胞悬液,96孔板中每 孔加入100UL细胞悬液（每孔5X103个细胞）；将96孔板置于37°C，5% C02培养箱中培 养24小时；然后用完全培养基稀释药物至所需浓度，每孔加入100 y L相应的含药培养基， 同时设立溶媒对照组，阳性对照组；将96孔板置于37°C，5% C02培养箱中培养72小时；然 后每孔加入20ii L MTT(5mg / ml)，在培养箱继续培养4小时；弃去培养基，每孔加入150ii L DMSO溶解，摇床10分钟轻轻混匀；在A =490nm，酶标仪读出每孔的0D值，计算抑制率。
[0099] 三、实验结果
[0100] 能显著抑制人卵巢癌细胞A2780的增殖，在浓度为50 ii g / ml的剂量下，对人卵 巢癌细胞A2780的抑制率达到66. 7%~75. 8%，其IC50为30ii g / ml左右。说明该注射 液具有潜在的抗卵巢癌的活性，且具有较好的量效关系。
[0101] 能显著抑制人子宫内膜癌细胞的增殖，在浓度为50i! g / ml的剂量下，抑制率达 到 62. 10~75. 38%，其IC50为30 ii g / ml左右说明该注射液有较好的抗子宫内膜癌的作 用，并呈现较好的量效关系。
[0102] 实验例4
[0103] 本发明口服液（实施例7)治疗卵巢囊肿
[0104] 诊断标准：采用三甲医院确诊的卵巢囊肿病人（诊断标准符合《中药新药临床研 究指导原则》的规定）随机分为两组。
[0105] 以服用本发明口服液（实施例2)的20卵巢囊肿患者做为治疗组，其余20人服用 CN101647984A【具体实施方式】中的丸剂为对照组。
[0106] 治疗标准：基本症状全部消失为治愈，基本症状明显缓解（比如囊肿消失）为显 效，症状有所缓解（疼痛减轻）为有效，症状没有改变为无效。
[0107] 疗效的统计：治疗三天后观察，治疗组全部20名患者中，治愈6人，治愈率为30%; 显效为3人，占15%;有效为6人，占30%。全部患者在治疗中未发现任何不适症状。而 对照组全部20名患者中，治愈3人，治愈率为15% ;显效为2人，占10% ;有效为5人，占 25%，无效10人，占50%。比较可知，本发明药物疗效明显优于对照组药物。临床试验过程 中，对照组中有4例患者感胃脘不适，不思饮食，治疗组未发现严重不良反应。
[0108] 比较实验例1
[0109] 比较例1
[0110] 诊断标准：采用三甲医院确诊的子宫肌瘤病人（诊断标准和疗效判断标准符合 《中药新药临床研究指导原则》的规定）随机分为两组。
[0111] 以服用本发明胶囊剂（实施例1)的90子宫肌瘤患者做为治疗组，每次5粒，每日 3次，经期停服。对照组30例子宫肌瘤患者服用理冲散结丸，每次1丸，每日3次，经期停 月艮。均于治疗前后检测相关指标。结果表明，治疗组的总有效率为74. 73%，对照组的总有 效率为56. 67%，P < 0. 01，差异有显著性意义，治疗组疗效优于对照组，结果见下表。
[0112] 两组患者治疗后总疗效比较
[0113]
[0114] 在中医症状疗效方面，治疗组对治疗经期延长、月经量多、乳房胀痛、舌象异常和 脉象异常的疗效优于对照组，P均< 〇. 05,差异有显著性。
[0115] 在体征疗效方面，治疗组在治疗大于10cm3的子宫肌瘤疗效优于对照组；治疗不 同部位的子宫肌瘤，两组疗效无差异性；子宫肌瘤缩瘤效果比较中，结果见下表 ：
[0116] 两组患者治疗前后子宫肌瘤缩瘤效果比较
[0117]
[0118] 治疗组治疗前后子宫肌瘤大小的差值自身对照比较，P< 0.01，差异性有极显著 性，说明治疗组有缩小子宫肌瘤的作用，两组治疗后肌瘤减少差值比较，P< 0.01，说明治 疗组缩小子宫肌瘤的疗效明显优于对照组。
[0119] 检测指标疗效比较发现，两组治疗前后血常规疗效差异无显著性意义；但治疗组 对血液流变学指标中血浆粘度、血沉、红细胞聚集指数有较好的疗效，差异有显著性。
[0120] 临床试验过程中，对照组中有5例患者感轻微胃脘不适，治疗组未发现严重不良 反应。
[0121] 比较实施例2
[0122] 对人乳腺癌细胞的抑制率及IC50值
[0123] 1、实验材料：96孔板购自Costar公司；RMPI1640培养基购自Gibco公司；DMEM培 养基购自Gibco公司；McCoy' s5A培养基购自SIGMA公司；新生牛血清购自杭州四季青公 司；喔唑蓝（MTT)购自Amresco公司；DMS0购自Amresco公司。
[0124] 2、实验仪器：超净工作台，苏州净化型号SW-CJ-1FD ;C02培养箱SANYO型号： XD-101 ;酶标仪 BIO-RAD Model NO. 550Serial N0. 16971。
[0125] 3、受试药物及处理方法：第一组：生黄芪15、生山药15、当归6、生三棱10、生莪术 10、知母10、生桃仁10、生鸡内金10 ;第二组：生黄芪15、生山药15、当归10、生三棱9、生莪 术9、知母10、生桃仁9、生鸡内金10 ;第三组：生黄芪30、生山药30、当归12、三棱10、莪术 10、知母6、桃仁4. 5、鸡内金3 ;第四组：党参、黄芪、山药、牡蛎、薏苡仁各4500g，浙贝母、天 花粉、鸡内金、三棱、莪术、鳖甲、桃仁、知母、丹参各3000g，白术、桔梗、当归、水蛭、川续断各 1800g，甘草900g。采用DMSO溶解，给药前用完全培养基配制成所需浓度。阳性对照药物紫 杉醇注射液（厂家：海口市制药厂有限公司；批号=080502)。
