苯并噻吩、含有它们的制剂及其制备方法

专利名称：：苯并噻吩、含有它们的制剂及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及药物和有机合成领域并提供适于治疗与绝经后综合症有关的多种内科病症以及适于治疗和预防乳腺癌的苯并噻吩类化合物。本发明还进一步涉及药物组合物。
背景技术：
：骨质疏松症是指一类由多种病因导致的疾病而其特征在于每单位体积骨质的净损失。该骨质损失及其所致骨折的后果造成骨骼不能提供对身体的合适结构支撑。骨质疏松症的最常见类型之一与绝经有关。大多数妇女在停经后的3-6年内损失近20-60％的小梁腔隙骨质。这种急剧的骨损失通常与骨质吸收和骨质形成的增加有关。而其中的骨吸收循环更占优势并由此造成了骨质的净损失。在绝经后妇女中骨质疏松症是一种常见的严重疾病。仅在美国就预计有2千5百万妇女患有这种疾病。骨质疏松症的后果就个人而言十分有害，并且由于其缓慢性和该疾病后遗症所需的大量的长时间的投入(住院和家庭护理)而带来巨大的经济损失。这对于那些年长者尤其突出。此外，虽然骨质疏松症一般不被认为是危及生命的病症，但在老年妇女中约有20-30％的死亡率与髋骨折有关。该死亡率中的大部分应直接归因于绝经后骨质疏松症。骨骼中最易受绝经后骨质疏松症作用损伤的组织是小梁骨。该组织常被称作海绵状或网眼状骨骼并且特别集中在接近骨骼末端(接近关节处)和脊椎内。小梁组织的特征在于彼此互连的小的类骨质结构以及更加坚固稠密的由外表层和中心骨干构成的皮层组织。小梁的这种互接网为外层的皮层结构提供横向支撑并对整个骨架的生物力学强度极其重要。在绝经后骨质疏松症中，骨骼衰退和骨折主要是由小梁骨的净吸收和损失引起的。由于绝经后妇女的小梁骨的损失，许多常见的骨折会发生在那些高度依赖于小梁支撑的骨骼上，例如椎骨、承重骨(如股骨和前臂)颈部就不足为奇了。事实上，髋骨骨折、collies骨折、和椎骨粉碎性骨折是绝经后骨质疏松症的标志。此时，仅有的两种一般被接受的绝经后骨质疏松症治疗方法是雌激素替代疗法和二磷酸酯给药疗法。虽然这些治疗一般是有效的，但能够依从雌激素疗法的患者较少而这要归因于雌激素治疗中常出现的不良副作用。二磷酸酯疗法在治疗骨折疏松症中是成功的但也会有一些严重副作用；而该疗法对于与绝经有关的其他症状却没有任何作用。与同龄男子相比，绝经前期的多数妇女更少患有心血管疾病。但在绝经后，妇女中的心血管疾病发生率缓慢增至同龄男子中所见的发生率。这种防护作用的丧失与雌激素缺失，以及特别是雌激素调节血清脂质水平能力的降低有关。雌激素血清脂质调节能力的本质还不很清楚，但迄今的证据表明雌激素可以增量调节肝脏中的低密度脂质(LDL)受体以除去过量的胆甾醇。此外，雌激素似乎对胆甾醇生物合成有些作用以及其他有益于心血管健康的作用。已有文献报导接受雌激素替代疗法的绝经后妇女的血清脂质水平可以恢复到绝经前状态时的浓度。因此，雌激素适宜用作这种病症的治疗。然而，雌激素替代疗法的副作用不能被许多妇女接受并因此限制了该疗法的应用。这种疾病的理想疗法应是使用一种具有如同雌激素的血清脂质调节作用、但没有副作用和雌激素疗法相关危险的试剂。雌激素依赖型癌症特别是乳腺癌已成为妇女尤其是35-65岁间妇女的主要医学问题。据推算许多妇女在其生命中会有十分之一的机率患上乳腺癌。乳腺癌已是妇女死亡的主要原因和丧失劳动能力、导致心理伤害和经济损失的原由。较高比例的患此病妇女会因该病的直接作用或并发症的间接作用而死亡，其中并发症可例如是病灶转移、全身健康丧失、或由治疗性介入(例如外科手术、放射治疗或化疗)引起的副作用。应用以激素为基础的介入疗法可以获得许多有益效果。最广泛的治疗方法是使用他莫昔芬。该疗法使患乳腺癌妇女的五年存活率显著改善；但长期存活(十年)率并未改善到同样程度。因此，即使采用最好的组合治疗方式，例如外科、放射、和/或化疗，但患者的长期预后也差，尤其是在转移性疾病发生时。显然，治疗方法极需改进并且更迫切的需求可能首先是对疾病的预防。为满足对具有缓解症状特别是绝经后综合症的新药和雌激素依赖型癌症的治疗的迫切需要，本发明提供了苯并噻吩类化合物、它们的药物组合物、该类化合物在抑制骨折损失/骨质疏松症、降低血清胆甾醇水平、及抑制雌激素依赖型癌症中的应用方法。有机化学合成领域中公认为化合物中氮的氧化将导致其碱性的降低和极性的增加，即这些化合物会更趋于中性并且通常会更易溶于水。在体内，许多含胺药物被氧化成了作为它们代谢和排泄一部分的N-氧化物，而消除碱性化合物是活生物体的一般性机理。通常，氮的氧化会使化合物与其母体碱相比药理活性减活或失活；但这是无法预见的，必须基于逐例加以检测(参见Goodman&Gilman的“治疗学的药理学原理”，第6版，Macmillan出版公司，NYC，第1章，1980)。例如抗癌化合物长春花生物碱中的N-氧化将导致生物活性的失活(参见Barnett,C.J.