专利名称：抗卷旋杆菌的菌苗复合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗性和预防性的抗菌菌苗复合物，该复合物对幽门卷旋杆菌(也称为幽门弯曲杆菌)(Helicobacter pylori)、肝卷旋杆菌(Helicobacter hepaticus)和冠状卷旋杆菌(Helicobacter coronari)特异性抗原及非特异性抗原产生免疫作用，并确保免疫调节。
(MARSHALL BJ.WARREN Jr.，在患有胃炎和消化溃疡病之人胃中尚未鉴定的弯曲芽孢杆菌(Unidentified curved bacilli in the stomach ofpatients with gastritis and peptic ulceration),Lancet 1984；i:1311-3)。
(MEGRAUD F.，幽门卷旋杆菌--粘液细菌的首害(chef de filedes bacteries du mucus),La Lettre de L′infectiologue 1993；8(supp1.4):151-9)。
众所周知，在微生物学中，壁、膜或荚膜(组合或单独的，溶解在培养介质中的形式)表面上的抗原是糖蛋白、多肽或多糖性质的。
与结合因素如蛋白多糖或多糖膜物质、致病微生物的提取物之核糖体源中的核糖核酸(RNA)结合的菌苗可用于制备非细胞菌苗(参看Inf.and Immunity,1,574-82,1970和WO 94/22462)。
这些菌苗使用与特异性测定的微生物疾病相一致的特异性抗原。
然而，抗原作用实质上与微生物细胞之间的(特别是核糖体)RNA水平有关。免疫活性细胞(CIC)直接使用RNA作为活性运载体。
为制备本发明复合物，对于血清型卷旋杆菌细菌抗原，借助于优选共价键的联接，将核糖体RNA优选偶联在优选于Ⅲ型胶原中存在的糖蛋白性质的氨基酸序列上。在人类中，胶原几乎是肌体的第三蛋白。Ⅲ型适合于氨基酸序列，并存在于皮肤、血管壁和消化道粘膜上皮中。
在本发明复合物中，我们稳定并使用了细胞膜组分，即相同微生物中可以产生核糖体RNA的组织。该膜组分包含所有的肽多糖物质，而且还已知为免疫佐剂。
除幽门卷旋杆菌、肝卷旋杆菌和冠状卷旋杆菌外，膜组分--葡多糖或蛋白多糖--不同微生物中通过抽提核糖体来提供RNA的组织也是有益的，这些微生物是以其致免疫性(补充巨噬细胞，激活T淋巴细胞，增强免疫球蛋白的合成，特别是IgA的分泌(11S)，增加吞噬细胞，以及刺激附属T细胞)而为人所熟知的。
其理由如下在完全由幽门卷旋杆菌、肝卷旋杆菌和冠状卷旋杆菌诱发的病理情况下，肌体除产生特异性的体液应答外，还在保护个体的过程中产生细胞应答以暂时缓和抗体的不足。
众所周知，细胞介导的应答在其原位不产生抗体，而只是形成致敏性且对所产生的抗原特异性的淋巴样细胞。
T淋巴细胞通过其本身和/或细胞因子起作用，并且可观察到炎性类型的应答或者细胞毒性的应答。
卷旋杆菌属细菌的致病力取决于其侵占胃粘膜的能力、在胃液中的存活能力、尽管宿主中有免疫应答但可在其中增殖的能力、以及产生通常非可逆性损伤(腺癌、胃淋巴瘤或MALT“与粘膜有关的淋巴样组织”的淋巴瘤)的能力，[PARSONNET J幽门卷旋杆菌和胃癌(Helicobacter pylori andgastric cancer),Gastroenterol Clin North Am 1993,22:89-104；-WORTHERSPON AC,DOGLIONI C,DISS TC等人在根除幽门卷旋杆菌后与粘膜有关的淋巴样组织型的主要低级B细胞胃淋巴瘤的消退(Regression of primary low-grade B-cell gastric lymphoma ofmucosa associated lymphoid tissue type after eradication of Helicobacterpylori),Lancet 1993,342:575-7；-MOHANDAS，幽门卷旋杆菌和淋巴瘤(Helicobacter pylori andlymphoma),N Eng J Med 1994,331:746-7]。
在注射期间如果免疫应答不足，产生对吞噬细胞的抵抗性，诱导细胞凋落，等等。。本发明菌苗复合物的组成本发明的复合物包括双分子，该双分子是通过将与靶相连之氨基酸的一个功能臂和相应于所述功能臂之组成的描述密码的RNA遗传臂相偶联而形成的。A、可使用的核糖体RNA是选自以下物质的提取物或它们的混合物，但不仅限于以下物质--幽门卷旋杆菌(或弯曲杆菌)、肝卷旋杆菌、冠状卷旋杆菌
