，得胶束溶液。将胶束溶液过0. 22Mm微孔滤膜后，冷冻干燥得胶束粉 末。然后用IOmL硼酸盐缓冲液分散溶解胶束粉末，加入防腐剂苯扎氯铵、等渗调节剂氯化 钠，PH调节为7. 4,无菌过滤分装即可。激光粒度仪测得姜黄素胶束平均粒径为97nm，分散 指数TOI=O. 073,分散均一性良好。将该姜黄素胶束滴眼剂在室温条件下保存5个月，姜黄 素从胶束中渗漏量小于10%。
[0023] 实验效果例1:本发明的0. 5%姜黄素胶束滴眼液有效性实验。
[0024] 实验药物：0. 5%姜黄素胶束滴眼液(实施例1制备)。
[0025] 对照药物：未用地喹氯铵修饰的0. 5%姜黄素胶束滴眼液(除在制备过程中未加入 地喹氯铵外，余同实施例1制备方法)。
[0026] 实验动物与实验方法：因STZ诱导的糖尿病小鼠作为较公认的类似于人非增殖期 糖尿病视网膜病变模型，本部分内容采用此模型进行研究。选用C57BL/6小鼠，雄性，6-8周 龄，体重18~25克(购买自北京维通利华实验动物技术有限公司）。动物随机分为两组，一组 采用新鲜配置的柠檬酸盐缓冲液（pH4. 5)配制STZ溶液后对小鼠进行腹腔注射，连续注射 5天，在最后一次(第五次注射)后的第8天(一周后)对每小鼠测量血糖，连续测量3天，STZ 注射组血糖值大于300mg/dL(16. 7mmol/L)认为I型糖尿病模型成功。在12周实验取材 时，对小鼠进行同样的体重和血糖监测，符合各参数指标和取组织材料的条件的小鼠用于 实验。另一组注射不含STZ的柠檬酸缓冲液作为正常对照。实验结果表明，STZ腹腔注射 建模的小鼠逐渐表现出多饮、多食、多尿、体重下降等糖尿病典型症状，其血糖稳定维持在 较高水平，体重较正常小鼠偏低(表1 )，表明造模成功。
[0027] 小鼠成模12周后行角膜上皮刮除术建立糖尿病角膜/神经损伤模型，分别给予 〇. 5%姜黄素胶束滴眼液(实施例1制备)、未用地喹氯铵修饰的0. 5%姜黄素胶束滴眼液(除 在制备过程中未加入地喹氯铵外，余同实施例1制备方法)进行滴眼药物治疗，研究发现(如 图1，及其对图1进行定量化分析而得到的图2):0. 5%姜黄素胶束滴眼液(实施例1制备)目艮 表滴眼给药有效促进模型小鼠角膜上皮和神经的修复，疗效优于未用地喹氯铵修饰的0. 5% 姜黄素胶束滴眼液(除在制备过程中未加入地喹氯铵外，余同实施例1制备方法）眼表滴眼 给药。
[0028] 表1正常和糖尿病模型小鼠在取样点时体重及血糖检测土SD，n=40)
实验效果例2:0. 5%姜黄素胶束滴眼液的细胞毒性实验。
[0029] 实验药物：0. 5%姜黄素胶束滴眼液(实施例1制备)。
[0030] 对照药物：未用地喹氯铵修饰的0. 5%姜黄素胶束滴眼液(除在制备过程中未加入 地喹氯铵外，余同实施例1制备方法)、相同浓度的地喹氯铵溶液。
[0031] 实验方法：采用人角膜上皮细胞系进行实验。24孔培养板中每孔接种2X104个 细胞，使用含10%胎牛血清的DMEM/F12 (1:1)培养液培养48小时后，更换为无血清培养液 用于下游实验。用含10%胎牛血清的培养液将HCECs配成单个细胞悬液，以1000~3000 个细胞/孔的密度接种到96孔板，培养24小时后加入空白滴眼液、0. 5%姜黄素胶束滴眼 液(实施例1制备)、未用地喹氯铵修饰的0. 5%姜黄素胶束滴眼液（除在制备过程中加入地 喹氯铵外，余同实施例1制备)、相同浓度的地喹氯铵溶液进行处理。细胞上述溶液后孵育4 小时后，弃去原培养液，换为含0. 5mg/mlMTT的无血清培养基，继续孵育4小时，弃掉上清， 每孔加150ulDMS0,振荡10分钟以充分溶解细胞中的蓝紫色结晶物，酶联免疫检测仪测定 490nm处的光吸收值。
[0032] 显然，从图3中可以发现，本发明的0. 5%姜黄素胶束滴眼液、对照实验的未用地喹 氯铵修饰的0. 5%姜黄素胶束滴眼液(除在制备过程中未加入地喹氯铵外，余同实施例1制 备）均没有明显的细胞毒性，而相同浓度的地喹氯铵溶液则表现出显著的细胞毒性。
[0033] 这是因为：地喹氯铵具有明显的细胞毒性，但是地喹氯铵分子结构特点为中间10 个碳原子的烃基(输水端)，烃基两端连接有季铵盐结构的亲水基，在水溶液中和聚乙烯己 内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇形成互补性镶嵌的胶束结构，小分子的地喹氯铵填充于 大分子的聚乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯_聚乙二醇胶束结构中，从而降低了其游离型药 物分子细胞毒性。
[0034] 实验效果例3:0. 5%姜黄素胶束滴眼液的贮存稳定性。
[0035] 实验药物：0.5%姜黄素胶束滴眼液(实施例1制备)。
[0036] 对照药物：未用地喹氯铵修饰的0.5%姜黄素胶束滴眼液(除在制备过程中未加入 地喹氯铵外，余同实施例1制备方法)。