，等人，药物化学杂志，21(1),88-961978)。发明概述本发明提供式Ⅰ所示的化合物。其中R1为氢、羟基、C1-C4烷氧基、-O-C(=O)O(C1-C6烷基)、-OC(=O)-(C1-C6烷基)、OC(=O)-O-Ar、-OC(=O)-Ar，其中的Ar是任意取代的苯基或-SO2(C4-C6直链烷基)；R2是R1、Cl或F；R3和R4分别是C1-C4烷基或结合成C4-C6聚亚乙基、或与N一起共同形成吗啉；和X是-CH2-、-CHOH2-、-O-、或-C(=O)-；或它们的可供药用的盐或溶剂化物。本发明还进-步涉及单独含有式Ⅰ化合物或同时含有式Ⅰ化合物和其他活性组分的药物组合物。发明详述本发明涉及发现了有选择的一组的2-芳基-3-芳酰基(3-芳基甲基、或3-苯氧基)苯并[b]噻吩胺N-氧化物(即式Ⅰ化合物)适用于治疗和预防骨质疏松症、高脂血症、和雌激素依赖型癌症，特别是乳腺癌。在上述通式中，术语“C1-C6烷基”代表含有1-6个碳原子的直链或支链烷基链。典型的C1-C6烷基包括甲基、乙基、正丙基和正丁基。术语“C1-C4烷氧基”代表例如，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、和正丁氧基。选择性取代苯基包括苯基和用C1-C6烷基、C1-C4烷氧基、羟基、硝基、氯、氟、或三(氯或氟)甲基一次或两次取代的苯基。R3和R4构成C4-C6聚亚甲基时的例子包括四亚甲基、五亚甲基、和六亚甲基。当它们与氮原子连接后时R3和R4可构成，例如吡咯烷基(pyrrolidino)、哌啶子基、和六亚甲基亚胺基。术语“溶剂化物”代表包括一个或多个分子溶剂的聚集物，例如带有1分子溶剂的式Ⅰ化合物。术语“抑制”的定义包括对所患症状的进程或严重程度产生阻止、预防、限制、减轻、改善、减缓、停止或逆转或此类作用在内的可普遍接受的涵义。因此，本发明包括适宜的药物治疗和/或预防给药。本发明优选的化合物包括[2(4-羟基苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮(methanone)N-氧化物，[2-(4-羟苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮N-氧化物氯氢化物，[2-(4-羟基苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲烷N-氧化物，[6-羟基-3-[4-[2(1-哌啶基)乙氧基]苯氧基]-2-(4-甲氧基苯基)]苯并[b]噻吩-N-氧化物，[6-羟基-3-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯氧基]-2-(4-羟苯基)]苯并[b]噻吩-N-氧化物。本发明化合物(式Ⅰ化合物)是由对下列式Ⅱ化合物的碱性氮的选择性氧化制备得到的。式Ⅱ化合物可以通过现成的方法制备。X为-CO-的式Ⅱ化合物可以按照美国专利4,133,814、4,418,068和4,380,635中详细记载的方法制得，这些文献在此列入作为参考。通常，制备过程中采用带有6-羟基和2-(4-羟苯基)基团的苯并[b]噻吩作为起始反应物。起始反应物经保护、酰化、和脱保护而制得式Ⅱ化合物。这些化合物的制备实施例在上述美国专利中已进行探讨。羧酸酯或磺酸酯形式的式Ⅱ化合物可按照美国专利5,393,763、5,482,949、和5,482,494描述的方法制备，上述各文献在此列入作为参考。改进上述方法时可能需要对特定取代基提供活性官能度。而这些改进对于有机化学领域的技术人员而言是显而易见和易于确定的。X为-CH2-或-CHOH-的式Ⅱ化合物可以通过美国专利5,484,798公开的方法制备，该文献在此列入作为参考。简单而言，可分步将羰基还原为甲醇并进一步还原成亚甲基，也可在一个步骤中即将羰基还原为亚甲基。式Ⅱ的羰基化合物可以用LiAlH4、NaBH4或类似物在适宜的例如含氯烃、THF、醚等溶剂中在0-30℃的温度下还原成为甲醇。甲醇可在室温条件下适宜的溶剂(例如二氯甲烷或THF)中用烷基硅烷(例如三乙基硅烷)和三氟乙酸还原成亚甲基。或者，该羰基化合物也可用LiAlH4在例如丙基苯的高沸点溶剂中并在回流温度下直接还原成为亚甲基。X为-O-的式Ⅱ化合物可按照美国专利5,488,058描述的方法制备，该文献在此列入作为参考。简单而言，将2-芳基苯并[b]噻吩在3-位溴化。该溴化物在Ullman反应条件下用含有碱性侧链的酚盐置换。在式Ⅱ化合物的3-芳酰基、3-苯氧基、或3-芳基甲基侧链上的氮的氧化中采用了稀释的H2O2水溶液与例如甲醇或乙醇或卤代烃的共溶剂完成的。该反应的反应条件为室温至100℃并且反应时间为1-72小时。需注意的是要谨慎选择氧化剂，通常用于氮氧化的氧化剂，如CrO3、KMnO4、以及类似物都不能采用，这是由于它们也会氧化苯并[b]噻吩中的硫。