一种抗真菌天然活性物质的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然植物制剂技术领域，具体为一种抗真菌天然活性物质的制备方 法。
【背景技术】
[0002] 真菌感染可分为浅表真菌感染和深部真菌感染两类，浅表感染是由癣菌侵犯皮 肤、毛发、指(趾)甲等体表部位造成的，发病率高，具有一定的危害性。深部真菌感染是由念 珠菌和隐球菌侵犯内脏器官及深部组织造成的，发病率低，危害性大。目前常用于防止真菌 感染的药物与其他其他化学农药一样，具有毒性及副作用较大，难以降解、容易产生耐药性 等缺点，对生态环境和人类健康存在极大的威胁。
[0003] 植物是生物活性化合物的天然宝库，其产生的次生代谢产物有40万种之多，其中 的大多数化学物质如萜烯类、生物碱、类黄酮、留体、酚类、挥发油和多糖等均具有较强的杀 虫或抗菌活性。因此，植物被认为是化学合成杀菌剂替代品最好的开发资源。
[0004] 小冠薰 Basilicum polystachyon(L. ) Moench 为唇形科（Labiatae)小冠熏属 (Basilicum)植物，广泛分布于东半球热带地区，包括亚洲、非洲和澳大利亚。该属植物大 约有6-7个种，中国有1个种，见于广东海南及台湾。小冠薰为一年生或多年生草本植物， 为一稀少的唇形科植物。文献报道，唇形科植物中常含有萜类、香豆素类、挥发油等成分， 具有广谱抗菌、抗病毒、抗炎镇痛、增强免疫等多种药理作用。
[0005] 孪花膨蜞菊 Wedelia biflora (Linn. ) DC.为菊科（Compositae)膨蜞菊属 (Wedelia)植物，全世界约60余种，我国有5种。蟛蜞菊属植物全世界多为民间药用，具有 保肝利胆、抗病毒、抗炎等功效。对本属植物化学成分的研宄显示，本属植物主要含有二萜、 倍半萜、黄酮类、挥发油、有机酸类化合物等。
[0006] 勒党花椒Zanthoxylum avicennae为芸香科花椒属植物，主要分布于北炜约25° 以南地区，生长于低海拔平地、坡地或谷地。我国分布在海南、福建、广东、台湾、广西、云南 等南方地区。在海南三亚，勒党花椒资源分布丰富。文献报道芸香科花椒属植物中主要含 有挥发油、黄酮、生物碱、香豆素、酰胺等成分，临床上用花椒乙醚提取物或花椒挥发油进行 消炎止痛，取得良好的疗效。另据文献报道，花椒属植物对4种深部真菌和11种皮肤癣菌 都有一定的抑菌和杀菌作用。另外发现花椒挥发油可抑制H22肝癌细胞增殖并激发细胞 凋亡，推测其具有一定的抗肿瘤作用。
[0007] 目前外用的杀菌剂大多是适合于喷雾的剂型，其中以乳油和可湿性粉剂为主，当 然还有悬浮剂。由于乳油中含有有机溶剂，不但对人畜有毒，会污染环境，且易燃、因此在贮 运和使用中均不安全，国外已禁止在蔬菜和果树上使用。粉剂虽然可以直接喷撒使用，但由 于不用水，易漂移造成污染环境，有效利用率低，药效期也比较短。近年来出现的水基性新 剂型如水溶剂、微乳剂、乳剂、悬浮剂等。而且微乳剂和乳剂正逐步取代乳油。用水取代了 有机溶剂，这样制剂中就不含固体填料，减轻了对环境的污染。悬浮剂以水为基质，无粉尘 危害，操作安全，正逐步取代可湿性粉剂。微乳剂、乳剂和悬浮剂等杀菌剂新剂型对环境造 成的污染小，且对人畜安全，是行之有效的绿色环保剂型。
[0008] 真菌感染引起的疾病称为真菌病，发病率最高的念珠菌病和皮肤癣菌病由人体正 常菌群的真菌引起。真菌感染性皮肤病常见的就是手足体癣，一般传染性较强。如果真菌 感染有渗液，可能并发细菌感染。临床上将致病真菌分为浅部真菌和深部真菌。真菌性肠 炎即属于深部真菌病。浅部真菌仅侵犯皮肤、毛发和指(趾）甲，而深部真菌能侵犯人体皮 肤、黏膜、深部组织和内脏，甚至引起全身播散性感染。
