苯醌衍生物e3330联合化疗剂用于治疗癌症和血管生成的制作方法
【专利说明】
[0001] 本申请是2008年9月22日提交的优先权日为2007年11月21日的申请号为 200880117660. 0的名称为"苯醌衍生物E3330联合化疗剂用于治疗癌症和血管生成"的发 明专利申请的分案申请。
[0002] 相关申请的交叉引用
[0003] 本申请要求于2007年11月21日提交的60/989, 566号美国临时专利申请和于 2007年9月26日提交的美国临时专利申请60/975, 396的优先权，其全部内容均结合于此 供参考。
技术领域
[0004] 本发明通常涉及分子生物学、生物化学和病理学领域。较具体的，在某些方面，本 发明涉及Apel/Ref-1氧化还原抑制剂在癌症治疗及血管生成抑制方面的应用。
【背景技术】
[0005] 脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶（Apel)，也称为氧化还原效应因子（Ref-1)(以下均 写为Apel/Ref-1)，是一种具有双重作用的酶。除了其DNA碱基切除修复（BER)活性之外， Apel/Ref-1还可作为一种氧化还原效应物保持转录因子呈一种活化的还原状态而发挥作 用（见图1)。
[0006] Apel/Ref-1已证实可刺激几种转录因子如HIF-1 a、NFk0、AP-1和p53以及其 他已知和未知的与肿瘤存活和演进相关因子的DNA结合活性（Evans et al.，Mutat Res 2000, 461，83)。已证实Apel/Ref-1在多种癌症包括乳腺癌、宫颈癌、生殖细胞瘤、成人 和儿童胶质瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、非小细胞性肺癌以及多发性硬化症中表达发生改变 (Puglisi et al. , Oncol Rep 2002,9, 11 ；Thomson et al. , Am JPediatr Hematol Oncol 2001?23, 234 ；Roberston et al., Cancer Res 2001, 61, 2220 ；Puglisi et al., Anticancer Res 2001,21,4041 ；Koukourakis et al. ,Int J Radiat Oncol Biol Phys 2001?50? 27 ；Kakolyris et al.，Br J Cancer 1998,77,1169 ;Bobola et al.，Clin Cancer Res 2001，7, 3510)。Apel/Ref-1高表达与放化疗效果差、完全应答率低、局部无复发间隔较短、 生存较差以及血管生成较多有关（Koukourakis et al.，Int J Radiat Oncol Biol Phys 2001,50,27 ；Kakolyris et al.,Br J Cancer 1998, 77, 1169 ；Bobola et al.,Clin Cancer Res 2001,7,3510).
[0007] 血管生成是癌症生长、存活、迀移和转移的一个重要要素。癌性肿瘤的部位形成新 血管为肿瘤加速生长和扩散提供营养源，并为肿瘤细胞进入血流并扩散至身体的其他部分 提供路径。因此，有效抑制血管生成是一种减缓或防止癌症生长及扩散的有效机制。Apel/ Ref-1活性的增加与血管生成有关。血管内皮生长因子（VEGF)是血管发生和血管生成中牵 涉到的重要信号传导蛋白。Apel/Ref-1是在血管内皮生长因子（VEGF)基因的缺氧反应元 件上形成的低氧诱导性转录复合体的一个组分（Ziel et al.，Faseb J2004，18,986)。
