在另一方面，本发明涉及一种制备用于本发明的营养组合物的方法，所述方法包 括以下步骤：
[0181]-提供营养组合物的各成分和橄榄苦苷并混合，使得所述营养组合物包含橄榄苦 苷。
[0182] 在进一步的实施方案中，制备用于本发明的营养组合物的方法包括以下步骤：
[0183] -提供一种或多种营养组合物的成分、橄榄苦苷和/或羟基酪醇，并任选进一步地 提供姜黄素和槲皮素的一种或多种，并混合。
[0184] 伸用的药物组合物。
[0185] 在进一步的实施方案中，本发明涉及一种组合物，其根据本发明用于抑制或预防 软骨破坏，其中所述组合物是药物组合物。
[0186] 药物指不是营养组合物的组合物，其中在身体上或身体内使用物质，以预防、诊 断、缓解、治疗或治愈人或动物在医学上的疾病。根据本发明，所述药物可以用于抑制或减 少软骨破坏。
[0187] 所述药物可以用于人类。或者其可以是兽医组合物，例如适合于狗、猫或马，特别 是纯种马。
[0188] 在一个优选的实施方案中，本发明的药物组合物包含橄榄苦苷。
[0189] 在另一个优选的实施方案中，本发明的药物组合物包含橄榄苦苷和/或羟基酪 醇。
[0190] 本发明还涉及根据本发明的药物的用途，如本文中描述为本发明组合物的用途。
[0191]用于本发明的组合物包含橄榄苦苷、或一种或多种或橄榄苦苷和/或羟基酪醇、 或进一步包含姜黄素和/或槲皮素，与至少一种赋形剂组合，所述赋形剂选自可药用的赋 形剂。制备本发明药物组合物的步骤可以很容易地被本领域的专业技术人员找到，例如 在手册Remington,sPharmaceuticalSciences,Mid.PublishingCo,Easton,Pa. ,USA。 生理学上可接受的赋形剂、载体和佐剂也在题为HandbookofPharmaceutical Excipients,Secondedition,AmericanPharmaceuticalAssociation, 1994中描述了。为 了配制本发明的药物组合物，本领域的专业技术人员能够有利地参照最新版的欧洲药典或 美国药典（USP)。特别是，本领域的专业技术人员能够有利地参照欧洲药典第四版"2002" 或参照美国药典USP25-NF20版（美国药典）。
[0192] 有利的是，如上所定义的药物组合物适合于口服、肠胃外或静脉内施用。当用于本 发明的药物组合物包含至少一种药学上或生理学上可接受的赋形剂时，其具体地是适合于 通过口服途径施用组合物的赋形剂、或适合于通过肠胃外途径施用组合物的赋形剂。
[0193] 用于本发明的药物组合物无差别地以固体或液体形式提供。对于口服施用，优选 是片剂、胶囊或明胶胶囊形式的固体药物组合物。
[0194] 在液体形式中，药物组合物优选是水性或非水性悬浮液的形式，或者是油包水或 水包油乳液的形式。
[0195] 固体药物形式可以包括，如载体、佐剂或赋形剂、至少一种稀释剂、一种香料、一种 增溶剂、一种润滑剂、一个悬浮剂、一种粘合剂、一种崩解剂和一种包封剂。这类化合物是例 如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、纤维素材料、可可脂等。液体形式 的组合物还可以包含水，可能作为与丙二醇或聚乙二醇的混合物，以及可能还有着色剂、香 料、稳定剂和增稠剂。
[0196] 治疗方法
[0197] 本发明还涉及预防或治疗软骨破坏的方法，例如预防或治疗其中发生软骨破坏的 病理学疾病或者与软骨破坏相关的外伤，所述方法包括向有需要的个体施用有效量的本发 明组合物。例如，该方法包括施用有效量的橄榄苦苷。在其他实施例中，本发明的方法包括 施用有效量的一种或多种橄榄苦苷和/或羟基酪醇。在优选的实施方案中，治疗方法包括 施用有效量的用于本发明的组合物，所述组合物包含橄榄苦苷和/或羟基酪醇，以及一种 或多种其他多酚，例如选自姜黄素、槲皮素和芦丁中的一种或多种其他多酚。
[0198] 如本文所用，"有效量"是在个体中预防缺陷、治疗疾病或医学病症的量，或者更一 般地，减少症状、管理疾病的进展或为个体提供营养、生理或医学益处的量。
[0199]当然，根据本发明的组合物实现治疗作用所需的有效量，将随特定的组合物、施用 途径、接受者年龄和身体状况，以及正在治疗的特定病患或疾病而不同。
[0200] 本发明还提供预防或治疗涉及软骨破坏的病理学疾病的方法，如，例如0A或RA; 抑制或减少软骨破坏的方法；抑制或减少软骨中胶原分解的方法；抑制或减少软骨中II型 胶原分解的方法；所述方法包括向个体施用有效量的用于本发明的组合物。
[0201 ] 在一个实施方案中，根据本发明的治疗方法涉及预防或治疗骨关节炎。
[0202] 根据本发明的治疗方法可以在哺乳动物中，如人或宠物，例如狗、猫和/或马中进 行。
[0203] 在某些实施方案中，在治疗方法中施用的本发明组合物可以是一种或多种本发明 的营养组合物和/或本发明的药物组合物。
[0204] 公开的组合
[0205] 应当指出的是，在本发明一个方面的上下文中描述的实施方案和特征也适用于本 发明的其他方面。