因此，例如H2O2的温和氧化剂是优选的。利用该方法制备的式Ⅰ化合物的例子如下所示。下面是式Ⅰ化合物的制备例。列举它们仅为达到说明本发明的目的而绝非限制本发明的范围。制备例1[2-(4-羟苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮N-氧化物将2g(4.23mmol)的[2-(4-羟苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮溶解在150mL回流的EtOH中并加入15mL30％的H2O2。将反应混合物回流18小时，然后用tlc检测反应的完全程度。补加入15mL30％H2O2并使反应物继续回流18小时。然后将反应物冷却并用真空蒸发法除去挥发性溶剂。将粗产物再溶于CHCl3中并用水提取。过滤通过无水硫酸钠干燥上述的CHCl3层并将其蒸发至干。得到1590mg的浅黄色无定形粉末的标题化合物。PMR(CDCl3-DMSO-d6)7.70δ(d,J=6Hz,2H),7.43(d,J=4Hz,1H),7.27(d,J=1Hz,1H),7.15(D,J=5Hz,2H),6.87(dd,J1=4Hz,J2=1Hz,1H),6.77(d,J=5Hz,2H),6.65(d,J=6Hz,2H),4.54(t,J=2Hz,2H),3.71(t,J=2Hz,2H),3.38(m,4H),2.16(m,2H),1.72(m,3H),1.48(m,1H)MSm/e=490(M+)FDpKa6.28表观分子量(amw)=487(66％DMF)Rf0.05硅胶CHCl3-MeOH(19∶1)(v/v)EA理论值C,66.3；H,5.73；N,2.76检测值C,66.46；H,5.62；N,2.76C28H27NO5S-H2O制备例2[2-(4-甲氧苯基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮N-氧化物将1190mg(2.38mmol)的[2-(4-甲氧苯基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮溶解在100mL甲醇中并加入30mL30％的H2O2。反应混合物变混浊但数小时后澄清。在室温下持续反应72小时。然后将反应混合物蒸发至干并用100mL乙酸乙酯提取。该乙酸乙酯溶液用稀释的Nalco水溶液洗涤并通过无水硫酸钠过滤使之干燥。加入己烷并将该溶液置于-20℃下结晶。过滤得到褐色固体并干燥，得到720mg标题化合物。PMR与目标结构一致MSm/e=501(M-16FDpKa6.39amw=517(66％DMF)Rf0.07硅胶CHCl3-MeOH(19∶1)(v/v)制备例3[2-(4-羟苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(N,N-二乙基)乙氧基]苯基]甲酮N-氧化物将2000mg(4.33mmol)的[2-(4-羟苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(N,N-二乙基)乙氧基]苯基]甲酮溶解在60mL甲醇中并加入30mL30％的H2O2。反应混合物在室温下持续反应18小时。然后将反应混合物蒸发至干并重新溶解在100mL乙酸乙酯中。该乙酸乙酯溶液用水洗涤并用无水硫酸钠干燥，然后蒸发至干。得到1150mg的褐色无定形粉末状的标题化合物。PMR与目标结构一致MSm/e=478(M+)and462(M-16)FDpKa6.15amw=498(66％DMF)Rf0.14硅胶CHCl3-MeOH(19∶1)(v/v)制备例4[2-(4-羟苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-吗啉代)乙氧基]苯基]甲酮N-氧化物将1100mg(2.23mmol)的[2-(4-羟苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-吗啉代)乙氧基]苯基]甲酮溶解在50mL甲醇中并加入30mL10％的H2O2。反应混合物在室温下持续反应18小时。用tlc检测反应并再加入10mL30％H2O2并使反应继续进行18小时。然后将反应混合物蒸发至干并于100mL乙酸乙酯中再溶解。该乙酸乙酯溶液用稀释的氯化钠水溶液洗涤并以无水硫酸钠干燥，然后蒸发至干。得到460mg的褐色无定形粉末状的标题化合物。