--肺炎克雷白氏杆菌--链球菌(肺炎或化脓)--金黄葡萄球菌--粘质沙雷氏菌--大肠埃希氏杆菌--鼠伤寒沙门氏菌--棒状杆菌(粒状、小型棒状和痤疮)--分枝杆菌(结核、耻垢、龟)--Hemophilus influenzae--Ⅱ型肺炎球菌--龋齿罗氏菌--大肠杆菌--痢疾志贺氏菌--肠球菌--诺卡氏菌(星状、巴西、玫瑰色、不透明、红色)--卡尔默蒂和盖兰(Calmette和Guerin)杆菌。
RNA的重均分子量在5104-108道尔顿。
现已有多种制备RNA的工业方法。在此作为实例引述在Infect.andImmunity,1,574-82,1970中描述的方法将细菌捣碎，然后进行分级沉淀，溶解核糖体蛋白，通过Pronase抽提沉淀出的RNA，最后用离子交换色谱纯化。
如果RNA是通过酶法制得的，最后的纯化过程可通过分子筛色谱来完成。可特别参考以下文献-C.EHRESMAN(1972),Biochimie,54,901-H.KAGAWA(1972),J.Biochem.,(1972),827
-M.SANTER(1973),J.Bact.,116,1304-NOMURA(1974),Ribosomes,Ed.Cold Spring Harbor LaboratoryB、可使用的细菌细胞膜组分可以是以下物质的提取物，但并不限于以下物质1、对于荚膜多糖a、幽门卷旋杆菌和肝卷旋杆菌b、肺炎克雷白氏杆菌c、肺炎链球菌d、Hemophilus influenzaee、大肠埃希氏杆菌a、幽门卷旋杆菌和肝卷旋杆菌[HILLS BA，胃粘膜屏障幽门卷旋杆菌消化胃表面活性剂并使其失去保护的证据(Gastric mucosal barrier:evidence for Helicobacterpylori ingesting gastric surfactant and deriving protection from it),Gut,1993年5月，34(5):588-93；-GENTA RM,ROBASON GO,GRAHAM DY，同时观察幽门卷旋杆菌和胃形态学新的染色(Simultaneous visualization of Helicobacterpylori and gastric morphology:a new stain),Human Pathology,1994年5月,25(3):221-6；-MAJEWSKI,S.I.和C.S GOODWIN,1988，幽门弯曲杆菌之基因组的限制性内切酶分析与快速抽提法大量基因组变异的证据(Restriction endonuclease analysis of the genome of Campylobacter pyloriwith a rapid extraction method:evidence for considerable genomicvariation),J.Infect.Dis.,157:465-471
-GEIS,G.,LEYING,H.,SUERBAUM,S.,MAI,U.和OPFERKUCH,W.，鞭毛幽门弯曲杆菌的超结构和化学分析(Ultrastructure and chemical analysis of Campylobacter pylori flagella)，J.Clin.Microbiol.,27:436-441,1989]b、肺炎克雷白氏杆菌[C.ERBING,L.KENNE,B.LINBERG,J.LONNGREN(1976),I型肺炎克雷白氏杆菌的荚膜多糖的结构研究(Structural studies of thecapsular polysaccharide of Klebsiella pneumoniae type I),Carbohydr.Res.,50(1976)115-20；-W.NIMMICH(1968)，克雷白氏杆菌之K.Angigen的分离和定性结构分析(Zur Isolierung und qualitativen Bausteianalyse der K.AnhigenVon Klebsiellen),Med.Mikrobio.und Immunol.,154,117,131；-C.RICHARD(1973),500种克雷白氏杆菌源的抗原和生化研究(Etude antigenique et biochimique de 500 souches de Klebsiella),Ann.Biol.Clin.,1973]c、肺炎链球菌[F.KAUFFMANN和E.LUND(1954),Int.Bull.Bact.Nomencl.4,125-28；-FLETON和OTTINGER,J.of