[0206] 用于本发明的组合物在文中以不同的参数描述，如成分、营养组合物形式、使用、 靶标组等。应注意的是，用于本发明的组合物的参数之一的上下文中描述的实施方案和特 征，也可与另一参数的上下文中描述的其他实施方案和特征组合，除非另有明确说明。
[0207] 在本申请中引用的所有专利和非专利参考文献，在此通过引用整体并入本文。
[0208] 现在将进一步在以下非限制性实施例中详细地描述本发明。 实施例
[0209] 实施例1-体外研究-藻酸盐珠中的牛原代软骨细胞
[0210] 材料和方法
[0211] 橄榄苦苷。基本上纯的橄榄苦苷（>98% )购自Extrasynthese(GENAY，法国）。
[0212] 羟基酪醇。基本上纯的羟基酪醇（>98% )购自Extrasynthese(GENAY，法国）。橄 榄苦苷的代谢物。
[0213] 槲皮素。基本上纯的槲皮素（>97%)购自HWIAnalytikGmbH(Ruelzheim，德国）。 芦丁的代谢物。
[0214]芦丁。基本上纯的芦丁（>94% )购自Sigma-Aldrich公司（Buchs,Switzerland)。
[0215]姜黄素。基本上纯的芦丁（>70% )购自Sigma-Aldrich公司（Buchs,Switzerland)。
[0216] 细朐培养
[0217] 洗涤年青的牛的蹄，除去泥土。将皮肤从蹄除去。横向打开关节。横断关节内韧 带。用磷酸盐缓冲盐水洗涤打开的关节。用解剖刀片，切出软骨全厚度切片，并收集在含有 10mMh印es和1%青霉素-链霉素的DMEM高糖中。在含有10mMh印es和1%青霉素-链 霉素的DMEM高糖中洗涤软骨切片。
[0218] 然后依次通过0· 5mg/ml透明质酸酶（hyluronidase) 30分钟、1.Omg/ml链霉蛋白 酶E60分钟和1.Omg/ml胶原酶在缓慢搅动下过夜消化软骨。
[0219] 酶孵育后，通过70μm的细胞过滤器过滤细胞悬浮液以分离细胞簇并除去组织碎 片。将细胞悬浮液离心以沉淀细胞。
[0220] 将培养基弃去，通过离心以及重新悬浮于含有10mMh印es的0. 9 %氯化钠溶液洗 涤细胞沉淀物。
[0221] 将细胞悬浮在含有1. 2%藻酸盐的0. 9%NaCl、10mMHEPES的溶液中，得到每毫升 4. 3xl06个细胞的密度。使该悬浮液通过针以逐滴的方式滴入102mM0&(：12溶液中。10分 钟后，将珠聚合，并用〇. 9%NaCl、10mMHEPES洗涤。含有lml完全培养基（含有2mML-谷 氨酰胺、0.51^/1111抗坏血酸、0.21^/11111^-脯氨酸和10%胎牛血清的01^1高糖培养基）的 24孔培养板的每个孔中沉积10个珠。细胞在培养基中维持2天，然后在有或无白细胞介 素-1α存在下用以下处理：1. 5μΜ橄榄苦苷、1. 5μΜ羟基酪醇、1. 5μΜ槲皮素、1. 5μΜ姜 黄素、1. 5μΜ橄榄苦苷+1. 5μΜ槲皮素、1. 5μΜ的橄榄苦苷+1. 5μΜ姜黄素、1. 5μΜ羟基 酪醇+1. 5μΜ槲皮素、1. 5μΜ羟基酪醇+1. 5μΜ姜黄素、1. 5μΜ槲皮素+1. 5μΜ姜黄素、 1. 5μΜ橄榄苦苷+1. 5μΜ槲皮素+1. 5μΜ姜黄素、1. 5μΜ羟基酪醇+1. 5μΜ槲皮素+1. 5μΜ 姜黄素。处理液溶于二甲基亚砜（DMS0)中。DMS0终浓度为0.1%。细胞暴露于处理3天。
[0222] 在各处理结束时，洗涤珠并悬浮于0. 1Μ柠檬酸钠+0. 15Μ氯化钠溶液中。离心悬 浮液，并收集含有细胞的沉淀以提取总RNA。
[0223] 基因表达
[0224] 总RNA分离自40个珠的收集物，使用Qiagen公司的RNeasy试剂盒分离。使用来 自Takara的Primescript1ststrandcDNASynthesis试剂盒、通过RNA的逆转录获得 cDNA。在实时PCR(SYBRGreen)中定量六0六10^-5、0?-2、11?-13和6六?0!1的1111?熟表达。
[0225](来自牛（BosTaurus))的引物列于下表1 :
[0226] 表1引物
[0227]
[0228] 结果
[0229] 图1至3表明培养3天后由GAPDHmRNA表达归一化的ADAMTS-5、C0X-2和MMP-13 的mRNA表达。数据表示为与阴性对照（在完全培养基中培养的细胞）相比的基因表达的 倍数变化。根据2AACT方法计算结果。
[0230]
[0231] 数据表示为中位数土S.E.中位数（每个3次重复的2个实验）。通过Kruskal Wallis检验以及之后的MannWhitneyU检验（2尾）进行统计学。*p〈0. 05 ;**〈0. 01; ***ρ〈0· 001对阴性对照（CTL-)或白介素-1a(ILIA)。
[0232] 图1A示出了在ILla不存在时（模拟细胞的正常状态）ADAMTS-5mRNA相对于 GAPDH的表达。各条件与CTL-进行统计学比较。
[0233] 图1B示出了在ILla存在时（模拟细胞的疾病状态）ADAMTS-5mRNA相对于GAPDH 的表达。各条件与ILla进行统计学比较，而ILla与CTL-进行比较（验证实验）。
[0234] 在正常条件下，添加OLP、HTY、QRC或⑶R降低了ADAM