PMR与目标结构一致MSm/e=492(M+)and475(M-16)FDRf0.04硅胶CHCl3-MeOH(19∶1)(v/v)制备例5[2-(4-正丁基磺酰基苯基)-6-正丁基磺酰基苯并[b]噻吩-3-基[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮N-氧化物将1250mg(1.27mmol)的[2-(4-正-丁基磺酰基苯基)-6-正-丁基磺酰基苯并[b]噻吩3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮溶解在125mL甲醇和25mL乙醇中并加入30mL30％的H2O2。反应混合物在室温下持续反应18小时。然后将反应混合物蒸发至干并再溶解在100mL乙酸乙酯中。该乙酸乙酯溶液用水洗涤并以硫酸钠干燥，然后蒸发至干。得到390mg的褐色无定形粉末状的标题化合物。PMR与目标结构一致MSm/e=730(M+)and714(M-16)FDRf0.16硅胶CHCl3-MeOH(19∶1)(v/v)制备例6[2-(4-羟苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲醇N-氧化物首先制得10mL10％H2O2和100mL甲醇的溶液。向该溶液中加入476mg(1mmol)的[2-(4-羟苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲醇。反应混合物在室温下持续反应20小时。然后将反应混合物蒸发至干并用甲苯研制数次。产品在真空下干燥。得到230mg的褐色无定形粉末状的标题化合物。PMR与目标结构一致MSm/e=492(M+)and476(M-16)FDPKa=6.41EACalc.forC28H29NO5S-2H2OC,63.7；H,5.87；N,2.65FoundC,63.13；H,5.81；N,2.43.制备例7[2-(4-羟苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲烷N-氧化物首先制得20mL10％H2O2和100mL甲醇的溶液。向该溶液中加入1500mg(3.27mmol)的[2-(4-羟苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲烷。反应混合物在室温下搅拌20小时。然后将反应混合物在真空下蒸发至干并用甲苯研制数次。产品在真空中室温下干燥数天。得到1090mg的褐色无定形粉末状的标题化合物。pMR(CDCl3)7.42δ(d,J=4Hz,4H),7.40(d,J=4Hz,1H),7.38(d,J=1Hz,1H),7.18(d,J=4Hz,2H),7.00(d,J=4Hz,2H),6.98(m,1H),6.92(d,J=4Hz,2H),4.69(t,J=2Hz,2H),4.27(s,2H),3.78(t,J=2Hz,2H),2.35-2.60(m,4H),2.38(m,2H),1.83(m,2H),1.60(m,1H)MSm/e=459(m-16)FDPKa6.49amw=461EACalc.forC28H29NO4SC,70.71；H,6.15；N,2.95Found；C,70.12；H,6.11；N,3.09.制备例9[6-羟基-3-[4-[2(1-哌啶基)乙氧基]苯氧基]-2-(4-甲氧基苯基)]苯并[b]噻吩-N-氧化物向含有[6-羟基-3-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯氧基]-2-(4-甲氧基苯基)]苯并[b]噻吩(50mg,0.10mmol)的3mL1∶1甲醇/氯仿溶液中加入H2O2(0.5mL的30％溶液)。将反应混合物在蒸汽浴中温和加热直至TLC检测的结果表明反应完全(1-2小时)。在真空下除去溶剂得到黄色固体并用乙醇/乙醚研制。过滤后得到46mg(92％)黄色固体的[6-羟基-3-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯氧基]-2-(4-甲氧基苯基)]苯并[b]噻吩-N-氧化物。mp120-125℃.1HNMR(DMSO-d6)δ10.30(bs,1H),7.53(d,J=8.8Hz,2H),7.15(d,J=2.0Hz,1H),7.00(d,J=8.7Hz,1H),6.93(d,J=8.8Hz,2H),6.79(s,4H)6.72(dd,J=8.7,2.0Hz,1H),4.38(m,2H),3.71(s,3H),3.50-3.03(m,6H),2.02(m,2H),1.51-1.13(m,3H),1.05(m,1H).FDmassspec:492,475,390,364.Anal.Calcd.forC28H29NO5S·0.45H2O:C,67.30；H,6.03；N,2.80.Found:C,67.31；H,5.96；N,2.57.制备例10[6-羟基-3-「4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯氧基]-2-(4-羟基苯基)]苯并[b]噻吩-N-氧化物本标题化合物可按照制备例10中所述相似方法制得。