-HPLC (% )和RP-HPLC (% )表示面积％ /起始面积％，其表示长期胃泌酸 调节素缀合物相对于起始值的保留百分比。表15显示在储存后长期胃泌酸调节素缀合物 的IE-HPLC面积（％)，表16显示在储存后长期胃泌酸调节素缀合物的SE-HPLC面积（％)， 和表17显示在储存后长期胃泌酸调节素缀合物的RP-HPLC面积（％)。
[0261] 表 14
[0262]
[0264] 表 15
[0265]
[0266]
[0267]
[0268]
[0269]
[0270] 由表14至17的结果可见，长期胃泌酸调节素缀合物在包含0. 02 %聚山梨醇酯20 和0. lmg/mL甲硫氨酸的组合物中最稳定。
[0271] 实施例7 :评价长期胃泌酸调节素缀合物根据DH和糖醇浓度的稳定性
[0272] 发明人测试了 pH和作为稳定剂的糖醇的浓度对长期胃泌酸调节素缀合物的稳 定性的影响。具体地，利用上述实施例中选择的〇. 02%聚山梨醇醋20和0. lmg/mL甲硫 氨酸，将长期胃泌酸调节素缀合物以下表18所示的组成在25°C下储存0-4周，然后通过 IE-HPLC、SE-HPLC 和 RP-HPLC 分析。在下表 19、20 和 21 中，IE-HPLC(% )、SE-HPLC(% ) 和RP-HPLC(% )表示面积％ /起始面积％，其表示长期胃泌酸调节素缀合物相对于起始值 的保留百分比。表19显示在储存后长期胃泌酸调节素缀合物的IE-HPLC面积（％)，表20 显示在储存后长期胃泌酸调节素缀合物的SE-HPLC面积（％)，和表21显示在储存后长期 胃泌酸调节素缀合物的RP-HPLC面积（％)。
[0273] 表 18
[0274]
[0279]
[0280]
[0281]
[0282] 由上表结果可见，IE-HPLC的结果表明，长期胃泌酸调节素缀合物的稳定性的高低 顺序为pH 5. 2、pH 5. 6和pH 6.0。RP-HPLC的结果表明，长期胃泌酸调节素缀合物的稳定 性的高低顺序为pH 6. 0、pH 5. 6和pH 5. 2。SE-HPLC的结果表明，长期胃泌酸调节素缀合 物的稳定性在pH 5. 2、pH 5. 6和pH 6. 0之间无显著差异。换句话说，IE-HPLC、RP-HPLC和 SE-HPLC的结果表明，长期胃泌酸调节素缀合物在pH 5. 6下稳定。
[0283] 同时，IE-HPLC和SE-HPLC的结果表明，在pH 5. 6下长期胃泌酸调节素缀合物在 不同甘露醇浓度之间无显著差异。然而，在RP-HPLC的结果中，在pH 5. 6下长期胃泌酸调 节素缀合物在5%甘露醇中比在10%或15%甘露醇中更稳定。
[0284] 实施例8 :评价长期胃泌酸调节素缀合物枏据DH和缓冲剂种类的稳宙件
[0285] 发明人测试了 pH和作为稳定剂的缓冲剂种类对长期胃泌酸调节素缀合物的稳定 性的影响。具体地，利用在上述实施例中选择的〇. 02%聚山梨醇醋20、0. lmg/mL甲硫氨酸 和5%甘露醇，将长期胃泌酸调节素缀合物以表22所示的组成在25°C下储存的0-4周，然 后通过 ffi-HPLC、SE-HPLC 和 RP-HPLC 分析。
[0286] 在下表23、24和25中，IE-HPLC(%)、SE-HPLC(%)和RP-HPLC(%)表示面积％/ 起始面积％，其表示长期胃泌酸调节素缀合物相对于起始值的保留百分比。表23显示在储 存后长期胃泌酸调节素缀合物的IE-HPLC面积（％ )，表24显示在储存后长期胃泌酸调节 素缀合物的SE-HPLC面积（％)，和表25显示在储存后长期胃泌酸调节素缀合物的RP-HPLC 面积（％ )。
[0287] 表 22
[0288]
[0289]
[0296] 由表23至25的结果可见，SE-HPLC或RP-HPLC的结果表明，长期胃泌酸调节素缀 合物的稳定性在pH 5. 6和pH 5. 8之间无显著差异。IE-HPLC的结果表明，长期胃泌酸调 节素缀合物在PH 5.6比在pH 5.8更稳定。SE-HPLC的结果显示，长期胃泌酸调节素缀合 物的稳定性在相同pH的不同缓冲剂之间无显著差异。另外，IE-HPLC或RP-HPLC的结果表 明，长期胃泌酸调节素缀合物在相同PH的组氨酸中是最稳定的。
[0297] 实施例9 :评价防腐剂存在与否和长期胄泌酸调节素缀合物浓度对长期胄泌酸调 节素缀合物的稳宙件的影晌