Bacteriology,1942,43,94,105；-M.COLIN,M.D.MACLEOD等人，用特异性荚膜多糖的免疫作用防止肺炎球菌(Prevention of pneumococcal pneumoniae byimmunization with specific capsular polysaccharides),J.Exp.Med.,1945,82,445-65；-A.R.DOCHEZ和O.T.AVERY，生长期间肺炎球菌的特异性水溶性物质的制备(The elaboration of specific soluble substance byPneumococcus during growth)(1971),J.Exp.Med.26,477-93；-WEST PHAL和LUDERITZ(1952),Z.Naturf,7B.148；-C.P.J.GLALDEMANS和H.P.TREFFERS，从肺炎双球菌中制备荚膜多糖的改进法(An improved preparation of the capsularpolysaccharide from Diplococcus pneumoniae),Carbohydr.Res.1976,4,181-84]。d、Hemophilus influenzae(聚核糖磷酸酯型的荚膜多糖)[P.ANDERSON等人(1972)，用聚核糖磷酸酯-B型Hemophilusinfluenzae荚膜抗原使人免疫(Immunization of humans with poly-ribosephosphate,the capsular antigen of Hemophilus influenzae type B),J.of Clin.Invest.，第51卷，1972,39-44；-P.ANDERSON等人(1977)，从B型Hemophilus influenzae的上清液中分离荚膜多糖(Isolation of the capsular polysaccharide fromsupematant of Hemophilus influenzae type B),Infect.And Immun.,1977,15(2),472-77]。e、大肠埃希氏杆菌[LUDERITZ等人(1977)，革兰氏阴性菌的体壁和荚膜抗原(Somaticand capsular antigens of gram-negative bacteria),Compr.Biochem.26A,105-228；-BOYER H.W.和D.ROULLAND-DISSOIX(1969)，大肠埃希氏杆菌中DNA之限制和改性的补充分析(A complementation analysis ofthe restriction and modification of DAN in Escherichia coli),J.Mol.Biol.,41:459-472；-CASADABAN,M.和S.N.COHEN(1980)，大肠埃希氏杆菌中DNA融合和克隆的基因控制信号分析(Analysis of gene control signalsby DNA fusion and cloning in E.Coli),J.Mol.Biol.,138:179-207；LUGTENBERG,B.,J.Meijers,R.PETERS,P.Van der Hock和L.VanAlphen(1975)，大肠埃希氏杆菌K12之“主要外膜蛋白”电泳分解成4个带(Electrophoretic resolution of the“major outer membraneprotein”of Escherichia coli K12 into four bands),FEEBS Lett.58:254-258]。
2、对于膜脂多糖(LPS)--棒状杆菌(avidum、牛、白喉、产酶、马、带形、菜豆、faciens、flavidum、梭形、粒状、栗色、增生、诡谲、液化、小型、微代谢、化脓、肥肿、干燥)，--以及革兰氏弱性(gram-moins)菌-幽门卷旋杆菌、肝卷旋杆菌、冠状卷旋杆菌-克雷白氏杆菌(肺炎和鼻硬结)-鼠伤寒沙门氏菌-沙雷氏菌(海红、corralina、印度、普利茅斯、kiluea)-脑膜炎奈瑟氏球菌-大肠埃希氏杆菌[GOODWIN C.S.