一种敷料及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医用材料技术领域，具体涉及一种敷料及其制备方法，尤其涉及一种 治疗糖尿病足溃疡的敷料及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 随着社会进步和人们生活、饮食方式的转变，糖尿病发病率逐年增高。中国近期一 项流行病学研究结果表明，中国的糖尿病患病率已达9. 7%，高于世界平均水平6. 4%。长 期血糖增高，大血管、微血管受损并危及心、脑、肾、周围神经、眼睛、足等。其中，糖尿病足是 糖尿病最严重的并发症和非外伤性截肢的主要原因。随着我国人口老龄化的发展，糖尿病 足发病率逐年增高，处理不当有可能会截肢或死亡，而85%截肢起因于溃疡。糖尿病足溃疡 的发生使糖尿病患者生活质量降低，住院时间延长，给社会和家庭带来了巨大的经济负担， 因此需对糖尿病足溃疡的防治进行综合评价，及早预防和治疗。
[0003] 糖尿病足溃疡的治疗主要经过3个步骤：清创，抗生素治疗，必要时血管重建。目 前，随着技术的发展和人们对糖尿病足溃疡认识的增加，越来越多的方法应用于临床。这些 方法更快地促进伤口的愈合，降低了截肢率，改善了患者的生活质量。
[0004] 目前临床上一般采用药物、血管搭桥、介入手术、超声消融等方法治疗糖尿病足， 但是均具有一定的局限性，难以取得令人满意的疗效，因此迫切需要寻求新的治疗方法。
[0005] 干细胞是一类具有自我复制能力和分化能力的多潜能细胞。在一定条件下可以分 化成多种功能细胞，医学界称为"万用细胞"，因此备受关注。已有人采用干细胞的基因修饰 以及细胞因子的联合运用等多种手段治疗糖尿病下肢血管病变，并表现出各自的优越性。 而干细胞移植治疗中，虽然已证实骨髓间充质干细胞可以通过血管重建或介入方法治疗糖 尿病足，但是采集外周血或骨髓干细胞风险较大、操作复杂，其自体干细胞数量、增值分化、 黏附和成血管能力均较低，伤口愈合速度慢。
【发明内容】
[0006] 有鉴于此，本发明针对现有技术的缺陷提供一种治疗糖尿病足溃疡敷料及其制备 方法，本发明所述敷料能促进细胞的增殖，促进伤口快速愈合。
[0007] 本发明提供了一种敷料，由细胞-支架混合液和生长因子溶液组成，其中所述细 胞-支架混合液由支架材料溶液和人脐带间充质干细胞悬液组成；所述生长因子溶液包括 生长因子EGF和生长因子hSCGF。
[0008] 其中，在一些实施方案中，所述细胞-支架混合液与生长因子溶液的体积比为 (10-20):1〇
[0009] 在一些具体实施例中，所述细胞-支架混合液与生长因子溶液的体积比为10:1。 在一些具体实施例中，所述细胞-支架混合液与生长因子溶液的体积比为20:1。在另一些 具体实施例中，所述细胞-支架混合液与生长因子溶液的体积比为15:1。
[0010] 在一些实施方案中，所述细胞-支架混合液中所述支架材料溶液和人脐带间充质 干细胞悬液的体积比为（5-7) : (1-3)。
[0011] 在一些具体实施例中，所述细胞-支架混合液中所述支架材料溶液和人脐带间充 质干细胞悬液的体积比为7: 3。在一些具体实施例中，细胞-支架混合液中所述支架材料溶 液和人脐带间充质干细胞悬液的体积比为5:1。在另一些具体实施例中，细胞-支架混合液 中所述支架材料溶液和人脐带间充质干细胞悬液的体积比为5:3。
[0012] 在一些实施方案中，所述细胞-支架混合液中所述人脐带间充质干细胞悬液中人 脐带间充质干细胞的细胞浓度为（1-10) X IO6个/mL。
[0013] 在一些具体实施例中，所述细胞-支架混合液中所述人脐带间充质干细胞悬液中 人脐带间充质干细胞的细胞浓度为IX IO6个/mL。在一些具体实施例中，所述细胞-支架 混合液中所述人脐带间充质干细胞悬液中人脐带间充质干细胞的细胞浓度为IOX IO6个/ mL。在另一些具体实施例中，所述细胞-支架混合液中所述人脐带间充质干细胞悬液中人 脐带间充质干细胞的细胞浓度为5 X IO6个/mL。
[0014] 在一些实施方案中，本发明所述敷料中所述支架材料溶液由DMEM/F12培养基、I 型鼠胶原、壳多糖、糖胺聚糖、海藻糖和戊二醛组成。
[0015] 在一些优选实施方案中，所述支架材料溶液中所述I型鼠胶原占支架材料溶液 0. 8v/v%~I. 2v/v%，壳多糖占支架材料溶液lv/v%~3v/v%，糖胺聚糖占支架材料溶 液4v/v%~6v/v%，海藻糖占支架材料溶液lv/v%~5v/v%，戊二醛占支架材料溶液Ov/ v%~0. 6v/v%，余量为DMEM/F12培养基。