[0008] 除了癌症，血管生成改变促进了与心血管疾病、慢性感染性疾病、风湿性关节炎、 糖尿病性视网膜病、退行性黄斑病变、视网膜后纤维增生、特发性肺纤维变性、急性成人呼 吸窘迫综合征、哮喘、子宫内膜异位症、银肩病、瘢痕瘤以及全身性硬化症相关的病理学症 状。对于减缓或预防涉及过量血管生成的疾病，抑制血管生成是一种理想的临床结局。
【发明内容】
[0009] 靶向抑制Apel/Ref-1的氧化还原功能是一种治疗癌症和血管生成的新途径。在 一个实施方式中，本发明涉及到应用抑制Apel/Ref-1氧化还原功能的抗癌治疗剂。在另一 个实施方式中，本发明涉及Apel/Ref-1氧化还原功能的抗血管生成试剂。
【附图说明】
[0010] 图1 :Apel/Ref-l在调节肿瘤存活中非常重要的转录因子方面的氧化还原功能。
[0011] 图2 :VEGF的酶联免疫吸附试验（ELISA)。
[0012] 图 3 :VEGF ELISA 检测。
[0013] 图 4 :VEGF ELISA 检测。
[0014]图 5 :VEGF ELISA 检测。
[0015]图 6 :VEGF ELISA 检测。
[0016]图 7 :VEGF ELISA 检测。
[0017] 图8 :利用铺种于基质胶上的CB-ECFC细胞实施的毛细管形成试验。
[0018] 图9:限制性稀释试验（LDA)。
[0019] 图10 :在用或不用碱性纤维母细胞生长因子（bFGF)处理的细胞中对视网膜内皮 细胞增殖进行MTS增殖检测。
[0020] 图11 :E3330(RN-3)对视网膜血管内皮细胞（RVEC)-野生型/sv40细胞的作用。
[0021] 图12 :利用源自人乳腺癌的MCF-7肿瘤细胞进行MTS检测。四甲基偶氮唑盐（MTS) 试验用于细胞存活/生长分析。
[0022] 图13 :利用源自人卵巢腺癌的OVCAR-3肿瘤细胞进行MTS检测。
[0023] 图14 :E3330 (RN-3)和化疗药物美法仑联合应用对多发性骨髓瘤细胞的作用。
[0024] 图15 :MTS检测中，72小时后E3330(RN-3)和化疗药物美法仑联合应用对多发性 骨髓瘤细胞的作用。
[0025] 图16:在24和48小时，E3330 (RN-3)和吉西他滨（0. . 25 y M)对胰腺肿瘤细胞的 作用。
[0026] 图17 :MTS细胞活性检测。
[0027] 图18:MTS细胞活性检测。
[0028] 图 19 :给药 E3330(RN-3) (0-50mg/kg)的雄性小鼠体重。
[0029] 图20:以不同量RN-3(E3330)处理的小鼠在处理后第2、3、4或5天观察到的存活 数据。
[0030] 图21 :E3330(RN-3)在24hr时程的实验过程中的药物动力学数据。
[0031] 图22 :E3330(RN3-3)的药物动力学数据。
[0032] 图23 :E3330 (RN-3)和视黄酸对促进细胞分化的作用。
[0033] 图24:如图23所述利用Annexin/PI试验进行HL-60细胞的凋亡分析。
[0034] 图25 :RN-3(E3330)和不同剂量RA的作用。
[0035] 图26 :E3330 (RN-3)和RA对正发生凋亡（Annexin/PI试验）的HL-60细胞的作 用。
[0036] 图27 :E3330(RN-3)和小分子甲氧胺联合应用对多发性骨髓瘤细胞的作用。
【具体实施方式】
[0037] 本发明涉及到应用选择性抑制Apel/Ref-1氧化还原功能的抗癌和抗血管生成试 剂。这种选择性抑制包括特异性抑制，或者，换句话说，对Apel/Ref-1的BER功能无影响或 者无可估计到的影响，且相对于BER功能而言，主要对氧化还原功能产生影响。本发明还涵 盖了这些试剂与其他化疗/治疗性试剂的联合应用。最好所述其他试剂以与那些选择性抑 制Apel/Ref-1氧化还原功能的试剂不同的方式作用于患者。
