酸镁的浓度为0.lmol/L ;
[0039](2)配制十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的混合溶液，超声均匀分散；十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的摩尔数之和等于步骤(I)中可溶三价金属盐的摩尔数，溶剂为甲醇和水的混合溶剂，甲醇和水的体积比为1: 1，十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的摩尔比为2:98,吲哚菁绿的浓度为2mmol/L ；
[0040](3)将叶酸分散到二次蒸馏水中，并加入浓度为0.2mol/L NaOH溶液调节至叶酸恰好完全溶解，叶酸的浓度为0.02mol/L,叶酸与可溶三价金属盐的摩尔比为1:5 ;
[0041](4)在氮气保护下，将步骤(1)、(2)和(3)配制的溶液混合，然后将浓度为0.2mol/L的NaOH溶液逐滴滴入至pH为8 ;然后控制水浴温度55°C，机械搅拌36小时；反应完成后，过滤得沉淀，去离子水离心清洗，最后置于65°C烘箱中烘干，即得叶酸修饰的超分子复合光热试剂。
[0042]将制得的叶酸修饰的超分子复合光热试剂在近红外光照下测试其光热转换效率。近红外光波长808nm，光能量密度1.lW/cm2，光照时间8min，温度记录时间间隔30s，测试不同比例的叶酸修饰的超分子复合光热试剂的光热转换效率。
[0043]实施例3:
[0044](I)配制硝酸镁和硝酸铝的混合盐溶液，硝酸镁和硝酸铝的摩尔比为1:3，硝酸镁的浓度为0.lmol/L ;
[0045](2)配制不同比例的十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的混合溶液，超声均匀分散；十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的摩尔数之和等于步骤(I)中可溶三价金属盐的摩尔数，溶剂为甲醇和水的混合溶剂，甲醇和水的体积比为3:1，十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的摩尔比分别为 I:99, 2:98, 3:97, 5:95，10:90，吲哚菁绿的浓度为 5mmol/L ；
[0046](3)在氮气保护下，将步骤⑴和步骤(2)配制的溶液混合，然后将浓度为0.2mol/L的NaOH溶液逐滴滴入至pH为9 ;然后控制水浴温度55°C，机械搅拌36小时；反应完成后，过滤得沉淀，去离子水离心清洗，最后置于65°C烘箱中烘干，即得超分子复合光热试剂。
[0047]将制得的超分子复合光热试剂加入到培养好的肿瘤细胞中，肿瘤细胞的个数为每孔14个。首先筛选出最佳的近红外光照时间及给药浓度，其次按照这个光照时间和给药浓度比较不同给药组的光热治疗效果。
[0048]实施例4:
[0049](I)配制硝酸镁和硝酸铝的混合盐溶液，硝酸镁和硝酸铝的摩尔比为1:3，硝酸镁的浓度为0.lmol/L ;
[0050](2)配制十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的混合溶液，超声均匀分散；十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的摩尔数之和等于步骤(I)中可溶三价金属盐的摩尔数，溶剂为甲醇和水的混合溶剂，甲醇和水的体积比为1: 1，十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的摩尔比为2:98,吲哚菁绿的浓10mmol/L ；
[0051](3)将叶酸分散到二次蒸馏水中，并加入NaOH溶液调节至叶酸恰好完全溶解，叶酸的浓度为0.02mol/L，叶酸与可溶三价金属盐的1:5 ;
[0052](4)在氮气保护下，将步骤(1)、(2)和(3)配制的溶液混合，然后将浓度为0.2mol/L的NaOH溶液逐滴滴入至pH为9 ;然后控制水浴温度55°C，机械搅拌36小时；反应完成后，过滤得沉淀，去离子水离心清洗，最后置于65°C烘箱中烘干，即得叶酸修饰的超分子复合光热试剂。
[0053]将制得的叶酸修饰的超分子复合光热试剂加入到培养好的肿瘤细胞中，肿瘤细胞的个数为每孔14个。首先筛选出最佳的近红外光照时间及给药浓度，其次按照这个光照时间和给药浓度比较不同给药组的光热治疗效果。与实施例3制备的超分子复合光热试剂相比，相同条件下，叶酸修饰的超分子复合光热试剂的光热治疗效果最佳，达到细胞成活率14.
