药颗粒剂，当灌胃剂量达到488. 5g生药/kg剂量时，给药 后小鼠出现轻微活动减少，1. 5小时左右恢复正常，给药后连续观察7天，无一动物死亡，其 全身状况、饮食、摄水、小便和体重增长均正常。
[0024] 4、试验结果表明：小鼠灌胃本发明颗粒剂的最大给药量为488. 5g生药/kg/d(LD5Q > 488. 5g生药/kg)。本发明的中药每日临床用药总量为0. 29g生药/kg/d;按体重计，小 鼠灌胃本发明颗粒剂的耐受量为临床病人的1684. 5倍。提示该药急性毒性极低，临床用药 安全。
[0025](二）长期毒性试验 1、试验目的：观察试验动物在长期食用本发明中药制剂后的毒性反应，评估本发明中 药制剂的基本安全性。
[0026] 2、试验材料： (1)动物：选用成年健康SD大鼠180只，初始体重213±13g，雌雄各半，雌性大鼠均无 孕。由北京市实验动物研宄中心提供。
[0027] (2)药物：本发明实施例1-5所制造的颗粒剂，加蒸馏水调制成稀糊，备用。单位 体重给药量按临床用药量的20倍计算（临床用药量依据《中华人民共和国药典》2010年版 一部)，给药量为5. 8g生药/kg/d。
[0028] 3、试验方法 (1)将180只SD大鼠分成6组，每组30只，雌雄各半。试验动物雌雄分笼饲养，每笼5 只，定量喂食(每笼1250-1450g/周），基础饲料为实验鼠全价颗粒饲料，自由饮水。实验温 度（22±2) °C，湿度60%-80%。自然光照明暗周期。SD大鼠购入后，在本实验室饲养条 件下适应2周，观察一般行为表现。试验前测量动物摄食量，选出合格的大鼠。
[0029] (2)给药方法 用实施例1-5所制颗粒剂调制的稀糊，分别对其中5组SD大鼠灌胃给药，每日2次，每 次体积为〇. 2ml/10g体重，连续给药26周。剩余一组为对照组，按同样方法灌胃生理盐水。 试验动物每周称体重1次，根据体重变化调整给药量。在第13周给药后24h，每组处死10 只，雌雄各半，观察并检测各项指标；余下的继续给药观察至26周，最后1次给药后24h，每 组再处死10只，雌雄各半，观察检测各项指标；余下10只进行8周恢复期观察。
[0030] (3 )检测项目及时间 一般检查：每天观察动物的一般状况，如精神状态、动态反应，行为活动，饮食量的变 化，排便情况，眼睛及孔道分泌物，毛色，清洁度等。体重变化情况及摄食量每周测定1次。
[0031] 血液学检查：给药后第13、26周及停药恢复期末(第34周）分别检测下列指标：红 细胞压积（HCT)、红细胞计数（RBC)、血红蛋白含量（HGB)、白细胞计数（WBC)、淋巴细胞相对 计数（LY)、血小板计数（PLT)、中性粒细胞相对计数（NE)、单核细胞相对计数（Mon)和凝血 时间（CT)。
[0032] 血液生化指标检查：给药后第13、26周及停药恢复期末(第34周)分别检测下列指 标：丙氨酸转氨酶（ALT)、碱性磷酸酶（AST)、门冬氨酸转氨酶（AST)、总胆红素（TB)、白蛋白 (ALB)、总蛋白质（TP)、血糖（GLU)、尿素氮（BUN)、总胆固醇（TC)、肌酐（Crea)、尿酸（UA)、 血钠（Na+)、血钾（K+)、血钙（Ca+)以及02-微球蛋白。
[0033] 尿生化学和尿液常规检查：给药后第13、26周及停药恢复期末(第34周）各测1 次。动物代谢笼单笼饲养收取24h尿，试验前禁食过夜，检测尿胆红素（BIL)、葡萄糖（GLU)、 酮体（KET)、蛋白质、PH值、尿胆原（UR0)、尿隐血（BL0)、亚硝酸盐（NIT)、比重及白细胞 (WBC);放射免疫法定量测定尿P2-MG(肾小管功能障碍敏感指标)。
[0034] 系统尸检和病理组织学检查：对各脏器进行肉眼检查，将心脏、肝脏、肺脏、肾脏、 脾脏、脑、肾上腺、胸腺、甲状腺、胰腺、子宫、卵巢、睾丸、前列腺等器官取出称重，计算脏器 系数(脏器重量/体重)。对上述脏器及脊髓、胸腺、膀胱、骨髓(胸骨)、十二指肠、胃、回肠、 胰腺、脑垂体、视神经、淋巴结、结肠和直肠等用光镜进行组织学检查。
