当归藤在制备治疗和/或预防细胞畸变药物方面的新用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及当归藤的新用途，特别是当归藤提取物及当归藤总黄酮的新用途，即 在制备治疗和/或预防细胞畸变药物方面的新用途。
【背景技术】
[0002] 现代免疫学研宄和环境污染调查表明，人类活动所产生的食物链污染、饮用水源 污染、工业大气污染、放射性污染等有害因子进入环境中，引起环境系统结构和功能发生变 化，致使人类在日常饮食、呼吸、皮肤接触和使用化学药物时，自身不可避免地暴露于各种 细胞致畸变环境中，导致生命体细胞畸变，更大大增加了肿瘤出现的概率，降低了人类动植 物各生物物种繁殖的成功率。众多研宄表明细胞畸变在肿瘤形成过程中起着决定性作用， 已经成为人类潜在的最大健康危害。放化疗是目前治疗和辅助手术治疗肿瘤癌症最常规、 有效的方法，但放化疗的毒副作用几乎不可避免。化疗药物的选择性不强，在杀灭癌细胞的 同时也会不可避免地损伤人体正常的细胞，从而出现致突变、致畸形和致癌的效应。放疗中 射线使人体组织间液发生电离，产生自由基，这些自由基再与生物大分子发生作用，形成不 可逆损伤，导致细胞死亡，这样在杀伤肿瘤细胞的同时也使肿瘤周围的正常组织细胞受到 损伤。常见的放化疗毒副作用有以下几种：身体衰弱、免疫功能下降、骨髓抑制、消化障碍、 炎症反应、心脏、肾脏、肝脏、神经系统毒性，及肺纤维化等。通过改变给药途径、剂量，成分 输血，骨髓移植，中药调节，生物免疫疗法等可以减轻放化疗的毒副作用。
[0003] 大量临床观察证实，中药在提高机体机能状态、减轻放化疗的副作用、促进骨髓功 能、提高食欲、增加体力、改善睡眠、促进手术康复、增加放化疗效果方面都有比较好的作 用。随着中医肿瘤学的发展，中药在癌症的综合治疗中发挥着越来越重要的作用，突出表 现在中药与常规手术、放化疗的结合方面。
[0004] 当归藤（EmbeliaparvifloraWall)系紫金牛科花酸藤子属植物，又称小花酸藤 子、大力王、筛其强，为常绿木质藤本，以其干燥的藤或根入药，主要分布广西（龙州、大新、 天等、百色、河池）、广东、贵州、云南等地。其性味苦、涩、平。壮医认为当归藤具有通龙路火 路、补血调经、益精壮阳、强腰膝的功能，是常用壮药品种，用于勒内（贫血）、京瑟（闭经）、 月经不调、隆白呆（带下）、发旺（风湿骨痛）、腰腿痛、胸肋痛、胃痛、慢性肠炎、产后腹痛、 卟艮裆（不孕症）等，属抗风湿要药。广西特产中成药"桂龙药膏"以该药材为原料。
[0005] "当归藤化学成分的预试验研宄"《广西中医学院学报》发现，当归藤中可能含有糖 类、苷类、酚类、鞣质、皂苷、有机酸类、黄酮类、三萜类、留体类、挥发油及油脂等成分。
[0006] 据卢森华等人研宄报道（"当归藤不同部位挥发油成分GC-MS分析"《安徽农业科 学》），当归藤根、茎、叶挥发油中均含有2-正戊基呋喃、肉豆蔻酸、棕榈酸和亚油酸，根中含 量最高为亚油酸，茎中含量最高为棕榈酸。
[0007] "当归藤中总皂苷的提取工艺研宄"《时珍国医国药》刘静等人在对当归藤化学 成分的研宄中，分离得到大量皂苷类化合物，其主要成分为百两金皂苷B。皂苷类化合物 常具有较好的抗肿瘤活性，而百两金皂苷B作为中药百两金的重要成分之一，对肿瘤细胞 MCF-7、NCI-H460和SF-268具有很强的细胞毒活性。
[0008] "紫外分光光度法测定当归藤中儿茶素含量"《安徽农业科学》管海波等在对当归 藤化学成分的研宄过程中，分离得到大量的儿茶素。儿茶素具有抑菌、消炎、抑制肿瘤、抗氧 化、抗衰老、抗畸变、降血压、降血脂、降血糖、防辐射等多种保健功能。