“幽门卷旋杆菌其于1982年4月的培养物的10周年纪念(Helicobacter pylori:10thanniversary of its culture in April1982)”,Gut 1993,34:293-4；-C.ERBIN等人(1977)，克雷白氏杆菌LPS的结构研究(Structuralstudies on the Klebsiella LPS),Carbohydr.Res.,56,377-81；-C.B.CASTOR等人(1971)，高纯肺炎克雷白氏杆菌致热LPS的特征(Characteristics of a highly purified pyrogenic LPS of Klebsiellapneumoniae),J.ofPharm.Sci.,60,(10),1578-80；-K.FUKUSHI(1964)，从肠杆菌中抽提和纯化内毒素所选方法和物质的比较(Extraction and purification of endotoxin fromEnterobacteriaceae:a comparison of selected methods and sources),J.ofBacteriol.87,(2),391-400；-G.A.LIMJUCO，从B组脑膜炎奈瑟氏球菌中得到的LPS的化学组成的研究(Studies on the chemical composition of LPS from Neisseriameningifidis group B),J.of Gen.Microbiol.1978,104,187-91；-G.A.ADAMS(1976),用DMSO从革兰氏阴性菌中抽提LPS(Extraction of LPS from gram-negative bacteria with DMSO),Canad.J.Biochem.,45,422-26；-K.G.JOHNSON(1976)，制备细菌LPS方法的改进(Improvedtechniques for the preparation of bacterial LPS),Canad.J.Microbiol.,(22),29-34；-Y.B.KIM等人(1976)，从Salmonella mutans得到的生理活性的内毒素(Biologically active endotoxins from Salmonella mutans),J.ofBacteriol.,94,(5),1320-26]。
3、对于膜蛋白-幽门卷旋杆菌-大肠埃希氏杆菌-粘质沙雷氏菌-化脓链球菌-鼠伤寒沙门氏菌幽门卷旋杆菌、肝卷旋杆菌、冠状卷旋杆菌
--GOBERT(B.),LABIGNE(A.),de KORWIN(J.D.),CONROY(M.C.),BENE(M.C.),FAURE(G.C.)，幽门卷旋杆菌的聚合酶链反应(Polymerase chain reaction for Helicobacter pyroli),Rev.Esp.Enf.Digest.1980,78(suppl.1),4；-TOWBIN,H.,T.STAEHELIN和J.GORDON(1979)，将蛋白从聚丙烯酰胺凝胶电泳转移至硝基纤维素纸上方法及某些应用(Electro-phoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulosesheets:procedure and some applications),Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76:4350-4354。大肠埃希氏杆菌-S.F.STIRM等人(1976)，附着体，承载大肠埃希氏杆菌的表面抗原K88(Episome,carried surface antigen K88 of Escherichia coli),J.ofBacteriol.,93,(2),731-39；-S.J.BETZ等人(1977)，细菌LPS的富蛋白组分的化学和生理性质(Chemical and biological properties of a protein rich fraction ofbacterial LPS),J.ofImmunol.,119,(4),1475-81。粘质沙雷氏菌-W.WOBER(1971)，对从革兰氏阴性菌得到的内毒素的蛋白部分的研究，通过乙酸水解粘质沙雷氏菌的内毒素分离出的蛋白部分的特征(Studies on the protein moiety of endotoxin from gram-negativebacteria,characterisation of the protein-moieting isolated by acetic acidhydrolysis of endotoxin of Serratia marcescens)。