[0298] 发明人测试了作为稳定剂的防腐剂存在与否和长期胃泌酸调节素缀合物浓度对 长期胃泌酸调节素缀合物的稳定性的影响。具体地，利用在上述实施例中选择的组氨酸 缓冲剂（pH 5. 6)、0. 02%聚山梨醇酯20、0. lmg/mL甲硫氨酸和5%甘露醇，将长期胃泌酸 调节素缀合物以下表26所示的组成在25°C下储存0-4周，然后通过IE-HPLC、SE-HPLC和 RP-HPLC 分析。在下表 27、28 和 29 中，IE-HPLC(%)、SE-HPLC(%)和 RP-HPLC(%)表示 面积％ /起始面积％，其表示长期胃泌酸调节素缀合物相对于起始值的保留百分比。表27 显示在储存后长期胃泌酸调节素缀合物的IE-HPLC面积（％)，表28显示在储存后长期胃 泌酸调节素缀合物的SE-HPLC面积（％)，和表29显示在储存后长期胃泌酸调节素缀合物 的 RP-HPLC 面积（％)。
[0299] 表 26
[0300]
[0308] 在表26至29中可见，IE-HPLC、SE-HPLC或RP-HPLC的结果表明，即使在存在防腐 剂的情况下长期胃泌酸调节素缀合物的稳定性也无变化，并且不根据其浓度而差异。
[0309] 虽然以示例为目的描述了本发明的优选实施方式，但本领域技术人员会理解，可 以有不同改动、添加和替换，而不脱离如所附权利要求公开的本发明的范围和精神。
【主权项】
1. 长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，包括药理活性量的长期胃泌酸调节素缀合 物，其中胃泌酸调节素，作为生理活性肽，连接至免疫球蛋白Fc区；和不含白蛋白的稳定 剂，其中所述稳定剂包含缓冲剂、糖醇和非离子型表面活性剂。2. 根据权利要求1所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述稳定剂进一 步包含选自等渗剂、糖、多元醇和氨基酸的一种或多种。3. 根据权利要求1所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述胃泌酸调节 素是由肖U膜尚血糖素制成的狀，并且具有SEQ ID NO :1的氣基酸序列，所述肖U膜尚血糖素是 膜尚血糖素的如体。4. 根据权利要求1所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述胃泌酸调节 素是天然胃泌酸调节素或其前体、衍生物、片段或变体。5. 根据权利要求4所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述衍生物具有 选自SEQ ID NOS :2至34的任一种氨基酸序列。6. 根据权利要求1所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述免疫球蛋白 Fc区是衍生自IgG、IgA、IgD、IgE或IgM的Fc区。7. 根据权利要求6所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述免疫球蛋白 Fc区的各结构域是源自选自IgG，IgA，IgD，IgE和IgM的不同免疫球蛋白的结构域的杂合 体。8. 根据权利要求6所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述免疫球蛋白 Fc区是由单链免疫球蛋白组成的二聚体或多聚体，所述单链免疫球蛋白由相同来源的结构 域组成。9. 根据权利要求6所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述免疫球蛋白 Fc区是IgG4Fc区。10. 根据权利要求9所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述免疫球蛋 白Fc区是人非糖基化IgG4Fc区。11. 根据权利要求1所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述缀合物利 用非肽基聚合物或重组技术来制备。12. 根据权利要求11所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述非肽基聚 合物选自丙二醇、乙二醇/丙二醇共聚物、聚氧乙烯多元醇、聚乙烯醇、多糖、葡聚糖、聚乙 烯乙醚、可生物降解的聚合物，包括聚乳酸（PLA)和聚乳酸-乙醇酸（PLGA);脂质聚合物； 几丁质；透明质酸；及其组合。13. 根据权利要求11所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述非肽基聚 合物是聚乙二醇。14. 根据权利要求1所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述糖醇是选 自甘露醇、山梨醇和甘油的一种或多种。15. 根据权利要求14所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述液体制剂 中所述糖醇的的浓度为2-15% (w/v)。