成测量值有所变化，有时这种变化达有时多达0.2°。此外，本领域技术人员将理解， XRH)样品制样方法，XRH)仪器，样品结晶度，样品用量以及晶体择优取向等因素将导致样 品XRro衍射图中相对峰强度的改变。
[0024] 本发明第四方面提供一种AHU-377半钙盐三水合物晶型的制备方法，包括，
[0025] 1)将AHU-377游离酸溶解或混悬在合适的溶剂中，与等量或过量可溶于该体系的 苛性碱或弱碱性钠盐或钾盐相混合制备生成AHU-377相应的盐，优选将弱碱性钠盐或钾盐 相混合；
[0026] 2)将上述AHU-377盐体系与水溶性钙盐在水或含有机溶剂的水体系中相混合，产 生AHU-377钙盐沉淀；
[0027] 3)收集上述成盐反应过程中产物得到AHU-377半钙盐三水合物晶型。
[0028] 作为进一步优选的方案，步骤1)所述合适的溶剂为结晶溶剂，包括水、水溶性溶 剂或其混合物。
[0029] 作为更进一步优选的方案，所述水溶性溶剂选自醇类、酮类、环醚类、酰胺类、亚砜 类有机溶剂或其混合物，优选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、四 氢呋喃、二