，SPL7013、甲硝唑和利福 昔明的MIC比在基线处观察到的MIC增加了几倍。到第9代时，SPL7013的MIC已经从1 mg/mL增加到了 64 mg/mL (64倍），而对于甲硝唑，到第7代时MIC从4 Pg/mL增加到了 >128 Pg/mL (>64倍）。到第9代时，利福昔明的MIC从0· 06 Pg/mL增加到了 128 Pg/mL (>2000倍）。相反，在传代过程中对克林霉素没有显著的MIC增加。对短小活动弯曲杆菌 ATCC 35241 (MMX 4145)在传代时观察到相似结果，除了对利福昔明的耐药性发展并不明 显以外。到第9代时，SPL7013的MIC从8 mg/mL增加到了 128 mg/mL (16倍），而甲硝唑 的MIC到第5代时从8 mg/mL增加到了 >128 mg/mL (>16倍）。在传代过程中利福昔明和 克林霉素没有观察到明显的MIC增加。
[0181] 对于嗜酸乳杆菌MMX 5716, SPL7013的MIC到第4代时增加了 8倍，从2 mg/mL到 16 mg/mL，而对于利福昔明，MIC到第9代时增加了 64倍，从I Pg/mL到64 Pg/mL。克林霉 素的MIC在传代过程中保持不变。
[0182] 在二路普雷沃尔菌MMX 3447传代过程中，该微生物没有在超过5代后保持存活。 到第5代，对SPL7013或甲硝唑没有观察到超过基线MIC两倍的增加。对于利福昔明，到第 5 代时 MIC 增加了 4 倍，从 0· 03 Pg/mL 到 0· 12 Pg/mL。
[0183] 小结 总之，在用目标细菌性病原体和嗜酸乳杆菌连续传代时，SPL7013的MIC存在一些增 加。MIC的增加在那些使用甲硝唑和利福昔明的微生物中也是显著的，且通常为跨数量级 的更大并比用SPL7013观察到的更早地发展。在连续传代中对于克林霉素没有明显的耐受 性。
[0184] 除短小活动弯曲杆菌以外，SPL7013的MIC的增加通过对MIC的再次试验被进行 了确认并表现为稳定，其在无药物传代后保持上升。在评价推定的短小活动弯曲杆菌突变 体中，对利福昔明和SPL7013在连续传代过程中观察到的MIC在MIC再次试验过程中没有 确认。该结果表明短小活动弯曲杆菌突变体不是在用SPL7013或利福昔明连续传代过程 中产生的，且对于SPL7013这看上去部分由于在基线和早期传代过程中观察到的人为的低 MIC。相反，对甲硝唑的短小活动弯曲杆菌突变体在连续传代过程中没有出现且是稳定的。
[0185] 在所评价的比较试剂中，没有明显的SPL7013来源突变体的共耐受，表明对 SPL7013降低的敏感性不影响靶向细菌中已知的、被良好表征的途径的试剂的活性。
[0186] 实施例9:腺病毒性感染的体内治疗 在全身麻醉和角膜划痕后，NZW雌性家兔每只眼睛接种50 μ 1 3.0 X IO7 PFU/mL (1.5 x IO6 PFU/眼）的Ad5 McEwen。接种后约3小时，从泪膜和角膜和结膜表面取拭样（swab) 至含有I mL结果（outgrowth)培养基的管中，并培养用于腺病毒。
[0187] 然后将家兔分为3组：3% SPL7013 (n=5)、载体（n=5)和0. 5%西多福韦的盐水溶 液作为阳性对照（n=4)。在第1天开始，对动物的每只眼睛用37 μ L药物每天处理8次， 或37 μ L对照每天两次。处理后1小时从泪膜和角膜和结膜表面取拭样。
[0188] 抗病毒耐受性： 在第 3 天，使用 Draize 评分法（Draize, J. Η·，Woodward, G. and Calvery, Η. 0· Methods for the study of irritation and toxicity of articles applied topically to the skin and mucous membranes. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1944; 82:377-390.) 评价了所有眼睛的制剂视觉耐受性，并使用最大平均总分数（Kay JH，Calandra JC. Interpretation of eye irritation tests. JlSbc Cos 1962; 13:281-289)进行了 解读。所有3组都打分为最小刺激。
[0189] 总而言之，SPL7013未表现出显著的眼部毒性。该大分子具有低毒性且可以低刺 激或无刺激被给药至眼部。
[0190] 抗病毒效力： 使用标准噬斑分析在A549肺癌细胞单层上测定了 Ad5滴度。眼睛培养物被稀释并接 种至A549单层，病毒吸附3小时。吸附后，对每个孔加入I mL培养基加0.5%甲基纤维素， 37°C下在5% CO2-水蒸汽环境中将平板孵育7天，然后用0. 5%结晶紫染色，并对噬斑进行 计数。
[0191] 表 12 Ad5 的 PFU
SPL7013在接受第一剂量8小时内作用，早于西多福韦，且在减少病毒滴度方面比西多 福韦更有效。
【主权项】