[0009] "当归藤中总黄酮提取工艺研宄"（《食品工业科技》）报道针对当归藤中总黄酮提 取工艺研宄，但仅仅按总黄酮得率为指标。
[0010] 目前没有文献资料提到当归藤、当归藤提取物或当归藤总黄酮可用于治疗和/或 预防细胞畸变。
【发明内容】
[0011] 本发明的目的是提供当归藤在制备治疗和/或预防细胞畸变药物方面的新用途；
[0012] 本发明的另一目的是提供当归藤提取物在制备治疗和/或预防细胞畸变药物方 面的新用途；
[0013]本发明的另一目的是提供当归藤总黄酮在制备治疗和/或预防细胞畸变药物方 面的新用途；
[0014]本发明的另一目的是提供当归藤提取物的制备方法；
[0015]本发明的另一目的是提供当归藤总黄酮的制备方法。
[0016] 本发明的目的是通过下列的技术方案实现的：
[0017]本发明原料来源：
[0018] 当归藤：系紫金牛科花酸藤子属植物EmbeliaparvifloraWall，又称小花酸藤 子、大力王、筛其强，为常绿木质藤本，以其干燥的藤或根入药，主要分布广西（龙州、大新、 天等、百色、河池）、广东、贵州、云南等地。性味苦、涩、平。
[0019] 发明人在研宄细胞畸变的治疗过程中发现，紫金牛科花酸藤子属植物特别是当归 藤所含总黄酮对环磷酰胺诱导的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核有明显抑制作用和小鼠骨髓 细胞染色体畸变有显著降低效果，实现了对细胞畸变病理进程的干预和病理症状的显著改 善，从而有效治疗细胞畸变。
[0020] 黄酮类化合物广泛存在于植物界，是目前倍受关注的天然活性产物之一。黄酮体 抗油脂过氧化活性已经被证实，认为它是作为优良抗氧化剂而起作用。大量研宄证明，黄酮 类化合物具有抗自由基、抗氧化、抗癌、抗菌、抗过敏、抗炎症等多种生理活性及药理作用， 且无毒，对人类的肿瘤、衰老、心血管疾病的防治有重要意义。研宄结果显示，当归藤总黄酮 对环磷酰胺诱导的小鼠骨髓细胞微核有明显抑制作用，说明当归藤总黄酮对致突变剂诱 导的小鼠体细胞突变有拮抗作用。而且当归藤提取物和当归藤总黄酮能显著抑制CP诱发 的染色体畸变，且存在一定的量效关系。统计分析各组不同类型的染色体畸变结果显示，当 归藤总黄酮主要是通过降低染色体末端缺失和染色体碎片的形成，对环磷酰胺引发的小鼠 骨髓细胞的染色体损伤进行修复，其机制可能是由于当归藤总黄酮能激活DNA和蛋白质合 成酶系统，从而帮助机体快速修复诱变剂引起的染色体损伤。已知CP进入体内主要是在肝 脏酶作用下生成中间产物醛磷酰胺，然后进入靶细胞后将其烷化基加到DNA分子的核苷酸 顺序中，引起DNA损伤，其损伤的实质是CP的代谢产物对DNA分子的氧化作用。CP这种作 用与? 0H自由基对DNA的损伤作用相类似。羟自由基被认为是毒性很强的自由基，能诱导 膜系统脂质过氧化，引起各种重要酶的氧化损伤，尤其是?〇!!能与DNA上的胸腺嘧啶等碱基 加成，生成的碱基自由基可相互结合或再通过02、02^ ?等反应生成过氧化物，导致碱基破坏 从而产生遗传突变。黄酮类化合物具有广泛的生物活性，，包括抗氧化，抗衰老，抗菌，抗肿 瘤等。最主要的是它的抗氧化活性。有研宄证明黄酮类化合物抗氧化作用是通过酚羟基与 自由基反应形成稳定的半醌式自由基结构，具有强力清除? 0H和02_ ?的作用。另外，与自 由基发生反应后，清除剂本身变成了自由基，这个新自由基的毒性或活泼性小于原来自由 基的毒性或活泼性从而起防护作用。由此推测当归藤总黄酮抗CP诱变作用可能与其抗氧 化作用有关。
[0021] 本发明专利临床应用的安全性较高，在细胞畸变的药物治疗中不失为一种好药， 其拓宽了细胞畸变的新方法，同时为患者解决了现有技术治疗细胞畸变时出现的不良反 应。