[0054]实施例5:
[0055](I)配制硝酸锌和硝酸铝的混合盐溶液，硝酸锌和硝酸铝的摩尔比为1:2，硝酸锌的浓度为0.lmol/L ;
[0056](2)配制不同比例的十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的混合溶液，超声均匀分散；十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的摩尔数之和等于步骤(I)中可溶三价金属盐的摩尔数，溶剂为甲醇和水的混合溶剂，甲醇和水的体积比为1:1，十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的摩尔比分别为 1:99,2:98,3:97,5:95,10:90，吲哚菁绿的浓度为 1mmoI/L ;
[0057](3)在氮气保护下，将步骤(I)和步骤(2)配制的溶液混合，然后将浓度0.2mol/L的NaOH溶液逐滴滴入至pH为8.5 ;然后控制水浴温度55 °C，机械搅拌36小时；反应完成后，过滤得沉淀，去离子水离心清洗，最后置于65°C烘箱中烘干，即得超分子复合光热试剂。
[0058]将制得的超分子复合光热试剂以最佳的给药浓度加入到培养好肿瘤细胞的六孔板中，肿瘤细胞的个数为每孔5 X 15个。三小时后吸出培养基，PBS清洗3遍。激光共聚焦显微镜考察复合光热试剂的近红外成像性能。
[0059]实施例6:
[0060](I)配制硝酸锌和硝酸铝的混合盐溶液，硝酸锌和硝酸铝的摩尔比为1:2，硝酸锌的浓度为0.lmol/L ;
[0061](2)配制十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的混合溶液，超声均匀分散；十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的摩尔数之和等于步骤(I)中可溶三价金属盐的摩尔数，溶剂为甲醇和水的混合溶剂，甲醇和水的体积比为1: 1，十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的摩尔比为2:98,吲哚菁绿的浓度为10mmol/L ；
[0062](3)将叶酸分散到二次蒸馏水中，并加入NaOH溶液调节至叶酸恰好完全溶解，叶酸的浓度为0.02mol/L，叶酸与可溶三价金属盐的摩尔比为1:5 ;
[0063](4)在氮气保护下，将步骤(1)、(2)和(3)配制的溶液混合，然后将浓度为0.2mol/L的NaOH溶液逐滴滴入至pH为8.5 ;然后控制水浴温度55°C，机械搅拌36小时；反应完成后，过滤得沉淀，去离子水离心清洗，最后置于65°C烘箱中烘干，即得叶酸修饰的超分子复合光热试剂。
[0064]将制得的叶酸修饰的超分子复合光热试剂以最佳的给药浓度加入到培养好肿瘤细胞的六孔板中，肿瘤细胞的个数为每孔5 X 15个。三小时后吸出培养基，PBS清洗3遍。激光共聚焦显微镜考察复合光热试剂的近红外成像性能。
【主权项】
1.一种超分子复合光热试剂的制备方法，其特征在于，其具体制备步骤如下: (1)配制可溶二价金属盐和可溶三价金属盐的混合盐溶液，可溶二价金属盐和可溶三价金属盐的摩尔比为1:2-1:4，可溶二价金属盐的浓度为0.05mol/L-0.5mol/L ； (2)配制十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的混合溶液，超声均匀分散；十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的摩尔数之和等于步骤(I)中可溶三价金属盐的摩尔数，溶剂为甲醇和水的混合溶剂，甲醇和水的体积比为1:1-3:1，十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的摩尔比为1:99-10:90，口引噪菁绿的浓度为lmmol/L-10mmol/L ； (3)在氮气保护下，将步骤(I)和步骤(2)配制的溶液混合，然后将浓度为0.1mol/L-0.5mol/L的NaOH溶液逐滴滴入至pH为8_9 ;然后控制水浴温度50-60 °C，机械搅拌36-48小时；反应完成后，过滤得沉淀，去离子水离心清洗，最后置于60-65°C烘箱中烘干，即得超分子复合光热试剂。