1. 一种治疗或预防受试者眼部微生物感染的方法，包括对眼睛局部施用有效量的一种 大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至 最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。2. 根据权利要求1的方法，其中微生物感染是结膜炎。3. 根据权利要求2的方法，其中结膜炎是病毒或细菌性结膜炎。4. 根据权利要求3的方法，其中结膜炎是病毒性结膜炎。5. 根据权利要求4的方法，其中病毒性结膜炎由腺病毒导致。6. 根据权利要求4的方法，其中腺病毒是腺病毒亚型11、8、19、37、53、54、56或64。7. 根据权利要求6的方法，其中腺病毒是腺病毒亚型19或37。8. 根据权利要求2-6任一项的方法，其中结膜炎选自流行性角膜结膜炎、急性流行性 结膜炎、咽结膜热、红眼、角膜结膜炎、游泳池结膜炎、粒状结膜炎和急性出血性结膜炎。9. 根据权利要求1-8任一项的方法，其中受试者是人类。10. 根据权利要求9的方法，其中所述人类佩戴或一直佩戴隐形眼镜。11. 根据权利要求1-10任一项的方法，其中大分子被给药多于7天。12. -种缓解、减轻或停止受试者眼部微生物感染的一种或多种症状发展的方法，包括 对眼睛局部施用有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子， 该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或 多个含磺酸或磺酸盐部分。13. 根据权利要求12的方法，其中症状是眼睛发红、瘙痒、刺激、畏光、疼痛、视力障碍、 肿胀、流眼水和排出中的一种或多种。14. 根据权利要求12或权利要求13的方法，其中该方法减轻了一种或多种症状的严重 程度或持续时间。15. 根据权利要求12或权利要求13的方法，其中该方法终止了一种或多种症状的发 展。16. -种治疗或预防患者眼部同时或无差别的病毒和/或细菌性感染的方法，包括对 眼睛局部施用有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该 1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个 含磺酸或磺酸盐部分。17. 根据权利要求16的方法，其中病毒性感染由选自腺病毒和疱疹病毒的病毒导致， 且细菌性感染由选自奈瑟氏菌属、衣原体属、葡萄球菌属、链球菌属、假单胞菌属和嗜血杆 菌属的细菌导致。18. -种预防或减少在第一只眼睛患有微生物感染的受试者的第二只眼睛中微生物感 染严重程度的方法，包括对第二只眼睛局部施用有效量的一种大分子或其药学上可接受的 盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一 个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。19. 一种减少眼部微生物感染在有眼部微生物感染风险的群体中传播的方法，包括对 群体中至少一个受试者的至少一只眼睛局部施用有效量的一种大分子或其药学上可接受 的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的 一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。20. 根据权利要求19的方法，其中每天对受试者给药树枝状分子多于7天。21. -种治疗或预防受试者结膜炎的方法，包括多于7天对受试者的眼睛局部施用有 效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子 具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐 部分。22. -种预防或减少在新生儿经过母亲产道的过程中将细菌性或病毒性感染传递至新 生儿眼睛的可能性的方法，包括对母亲的产道给药包含有效量的一种大分子或其药学上可 接受的盐的局部用制剂，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面 一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。23. 组合物，包括大分子或其药学上可接受的盐，其包括具有连接至最外面一代树枝状 分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分的1-8代树枝状分子和至 少一种提供与眼部相容的PH和渗透压的药学可接受载体。24. 根据权利要求23的组合物，其中组合物不包含额外的防腐剂。25. -种隐形眼镜溶液，包括大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分 子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面氨基的一个 或多个含磺酸或磺酸盐部分。26. -种杀微生物剂递送系统，包括隐形眼镜和大分子或其药学上可接受的盐，其包括 1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个 表面氨基的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。27. 权利要求23-26任一项的组合物、隐形眼镜溶液或递送系统，用于治疗或预防受试 者眼部微生物感染。28. -种用于治疗或预防受试者眼部微生物感染的药物组合物，包含大分子或其药学 上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子作为主要成分，该1-8代树枝状分子具有连接至最 外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。