化脓链球菌-M.K.WITTNER(1977)，用A组链球菌M蛋白菌苗对鼠进行同源和杂源保护(Homologous and heterologous protection of mice withgroup-A Streptococcal M protein vaccine)Infect.and Immun.,1977,15,(1),104-8。鼠伤寒沙门氏菌-N.KUUSI等人(1979)，用鼠的实验沙门氏病中的主外膜蛋白进行免疫(Immunization with major outer membrane protein inexperimental salmonellosis of mice),Infect.and Immun.,1979,25,(3),857-62；-C.BARBER等人(1972)，鼠伤寒沙门氏菌蛋白在感染带有天生病原体之鼠中的保护作用(The protective role of proteins fromSalmonella thyphimurium in infection of mice with their naturalpathogen),Rev.Immunol.,36,77-81；-G.DELORD(1979)，包含在M-206鼠伤寒沙门氏菌培养物的上清液中的接种抗原的研究(Etude d′un anfigene vaccinant contenudans le sumageant de culture de Salmonella thyphimurium,souche M-206),these de medecine de Lyon No.428,1979；-G.W.GOODMAN(1979)，新型B-淋巴细胞激活剂内毒素蛋白的化学和物理性质的特征(Characterization of the chemical andphysical properties of a novel B-lymphocyte activator endotoxin protein)，Infect.and Immun.,1979,24(3),685-96。
4、对于磷壁酸和脂磷壁酸链球菌、葡萄球菌和乳芽孢杆菌(革兰氏阳性菌的表面是由通过磷酸二酯桥联接的磷壁酸组成的，该磷壁酸是甘油的聚合物)。
以下文献描述了制备方法-M.M.BURGER(1966)，磷壁酸抗原决定子，链分离，和它们在细胞壁上的位置(Teichoic acids:antigenic determinants,chainseparation.and their location in the cell wall),Microbiology 56,910-17；-K.W.KNOW(1973)，磷壁酸的免疫学性质(Immunologicalproperties of teichoic acids),Bacteriol.Reviews,37,21,215-57；-G.A.MILLER(1976)，链球菌脂磷壁酸对鼠宿主应答的作用(Effets of streptococcal lipoteichoic acid on host response in mice),Infect.and Immun.,1976,13,(5),1408-17；-A.J.WICHEN等人(1975)，脂磷壁酸新一类的细菌抗原(Lipoteichoic acids:a new class ofbacterial antigens),Science,187,1161-67。可行的不同剂量RNA*FISKE和SUBBAROW，磷的剂量,用于质量控制的离子柱交换HPLC色谱(Dosage du phosphore.Chromatographie HPLC sur colonneechangeuse d′ions pour le controle qualitatif),J.Biol.Chem.(1926),66,375。蛋白*LOWRY(J.Biol.Chem.(1951),193,265-75)。己糖*T.A.SCOTT，蒽酮中的比色计剂量(Dosage colorimetr,al′anthrone),Anal.Chem.(1953),25,1956-61。己糖胺*L.A.ELSON(Biochem.J(1953),27,1824-28)。脂多糖
*J.JANDA和E.WORK(Febs Letters,1971,16(4),343-45)。C、其他免疫佐剂除膜组分外，还有-Ⅲ型胶原-氯化钠。