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的可溶二价金属盐选自硝酸镁、氯化镁、硫酸镁、硝酸锌、氯化锌、硫酸锌；所述可溶三价金属盐选自硝酸铝、氯化铝、硫酸招O3.根据权利要求1或2所述的方法制备得到的超分子复合光热试剂作为肿瘤光热治疗及近红外成像试剂的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的超分子复合光热试剂用量为0.02-10 μ g/104cell，光能量密度 0.5-1.5ff/cm2,808nm 近红外光照 2min_15min。5.—种叶酸修饰的超分子复合光热试剂的制备方法，其特征在于，其具体制备步骤如下: (1)配制可溶二价金属盐和可溶三价金属盐的混合盐溶液，可溶二价金属盐和可溶三价金属盐的摩尔比为1:2-1:4，可溶二价金属盐的浓度为0.05mol/L-0.5mol/L ； (2)配制十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的混合溶液，超声均匀分散；十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的摩尔数之和等于步骤(I)中可溶三价金属盐的摩尔数，溶剂为甲醇和水的混合溶剂，甲醇和水的体积比为1:1-3:1，十二烷基磺酸钠与吲哚菁绿的摩尔比为1:99-10:90，口引噪菁绿的 lmmol/L-10mmol/L ； (3)将叶酸分散到二次蒸馏水中，并加入NaOH溶液调节至叶酸恰好完全溶解，叶酸的浓度为0.01-0.lmol/L，叶酸与可溶三价金属盐的摩尔比为1:10-1:2 ； (4)在氮气保护下，将步骤(I)、(2)和(3)配制的溶液混合，然后将浓度为0.1mol/L-0.5mol/L的NaOH溶液逐滴滴入至pH为8_9 ;然后控制水浴温度50-60 °C，机械搅拌36-48小时；反应完成后，过滤得沉淀，去离子水离心清洗，最后置于60-65°C烘箱中烘干，即得叶酸修饰的超分子复合光热试剂。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的可溶二价金属盐选自硝酸镁、氯化镁、硫酸镁、硝酸锌、氯化锌、硫酸锌；所述可溶三价金属盐选自硝酸铝、氯化铝、硫酸招O7.根据权利要求5或6所述的方法制备得到的叶酸修饰的超分子复合光热试剂作为肿瘤光热治疗及近红外成像试剂的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的叶酸修饰的超分子复合光热试剂用量为 0.02-10 μ g/104cell，光能量密度 0.5-1.5W/cm2，808nm 近红外光照 2min_15min。
【专利摘要】本发明公开了属于肿瘤治疗及成像药物制备技术领域的一种超分子复合光热试剂及其在光热治疗和近红外成像方面的应用。本发明基于吲哚菁绿自身热稳定性及水溶性差等特点采用甲醇-水混合溶剂的低温共沉淀合成法将有机光热试剂吲哚菁绿，十二烷基磺酸钠共插层于水滑石层间，通过调变吲哚菁绿与十二烷基磺酸钠的比例，得到了吲哚菁绿以高分散形式存在的复合纳米光热试剂，将其应用于肿瘤治疗及近红外成像研究，有良好的效果。同时采用相同的合成方法将吲哚菁绿，十二烷基磺酸钠和靶向分子叶酸共插层入水滑石层间，进一步增强了治疗和近红外成像的效果。本发明制备的超分子复合光热试剂在8μg/ml的浓度下1.1W/cm2808nm近红外光照射12min，癌细胞的存活率普遍低于15％。
【IPC分类】A61K41/00, A61K47/02, A61P35/00, A61K49/00
【公开号】CN105214102
【申请号】CN201510695849
【发明人】梁瑞政, 李春阳, 卫敏
【申请人】北京化工大学
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年10月22日