[0016] 在一些具体实施例中，所述支架材料溶液中所述I型鼠胶原占支架材料溶液 1. Ov/v%，壳多糖占支架材料溶液2v/v%，糖胺聚糖占支架材料溶液5v/v%，海藻糖占支 架材料溶液3v/v%，戊二醛占支架材料溶液0. 3v/v%，余量为DMEM/F12培养基。
[0017] 在一些具体实施例中，所述支架材料溶液中所述I型鼠胶原占支架材料溶液 0. 8v/v %，壳多糖占支架材料溶液3v/v %，糖胺聚糖占支架材料溶液4v/v %，海藻糖占支 架材料溶液5v/v%，戊二醛占支架材料溶液0. lv/v%，余量为DMEM/F12培养基。
[0018] 在另一些具体实施例中，所述支架材料溶液中所述I型鼠胶原占支架材料溶液 1. 2v/v%，壳多糖占支架材料溶液lv/v%，糖胺聚糖占支架材料溶液6v/v%，海藻糖占支 架材料溶液lv/v%，戊二醛占支架材料溶液〇. 6v/v%，余量为DMEM/F12培养基。
[0019] 按照本发明，所述支架材料溶液中所述糖胺聚糖的种类为本领域技术人员熟知的 任意一种糖胺聚糖即可，并无特殊的限制。本发明中所述糖胺聚糖优选6-硫酸软骨素、透 明质酸、肝素复合物中至少一种。
[0020] 在一些实施方案中，本发明所述敷料中所述生长因子溶液由生长因子EGF、生长因 子hSCGF、赋形剂和水组成。
[0021] 在一些优选实施方案中，本发明所述敷料中所述生长因子EGF占生长因子溶液的 Iwt % -5wt %，所述生长因子hSCGF占生长因子溶液的Iwt % -IOwt %，所述赋形剂占生长因 子溶液的5wt% -IOwt%，余量为水。
[0022] 在一些具体实施例中，所述生长因子溶液中所述生长因子EGF占生长因子溶液 的3wt%，所述生长因子hSCGF占生长因子溶液的5wt%，所述赋形剂占生长因子溶液的 8wt%，余量为水。
[0023] 在一些具体实施例中，所述生长因子溶液中所述生长因子EGF占生长因子溶液 的lwt%，所述生长因子hSCGF占生长因子溶液的10wt%，所述赋形剂占生长因子溶液的 5wt%，余量为水。
[0024] 在一些具体实施例中，所述生长因子溶液中所述生长因子EGF占生长因子溶液 的5wt%，所述生长因子hSCGF占生长因子溶液的lwt%，所述赋形剂占生长因子溶液的 IOwt %，余量为水。
[0025] 按照本发明，所述生长因子溶液中所述赋形剂的种类为本领域技术人员熟知的任 意一种赋形剂即可，并无特殊的限制。本发明中所述赋形剂优选甘露醇、海藻糖或蔗糖中至 少一种。
[0026] 本发明还提供了上述敷料的制备方法，包括
[0027] A)、将DMEM/F12、I型鼠胶原、壳多糖、糖胺聚糖、海藻糖及戊二醛混勾，调pH值至 7. 2-7. 4,形成支架材料溶液；
[0028] B)、按支架材料溶液与人脐带间充质干细胞悬液的体积比为（5-7) : (1-3)比例， 在支架材料溶液中加入人脐带间充质干细胞悬液并混匀得到细胞-支架混合液；
[0029]C)、将生长因子EGF、生长因子hSCGF、赋形剂和水混匀溶解得到生长因子溶液；
[0030] D)、将细胞-支架混合液与生长因子溶液按（10-20) : 1比例混合得到敷料。
[0031] 本发明还提供了一种3D敷料的制备方法，扫描糖尿病足溃疡表面图像获得溃疡 表面图像，根据图像建立3D敷料模具；利用已经建好的3D敷料模具，将本发明所述敷料一 层层喷涂在基材上，凝固后将敷料从基材上剥离，放在培养基中于37°C、5% CO2、饱和湿度 培养10天。
[0032] 在一些实施方案中，本发明所述3D敷料的制备方法中所述培养基为含10v/v% FBS和lv/v%双抗的DMEM/F12培养基。
[0033] 本发明提供了一种敷料及其制备方法。本发明所述敷料由细胞-支架混合液和生 长因子溶液组成；其中，所述细胞-支架混合液由支架材料溶液和人脐带间充质干细胞悬 液组成；所述生长因子溶液包括生长因子EGF和生长因子hSCGF。与现有技术相比，本发明 以人脐带间充质干细胞作为敷料的种子细胞采集简单，增值分化能力强，与生长因子共同 作用，能促进细胞的增值，促进伤口快速愈合。本发明所述敷料的制备方法操作简单，适合 规模化生产。本发明所述3D敷料的制备方法，采用3D打印和干细胞技术相结合的方式，制 备方法简单，制备得到适合不同的患者、患者的不同部位以及溃疡程度的3D敷料，具有个 性化优点，减少了免疫排斥反应，提高了组织相容性。
【附图说明】
[0034] 图1为实施例1中P3代人脐带间充质干细胞的细胞形态图，其中图a放大倍数为 40倍