所使用的Ⅲ型胶原具有如下特征a、接近如下序列的氨基酸序列(浓度以g/kg表示)-天冬氨酸AA 51.5-羟基脯氨酸 HP 107.0-苏氨酸 TH 16.1-丝氨酸 SE 27.8-谷氨酸 AG 95.9-脯氨酸 PR 124.0-甘氨酸 GL 149.0-丙氨酸 AL 87.9-缬氨酸 VA 23.3-蛋氨酸 ME 7.5-异亮氨酸IL 14.4-亮氨酸 LE 27.8-酪氨酸 TY 6.7-苯丙氨酸PA 14.4-赖氨酸 LY 28.6-组氨酸 HI 5.5-精氨酸 AR 73.0
b、分析类型如下-颜色 黄白色-表观密度 250g/l-含水量 6％-10％溶液的pH值 6.9-40℃(下的Engler浓度 2.5(溶液为17.75％)-原料比例 0.9％-灰量 2.2％-Fe+Cu+Ca的比例 462mg/kg-重金属 通过电弧发射光谱没有发现-元素分析 C 46.80％H 7.10％N 14.96％本发明复合物的组成涉及核糖体RNA或RNA片段、膜组分(例如肺炎克雷白氏杆菌的蛋白多糖)和Ⅲ型胶原，并添加有氯化钠和抗炎药，其可以不产生任何毒性的小剂量给药，产生高水平的保护和治愈作用。
优选制剂是上述组成的注射剂型，但也可使用与医疗应用相配适的制剂和/或载体或添加剂。菌苗复合物的作用机理本发明的治疗(菌苗)复合物类似于特异性菌苗(通过“惰性系统”，该系统的目的是增加重组亚单元的菌苗和由肽组成之菌苗的免疫遗传力)，并且是具有淋巴因子特征的非特异性菌苗，其固定在巨噬细胞上，并在与卷旋杆菌面对面的免疫应答中起到最重要的作用。[KAZI,J.I.,SINNIAH,R.,JAFFRAY,N.A.,ALAM,S.M.,ZAMAN,V.,ZUBERI,S.J.和KAZI,A.M.,在与幽门弯曲杆菌有关的慢性胃炎中的细胞和体液免疫应答(Cellular and humoral immune responses in Campylobacterpylori-associated chronic gastritis),J.Pathol.159:231-237,1989]。
从1974-75(A.S.和G.P.YOUMANS)以来，一直认为对RNA免疫应答的抑制作用可通过各种不同的抑制剂来实现。
YOUMANS仅针对一种细菌源(结核分枝杆菌)进行了研究，其中“寄生现象”仅是在细胞内有。
VENNEMAN等人在1972年认为，真正的抗原能够结合在RNA上，而其起到佐剂的作用。将它们和核糖体RNA一起接种在小鼠上，所述RNA是在65℃下用苯酚抽提脑膜炎沙门氏菌之核糖体得到的。接种30天后，证实动物得到的保护比活微生物源菌苗(减活)更好。
普遍认为保护水平与注射的RNA量有关。
例如，肺炎链球菌提取物核糖体RNA诱导体液性质的保护作用，而肺炎克雷白氏杆菌提取物核糖体RNA可诱导细胞性质的保护作用。。
体内注射在小鼠和豚鼠中的混合物可起到蜂窝状巨噬细胞的作用。
给药溶血范围的酸性磷酸酶直接与小鼠脾细胞接触后，该“暂时”的作用重新恢复。
用本发明治疗和菌苗复合物进行的治疗在期间可产生细胞和体液免疫刺激作用，以及对幽门卷旋杆菌非常明显的特异性和非特异性作用。病人的肌体被激动以“排斥被感染的细胞”。通过被同时激发的PMN(多形核白细胞)和单核细胞的作用，还可得到痊愈。。
该治疗机理可借助于由上述佐剂(膜蛋白多糖、Ⅲ型胶原、氯化钠的组合)调理的(非特异性细菌核糖体)RNA产生天然无性繁殖系。
该无性繁殖系诱导对抗遗传型抗体的免疫作用，并对与细菌有关联的位置产生抗体。为减小或抑制炎性反应，在用本发明菌苗复合物治疗时需要通过I.V.或I.M.途径使用磷酸二钠形式的类皮质体液(例如倍他米松型)，其剂量为20-60mg。
该作用还伴随着内源性干扰素的产生，以及N.K.细胞的活化。
本发明免疫调节菌苗复合物的目的是诱导局部免疫应答，并通常可产生防止或至少降低(有可能降低至只有自动防御)进入至肌体中的感染物质的增殖的作用。