[0035] 4、试验结果 一般观察所有大鼠均没有表现出任何异常情况；血液学检查、血液生化指标检查、尿生 化学、尿液常规检查、系统尸检和病理组织学检查，各项指标与对照组动物相比，均没有明 显的差异。因此，本发明中药颗粒剂对SD大鼠是没有任何长期毒性和延迟毒性作用的，鉴 于其为人服用量的20倍比例，所以可以推测该颗粒剂供患者服用是安全的。
[0036] 二、本发明中药制剂的药效学实验 (一）实验材料 1、菌种、小鼠 (1) 结核分枝杆菌H37Rv标准株； (2) 昆明种小鼠，体重为19±2g的6-8周龄的雌性BALB/c小鼠70只，同批试验体重差 异不超过29。
[0037] 2、主要试剂 (1) 本发明实施例4生产的颗粒剂，规格为0. 387g生药/g颗粒剂； (2) 异烟肼：规格：0.Ig/片，厂家：上海信谊药厂有限公司，成人有效临床剂量0. 3g/ d ; (3) 微卡菌苗(注射用母牛分枝杆菌）：规格：22. 5ug/支，厂家：安徽龙科马生物制药 有限责任公司。
[0038] (二）实验方法 1、小鼠结核病模型的建立 每只小鼠经尾静脉注射5XIO5CFU的结核分枝杆菌H37Rv标准株菌悬液，制备小鼠结 核病模型。
[0039] 2、实验分组 将小鼠称重后，随机均匀地分为7组，每组10只。感染后第7天开始治疗。
[0040] (1)模型组：感染后第7天杀鼠； (2) 空白对照组：每只小鼠每日灌胃0. 5ml蒸馏水，每周灌胃5天(周一至周五）至杀 鼠； (3) 微卡治疗组：每次每只小鼠双侧胫前肌缓慢注射22. 5ug/100ul，每2周注射1次， 共3次； (4) 异烟肼治疗组：每只小鼠每日灌胃0. 4mg/0. 5ml异烟肼，每周灌胃5天(周一至周 五）至杀鼠： (5) 本发明中药制剂低剂量组：每只小鼠每日灌胃1.45g生药/kg剂量(临床用药量的 5倍)，每周灌胃5天(周一至周五）至杀鼠； (6) 本发明中药制剂中剂量组：每只小鼠每日灌胃2. 90g生药/kg剂量(临床用药量的 5倍)，每周灌胃5天(周一至周五）至杀鼠； (7) 本发明中药制剂高剂量组：每只小鼠每日灌胃5. 80g生药/kg剂量(临床用药量的 5倍)，每周灌胃5天(周一至周五）至杀鼠。
[0041] 3、动物解剖 在感染后7天，10只结核模型组小鼠处死并解剖，以了解结核模型是否成功建立。在治 疗12周，每组小鼠均处死并解剖，以了解本发明中药制剂的治疗效果。
[0042] 4、观察指标 (1) 一般状态：观察小鼠的精神状态、毛色及活动情况等。
[0043] (2)小鼠体重增长情况：治疗前称体重1次，治疗后每周称体重1次。治疗后体重 减去治疗前体重即治疗后增长的体重。
[0044] (3)小鼠死亡数和死亡率：记录小鼠死亡数、计算死亡率，死亡的小鼠立即解剖观 察肺部病变。
[0045] (4)肺、肝、脾脏器重量指数：解剖前准确称量小鼠体重，然后精确称取肺、肝、脾重 量，计算肺、肝、脾重量指数（WI)=(脏器重量/小鼠体重）X100%计算。
[0046] (5)肺、肝、脾大体病理观察：观察小鼠肺、肝、脾脏器大小、病变范围、表面结节、坏 死灶等，具体评定标准见下表1。
[0047] 表1脏器大体病理病变程度观察记录表
(6)肺组织病理检查：将小鼠肺右叶固定于10%中性福尔马林，石蜡包埋切片，苏木 精/伊红（HE)染色后，5um连续切片，镜下观察肺组织病理改变。
[0048] (7)脾菌落计数：取脾上半部分分别加3ml生理盐水，用组织研磨器研磨成组织悬 液，脾用生理盐水系列稀释成10'10'KT3菌悬液，将菌悬液10'10'KT3 0.Iml接种于 含两性霉素B的改良罗氏培养基上，每个稀释度接种2个培养基，涂抹均匀，于37°C培养4 周。
[0049] 5、统计学分析 应用SPSS13. 0统计软件进行数据处理，计量数据以I=SD表示，各组数据进行正态性 和方差齐性检验，多组均数比较采用单因素方差分析。P< 0. 05表示差异有显著性。
[0050](三）实验结果 1、小鼠结核模型的建立 (1 )、感染7天肺肝脾大体病理：小鼠肺可