29. 根据权利要求28的组合物，其中微生物感染是结膜炎。30. 根据权利要求29的组合物，其中结膜炎是病毒或细菌性结膜炎。31. 根据权利要求30的组合物，其中结膜炎是病毒性结膜炎。32. 根据权利要求31的组合物，其中病毒性结膜炎由腺病毒导致。33. 根据权利要求31的组合物，其中腺病毒是腺病毒亚型11、8、19、37、53、54、56或 64。34. 根据权利要求33的组合物，其中腺病毒是腺病毒亚型19或37。35. 根据权利要求29-33任一项的组合物，其中结膜炎选自流行性角膜结膜炎、急性 流行性结膜炎、咽结膜热、红眼、角膜结膜炎、游泳池结膜炎、粒状结膜炎和急性出血性结膜 炎。36. 根据权利要求28-36任一项的组合物，其中受试者是人类。37. 根据权利要求36的组合物，其中所述人类佩戴或一直佩戴隐形眼镜。38. 根据权利要求28-37任一项的组合物，其中组合物给药多于7天。39. -种用于缓解、减轻或停止受试者眼部微生物感染一种或多种症状发展的药物组 合物，包括大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子作为主要成分，该1-8 代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含 磺酸或磺酸盐部分。40. 根据权利要求40的组合物，其中症状是眼睛发红、瘙痒、刺激、畏光、疼痛、视力障 碍、肿胀、流眼水和排出中的一种或多种。41. 根据权利要求40或权利要求41的组合物，其中组合物用于减轻一种或多种症状 的严重程度或持续时间。42. 根据权利要求12或权利要求13的组合物，其中组合物用于终止一种或多种症状 的发展。43. -种用于治疗或预防受试者眼部同时或无差别的病毒和/或细菌性感染的药物组 合物，包括大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子作为主要成分，该1-8 代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含 磺酸或磺酸盐部分。44. 根据权利要求43的组合物，其中病毒性感染由选自腺病毒和疱疹病毒的病毒导 致，且细菌性感染由选自奈瑟氏菌属、衣原体属、葡萄球菌属、链球菌属、假单胞菌属和嗜血 杆菌属的细菌导致。45. -种用于对第二只眼睛局部施用以预防或减少在第一只眼睛患有微生物感染的受 试者的第二只眼睛中微生物感染严重程度的药物组合物，包括一种大分子或其药学上可接 受的盐，其包括1-8代树枝状分子作为主要成分，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一 代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。46. -种用于减少眼部微生物感染在有眼部微生物感染风险的群体中传播的药物组合 物，包括大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子作为主要成分，该1-8代 树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺 酸或磺酸盐部分。47. 根据权利要求46的组合物，其中树枝状分子用于对群体中至少一个受试者每天施 用多于7天。48. -种用于多于7天给药以治疗或预防受试者结膜炎的药物组合物，包括大分子或 其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子作为主要成分，该1-8代树枝状分子具有连 接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。49. 一种用于预防或减少在新生儿经过母亲产道的过程中将细菌性或病毒性感染传递 至新生儿眼睛的可能性的药物组合物，包括有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐， 其包括1-8代树枝状分子作为主要成分，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝 状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。
【专利摘要】通过局部对眼睛给药有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其具有一个或多个连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的含磺酸或磺酸盐部分的1-8代树枝状分子，而治疗或预防了受试者眼部微生物感染。在这些方法中含有大分子或盐的组合物是有用的。
【IPC分类】A61P27/02, A61K31/198, A61K31/255
【公开号】CN105007910
【申请号】CN201380059141
【发明人】贾辛丝·金凯德·费尔利, 科林·保罗·巴雷特, 杰里米·罗伯特·亚瑟·保罗
【申请人】星法马有限公司
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2013年9月13日
【公告号】CA2884897A1, EP2895161A1, US20150238557, WO2014043576A1