与肿瘤细胞发育阶段相匹配的细胞及其提取物的新用图
【技术领域】
[0001]本发明涉及治疗癌症的药物，具体涉及与肿瘤细胞发育阶段相匹配的细胞及其提取物的新用途。
【背景技术】
[0002]经过多年的努力，肿瘤死亡率却没有明显的下降(Siegel R, Naishadham
D,Jemal A.Cancer statistics, 2013.CA Cancer J Clin 2013 ；63:11-30.2ForouzanfarMH, Foreman KJ, Delossantos AM, et al.Breast and cervical cancer inl87countriesbetween 1980and 2010:a systematic analysis.Lancet 2011 ;378:1461-84.)。目前的治疗虽然能够有效杀死肿瘤细胞，但是却不能治愈肿瘤，也不能抑制复发，而且由于严重的副反应，病人的生活质量很差，因此寻找有效治疗在医学领域仍是一个难题。要想治愈肿瘤，我们必需重新认识肿瘤细胞的起源和本质。
[0003]通过肿瘤发病的统计分析，可以看出上皮组织发生的肿瘤最常见，其次是结缔组织，而肌肉组织和神经组织很少发生肿瘤(Siegel R, Naishadham D, Jemal A.Cancerstatistics, 2013.CA Cancer J Clin 2013;63:11-30.)。我洞悉到，肿瘤发生率与两个因素有关:一是组织细胞的再生率。再生越快，肿瘤发病率越高。例如肠上皮细胞每三天更新一次，食管上皮细胞一周就更新一次，因此这些部位的肿瘤发病率很高。而肌肉细胞更新率不高，而来自肌肉组织的肿瘤也很罕见。神经细胞更是被认为不更新，而它也几乎不发生肿瘤，相反胶质细胞经常更新，其来源的肿瘤也就很常见。总之，细胞再生是肿瘤发生的内在因素，组织细胞的再生能力与其肿瘤的发生率基本一致。另一个因素是外界影响因素的强度和持续时间。组织再生能力越强，越易受到外界环境的刺激，肿瘤的发病率越高。
[0004]尽管致癌物多种多样，但是肿瘤细胞的生物学特性却是相同的，而且祛除致癌物后，肿瘤细胞仍然存活，因此针对病因学的治疗是没有本质意义的。这一现象就产生了一个问题，如果癌症的发生不是存在一个共同的机制，不同致癌物引起的癌细胞共同的生物学特性就不能解释。
[0005]已经发现，肿瘤细胞与胚胎干细胞有很多共同的特征，例如可塑性、免疫逃逸、永生化和表达胚胎特异性蛋白(Ben-David U, Benvenisty N.The tumorigenicity of humanembryonic and induced pluripotent stem cells.Nat Rev Cancer 2011 ； 11:268-77.Wong DJ, Liu H, Ridky TW, Cassarino D, Segal E, Chang HY.Module map of stem cellgenes guides creat1n of epithelial cancer stem cells.Cell Stem Cell 2008 ；2:333-44.Normile D.Cell proliferat1n.Common control for cancer, stem cells.Science 2002 ;298:1869.)。就像肝癌细胞与胚胎肝细胞都表达AFP，结肠癌细胞和胚胎肠上皮细胞表达CEA。尽管肿瘤细胞和干细胞有很多共同点，肿瘤细胞最终导致生命死亡，而干细胞却是组织再生所必需的。一些研宄也已经表明，干细胞收到异常的增殖信号，从而产生肿瘤细胞(Fujimori H, Shikanai M, Teraoka H, Masutani M, Yosh1kaK.1nduct1n of cancerous stem cells during embryonic stem cell differentiat1n.J B1l Chem 2012 ；287:36777-91.Flynn CM，Kaufman DS.Donor cell leukemia:1nsightinto cancer stem cells and the stem cell niche.Blood 2007 ； 109:2688-92.JudeCD，Gaudet JJ，Speck NA，Ernst P.Leukemia and hematopoietic stem cells:balancingproliferat1n and quiescence.Cell Cycle 2008 ；7:586-91.Beug H.Breast cancerstem cells:eradicat1n by differentiat1n therapy ? Cell 2009 ；138:623-5.Grichnik JM，Burch JA，Schulteis RDj et al.Melanoma, a tumor based on a mutant stemcell ? J Invest Dermatol 2006 ；126:142-53.Reva Tj Morrison SJj Clarke MFj WeissmanIL.Stem cells, cancer, and cancer stem cells.Nature 2001 ;414:105-1L ) 0 由于胚胎干细胞可发育成所有的成体组织细胞，那么胚胎微环境是否可诱导肿瘤细胞分化？如果是这样，那将会为肿瘤提供一个高效而无毒的治疗策略。