mp125-130℃.1HNMR(DMSO-d6)δ7.39(d,J=8.6Hz,2H),7.15(d,J=2.1Hz,1H),6.99(d,J=8.7Hz,1H),6.77(s,4H),6.73(dd,J=8.7Hz,2.1Hz,2H),6.71(d,J=8.6Hz,2H),4.37(m,2H),3.52(m,2H),3.38-3.03(m,4H),2.04(m,2H),1.53-1.49(m,3H),1.31(m,1H).FDmassspec:477,460.Anal.Calcd.forC27H27NO5S·0.5H2O:C,66.65；H,5.80；N,2.88.Found:C,66.66；H,5.98；N,2.89.下列试验例将说明式Ⅰ化合物在试验模型或临床试验中的方法。试验方法一般准备方法在用于说明试验方法的实施例中采用绝经后模型并测定不同的处理对该模型循环脂质的作用。75日龄的雌性SpragueDawley大鼠(体重范围介于200-225g)购自于CharleRiver实验室(Portage,MI)。试验动物在CharlesRiver实验室接受双侧卵巢切除术(OVX)或者经Sham外科处理并在1周后运出。自运抵后将它们以每笼3-4只为一组圈养在金属悬挂笼中并且随意进食(钙含量约为0.5％)和饮水达1周。室温保持在22.2±1.7℃并且最低相对湿度为40％。室内光周期是12小时的光照和12小时的黑暗。给药方案的组织采集大鼠驯养1周后(即OVX术后两周)即开始每天给药待测化合物。将17α-乙炔基-雌二醇或待测化合物以1％羧甲基纤维素的悬浮液或溶于20％环糊精的方式口服(除非另有说明)给药。每天向受试动物给药并持续4天。给药方案完成后，将受试动物称重并用氯胺酮赛拉嗪(2∶1,V∶V)混合物将其麻醉，然后以心脏穿刺法采集血样。随后将受试动物用CO2窒息处死，从中线切口处取出子宫并测出子宫的湿重。胆甾醇分析将血样在室温下2小时内凝块并将其以3000rpm的转速离心10分钟以得到血清。采用BoehringerMannheimDiagnstics高效胆甾醇分析法检测出血清胆甾醇。简单而言就是将胆甾醇氧化为胆甾-4-烯-3-酮和过氧化氢。而该过氧化氢进一步与苯酚和4-氨基比林在过氧化物酶存在下反应并生成可在500nm分光光度下读数的对-醌亚胺染料。根据标准曲线计算出胆甾醇浓度。上述整个分析过程用BiomekAutomatedWorkstation来自动完成。子宫嗜酸细胞过氧化物酶(EPO)的检测在进行酶促分析试验前子宫被保存在4℃条件下。随后将子宫在含有0.005％曲通X-100的50体积的50mMTris缓冲液(pH-8.0)中匀浆化。于Tris缓冲液中加入0.01％过氧化氢和10mM邻-苯二胺(最终的浓度)，在450nm下监测吸光度的增加一部分。子宫中存在的嗜酸细胞是化合物雌激素活性的一种表征。于反应曲线的起点和线性段测定15秒间隔时的最大速率。化合物来源17α-乙炔基雌二醇可购自于Sigma化学公司，St.Louis,MO。高脂血症表1所列数据表示的是卵巢切除大鼠、用17-α-乙炔基-雌二醇(EE2)处理的大鼠、及经本发明化合物处理大鼠的对比试验结果。虽然EE2在以0.1mg/kg/天的剂量口服给药后能够引起血清胆甾醇降低，但它仍对子宫施加一种模拟作用从而使EE2组子宫重量显著高于卵巢切除大鼠的子宫重量。子宫的这种对雌激素的响应是该领域中公知的。与卵巢切除大鼠相比，本发明化合物降低了血清胆甾醇。如下列数据所示，也可以通过对嗜酸细胞渗入至子宫内的反应的评估来确定动情力。本发明化合物并未引起在卵巢切除大鼠子宫基质层中的可观测到的嗜酸细胞的大量增加。EE2却能引起显著的并且是预料中的嗜酸细胞渗入增加。表1中的数据显示出每处理组5-6只大鼠的应答结果。表1化合物编号剂量子宫重量子宫血清胆甾醇(实施例编mg/kga％Incb嗜酸细胞％DEC.d号)(Vmax)cEE2e0.1207.5*205.8*87.3*10.131.2*4.444.9*1.029.6*4.668.7*10.08.32.570.3*21.049.2*11.265.7*31.077.5*21.7*64.2*41.062.5*4.156.2*51.044.4*4.774.9*a17-α-乙炔基-雌二醇b相对于卵巢切除空白对照组的子宫重量增加百分比c嗜酸细胞过氧化物酶的最大V值d相对于卵巢切除空白对照组的血清胆甾醇减少量ep＜.05骨质疏松症试验方法经过上述一般准备过程后，在下文中，受试大鼠将每天接受处理并持续35天(6只大鼠/每处理组)且在第36天用二氧化碳将它们窒息处死。35天的时间足以使在此期间测得的大鼠骨质密度达到最大的降低。处死时将子宫取出并解剖除去无关组织，而液体内容物需在湿重测定前排出以确定仅与完全的卵巢切除有关的雌激素缺失。