-PRUUL,H.,LEE,P.C.,GOODWIN,C.S.和MACDONALD.,P.J.，幽门弯曲杆菌与人免疫防御机制的相互作用(Interaction ofCampylobacter pyloridis with human immune defence mechanisms),J.Med.Microbiol.,23:233-238,1987；-RATHBONE,B.J.,WYATT.J.I.,WORSLEY,B.W.,SHIRES,S.E.,TREJDOSIEWICZ,L-K.,HEATLEY,R.V.和LOSOWSKY,M.S.，在非溃疡性消化不良中对胃幽门弯曲杆菌的系统和局部抗体应答(Systemicand local antibody response to gastric Campylobacter pyloridis in non-ulcerdyspepsia)Gut 27:642-647,1986；-STACEY,A.R.,HAWTIN,P.R.和NEWELL,D.G.，对幽门卷旋杆菌消化的局部免疫应答(Local immune responses to Helicobacter pyloriingections)。以及Malgertheimer,P.和Ditschuneit,H.(Eds.)幽门卷旋杆菌、胃炎和消化溃疡(Helicobacter pylori,Gastritis and PepticUlcer),Spnnger Verlang,Berlin-Heidelberg,1990，第162-166页。
另外，本发明治疗复合物的创造性在于，通过发挥后感染作用减轻或消除“抑制性细胞”的存在，通过防御性细胞和/或体液应答产生抗溃疡反应。这是对Kist和Coll于1993年提出的病症的治疗应答。。
并可防止感染的复发。
-BORODY T.,ANDREWS P.,MANCUSO N.,JANKIEWICZ E.,BRANDL S.，根除4年后幽门卷旋杆菌重新感染(Helicobacter pylorireinfection 4 years post-eradication),Lancet 1992,339:1295；-BELL GD,POWELL KU,BURRIDGE SM,HARRISON G,RAMEH B,WEIL J.等人，明显地成功根除幽门卷旋杆菌感染后重新感染或复发对十二指肠溃疡病患者治疗的暗示(Reinfection orrecudescence after apparently successful eradication of Helicobacter pyloriinfection:Implications for treatment of patients with duodenal ulcerdisease),Q J Med 1993,86:375-382。
总之，本发明的治疗复合物通过产生RNA分子而起到操纵进程的作用，该RNA分子阻断幽门卷旋杆菌的感染并增强免疫防御。。
另一方面，已观察到在所进行的各种不同的临床实验中，本发明的复合物能够非常成功地代替通常需要三重治疗的常规治疗法，其中有显著的细菌耐受性。菌苗复合物的给药方法本发明菌苗复合物可通过口服或非胃肠道途径给药*或直接静脉注射*或缓慢灌注*或皮下注射*或透皮途径(24小时)这些不同的方法都已实验成功。
每日剂量或给药频率大部分取决于病人的状况。超剂量不会产生任何危险，这是因为复合物没有毒性。静脉途径给药可使用1周-1个月的时间，治疗时每周的每天包括缓慢灌注500ml包含以下物质的溶液-0.9％氯化钠-40μg膜糖组分(肺炎克雷白氏杆菌的蛋白多糖)-30μg以下物质的RNA(核糖体)*幽门卷旋杆菌 7μg*肺炎双球菌7μg*化脓链球菌(A12) 7μg*肺炎克雷白氏杆菌 7μg*Hemophilus influenzae 2μg
-10μg所述的Ⅲ型胶原-8mg倍他米松磷酸二钠(或者2ml注射溶液)对于可走动的患者，缓慢I.V.灌注的治疗可用皮下注射来代替，每个注射溶液包括-40μg膜糖组分(肺炎克雷白氏杆菌的蛋白多糖)-30μg以下物质的RNA(核糖体)*幽门卷旋杆菌 7μg*肺炎双球菌 7μg*化脓链球菌(A12)7μg*肺炎克雷白氏杆菌 7μg*Hemophilus influenzae 2μg-10μg所述的Ⅲ型胶原-0.5ml的0.9％氯化钠-4mg倍他米松磷酸二钠(或者1ml注射溶液)该治疗可持续几周。口服途径给药每日2片，只在早晨空腹吞服1次，每片包括-400μg膜糖组分(肺炎克雷白氏杆菌的蛋白多糖)-300μg以下物质的RNA(核糖体)*幽门卷旋杆菌 70μg*肺炎双球菌70μg*化脓链球菌(A12) 70μg*肺炎克雷白氏杆菌 70μg*Hemophilus influenzae 20μg
-100mg所述的Ⅲ型胶原-2mg倍他米松磷酸二钠该治疗在1个月中每日给药2片，然后在3个月的期间中重复每日给药2片的疗程每月1周。透皮途径绐药粘性透皮给药系统包括储药部分和可透过的膜，该膜使活性成分连续地透过至皮肤，并以恒定的速率到达血液循环中。
该装置可固定在健康、干燥且少毛的皮肤表面上(例如腹部或胸部的侧皮)。
其包括-聚合物粘合剂-粘合剂的基体聚乙烯-聚硅酯保护过滤器其内含物与片剂的相同，且其剂量与口服给药的相同(每贴含2片的量)。