【发明内容】
[0009] 针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于设计提供一种抗真菌天然活 性物质的制备方法的技术方案，其萃取液分别真空浓缩后得到乙醚萃取物和乙酸乙酯萃取 物，这两个萃取部位具有较强的抗植物病原真菌和人体浅表真菌感染的作用，可用作植物 源杀菌剂，用于防治真菌感染和人体皮肤真菌感染。
[0010] 所述的一种抗真菌天然活性物质的制备方法，其特征在于包括以下步骤： 1) 粉碎混合：分别将小冠熏、勒党花椒、孪花蟛蜞菊的干燥物粉碎成粗粉，通过20-40 目筛，然后按照重量比1-4:1-4:0. 2-2混合均匀； 2) 提取：将按照比例混合后的小冠熏、勒党花椒、孪花蟛蜞菊粗粉置于破碎提取器的容 器内，按照混合物粗粉Ikg则95%含水乙醇的用量为6-10升的比例加入含水乙醇进行室温 组织破碎提取2-3次，每次提取时间为1-5分钟； 3) 闪蒸浓缩：将提取液抽滤，弃去滤渣，得到的提取液在60-80°C以下采用真空薄膜浓 缩装置进行闪蒸浓缩至原体积的1/5-1/8 ; 4) 乙醚萃取部位的制备：将浓缩液分散到水中，水的用量为浓缩液体积的1/2-1/4， 然后用乙醚萃取2-5次，乙醚每次用量为浓缩液体积的1-2倍量，静止分层后，分去乙醚 层，合并乙醚萃取液，在旋转蒸发仪中，常压蒸馏浓缩，蒸出乙醚，得到乙醚浓缩液；继续 将浓缩液进行真空干燥成干粉，用研钵研细后得到乙醚提取物干粉，乙醚提取物收率达到 8. 5% -14. 6% ； 5) 乙酸乙酯萃取部位的制备：将乙醚萃取后，分出的水层浓缩液，改用乙酸乙酯萃取， 用乙酸乙酯萃取2-5次，乙酸乙酯每次用量为浓缩液体积的1-2倍量，静止分层后，分去乙 酸乙酯层，合并乙酸乙酯萃取液，在闪蒸浓缩装置中，50-70°C以下真空减压浓缩，蒸出乙酸 乙酯，得到乙酸乙酯浓缩液；继续将浓缩液进行真空干燥成干粉，用研钵研细后得到乙酸乙 酯提取物干粉，乙酸乙酯提取物收率达到11. 7. 6% -16. 9% ; 6) 将步骤4)的乙醚提取物干粉和步骤5)中的乙酸乙酯提取物干粉按照重量比1:1-3 混合，得到抗真菌天然活性物质。
[0011] 所述的一种抗真菌天然活性物质的制备方法，其特征在于步骤1)中：小冠熏粗 粉、勒党花椒粗粉、孪花蟛蜞菊粗粉的重量比为1-3:1-3:0. 5-1. 5。
[0012] 所述的一种抗真菌天然活性物质的制备方法，其特征在于步骤1)中：小冠熏粗 粉、勒党花椒粗粉、孪花蟛蜞菊粗粉的重量比为1. 5-2. 5:1. 5-2. 5:0. 8-1. 2。
[0013] 所述的一种抗真菌天然活性物质的制备方法，其特征在于步骤1)中：小冠熏粗 粉、勒党花椒粗粉、孪花蟛蜞菊粗粉的重量比为2:2:1。
[0014] 所述的一种抗真菌天然活性物质的制备方法，其特征在于步骤2)中：按照混合物 粗粉Ikg则95%含水乙醇的用量为7-9升的比例加入含水乙醇进行室温组织破碎提取。
[0015] 所述的一种抗真菌天然活性物质的制备方法，其特征在于步骤3)中：真空浓缩温 度为65-75°C，浓缩液浓缩至原体积的1/6-1/7。
[0016] 所述的一种抗真菌天然活性物质的制备方法，其特征在于步骤4)中：水的用量为 浓缩液体积的1/3,乙醚每次用量为浓缩液体积的1. 5倍量。
[0017] 所述的一种抗真菌天然活性物质的制备方法，其特征在于步骤5)中：乙酸乙酯每 次用量为浓缩液体积的1. 5倍量，真空减压浓缩的温度为55-65°C。
[0018] 上述一种抗真菌天然活性物质的制备方法，具有以下有益效果： 1) 本发明对小冠熏、勒党花椒、孪花蟛蜞菊采用组织破碎提取，其工作原理是将被提 取的药材与提取溶剂放入提取容器内，利用高速旋转