使用苏拉明、戊聚糖多聚硫酸酯、端粒酶反义体及端粒酶抑制剂的方法和组合物的制作方法

专利名称：：使用苏拉明、戊聚糖多聚硫酸酯、端粒酶反义体及端粒酶抑制剂的方法和组合物的制作方法与相关申请的相互参照本申请要求获得临时申请序列号60/444,061的优先权，该申请于2003年1月31日提交，标题为“苏拉明、戊聚糖多聚硫酸酯以及人端粒酶反义体对端粒酶活性的抑制作用(inhibitionoftelomeraseactivitybysuramin，pentosanpolysulfateorantisensetohumantelomerase”。与本申请交叉参考的还有2003年6月18日提交的美国专利申请10/646,018，标题为“通过端粒破坏来调控药物活性的方法和组合物(Methodsandcompositionsformodulatingdrugactivitythroughtelomeredamage”；以及2000年6月5日提交的美国专利申请09/587,559，标题为“调节细胞增殖和细胞死亡的方法和组合物(Methodsandcompositionsformodulationcellproliferationandcelldeath)”，其全文内容合并于本文中作为参照。政府资助的研究本申请中所述的工作部分地由美国卫生和人类服务部(theUnitedStatesDepartmentofHealthandHumanServices)资助(许可号为R01CA77091，R01CA97067，R37CA49816；R01CA78577；R01CA74179；R21CA91547；及U01CA76576)。发明
背景技术：
：领域本发明描述了一种靶向人端粒酶并抑制人类癌症细胞中的端粒酶活性的反义分子(hTR-反义体(anti-sense))。本发明还描述了苏拉明、戊聚糖多聚硫酸酯(PPS)或hTR-反义体抑制端粒酶活性的用途。本发明进一步地教导了另一种端粒酶抑制剂3’叠氮脱氧胸苷(3′-azido-deoxythymidine)(AZT)(其在非毒性剂量时产生纳摩尔水平的血药浓度)在治疗肿瘤中的用途。本发明还教导了在用其他手术方法或非手术肿瘤体积减小(tumorsizereduction)(细胞减灭(cytoreduction))的同时或之后，用端粒酶抑制剂治疗肿瘤的方法。本发明还教导了在非手术肿瘤体积减小治疗之前，应用端粒酶抑制剂，可以提高肿瘤细胞对这种治疗效应的敏感性。本发明还教导了如何使用端粒酶抑制剂，如苏拉明、PPS或hTR反义体来预防肿瘤的发展。现有技术的说明端粒和端粒酶.端粒是染色体末端的帽状结构，对于维持染色体的完整性和复制能力十分重要。由于DNA聚合酶不能复制染色体的3’末端，每次细胞分裂会使端粒缩短50到200bp。端粒损失达到低于某一临界的最小长度就会引起细胞死亡(Lingner，etal.，Science，2691533-1534，1995)，或导致细胞开始衰老(senescence)(如丧失增殖能力)(Goldstein，Science，2491129-1133，1990；Martin，etal.，Lab.Invest.，2386-92，1979)。端粒酶这种酶包含RNA和蛋白成分，它可以恢复端粒的长度，在肿瘤细胞中几乎普遍地存在，而在正常体细胞中一般不存在。(Hiyama，etal.，JNatlCancerInst，88116-122，1996).使用端粒酶抑制剂的方法.端粒酶的功能的重要性，以及其选择性地存在于肿瘤细胞中引出了最初的假设，即端粒酶是理想的肿瘤特异性靶，端粒酶抑制剂是一种有治疗效用的抗肿瘤药物。(如inHuminiecki，L.，ActaBiochimicaPolonica，43531-538，1996).