上挑取单菌落接种到相应液体培养基中，细菌接种于营养肉汤，酵 母菌和霉菌接种于马铃馨液体培养基中，分别于37°C、28°C恒溫振荡培养箱中培养2地、 48-7化后作为原菌液，分别用灭菌生理盐水将各原菌液制成含菌数为10 6CFU/mL的菌悬液。 [0027] 所述的营养肉汤，按每升计算，其原料组成及含量如下所示： 蛋白腺 10.0 牛肉浸粉 3.0 氯化钢 5.0 抑值 7.2 ± 0.2 25°C 余量为水； 所述的马铃馨液体培养基，按每升计算，其原料组成及含量如下所示： 马铃馨浸出粉 6.0 葡萄糖 20.0 氯霉素 0. 1 pH值 5. 4 - 5. 8 25°C 余量为水。
[002引 4、抑菌效果的测定 在超净工作台上，将20血灭菌后的固体培养基倒入无菌培养皿制平板，冷却后注入上 述菌悬液lOOul，用无菌涂布棒涂抹展开至培养基表面，然后在表面等距离放上无菌牛津 杯，在杯内分别注入200ul的步骤（1)所得的浓度均为0.Ig/mL的藤茶提取物溶液、茵香醇 溶液、2-苯乙醇溶液和实施例2所得的复配型天然抗菌剂组合物II溶液，做同步抑菌实验 进行空白对照，放入培养箱中，细菌于37°C下培养2地，霉菌于28°C下培养48-7化，按时取 出，测定抑菌圈直径，取平均值，结果如下表：
从上表中可W看出，相同浓度下的复配型天然抗菌剂组合物的抑菌作用明显好于单一 活性物质藤茶提取物、茵香醇和2-苯乙醇，特别是其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有较明 显的抑制作用。
[0029]实施例5复配型天然抗菌剂的最小抑菌浓度测定 1、 接种 将大肠杆菌接种于固体培养基平板，于37°C下培养24h; 所述的固体培养基为膜蛋白腺大豆琼脂培养基，按每升计算，其原料组成及含量如下 所示： 膜蛋白腺 15.0 植物蛋白腺 5.0 氯化钢 5.0 琼脂 15.0 抑值 7.3 ± 0.2 25°C 余量为水； 2、 菌悬液的制备 从活化后的平板上挑取大肠杆菌单菌落接种到营养肉汤培养基中，于37°C、恒溫振荡 培养箱中培养24h后作为原菌液，用灭菌生理盐水将原菌液制成含菌数为106CFU/mL的菌 悬液。
[0030] 所述的营养肉汤，按每升计算，其原料组成及含量如下所示： 蛋白腺 10.0 牛肉浸粉 3.0 氯化钢 5.0 抑值 7.2 ± 0.2 25°C 余量为水； 3、最小抑菌浓度值的测定 本实验W大肠杆菌为指示菌，采用肉汤稀释法测定最小抑菌浓度（MIC)。取无菌试管 (13X100mm)13支，排成一排，采用试管等倍稀释法对复配型天然抗菌剂进行浓度设定。除 第1管加入1. 6mlMH肉汤外，其余每管加入MH肉汤1ml，在第1管加入供试样品溶液0. 4ml 混匀，然后吸取1ml至第2管，混匀后再吸取1ml至第3管，如此连续倍比稀释至第11管， 并从第11管中吸取1ml弃去，第12管为不含供试样品溶液的生长对照，然后在每管内加 入上述制备好的菌悬液各1ml，使每管最终菌液浓度约为5X105CFU/mレ第13管为不含菌 悬液和供试样品的空白对照。于37 °C下培养24h，结果判读对照空白实验，通过评分得出最 低抑菌浓度MIC(评分为0,完全清亮)。. 所述的供试样品溶液为浓度为20.OOmg/ml的复配型天然抗菌剂组合物II溶液； 实验结果见下表：
表中"0 "表示完全清亮，"1"表示轻微模糊，"2 "表示浑浊。
[0031] 从上表可W看出复配型天然抗菌组合物II对大肠杆菌的最低浓度为1. 25mg/ml， 由此表明了该复配型天然抗菌组合物II对细菌的抗菌效能较好。
