用于细胞动员中的硫酸葡聚糖的制作方法

文档序号:9597220阅读:368来源:国知局
用于细胞动员中的硫酸葡聚糖的制作方法
【技术领域】
[0001] 实施方案一般设及进入受试者血流中的细胞的动员。
[000引发明背景
[0003] 干细胞和祖细胞是具有分裂和发育W形成成熟系统的任何细胞类型的能力的未 成熟细胞。造血干细胞化SC)能够产生免疫系统和骨髓的细胞。HSC移植化SCT)被用来 恢复患者的正常造血W治疗在化疗或放射后的各种疾病。在过去的几十年中,HSCT已经变 成各种病症(包括多发性骨髓瘤(MM)、非霍奇金氏淋己瘤(NHL)和需要同种异体移植的病 症)的临床例行治疗。不管在近几年中的明显改进,但是手术仍然与相当高的致病率和死 亡率相关联,运是由于并发症和原发疾病的复发。还继续需要改进干细胞来源、细胞收获程 序、调理疗法和免疫抑制治疗。存在两种主要类型的服CT,或同种异体(其中干细胞源自相 容的健康供体)或自体,当干细胞从患者收集且在高剂量的化疗/放疗调理疗法后的后期 给回相同患者。在同种异体W及特别是自体HSCT中,周边血液如今具有与干细胞来源几乎 完全更换的骨髓。作为细胞来源的周边血液是优选的,因为它设及供体的较少侵入式手术 且所移植细胞的植入相比于使用骨髓作为细胞来源的更加快速。
[0004] 不管在近几年中的明显改进,但是手术仍然与相当高的致病率和死亡率相关联, 此由于移植相关性并发症(主要是同种异体)和原发疾病的复发(主要是自体)导致。因 此,还继续需要改进干细胞来源、细胞收获方案、调理疗法和免疫抑制治疗。
[0005] 如今,干细胞是通过用粒细胞集落刺激因子(G-CS巧处理供体而动员到周边 血液且所述细胞是通过血液成分分离术收集W供后续移植用。在输注至接受者的血流 中后,健康造血细胞迁移到骨髓,在那它们可W分化产生成熟血液细胞并恢复造血。最 近,已经批准普乐沙福(plerixafor) (M0Z0BIL?,AMD3100,1,1' -[1,4-亚苯基双(亚甲 基)]-双-1,4, 8, 11-四氮杂环四癸烧)与G-CSF组合来增加MM和饥正患者中祖细胞的动 员。
[0006] G-CSF和普乐沙福的组合治疗的一个明显局限是减缓干细胞动员。虽然小鼠中的 实验数据指示在施用普乐沙福1小时后于动员干细胞中出现峰度roxmeyer 2005),但是人 类中对应的峰是在施用普乐沙福约9小时后首次开始(Mozobil?产品专论)。由此,被动 员干细胞的收获延迟直到施用普乐沙福约11小时后,运暗示长住院时间(Mozobil?产品专 论)。因此,实践是普乐沙福需要在实际细胞收获前的那天施用。
[0007] Sweeney 2000和Sweeney 2002研究硫酸化多糖(包括IOkDa的硫酸葡聚糖)在 小鼠和猴干细胞/祖细胞的动员中的效应。在小鼠和猴中,施用硫酸葡聚糖分别3小时和 6小时后,硫酸葡聚糖导致集落形成细胞(CFC)的动员。因此,在Sweeney 2000和Sweeney 2002中所呈现的结果似乎指示,就动员干细胞/祖细胞而言,硫酸葡聚糖比普乐沙福慢约 =倍。 发明概要
[0008] -般目标是提供一种祀细胞进入受试者血流中的有效动员。
[0009] 另一个一般目标是提供在受试者血流中高水平的被动员祀细胞。
[0010] 运些和其它目标是通过本文所公开的实施方案得到满足。
[0011] 所述实施方案的一方面设及一种具有3500与9500化范围内的平均分子量的硫酸 葡聚糖,或其药学上可接受的衍生物,其用于动员祖细胞和/或干细胞进入受试者的周边 血液。所述实施方案的一个相关方面定义一种具有3500与9500化范围内的平均分子量的 硫酸葡聚糖,或其药学上可接受的衍生物的用途,其用于制造动员祖细胞和/或干细胞进 入受试者的周边血液的药物。所述实施方案的另一相关方面定义一种动员祖细胞和/或干 细胞进入受试者的周边血液的方法。所述方法包括施用有效量的具有3500与9500化范围 内的平均分子量的硫酸葡聚糖,或其药学上可接受的衍生物给所述受试者。
[0012] 所述实施方案的另一方面设及一种具有3500与9500化范围内的平均分子量的硫 酸葡聚糖,或其药学上可接受的衍生物,其用于动员祀白血球,特别是淋己细胞进入受试者 的血流。所述实施方案的一相关方面定义一种具有3500与9500化范围内的平均分子量的 硫酸葡聚糖,或其药学上可接受的衍生物的用途,其用于制造动员祀白血球,特别是淋己细 胞进入受试者的血流的药物。所述实施方案的另一相关方面定义一种动员祀白血球,特别 是淋己细胞进入受试者的血流的方法。所述方法包括施用有效量的具有3500与9500化范 围内的平均分子量的硫酸葡聚糖,或其药学上可接受的衍生物给所述受试者。