[0126] 4、肿瘤细胞株：人卵巢癌细胞A2780由南京凯基生物科技发展有限公司提供。
[0127] 二、实验方法
[0128] 实验步骤为：细胞消化、计数、制成浓度为5 X104个/ml的细胞悬液,96孔板中每 孔加入100UL细胞悬液（每孔5X103个细胞）；将96孔板置于37°C，5% C02培养箱中培 养24小时；然后用完全培养基稀释药物至所需浓度，每孔加入100 y L相应的含药培养基， 同时设立溶媒对照组，阳性对照组；将96孔板置于37°C，5% C02培养箱中培养72小时；然 后每孔加入20ii L MTT(5mg /ml)，在培养箱继续培养4小时；弃去培养基，每孔加入150ii L DMS0溶解，摇床10分钟轻轻混匀；在A =490nm，酶标仪读出每孔的0D值，计算抑制率。
[0129] 三、实验结果
[0130] 第一组能显著抑制人卵巢癌细胞A2780的增殖，在浓度为50 y g / ml的剂量下， 对人卵巢癌细胞A2780的抑制率达到63. 3%~69. 8%。
[0131] 第二组能显著抑制人卵巢癌细胞A2780的增殖，在浓度为50 ii g / ml的剂量下， 对人卵巢癌细胞A2780的抑制率达到74. 6%~82. 3%。
[0132] 第三组能显著抑制人卵巢癌细胞A2780的增殖，在浓度为50 y g /ml的剂量下， 对人卵巢癌细胞A2780的抑制率达到75. 6%~78. 7%，其IC50为20iig /ml左右。
[0133] 第四组能显著抑制人卵巢癌细胞A2780的增殖，在浓度为50 y g / ml的剂量下， 对人卵巢癌细胞A2780的抑制率达到50. 7%~56. 3%。
[0134] 比较可知，第一组、第二组和第三组明显优于第四组。
【主权项】
1. 一种治疗妇科肿瘤的中药组合物，其特征在于由如下重量配比的原料药制成：黄芪 10-30、山药12-30、当归6-12、三棱5-10、莪术3-10、知母6-12、桃仁4. 5-9、鸡内金3-10。2. 如权利要求1所述的中药组合物，其特制在于由如下重量份的原料药制成：黄芪 12-25、山药12-20、当归8-12、三棱6-10、莪术5-10、知母8-12、桃仁5-9、鸡内金4-10。3. 如权利要求2所述的中药组合物，其特制在于由如下重量份的原料药制成：黄芪 14-22、山药14-20、当归8-12、三棱7-10、莪术6-10、知母8-12、桃仁6-9、鸡内金6-10。4. 如权利要求3所述的中药组合物，其特制在于由如下重量份的原料药制成：黄芪18、 山药16、当归10、三棱8、莪术7、知母10、桃仁7、鸡内金7 ;或者黄芪15、山药15、当归10、 三棱9、莪术9、知母10、桃仁9、鸡内金10 ;或者黄芪22、山药20、当10归、三棱7、莪术6、 知母8、桃仁6、鸡内金6 ;或者黄芪14、山药14、当归8、三棱10、莪术10、知母12、桃仁9、鸡 内金10。5. 如权利要求4所述的中药组合物，其特征在于所述的所述的黄芪是生黄芪、所述的 山药是生山药、所述的三棱是生三棱、所述的莪术是生莪术、所述的桃仁是生桃仁和/或所 述的鸡内金是生鸡内金6. -种制备如权利要求1-5任一所述中药组合物的方法，其特制在于：溶剂提取部分 或全部原料药，浓缩，去除杂质，干燥后，再按常规方法，加入常规辅料，制备成各种临床可 接受的剂型。7. 如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述溶剂为水、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、 甲醇的一种或多种；在溶剂提取之前，对含有挥发油的药材，提取挥发油；所述提取挥发油 优选为水蒸汽蒸馏、超临界提取挥发油。8. 如权利要求7所述的方法，其特征在于：将挥发油用环糊精包合后用于制备各种临 床可接受的剂型。9. 权利要求1-5任一所述中药组合物在用于制备治疗妇科肿瘤药物中的应用。10. 如权利要求8所述的应用，其特制在于是用于制备治疗子宫肌瘤药物中的应用、用 于制备治疗卵巢囊肿药物中的应用、用于制备治疗乳腺瘤药物中的应用、用于制备治疗腹 腔肿块药物中的应用或者用于制备治疗活血化瘀药物中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种用于治疗妇科肿瘤的中药组合物，尤其是治疗子宫肌瘤的中药组合物，同时涉及该组合物的制备方法和制药用途。所述中药组合物由黄芪、山药、当归、三棱、莪术、知母、桃仁、鸡内金制成，能有效治疗妇科肿瘤和/或相关疾病，如子宫肌瘤等，能在较少药物的基础上发挥同样有效的治疗效果，并且，其药物配比更加合理。
【IPC分类】A61K36/9066, A61P35/00, A61K35/37
【公开号】CN105012853
【申请号】CN201410150721
【发明人】李冬华
【申请人】李冬华
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2014年4月16日