【发明内容】
[0006]本发明的发明目的是提供与肿瘤细胞发育阶段相匹配的细胞及其提取物的新用途。
[0007]本发明与肿瘤细胞发育阶段相匹配的细胞及其提取物在制备抑制癌细胞生长或增殖的药物中的应用，其中所述与肿瘤细胞发育阶段相匹配的细胞包括从干细胞分化到成熟细胞或胚胎发育过程中经历的所有阶段的细胞。
[0008]可选的，所述提取物为细胞裂解物、分泌物以及细胞间质中的一种或者两种以上的混合物。
[0009]可选的，所述细胞及其提取物来自干细胞、自体、异源和/或动物的细胞或胚胎组织。
[0010]可选的，所述细胞及其提取物来自鼠胚和/或鸡胚组织。
[0011]可选的，其中所述细胞及其提取物为可溶的组分、不可溶的组分或可溶的组分与不可溶组分的混合物。
[0012]可选的，其中所述可溶的组分指这样的培养基:在其中细胞被培养并且分泌活性剂到其中，并且含有没有沉积的蛋白质和生物成分的培养基。
[0013]可选的，其中所述不可溶的组分包括细胞分泌到胞外的基质蛋白和/或细胞分泌到胞外的生物组分。
[0014]可选的，其中所述可溶的组分还包括核酸、蛋白因子、肽、脂类、小分子物质和各种糖基化修饰。
[0015]可选的，其中所述细胞及其提取物单独或联合应用。
[0016]可选的，其中所述肿瘤细胞包括所有被诊断为恶性肿瘤的细胞类型。
[0017]可选的，其中所述癌细胞为黑素瘤、神经胶质瘤、肾上腺、膀胱、骨、骨髓、脑、脊柱、胸、颈部、胆囊、神经节、胃肠道、胃、结肠、心脏、肾、肝、肺、肌肉、卵巢、胰、甲状旁腺、阴茎、前列腺、唾液腺、皮肤、脾、睾丸、胸腺、子宫或乳腺的癌细胞。
[0018]本发明与肿瘤细胞发育阶段相匹配的细胞及其提取物在制备抑制癌细胞生长或增殖的药物中的应用，包括但不限于，抑制癌细胞生长或增殖、促进受损细胞或组织的修复和再生、促进组织再生、用于组织培养系统以培养细胞，例如干细胞、促进组织修复。
[0019]因此，本发明的药物也适于非人类动物的应用。如本文所用，“兽医”指涉及或与动物特别是家畜的内科或外科治疗相关的医学学科。常见的兽医动物可以包括哺乳动物、两栖动物、鸟类、爬行动物和鱼。例如，典型的哺乳动物包括狗、猫、马、兔、灵长类、啮齿类和家畜，例如牛、马、山羊、绵羊和猪。
【附图说明】
[0020]图1示出了鸡胚肝提取物处理48h后，H印G2肿瘤细胞的镜下增殖变化。
[0021]图2示出了鸡胚肝提取物处理48h后，H印G2肿瘤细胞的增殖率变化。
[0022]图3示出了鸡胚肝提取物处理48h后，HepG2肿瘤细胞的肝癌标记物AFP的基因表达。
[0023]图4示出了鼠胚肝细胞共培养48h后，HepG2肿瘤细胞的镜下增殖变化。
[0024]图5示出了鼠胚肝细胞共培养48h后，HepG2肿瘤细胞的增殖率变化。
[0025]图6示出了鼠胚肝细胞共培养48h后，HepG2肿瘤细胞的肝癌标记物AFP的基因表达。
[0026]图7示出了 9-1 Id鸡胚肝提取液、13.5-14.5d鼠胚肝细胞共培养48h后，!fepG2肿瘤细胞的形态变化。
[0027]图8示出了鸡胚肝提取液处理48h后，HepG2肿瘤细胞增殖关键因子Myc和分化关键控制因子HNF_4a的基因表达。
[0028]图9示出了鼠胚肝细胞共培养48h后，HepG2肿瘤细胞增殖关键因子Myc和分化关键控制因子HNF_4a的基因表达。
[0029]图10示出了鼠胚肝细胞培养液局部皮下注射后，荷瘤裸鼠的数量变化。
[0030]图11示出了鼠胚肝细胞培养液局部皮下注射后，HepG2肿瘤的大小变化。
【具体实施方式】
[0031]下面对本发明的技术方案作进一步的说明。
[0032]考虑到肿瘤细胞拥有整个的基因组、不产生毒素、对机体的毒害主要是占位、与胚胎干细胞有很多相似性以及有时可被胚胎微环境诱导分化，发明人认为，应重新认识肿瘤的起源和本质，提出了一个理论:肿瘤细胞为停滞于某发育阶段，而呈无限增殖的“正常干细胞”或细胞的“返祖”现象，提出对于恶性程度不同的肿瘤细胞诱导再分化，应利用不同发育阶段的胚胎微环境诱导肿瘤细胞“重新编程”，进而促使其再分化为正常细胞，成为彻底治愈肿瘤提供了高效、无毒的新思路。
[0033]肿瘤细胞是发育阻滞在某个阶段的组织干细胞，因此肿瘤就表现出组织干细胞相应发育阶段的一些组织学特性。阻滞在原始阶段，就表现为恶性肿瘤；而阻滞在较晚发育阶段，肿瘤就表现为良性；处在中间阶段的为间质瘤。对某个特定组织而言，由于基因脆点不同，肿瘤也就常表现为一些常见类型。尽管肿瘤细胞拥有很多特性，例如血管发生、免疫逃逸、转移等，但是它们与组织干细胞之间没有截然不同的区别，因此，杀灭策略是不会彻底治愈癌症的。我们的治疗策略必须转移为多因子参与的肿瘤细胞诱导分化。
[0034]由于胚胎发育的过程覆盖了所有组织细胞的所有发育阶段，并有能力协调组织的同步发育，因此胚胎微环境在理论上应该有能力诱导所有的肿瘤细胞分化。特定发育阶段的胚胎微环境应该有能力编辑阻滞在相同发育阶段的肿瘤细胞，引导肿瘤细胞分化成正常细胞。这种编辑应该是相同组织来源的。根据越原始越相似原理，这种编辑作用是不受种属限制的。只有相同组织来源的、相同发育阶段的(同源同步)胚胎微环境，才能够编辑对应的肿瘤细胞分化。关键是干细胞的发育阶段要覆盖肿瘤细胞的阻滞阶段，才能够保证成功的诱导。基于