[0013] 所述实施方案的又一方面设及一种细胞动员组合物,其包括具有3500与9500化 范围内的平均分子量的硫酸葡聚糖,或其药学上可接受的衍生物W及粒细胞集落刺激因 子(G-CSF)。所述实施方案的其它相关方面定义一种细胞动员组合物,其包括具有3500与 9500化范围内的平均分子量的硫酸葡聚糖,或其药学上可接受的衍生物和G-CSF,其用于 动员祖细胞和/或干细胞进入受试者的周边血液和/或用于动员祀白血球,特别是淋己细 胞进入受试者的血流。所述实施方案的进一步相关方面定义一种细胞动员组合物的用途, 所述组合物包括具有3500与9500化范围内的平均分子量的硫酸葡聚糖,或其药学上可接 受的衍生物和G-CSF,其用于制造用于动员祖细胞和/或干细胞进入受试者的周边血液和/ 或用于动员祀白血球,特别是淋己细胞进入受试者的血流的药物。所述实施方案的还有其 它相关方面定义一种动员祖细胞和/或干细胞进入受试者的周边血液或动员祀白血球,特 别是淋己细胞进入受试者的血流的方法。所述方法包括施用有效量的细胞动员组合物给所 述受试者,所述组合物包括具有3500与9500Da范围内的平均分子量的硫酸葡聚糖,或其药 学上可接受的衍生物和G-CSF。
[0014] 在一个实施方案中,所述药学上可接受的衍生物优选为硫酸葡聚糖的药学上可接 受的盐。
[0015] 本发明者已发现,关于平均分子量具有狭窄范围的硫酸葡聚糖相比于具有更小或 更大平均分子量的硫酸葡聚糖分子实现显著改进的细胞动员。
[0016] 具有低于本发明实施方案范围的平均分子量的硫酸葡聚糖分子就动员祖细胞和/ 或干细胞或白血球而言并不具有任何明显效果。具有高于本发明实施方案范围的平均分 子量的硫酸葡聚糖分子似乎不具有任何加成效应W及当与其它细胞动员化合物诸如G-CSF 一起使用时没有协同效应,且似乎相比于本发明实施例具有更缓慢的动员效应。
[0017] 本发明实施方案提供一种具有未预期动员特性的有效细胞动员,其几乎在施用 硫酸葡聚糖后立即触发细胞动员,被动员细胞的峰值已经在施用硫酸葡聚糖后在小鼠中 7. 5-30分钟内且在人类中30-120分钟内开始。所述实施方案的硫酸葡聚糖分子可W额外 地与其它细胞动员化合物W协同方式组合来甚至进一步增加被动员细胞数量。
[0018] 附图简述
[0019] 所述实施方案连同其其它目标和优点可最好通过参考W下描述W及附图一起来 理解,其中:
[0020] 图1说明通过单次S. C.注射硫酸葡聚糖(LMW-D巧或AMD3100相比于对照(巧樣 酸单水合物(CAM))所引发的白细胞动员。在3小时(LMW-D巧或1小时(AMD3100)后采集血 样。显示平均值±SEM。统计分析相对于对照组比较LMW-DS或AMD3100(卸<0. 05,**p<0. 01, ***p<0. 001)或相对于 AMD3100 比较 LMW-DS (.;p< 0.050.01,門;p< 0.001 )。
[0021] 图2说明LMW-DS对HGF血液浓度的效应。用单次S. C.注射LMW-DS或AMD3100处 理动物。使用CAM作为媒介物对照。在3小时(LMW-D巧或1小时(AMD3100)后采集血样。 显示平均值+SEM。统计分析相对于对照组比较LMW-DS或AMD3100 (卸<0. 05, **卸<0. 001) 或相对于 AMD3100 比较 LMW-DS -WpO.OOl)。
[0022] 图3说明通过单次i.V.注射LMW-DS和AMD3100到周边血液的白细胞动员。使 用CAM作为媒介物对照。在30分钟(LMW-DS和媒介物)或1小时(AMD3100)后采集血样。 显示平均值+SEM。统计分析相对于对照组比较LMW-DS或AMD3100 (*p<0. 05, **p<0. 01, ***p<0. 001)或相对于 AMD3100 比较 LMW-DS (';'p<〇.〇5,';-.;p<〇.〇I I)。
[0023] 图4A和4B说明单次i.V.注射LMW-DS或s. c.注射AMD3100对动员周边血液 中的造血集落形成细胞(CFC)的效应。使用CAM缓冲液(i.v.)作为媒介物对照。在30 分钟(LMW-DS和媒介物)或1小时(AMD3100)后采集血样。显示平均值±SEM。统计 分析相对于对照组比较LMW-DS或AMD3100(*p<0. 05, **p<0. 01)或相对于AMD3100比较 LMW-DS C'p<0.05)〇
