硫酸化寡聚糖衍生物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及多元硫酸化寡聚糖衍生物化合物，其作为硫酸乙酰肝素-结合蛋白和类肝素酶的抑制剂具有活性；制备所述化合物的方法；包含所述化合物的组合物，以及所述化合物及其组合物用于对哺乳动物受试者进行抗血管生成、抗转移、抗炎、抗微生物、抗凝血和/或抗血栓形成的治疗、降低血液的甘油三酯水平以及抑制心血管疾病的用途。
【专利说明】硫酸化寡聚糖衍生物
[0001] 本申请是中国专利申请号200580006833. 8 (PCT/AU2005/000314)，申请日为2005 年3月4日发明名称为"硫酸化寡聚糖衍生物"的分案申请。
【技术领域】
[0002] 本发明在此的描述涉及具有作为硫酸乙酰肝素-结合蛋白和类肝素酶的抑制剂 活性的化合物。具体地，本发明涉及硫酸化寡聚糖衍生物，尽管本发明的范围不是必然地被 限制于此。具体地，本发明涉及多元硫酸化寡聚糖衍生物，所述衍生化优选在单糖单元还原 端的C-1上和/或非还原端的C-6上。本发明还涉及制备所述化合物的方法，包含所述化 合物的组合物，以及所述化合物及其组合物对哺乳动物受试者进行抗血管生成、抗转移、抗 炎、抗微生物、抗凝血和/或抗血栓形成的治疗的用途。所述化合物及其组合物还具有在哺 乳动物受试者中降低血液甘油三酯水平以及抑制心血管疾病的作用。当将其对哺乳动物受 试者进行给药时，所述化合物还对预防上述病症具有作用。
【背景技术】
[0003] 已知的硫酸化寡聚糖试剂PI-88[1，2](参见下面的化合物1)已经被证明是有价 值的肿瘤生长和转移抑制剂[1，3]并且正在癌症病人中进行II期临床试验[4]。PI-88通 过抑制血管生成生长因子（具体地是FGF-UFGF-2和VEGF)以及它们的受体与硫酸乙酰肝 素的相互作用来发挥抗血管生成作用[1，5]。另外，PI-88是一种类肝素酶的有效抑制剂， 该酶是一种分解蛋白聚糖的硫酸乙酰肝素侧链的糖苷酶，该蛋白聚糖是肿瘤细胞周围的细 胞外基质（ECM)和基底膜的主要成分[1，2]。已经将类肝素酶与血管紧密地联系起来：它 能够从所述ECM中释放活性硫酸乙酰肝素-结合的血管生成生长因子并且与所述ECM的降 解以及随后的与新血管的生长相联系的组织重塑有关[6]。所述的通过类肝素酶的ECM的 降解在所述肿瘤细胞的扩散（转移）中也是决定性的，该肿瘤细胞的扩散（转移）是通过 允许它们进入血流并且固定在远处的，在那里它们能够形成次生瘤[6, 7]。
[0004] 除它的抗血管生成作用之外，PI-88通过以下来抑制凝血系统：（i)抑制在固有途 径中的蛋白酶，（ii)刺激组织因子途径抑制物（TFPI)的释放，以及（iii)活化肝素辅因子 Π -介导的凝血酶的抑制。然而，PI-88不与AT III相互作用并且因此显示无抗-Xa或AT III-介导的抗-Ila的活性[8, 9]。在猴子的体内研究中表明低剂量的PI-88促进完全硫 酸乙酰肝素结合的TFPI从血管细胞壁释放[9]。除了其在凝血方面的影响，TFPI最近被证 明是一种抗血管生成剂[10]和转移抑制剂[11]。PI-88还显示出阻滞血管平滑肌细胞增 殖以及内膜增厚[12]，抑制细胞的单纯疱疹病毒（HSV)感染以及HSV-1及HSV-2的细胞向 细胞的传播[13]，以及抑制在被动埃曼肾炎（passive Heymann nephritis)中的蛋白尿征
[14]。
[0005] PI-88是一种高度硫酸化、大小范围为二-至己糖的单磷酸化甘露糖寡聚糖 的混合物[15, 16]。通过完全磺化[2, 16]所述寡聚糖磷酸盐部分（2)(参见在本段之 后的式I)制得PI-88,该寡聚糖磷酸盐部分⑵是通过温和的、酸催化水解所述酵母 Pichia(Hansenula)holstii NRRL Y-2448的细胞外磷酸甘露聚糖获得的[17，18]。所述主 要组分分别地是五-和四糖磷酸盐3(?60%)以及4(?30%)，同时剩余的10 %是由二-、 三-和己糖磷酸盐（5-7)以及四糖基胺（tetrasaccharylamine，未示出）组成的[15, 16]。
[0006] 式 I
[0007]
【权利要求】
1. 一种通式化合物： X-tYln-Z-UR1 其中： X、Y和Z每个是单糖单元，其具有通过单或多键与X、Y和Z的每个非连接的碳结合的 基团UR，除具有通过单或多键结合的UR1的单糖Z的碳-1之外； η是0-6的整数； 每个U独立地是C、N、S或0或者它们的高氧化态，包括CO、COO、NO、N02、S (0)、S (0) 0 ; 每个R独立地是S03M或Η，其中Μ是任何药学上可接受的阳离子或者是任何烷基、芳基、 酰基、芳酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、PEG、PEG衍生物、Η或基团