[0032] 实施例6在膏霜类化妆品中的防腐效果 1、一种含有如实施例2所得的复配型天然抗菌剂组合物II的保湿乳化妆品，按质量百 分比计算，其原料组成及含量如下表：
2、测试方法 采用防腐挑战测试法，参照美国药典扣S巧方法进行实验。如下分组进行试验： 第一组：不加防腐剂 第二组：1%复配型天然抗菌剂 实验结果见下表：
表中"+ "表示有菌落出现，表示没有菌落出现。
[0033] 由上表可知，第一组没有加复配型天然抗菌剂，没有抑菌效果。第二组加入了1% 复合型天然抗菌剂，在7天内能将均浓度在l〇5-l〇6CFU/g的微生物全部抑制。由此可知，本 发明的复合型天然抗菌剂具有良好的抗菌效果，可W代替传统防腐剂的使用，从而降低产 品的刺激性，提高产品的安全性。
【主权项】
1. 一种复配型天然抗菌剂，其特征在于由如下重量百分比的组分组成： 藤茶提取物 5-50% ; 至少一种天然香原料 5-70% ; 丙二醇和水的混合溶液 1-80%，在所述的丙二醇和水的混合溶液中，丙二醇和水 的体积比为30~50:50~70。2. 根据权利要求1所述的一种复配型天然抗菌剂，其特征在于：所述的藤茶提取物 中的主要成分为二氢杨梅素，二氢杨梅素在所述的藤茶提取物中的质量百分比浓度为 25~98%。3. 根据权利要求2所述的一种复配型天然抗菌剂，其特征在于：二氢杨梅素在所述的 藤茶提取物中的质量百分比浓度为98%。4. 根据权利要求1所述的一种复配型天然抗菌剂，其特征在于：所述的至少一种天然 香原料选自2-苯乙醇、茴香醇、香兰素、丁香酚、肉桂醛、芳樟醇、香豆素、香紫苏醇、茴香 醛、柠檬醛、茶多酚、香茅醇、r-癸内酯、N-乙酰甲基氨茴酸酯、薄荷醇、香草醛、氨茴酸二 甲酯、氨茴酸甲酯、水杨酸酯类、茉莉醛、扁柏醇、香芹酚、或者百里香酚中的一种或一种以 上的组合。5. 根据权利要求1所述的一种复配型天然抗菌剂，其特征在于：在所述的丙二醇和水 的混合溶液中，丙二醇和水的体积比为40:60。6. 权利要求1所述的一种复配型天然抗菌剂的制备方法，其特征在于：按照重量百分 比称取藤茶提取物、天然香原料和丙二醇和水的混合溶液，将藤茶提取物先加热溶解在丙 二醇水溶液中；再加入天然香原料于上述溶液中搅拌混匀，得到复配型天然抗菌剂组合物。7. -种化妆品，其特征在于：含有权利要求1的所述的复配型天然抗菌剂，所述的复配 型天然抗菌剂在化妆品中的质量百分比浓度为0. 1-10%。8. 根据权利要求7所述的一种化妆品，其特征在于：所述的复配型天然抗菌剂在化妆 品中的质量百分比浓度为1. 0-5. 0%。
【专利摘要】本发明公开了一种复配型天然抗菌剂，由5-50%重量的藤茶提取物、5-70%重量的一种或多种天然香原料、1-80%重量丙二醇和水的混合溶液组成。本发明还提供了上述复配型天然抗菌剂的制备方法，按照重量百分比称取藤茶提取物、天然香原料和丙二醇和水的混合溶液，将藤茶提取物先加热溶解在丙二醇水溶液中；再加入天然香原料于上述溶液中搅拌混匀，得到复配型天然抗菌剂组合物。本发明还提供了含有上述复配型天然抗菌剂的化妆品。本发明的复配型天然抗菌剂能有效抑制化妆品中的微生物繁殖，可代替化学合成防腐剂，从而降低产品的刺激性，提高产品的安全性。
【IPC分类】A61K8/97
【公开号】CN105213250
【申请号】CN201510565609
【发明人】方碧娟, 喻敏, 张婉萍
【申请人】上海应用技术学院, 上海帝科精细化工有限公司
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年9月8日