[0024]图5说明在单次i.V.注射LMW-DS或CAM(对照)后被动员祖细胞师C)的祖细 胞亚型(C即-GM、C即-GEMM和B即-巧的区别。使用CAM缓冲液作为对照且此值是使用0值 (阴性对照)。显示平均值±SEM。统计分析相对于对照组比较LMW-DS(*p<0. 05,*卸<0. 01, ***p<0.001)。
[00巧]图6说明通过G-CSF和LMW-DS或G-CSF和AMD3100的组合相比于CAM缓冲液 (媒介物)所引发的白细胞动员。在30分钟(LMW-DS和媒介物)或1小时(AMD3100)后 采集血样。显示平均值± SEM。统计分析相对于对照组比较G-CSF+LMW-DS或G-CSF和 AMD3100(G-CSF+CAM) (*p<0. 05, **p<0. 01,**卸<0. 001)或相对于 G-CSF+AMD3100 比较 G-CSF+LMW-DS (';p< 0.05,;-;p< 0.01,';'中中口< 0.001)。
[0026] 图7A和7B说明G-CSF和LMW-DS或G-CSF和AMD3100在周边血液中祖细胞动员 的组合治疗。使用CAM缓冲液作为媒介物对照。在30分钟(LMW-DS和媒介物)或1小时 (AMD3100)后采集血样。显示平均值±SEM。统计分析相对于对照组比较G-CSF+LMW-DS 或 G-CSF 和 AMD3100(G-CSF+CAM) (*p<0. 05, **p<0. 01)或相对于 G-CSF+AMD3100 比较 G-CSF+LMW-DS (-;'p< 0-05P < 0,01)。
[0027] 图 8 说明在小鼠中单次注射 lOOmg/kg LMW-DS、G-CSF、G-CSF+LMW-DS、 G-CSF+AMD3100巧mg/kg)或CAM (媒介物)后祖细胞的动员的观察。用G-CSF和LMW-DS的 组合治疗相比于CAM缓冲液、LMW-DS和G-CSF显著增加CFC数量。误差棒显示沈M,n = 6-10。
[0028] 图 9 说明在小鼠中单次注射 lOOmg/kg LMW-DS、G-CSF、G-CSF+LMW-DS、 G-CSF+AMD3100巧mg/kg)或CAM (媒介物)后淋己细胞的动员的观察。施用LMW-DS相比 于G-CSF或AMD3100的单一疗法增加周边血液中的淋己细胞,且与G-CSF组合,相比于 G-CSF+AMD3100增加显著。误差棒显示沈M,n = 6-10。
[0029] 图10说明硫酸葡聚糖对周边血液中白血球的效应。用单次i. V.注射不同平均分 子量的硫酸葡聚糖值S3或DS5) W 50mg/kg的剂量处理动物。使用缓冲盐水(化Cl)作为媒 介物对照。一些动物使用五己比妥钢(PNB)代替异氣烧进行镇静,来比较不同麻醉方法的 效应。误差棒显示沈M。使用学生T检验来评估相比于对照组的统计上显著差异(*p<0. 05, **p<0. 01,***p<0.001)。
[0030] 图11说明硫酸葡聚糖对动员造血祖细胞进入周边血液中的效应。用单次i. V.注 射不同平均分子量的硫酸葡聚糖值S3或DS5)或媒介物(化Cl)处理动物。误差棒显示沈M。 使用学生T检验来评估相比于对照组的统计上显著差异(*p<0. 05)。
[0031] 图12说明硫酸葡聚糖对增加周边血液中的HGF水平的疗效。用单次i. V.注射不 同平均分子量的硫酸葡聚糖值S3或DS5)或媒介物(化Cl)处理动物。误差棒显示沈M。使 用学生T检验来评估相比于对照组的统计上显著差异(***p<0. 001)。
[0032] 图 13 说明在接受 10 分钟 i. V.输注 15mg/kg LMW-DS (上图)、18mg/kg LMW-DS (中 图)或24mg/kg LMW-DS(下图)在0时间时人类周边血液中的淋己细胞的动员。黑线代表 平均淋己细胞水平且灰线代表单人类的淋己细胞水平。
【具体实施方式】
[0033] 本发明实施方案一般设及动物,优选是哺乳动物且特别是人类的细胞动员。特定 来说,所述实施方案设及干细胞和/或祖细胞和/或特定白血球的动员,其可用于例如细胞 移植,包括造血干细胞移植化SCT)。
[0034] 所述实施方案是基
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