卵巢切除通常会使子宫重量减轻75％。然后将上述子宫置于10％的中性缓冲的福尔马林中以允许后续的组织分析试验。切取右股骨并用图象分析程序(NIH图象仪)对其干骺远端进行数字化(digitilized)X-射线的显象和分析。用定量计算机化的断层显相仪对取自上述受试动物的胫骨近端部位扫描。在上述过程中，口服给予溶于20％羟丙基β-环糊精的本发明化合物和乙炔基雌二醇(EE2)。总之，与具完整卵巢并仅以载体处理的空白对照动物相比，受试动物卵巢切除后会引起股骨密度的显著降低。口服给予乙炔基雌二醇(EE2)能够防止上述损失，但用该药物处理总存在刺激子宫的危险。本发明化合物以全面的、剂量依赖性的方式防止骨质损失。MCF-7增殖试验将MCF-7乳腺癌细胞(ATCCHTB22)置于补加有10％胎牛血清(FBS)(v/v)、L-谷氨酰胺(2mM)、丙酮酸钠(1mM)、HEPES((N-[2-羟乙基]-哌嗪-N’-[2-乙基磺酸]10mM}、非必需氨基酸和牛胰岛素(1ug/ml)的MEM(极限必需培养基，无酚红，Sigma,St.louis,MO)(维持培养基)中。在试验前10天将MCF-7细胞转移至补加有10％经葡聚糖包衣活性炭剥离过的胎牛血清(DCC-FBS)试验培养基中以代替10％FBS的维持培养基以耗尽内部贮存的类固醇。再将MCF-7细胞用细胞解离培养基(无Ca++/Mg++的HBSS(无酚红)，并且补加有10mMHEPES和2mMEDTA)从维持瓶中转移出来。用试验培养基洗涤细胞二次并调至80,000个细胞/mL。在平底微量培养孔中加入100μL(8,000个细胞)并在37℃下、在5％CO2湿润的培养箱内温育48小时以使转移后的细胞达到粘连和平衡。在试验培养基中制备药物或作为空白稀释剂的DMSO的一系列稀释液并将50μL转移到分成三份的微量培养物中，然后将50μL的试验培养基调至200μL的最终体积。经过再次在37℃下、在5％CO2湿润的培养箱内温育48小时后，用含氚胸苷(luCi/皿)脉冲微量培养物4小时。在-70℃下冰冻培养物并持续24小时以终止培养，随后解冻并用Skatron半自动细胞收集器来收集微量培养物。用WallacBetaPlaceβ计数器通过液体闪烁来计数。例如，在该试验中，制备例1中的化合物的IC50约为1μM。对DMBA-诱发乳房肿瘤的抑制作用使购自HarlanIndustries,Iindianapolis,Indiaha的Sprague-Dawley雌性大鼠产生雌激素依赖型乳房肿瘤。在约55日龄时，大鼠接受1次口服20mg的7,12-二甲基苯并蒽(DMBA)。在DMBA给药后约6周内，每隔1周触模乳腺以了解肿瘤的发生情况，当出现一个或多个肿瘤时用度量卡尺测出各肿瘤的长径和短径并记录测量结果且将该动物选作试验动物。在处理组和空白对照组中尽量平均分配各种大小肿瘤以使肿瘤平均大小在各受试组中相等。各试验中的空白对照组和受试组均包括5-9只动物。式Ⅰ化合物既可经腹膜内注射(在2％阿拉伯胶中)也可口服给药。口服给药的化合物溶解或悬浮在0.3mL玉米油中。在包括给予阿拉伯胶和玉米油的空白对照组在内的处理中，各受试动物每天给药1次。在初始肿瘤测量和受试动物选择后，用上述方法每周测量肿瘤并且连续3-5周对动物进行处理和测量，在此期间确定肿瘤的最终面积。在各化合物和空白对照处理中，测量平均肿瘤面积的变化。上述试验中至少一个活性结果可以说明式Ⅰ化合物的有效性。本发明化合物与多种不同的有机或无机酸或碱形成可药用的酸和碱加成盐并且还包括药物化学中常用的生理可接受盐。这些盐也是本发明的一部分。用于形成上述盐的典型无机酸包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、连二磷酸以及类似物。也可以使用有机酸形成的盐，例如脂族单和二羧酸、苯基取代链烷酸、羟基链烷酸或羟基链烷二酸、芳族酸、脂族和芳族磺酸。因此，该可药用盐包括乙酸盐、苯基乙酸盐、三氟乙酸盐、丙烯酸盐、抗坏血酸、苯甲酸盐、氯代苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、邻乙酰氧基苯甲酸盐、萘基-2-苯甲酸盐、溴化物、异丁酸盐、苯基丁酸盐、β-羟基丁酸盐、丁炔-1,4-二羧酸盐、己炔-1,4-二羧酸盐、癸酸盐、辛酸盐、氯化物、肉桂酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、富马酸盐、乙醇酸盐、庚酸盐、马尿酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、异烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二酸盐(terephthalate)、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