[0038] 与血管生成发生改变相关的生理性疾病涵盖那些与血管生成不当（其直接或间 接有害于患者）相关的疾病。除了其他疾病，血管生成改变促进与癌症（包括生长、存活、迀 移、微环境和转移）以及心血管疾病、慢性感染性疾病、风湿性关节炎、糖尿病性视网膜病、 退行性黄斑病变、视网膜后纤维增生、特发性肺纤维变性、急性成人呼吸窘迫综合征、哮喘、 子宫内膜异位症、银肩病、瘢痕瘤和全身性硬化症相关的病理学症状。
[0039] 术语患者包括脊椎动物，优选人类患者。术语抑制及其衍生语，包括其通常公认的 含义，其包括阻止、防止、遏制和减慢、中断或逆转进程或严重程度。因此，本发明所述方法 既包括内科治疗性给药又包括预防性给药，视情况而定。就其本身而言，当涉及到本文所述 的治疗性应用时，需要该治疗的患者是经鉴定需要或希望医学干预的个体。有效量是抑制 本文所述病理性疾病和病症所需试剂的量。当给药患者至少一种其他治疗剂时，这些试剂 可依次、并列（concurrently)或同时（simultaneously)给药，以实现这些试剂的优势。 [0040]人们已发现Apel/Ref-1的氧化还原功能可被3-[(5_(2, 3-二甲氧基-6-甲基 1，4-苯并喹啉基）]-2_壬基-2-丙烯酸选择性抑制，见下图（下文的"E3330"，本申请中也 称为"RN3-3"）。
【主权项】
1. 一种选择性抑制Apel/Ref-1的氧化还原功能的试剂在制备用于抑制与改变的血管 生成相关的生理疾病的药物中的用途，其中，所述疾病为癌症。
2. 根据权利要求1所述的用途，其中所述试剂是E3330,或其药用盐。
3. 根据权利要求1所述的用途，其中所述癌症选自乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌、 宫颈癌、生殖细胞肿瘤、成人和儿童胶质瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、非小细胞肺癌、白血病和 多发性骨髓瘤。
4. 根据权利要求3所述的用途，其中所述疾病是胰腺癌。
5. 根据权利要求4所述的用途，其中所述试剂是E3330或其药学可接受的盐或溶剂化 物。
6. 根据权利要求5所述的用途，其中所述试剂与至少一种其他的治疗剂组合使用。
7. 根据权利要求6述的用途，其中所述其他的治疗剂选自美法仑、吉西他滨、顺钼、甲 氧胺、沙利度胺及其衍生物，以及视黄酸。
8. -种选择性地抑制Apel/Ref-Ι的氧化还原功能的试剂在制备用于抑制胰腺癌的药 物中的用途。
9. 根据权利要求8所述的用途，其中所述试剂是E3330或其药学可接受的盐或溶剂化 物。
10. 根据权利要求9所述的用途，其中所述试剂与至少一种其他的治疗剂组合使用。
11. 根据权利要求10所述的用途，其中所述其他的治疗剂选自美法仑、吉西他滨、顺 铂、沙利度胺及其衍生物，以及视黄酸。
【专利摘要】本发明披露了用于治疗癌症和血管生成的新方法。酶Ape Ⅰ/Aef-1通过其氧化还原功能，增强与癌症演进相关的转录因子的DNA结合活性。本发明阐述了应用这些试剂来选择性抑制Ape Ⅰ/Aef-1的氧化还原功能从而减弱肿瘤细胞的生长、存活、迁移和转移。Ape Ⅰ/Aef-1的抑制活性已证实可增强其他治疗剂的疗效并保护正常细胞免遭毒性。此外，Ape Ⅰ/Aef-1抑制已证实可减少血管生成，可用于治疗癌症以及其他那些血管生成改变是组分之一的病理学症状。
【IPC分类】A61P35-00, A61K45-06, A61P35-02, A61K31-192
【公开号】CN104666286
【申请号】CN201410499746
【发明人】马克·R·凯利
【申请人】印第安纳大学研究及科技有限公司
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2008年9月22日
【公告号】CN102215833A, CN102215833B