16. 根据权利要求1所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述缓冲剂是 选自柠檬酸盐、乙酸盐、组氨酸和磷酸盐缓冲剂的一种或多种。17. 根据权利要求1所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述缓冲剂的 pH范围为4. 5至7. 0。18. 根据权利要求2所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述等渗剂是 氯化钠。19. 根据权利要求1所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述非离子型 表面活性剂是聚山梨醇酯或泊洛沙姆。20. 根据权利要求19所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述液体制剂 中所述非离子型表面活性剂的浓度为〇. 001-0. 1% (w/v)。21. 根据权利要求2所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述氨基酸是 甲硫氨酸。22. 根据权利要求1所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述稳定剂包 含pH范围为4. 8至6. 0的缓冲剂、选自甘露醇和山梨醇的一种或多种糖醇、和聚山梨醇酯 20〇23. 根据权利要求1所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，进一步包括选自间 甲酚、苯酚和苄醇的一种或多种防腐剂。24. 根据权利要求23所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述液体制剂 中所述防腐剂的浓度为0.001-1% (w/v)。25. 根据权利要求23所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述防腐剂是 间甲酯。26. 根据权利要求23所述的长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，其中所述制剂用于 多剂量给予。27. 长期胃泌酸调节素缀合物的液体制剂，包括药理学上有效量的长期胃泌酸调节素 缀合物，其中胃泌酸调节素，作为生理活性肽，连接至免疫球蛋白Fc区；5-50mM组氨酸； 2-15% (w/v)甘露醇；0? 01-lmg/mL 甲硫氨酸；和 0? 001-0. 1% (w/v)聚山梨醇醋 20。28. 权利要求27所述的液体制剂，进一步包括0.001-1% (w/v)间甲酚。29. 制备权利要求1至22和27中任一项所述的液体制剂的方法，所述方法包括步骤： a) 制备长期胃泌酸调节素缀合物；和 b) 混合步骤a)中制备的所述长期胃泌酸调节素缀合物与稳定剂，所述稳定剂包含缓 冲剂、糖醇和非离子型表面活性剂。30. 制备权利要求23至26和28中任一项所述的液体制剂的方法，所述方法包括步骤： a) 制备长期胃泌酸调节素缀合物；和 b) 混合步骤a)中制备的所述长期胃泌酸调节素缀合物与稳定剂和防腐剂，所述稳定 剂包含缓冲剂、糖醇和非离子型表面活性剂。31. 权利要求29或30所述的方法，其中所述稳定剂进一步包含选自等渗剂、糖、多元醇 和氨基酸的一种或多种。
【专利摘要】本发明涉及包括长期胃泌酸调节素缀合物的不含白蛋白的液体制剂，其中胃泌酸调节素肽，包括胃泌酸调节素的衍生物、变体、前体或片段，连接至免疫球蛋白Fc区，与天然胃泌酸调节素相比，该免疫球蛋白Fc区可增加长期胃泌酸调节素缀合物的生理活性的持续时间和长期保持其体内稳定性；以及制备液体制剂的方法。液体制剂包括缓冲剂、糖醇和非离子型表面活性剂，并且不包含人血清白蛋白和可能对人体有害的因子，因此不易受病毒感染。另外，本发明的胃泌酸调节素缀合物包括连接至免疫球蛋白Fc区的胃泌酸调节素，因与天然胃泌酸调节素相比此具有大分子量、延长的生理活性和良好的储存稳定性。
【IPC分类】C07K14/605, A61K9/08, A61K39/395, A61K38/26
【公开号】CN104884045
【申请号】CN201380069534
【发明人】金贤煜, 林亨奎, 张明贤, 金尚允, 裴城敏, 权世昌
【申请人】韩美药品株式会社
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2013年11月6日
【公告号】CA2890324A1, EP2916819A1, US20150290324, WO2014073842A1