二酸盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、丙炔酸盐(propiolate)、丙酸盐、苯基丙酸盐、水杨酸盐、癸二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸、硫酸盐、硫酸氢盐、焦硫酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磺酸盐、苯基磺酸盐、对溴代苯基磺酸盐、氯代苯基磺酸盐、乙基磺酸盐、2-羟基乙基磺酸盐、甲基磺酸盐、萘基-1-磺酸盐、萘基-2-磺酸盐、对甲苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、酒石酸盐、以及类似物。优选的盐是盐酸盐。可药用的酸加成盐通常通过式Ⅰ化合物与等摩尔或过量的酸反应而制得。反应物通常是混合在互溶剂中，例如乙醚或苯甲醇、乙醇、或丙酮。一般情况下，盐在大约1小时-10天后自溶液中沉淀出来并且通过过滤或常规方法将溶剂除去而分离出来。用以成盐常用的碱包括氢氧化铵、碱金属和碱土金属的氢氧化物、碳酸盐、脂族胺和伯、仲、叔胺、脂族二胺。优选的用于制备加成盐的碱包括氢氧化铵、碳酸钾、甲胺、二乙胺、乙二胺和环己胺。可药用的盐一般比其衍生来的化合物具有更好的溶解性特点并因此更适宜制成液体或乳剂配方。式Ⅰ化合物通常优选以酸加成盐形式给药，如在含碱性基团(例如哌啶基)药物的给药中，并且该化合物还有利于经口服给药。本文所用术语“有效量”是指能够减轻上述多种病理性疾病症状的式Ⅰ化合物的用量，或选择性地，是式Ⅰ化合物与式Ⅱ化合物的结合用量，本发明给药化合物的具体剂量当然要取决于患者所处的具体情况，包括例如欲给药的化合物、给药途径、患者状况、和欲治疗病症所决定况。典型的日剂量将含有约0.1mg-1000mg/天的无毒性剂量水平的本发明化合物，并且优选约20mg-2000mg/天。本发明化合物可以通过包括口服、直肠、经皮、皮下、静脉内、肌肉内、和鼻内在内的多种途径给药，这些化合物优选在给药前配制，而其选择由主治医生决定。上述制剂中的所有活性组分占制剂总重量的0.1-99.9％。所谓“可药用的”指的是载体、稀释剂、赋形剂和盐必须与制剂中其他组分相匹配，并且对其接受者无害。下文制剂中的活性组分指的是式Ⅰ化合物。本发明的药物制剂可通过采用本
技术领域：
熟知的方法和易得的组分而制得。例如，含有或不含其他活性组分(例如式Ⅱ化合物)的式Ⅰ化合物可以与通常的赋形剂、稀释剂、或载体共同配制并且可制成片剂、胶囊剂、悬浮剂、粉剂、以及类似剂型。适宜上述制剂的赋形剂、稀释剂和载体的例子包括填充剂和增量剂，例如淀粉、蔗糖、甘露糖醇、和硅衍生物；粘合剂，例如羧甲基纤维素和其他纤维素衍生物、藻酸盐、明胶、和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂，例如甘油；崩解剂，例如碳酸钙和碳酸氢钠；溶解阻滞剂，例如石蜡；吸收促进剂，例如季铵化合物；表面活性剂，例如鲸蜡醇、甘油单硬脂酸酯；吸附性载体，例如高岭土和皂土；以及润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙和镁、固体聚乙二醇。化合物还可以配制成常规口服给药的酏剂或溶液剂、或适宜肠胃外给药，例如肌肉内、皮下或静脉内给药的溶液剂。此外，该化合物还适宜配制成缓释剂型及其类似剂型，如此构成的该类制剂可以将活性组分仅在或优选在特定的生理部位释放并且可能经过一段时间释放。包衣、被膜、和防护基质可以由例如聚合物或蜡制成。下列制剂实施例仅用于说明本发明但不用作限定本发明保护范围。制剂例制剂例1明胶胶囊明胶硬胶囊如下制备上述制剂可按照依从性提供适当的变化进行改变。片剂剂型用下列组分制备制剂例2片剂将各组分混合并压制成片剂。或者，含有2.5-1000mg的活性组分的各片剂按照下列制备制剂例3片剂将活性组分、淀粉和纤维素通过美国45目筛来筛分并将它们充分混合。将聚乙烯吡咯烷酮溶液与所得粉末混合，随后通过美国14目筛筛分。所得颗粒在50-60℃下干燥并通过美国18目筛。将预先经美国60目筛筛分的羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石加入到上述颗粒中并混合，然后在压片机中压制成片剂。各含有0.1-1000mg药物/5ml的剂量的悬浮剂可制备如下制剂例4悬浮剂(将药物通过美国45目筛筛分并与羧甲基纤维素和糖浆混合以制得均匀糊剂。将苯甲酸溶液、矫味剂和着色剂用一些水稀释后在搅拌下加入。然后加入足量的水以达到所需体积。可制备含有下列组分的气雾剂制剂例5气雾剂(将活性组分与乙醇混合并将化合物加至部分抛射剂22中，冷却至30℃，然后转移至填充装置中。