以下实施例不是限制性的，而是用于详细说明本发明治疗菌苗复合物的作用。实施例1Robert G.先生，64岁，由于上腹部痛而住院，胃灼热且腹部疼痛，并伴有排泄问题，交替的腹泻和便秘。消化道内窥镜通过贲门开口检查了胃-食管回流的病理状况，其已形成了食管炎和食管底部的消化溃疡。
用脲酶的快速测试进行了活组织检查。该解剖病理学的检查和组织培养都证实了幽门卷旋杆菌的存在。
进行了常规治疗(抑制分泌药和二种抗生素)。临床上三重治疗都没有治愈。
在治疗后的六周，以13C标记的尿素进行的根除检查呼吸测试是阳性的，得出细菌已增殖的结论。
以皮下注射液的形式用本发明的菌苗复合物进行了治疗。
1个月后，临床上观察到愈合，以13C标记的尿素进行的呼吸测试是阴性的。
6个月后，以13C标记的尿素进行新检查呼吸测试和内窥镜检查，表明已得到愈合。
1年后，已痊愈。实施例2Serge Y.先生，48岁，为B型窦性胃炎。用Ⅳ剂型的免疫调节复合物治疗(以前的治疗仅是包敷胃部)。连续治疗后15天，临床上得到愈合。1年后检查(以13C标记的尿素进行的呼吸测试)为阴性。实施例3Pierre K.先生，内窥镜检查证实为十二指肠溃疡(以及活组织检查，脲酶测试，ELISA测试)。
也进行口服给药的治疗。3周后，临床上得到愈合。
6周后，以13C标记的尿素进行的呼吸检查证实根除。
6月后，没有任何复发迹象，而且Elisa测试表明抗体浓度不明显(小于50％)。实施例4Sarah L.女士，为与B型胃炎有关的十二指肠溃疡。
发现在同胞中存在胃癌。检测结果表明所有测试方法的结果都是阳性的培养、组织学、病毒基因组扩增(PCR)、脲酶测试。
然后开始1周的静脉治疗和6个月的皮下给药治疗。
将其高度危险性通知家属，在第3个月进行内窥镜和活组织检查PCR、细胞学、培养、CLO测试，结果都是阴性的。
第6个月，呼吸测试(13C)证实临床痊愈。
权利要求
1.特异性治疗免疫调节复合物，其特征在于，其包括双分子，该双分子是通过将连接在靶上的氨基酸的功能臂与相应于所述功能臂组成的描述密码的RNA的遗传臂相偶联而构成的，以及糖肽和/或脂多糖的细菌膜组分。
2.根据权利要求1的免疫调节复合物，其特征在于，所述核糖核酸(RNA)源自于核糖体。
3.根据权利要求2的免疫调节复合物，其特征在于，所述核糖体核糖核酸是选自以下物质的提取物幽门卷旋杆菌、肝卷旋杆菌、冠状卷旋杆菌、弯曲杆菌、或它们的混合物。
4.根据权利要求1的免疫调节复合物，其特征在于，所述氨基酸是胶原氨基酸。
5.根据权利要求4的免疫调节复合物，其特征在于，所述胶原氨基酸选自于天冬氨酸、羟基脯氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、或它们的混合物。
6.根据权利要求1-5之一的免疫调节复合物，其通过产生抗体以及内源性干扰素，用于治疗卷旋杆菌细菌引发的疾病。
7.根据权利要求1-5之一的免疫调节复合物，其显著地避免消化道的原病理状况的复发，用作遗传型抗菌抗体的抗遗传型菌苗。
8.根据权利要求1-5之一的免疫调节复合物，其用于防止抗生素等的常规治疗中的细菌耐受性。
9.根据任一前述权利要求的特异性抗卷旋杆菌的免疫调节及菌苗复合物，其特征在于，其为与主要为类皮质体液的抗炎药、抗生素、抑制分泌药(质子泵抑制剂、奥美拉唑型或抗H2药)同时给药的形式，或另外产生制菌作用、杀菌作用或溶菌作用，以根除通过细菌因素(产生不同类型的细胞毒素、炎症介导因子白介素I、肿瘤坏死因子α)或宿主因素产生致病作用的卷旋杆菌。
10.根据任一前述权利要求的免疫调节复合物，其特征在于，其成型为以不同途径给药的剂型灌注、静脉注射、皮下注射、透皮装置。
全文摘要
本发明公开了一种治疗菌苗复合物,该复合物对卷旋杆菌具有特异性和非特异性,并通过免疫调节来调节肌体的自然防御。该药物还可用于防止疾病复发,特别是防止对常规治疗的耐受性。该药物基本上包括按预定比例的RNA、微生物的选择性膜组分、特别的氨基酸序列、氯化钠和甾体抗炎药,还可同时给药抗生素和抑制分泌的药物。所述药物特别适合于治疗由卷旋杆菌引起的消化道疾病(窦性胃炎、十二指肠溃疡、胃溃疡、食管炎、肝炎),并防止胃癌和变性感染MALT(与粘膜有关的淋巴样组织)淋巴瘤以及直接或间接与卷旋杆菌感染有关的冠状疾病。
文档编号A61K39/116GK1211924SQ9719260
公开日1999年3月24日 申请日期1997年2月25日 优先权日1996年2月26日
发明者费尔南·纳尔拜·托罗西安 申请人:费尔南·纳尔拜·托罗西安