其中独立地在每个ΑΒ基团中，Α是0或ΝΗ，并且Β是Η或Μ，其中Μ是如上所定义的， 或烷基、芳基或任何其它合适的基团； R1是S03M、H、烷基、芳基、酰基、芳酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、PEG或PEG衍生物，或 者R1与U -起是N3或取代的三唑或衍生物，或者取代的四唑或衍生物，或者取代的芳基或 衍生物，或者取代的杂芳基或衍生物； 条件是当所有的UR1和UR基团是0S03M或0H(除所述单糖X的环外亚甲基基团以外） 时，所述单糖X的环外亚甲基基团不能是〇P〇3M2基团。
2. -种通式化合物： 其中： η是0-6的整数； U是C、N、S或0或者它们的高氧化态，包括CO、COO、NO、N02、S (0)、S (0) 0 ; 每个R独立地是S03M或Η，其中Μ是任何药学上可接受的阳离子或者是任何烷基、芳基、 酰基、芳酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、PEG、PEG衍生物、Η或基团
其中独立地在每个ΑΒ基团中，Α是0或ΝΗ，并且Β是Η或Μ，其中Μ是如上所定义的， 或烷基、芳基或任何其它合适的基团； R1是S03M、H、烷基、芳基、酰基、芳酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、PEG或PEG衍生物，或 者R1与U -起是N3或取代的三唑或衍生物，或者取代的四唑或衍生物，或者取代的芳基或 衍生物，或者取代的杂芳基或衍生物； 条件是当R1和所有的R基团是S03M或0H(除所述非还原D-甘露糖的C-6上的R基团 以外）时，所述非还原D-甘露糖的C-6上的R基团不能是P0具基团。
3. 权利要求1或权利要求2的化合物，其中Μ是钠。
4. 权利要求1或权利要求2的化合物，其中η是3。
5. 权利要求1或权利要求2的化合物，其中R1是正辛基。
6. 权利要求1或权利要求2的化合物，其中至少50%的R基团含有S03M。
7. 权利要求1或权利要求2的化合物，其中70至100%的R基团含有S03M。
8. 根据权利要求1的化合物，其中所述化合物是如以上所描述的PG500、PG501、PG502、 PG503、PG504、PG506、PG507、PG508、PG509、PG510、PG511、PG512、PG513、PG514。
9. 一种用于预防或治疗哺乳动物受试者的由血管生成、转移、炎症、凝血/血栓、升高 的血液甘油三酯水平、微生物感染和/或心血管疾病产生的病症的药物或兽药组合物，所 述组合物包含至少一种根据权利要求1或权利要求2的化合物以及用于所述至少一种化合 物的药学或兽医学上可接受的载体或稀释剂。
10. 根据权利要求9所述的组合物，其进一步包含药学或兽医学上可接受的赋形剂、缓 冲剂、稳定剂、等渗化试剂、防腐剂或抗氧化剂。
11. 根据权利要求所述9的组合物，其中所述化合物以酯、游离酸或碱、水合物或前药 的形式存在。
12. 根据权利要求1或权利要求2的化合物在制备用于预防或治疗哺乳动物受试者的 由血管生成、转移、炎症、凝血/血栓、升高的血液甘油三酯水平、微生物感染和/或心血管 疾病产生的病症的药物中的应用。
13. 根据权利要求12的应用，其中所述哺乳动物受试者是人类受试者。
14. 一种用于预防或治疗哺乳动物受试者的由血管生成、转移、炎症、凝血/血栓、升高 的血液甘油三酯水平、微生物感染和/或心血管疾病产生的病症的方法，所述方法包括向 所述受试者以有效量的至少一种根据权利要求1或权利要求2的化合物或包含所述至少一 种化合物的组合物给药。
15. 根据权利要求14的方法，其中所述哺乳动物受试者是人类受试者。
16. 根据权利要求14的方法，其中由血管生成产生的所述病症是增生性视网膜病或由 实体瘤生长的血管生成。
17. 根据权利要求14的方法，其中由炎症产生的所述病症是类风湿性关节炎、多发性 硬化、炎症性肠病、同种异体移植排斥或慢性哮喘。
18. 根据权利要求14的方法，其中由凝血和/或血栓产生的所述病症是深度静脉血栓 形成、肺栓塞、血栓性中风、外周动脉血栓形成、不稳定性心绞痛或心肌梗塞。
19. 一种用于制备根据权利要求1的化合物的方法，所述方法包括： i) 活化被保护的寡聚糖以及将所述被活化的寡聚糖与供体化合物缩合； ii) 将从步骤（i)得到的所述糖甙脱保护；以及 iii) 任选地衍生化所述的脱保护的糖甙。
20. 根据权利要求19的方法，其中步骤（i)中的所述的活化是通过路易斯酸。
21. 权利要求19的方法，其中所述寡聚糖的非还原的碳是磷酸化的。
【文档编号】A61K31/702GK104119404SQ201410353750
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2005年3月4日 优先权日:2004年3月4日
【发明者】V·费尔罗, J·K·法尔威瑟, T·卡洛丽, 刘立功 申请人:普罗吉恩制药有限公司