将所需量的混合物灌装到不锈钢容器中并用残余的抛射剂稀释。然后将阀门安装在容器上。栓剂可制备如下制剂例6栓剂将活性组分通过美国60目筛并悬浮在预先用最低所需热量融化的饱和脂肪酸甘油酯中。将混合物倾入至标准2g容量的栓剂模型中并冷却。静脉内制剂制备如下制剂例7静脉内溶液含有上述组分的溶液以约1mL/分钟的速度向患者进行静脉内给药。制剂例8结合胶囊Ⅰ制剂例9结合胶囊Ⅱ制剂例10结合片剂制剂例8明胶胶襄明胶硬胶囊可制备如下上述配方可按依从性提供的合理变化而改变。可利用下列组分制备片剂剂型制剂例9片剂将各组分混合并压制成片剂。或者，各含有2.5-1000mg的活性组分的片剂按照下列方法制备制剂例10片剂将活性组分、淀粉和纤维素通过美国45目筛来筛分并将它们充分混合。将聚乙烯吡咯烷酮溶液与所得粉末混合，随后通过美国14目筛筛分。这样得到的颗粒在50-60℃下干燥并通过美国18目筛。将预先通过美国60目筛筛分的羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石然后加入到上述颗粒物中并混合，然后在压片机中压制成片剂。制剂例11片剂</tables>将活性组分、淀粉和纤维素通过美国45目筛来筛分并充分混合。将聚乙烯吡咯烷酮溶液与所得粉末混合，随后通过美国14目筛筛分。所得颗粒在50-60℃下干燥并通过美国18目筛。将预先通过美国60目筛筛分的羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石加入到上述颗粒物中并混合，然后在压片机中压制成片剂。制剂例12片剂将活性组分、淀粉和纤维素通过美国45目筛来筛分并充分混合。将聚乙烯吡咯烷酮溶液与所得粉末混合，随后通过美国14目筛筛分。所得颗粒在50-60℃下干燥并通过美国18目筛。将预先通过美国60目筛筛分的羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石加入到上述颗粒物中并混合，然后在压片机中压制成片剂。权利要求1．式Ⅰ化合物其中R1为氢、羟基、C1-C4烷氧基、-O-C(=O)O(C1-C6烷基)、-OC(=O)-(C1-C6烷基)、-OC(=O)-O-Ar、-OC(=O)-Ar，其中的Ar是任选取代的苯基或-SO2(C4-C6直链烷基)；R2是R1、Cl或F；R3和R4分别是C1-C4烷基或结合成C4-C6聚亚乙基、或与N一起共同形成吗啉；和X是-CH2-、-CHOH2-、-O-、或-C(=O)；或它们的可供药用的盐或溶剂化物。2．权利要求1中的化合物，其中该化合物是[2(4-羟基苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮-N-氧化物。3．权利要求2中化合物，其中该化合物是其盐酸盐。4．权利要求1中的化合物，其中该化合物是[6-羟基-3-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯氧基]2(4-甲氧基苯基)]苯并[b]噻吩N-氧化物。5．权利要求1中的化合物，其中该化合物是[6-羟基-3-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯氧基]-2-(4-羟苯基)]苯并[b]噻吩-N-氧化物。6．权利要求4中的化合物，其中该化合物是其盐酸盐。7．一种抑制骨质疏松症的方法，该方法包括给予需治疗患者以有效量的权利要求Ⅰ的化合物。8．一种降低血清胆甾醇水平的方法，该方法包括给予需治疗患者以有效量的权利要求Ⅰ的化合物。9．一种抑制雌激素依赖型癌症的方法，该方法包括给予需治疗患者以有效量的权利要求Ⅰ的化合物。10．一种药物制剂，该制剂包括权利要求1中式Ⅰ化合物，以及选择性地含有可药用的载体、稀释剂或赋形剂。11．一种药物制剂，该制剂包括权利要求Ⅰ中的式Ⅰ化合物，并进一步含有[2-(4-羟基苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮盐酸盐和、以及选择性地含有可药用载体、稀释剂或赋形剂。12．权利要求11中的制剂，其中该式Ⅰ化合物含有低于总活性组分重量的10％。13．权利要求12中的制剂，其中式Ⅰ化合物含有低于总活性组分重量的1％。14．权利要求13中的制剂，其中的式Ⅰ化合物含有低于总活性组分重量的0.3％。15．权利要求11中的制剂，其中该式Ⅰ化合物是[2-(4-羟基苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮-N-氧化物。全文摘要本发明提供了新的苯并噻吩化合物。文档编号A61K31/445GK1211921SQ97192469公开日1999年3月24日申请日期1997年2月19日优先权日1996年2月22日发明者G·J·库尔利南,A·D·帕尔克维茨申请人:伊莱利利公司