[0022] 因此，申请人提供当归藤、当归藤提取物、当归藤总黄酮能够用于治疗细胞畸变药 物方面的新用途。
[0023] 本发明还公开了当归藤提取物在制备治疗和/或预防细胞畸变药物的应用，所述 当归藤提取物的制备包括以下步骤：
[0024] 当归藤粉碎，加入浓度为60-80 %乙醇50-70°C水浴提取2-3次，每次乙醇用量为 药材总重量8-12倍，每次提取时间为40-60min，合并提取液，浓缩，过滤，浓缩，干燥，得当 归藤提取物。
[0025] 本发明公开的当归藤总黄酮在制备治疗和/或预防细胞畸变药物的应用，所述当 归藤总黄酮通过以下步骤制备：
[0026] 当归藤粉碎，加入浓度为50-80%乙醇微波提取2-3次，每次乙醇用量为药材总重 量8-15倍，每次提取时间为10-20min，合并提取液，浓缩，过滤，滤液过弱酸性阳离子交换 树脂吸附后，用浓度为60-80%乙醇洗脱，洗脱液浓缩、真空干燥，得当归藤总黄酮。
[0027] 本发明公开的当归藤总黄酮在制备治疗和/或预防细胞畸变药物的应用，所述当 归藤总黄酮还可以通过以下步骤制备：
[0028] 当归藤粉碎，加入浓度为60%乙醇，用780W微波提取2-3次，每次乙醇用量为药材 总重量12倍，每次提取时间为15min，合并提取液，减压浓缩，加硅藻土过滤，滤液过ADS17 树脂吸附，用70%乙醇洗脱，洗脱液浓缩、真空干燥，得当归藤总黄酮。
[0029] 本发明提供的当归藤、当归藤提取物、当归藤总黄酮用于治疗细胞畸变药物方面 的新用途具有以下优点：
[0030] 1、当归藤、当归藤提取物、当归藤总黄酮从紫金牛科花酸藤子属当归藤中而得，安 全无毒，可长期服用。
[0031] 2、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核（MN)显示，当归藤提取物及当归藤总黄酮组小鼠 分别在不同程度上降低了CP诱发的微核率，这些数据表明当归藤提取物、当归藤总黄酮可 抑制CP对小鼠骨髓细胞的致突变作用并且存在着明显的量效关系。
[0032] 3、小鼠骨髓细胞染色体畸变（CA)实验中发现，当归藤提取物、当归藤总黄酮主要 是通过降低染色体末端缺失和染色体碎片（P〈〇. 05,P〈0. 01)的形成，对环磷酰胺引发的小 鼠骨髓细胞的染色体损伤进行修复，从而帮助机体快速修复诱变剂引起的染色体损伤。
【具体实施方式】
[0033] 下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明 本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明 要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的乙醇量的百分数是体积百分数，v/v表示溶液 的体积比。
[0034] 实施例1:当归藤提取物的制备
[0035] 取10kg当归藤粉碎，加入浓度为80%的乙醇水浴提取3次，每次的乙醇用量分别 为药材总重量的12倍、10倍、8倍，水浴温度为70°C，每次提取时间分别为60min、50min、 40min，合并提取液，浓缩，过滤，干燥，得当归藤提取物。
[0036] 实施例2 :当归藤总黄酮的制备
[0037] 取10kg当归藤粉碎，加入浓度为60%的乙醇微波提取3次，每次乙醇用量分别为 药材总重量的15倍、10倍、8倍，每次提取时间分别为2〇1^11、15111111、1〇111111，合并提取液，浓 缩，过滤，滤液过ADS17树脂吸附，用浓度为80 %的乙醇洗脱，洗脱液浓缩、真空干燥，得当 归藤总黄酮。
[0038] 以芦丁作对照品，