[0037] 实验方法：制备0. 5%姜黄素胶束滴眼液(实施例1制备）和未用地喹氯铵修饰的 〇.5%姜黄素胶束滴眼液（除在制备过程中未加入地喹氯铵外，余同实施例1制备)，分别封 装于2ml安瓶中避光25度保存，定期取滴眼液，采用0. 22ym微孔滤膜过滤，高效液相色谱 法测定过滤前后溶液中的姜黄素药物浓度，计算其贮存稳定性。
[0038] 显然，从图4中可以发现，本发明的0. 5%姜黄素胶束滴眼液相比于对照实验的未 用地喹氯铵修饰的0. 5%姜黄素胶束滴眼液(除在制备过程中未加入地喹氯铵外，余同实施 例1制备方法)贮存稳定性显著提高。这是因为：地喹氯铵分子结构特点为中间10个碳原子 的烃基(输水端)，烃基两端连接有季铵盐结构的亲水基，在水溶液中和聚乙烯己内酰胺-聚 乙酸乙烯酯-聚乙二醇形成互补性镶嵌的胶束结构，小分子的地喹氯铵填充于大分子的聚 乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇胶束结构中，提高了胶束的致密结构，从而提高了 胶束载姜黄素在水溶液中的稳定性。
[0039] 上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，并不能以此限制本发明的保护范 围。凡根据本发明精神实质所做的等效变换或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。
【主权项】
1. 一种姜黄素胶束滴眼液，包括姜黄素为主药以及防腐剂、等渗调节剂，其特征在于还 包括聚乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇共聚物为药物辅料，地喹氯铵为线粒体靶 向修饰剂和稳定剂，所述姜黄素主药和聚乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇共聚物 药物辅料质量比在1:12-1:20之间，所述地喹氯铵和聚乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚 乙二醇共聚物药物辅料质量比在1:20-1:40之间。2. 如权利要求1所述的姜黄素胶束滴眼液，其特征在于所述聚乙烯己内酰胺-聚乙 酸乙烯酯-聚乙二醇共聚物中聚乙烯己内酰胺、聚乙酸乙烯酯、聚乙二醇三者的质量比为 57:30:13,共聚物总分子量 100000-120000。3. -种如权利要求1所述的姜黄素胶束滴眼液的制备方法，其特征在于包括以下步 骤：将姜黄素主药、地喹氯铵和聚乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇共聚物药物辅料 溶解在无水乙醇中，通过40°C水浴旋转真空蒸发有机溶剂在容器内部均匀成膜，再加入蒸 馏水以充分洗膜，水浴超声得胶束溶液，过滤冷冻干燥后得姜黄素胶束的干粉制剂，再分散 溶解于无菌缓冲液中，使得姜黄素最终质量百分浓度为〇. 5%，最后加入防腐剂、pH调节剂， 等渗调节剂之后无菌过滤分装即可。4. 如权利要求3所述的姜黄素胶束滴眼液的制备方法，其特征在于制得的姜黄素胶束 的粒径范围在70-150nm之间。5. 如权利要求3所述的姜黄素胶束滴眼液的制备方法，其特征在于所述缓冲液为常用 磷酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液，pH值为7. 4。
【专利摘要】本发明公开了一种姜黄素胶束滴眼液，包括姜黄素为主药以及防腐剂、等渗调节剂，其特征在于还包括聚乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇共聚物为药物辅料，地喹氯铵为线粒体靶向修饰剂和稳定剂，所述姜黄素主药和聚乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇嵌段共聚物药物辅料质量比在1:12-1:20之间，所述地喹氯铵和聚乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇共聚物药物辅料质量比在1:20-1:40之间。本发明制备的姜黄素胶束滴眼液，给药浓度可达5mg/ml，且胶束粒径小，分布范围均一，药物稳定性良好。不但降低了给药刺激性、还提高了角膜对药物的吸收、降低了给药浓度、延长了药物作用时间、减少了给药次数、提高了患者的顺从性，具有很好的经济性。
【IPC分类】A61K9/107, A61P27/02, A61K31/12, A61P3/10
【公开号】CN105030669
【申请号】CN201510389806
【发明人】吴祥根, 郭传龙, 李梦双, 史伟云
【申请人】山东省眼科研究所
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年7月6日