提出这一用法是基于如下假设活化的端粒酶是肿瘤的启动和维持所必须的。尚无报道证实端粒酶抑制剂的临床有效性。事实上，此后有几项重要的发现被描述，它们均提示端粒酶抑制剂的治疗价值有限。首先，目前已经公认端粒酶还有不依赖于端粒酶的其他端粒延长机制(如，Gan，etal.，FEBSLett.，52710-14，2002)。其次，即使端粒酶已经被完全抑制，肿瘤细胞中预存在的端粒也常具有足够的长度，足以维持多个周期的细胞增殖。因此，端粒酶抑制剂要经过一段相当长的滞后时间后，才能产生细胞毒性。例如，端粒酶抑制剂在HeLa细胞中在经过23到26次细胞倍增后才产生细胞毒性。(Feng，etal.，Science，2691236-1241，1995)。因为肿瘤无控制地生长将引起致命的肿瘤负荷，如，一名患者通常会在肿瘤体积倍增不到10次后发生肿瘤介导的死亡，所以，端粒酶抑制剂这种需要一较长的滞后期才能对端粒酶产生抑制从而引起细胞死亡或衰老的特性使其不能实用，不是一种有用的治疗药物。虽然在近10年前就首次提出了用端粒酶抑制剂治疗肿瘤的假设，但直到今天，没有任何一种明确鉴定为是端粒酶抑制剂的药物作为抗肿瘤药物在人类患者中检测。(美国专利申请第5,489,508号).在美国专利第10/464,018号中请中，申请者描述了如下发现用紫杉醇(紫杉醇)治疗癌症，可造成端粒损伤从而减低端粒酶活性，引起该肿瘤对紫杉醇的治疗产生耐受性；而同时给予一种端粒酶抑制剂(如AZT，hTR反义体)可以减少这种耐受性，增强紫杉醇的抗肿瘤作用。本申请扩展了申请人此前发明的申请，教导了使得端粒酶抑制成为一种有效的抗肿瘤治疗的方法。一方面，本发明教导了在给予端粒酶抑制剂之前或同时使用细胞减灭疗法，来降低肿瘤负荷，这样在端粒酶抑制剂能够侵蚀端粒的长度使其降低至低于产生凋亡和细胞衰老的临界水平之前，肿瘤负荷不会达到致死的水平，从而使得端粒酶抑制成为一种有效的疗法。因此，本发明教导了使用端粒酶抑制剂来抗击肿瘤的方法，包括给予患者细胞减灭疗法，(即减小肿瘤体积的治疗，如，外科手术、放射治疗、化学治疗等)，然后给予一种端粒酶抑制剂，其中该端粒酶抑制剂的血浆浓度应维持在端粒酶抑制的水平，持续一段较长时间，例如，数周或数个月。该端粒酶抑制剂也可以在细胞减灭治疗的同时给予。这里所教导的内容基于申请中的如下发现在细胞减灭治疗(如化学治疗)过程中和/或结束后，使血浆中苏拉明维持在端粒酶抑制而非毒性的浓度水平，可以促进肿瘤缩小，延缓肿瘤进展，延长人类癌症患者的生存时间。本发明的另一方面教导了端粒酶抑制剂用于细胞毒治疗终止后的用途，例如，因细胞毒治疗的剂量限制性(dose-limiting)毒性而终止。细胞毒治疗，比如化学治疗，常对肿瘤患者产生毒性，因此不能无限期地使用(即作为维持疗法在维持期这段时间中使用)。以临床的观点来看，这是一个重要的问题，因为大多数化学治疗的肿瘤都要进展，而通常不能根除。例如，在肿瘤经化学治疗可以根除的情况下，不到1％的非小细胞肺癌患者可以达到完全应答(Schiller，etal.，NewEngJMed，34692-98，2002)。因此，残留的肿瘤细胞在细胞毒治疗停止后可以再继续生长。相反，因为端粒酶选择性在肿瘤细胞中表达，端粒酶抑制剂不容易产生毒性，因此可以无限期或长时间应用。这样，端粒酶抑制剂抑制细胞增殖或诱导细胞衰老的能力就可以阻止肿瘤的再生长，表现出生存优势。例如，在非小细胞肺癌的人类患者中一种常用而有效的化学治疗是紫杉醇(225mg/m2)与卡铂(AUC＝6)联合，每三周给药一次。紫杉醇的神经毒性可以累积，通常在4到6次治疗后达到剂量限制，迫使治疗终止。通常的情况下肿瘤在数个月内开始继续生长，因此平均生存期约为8个月(Schiller，etal.，2002)。关于这一领域内的现有技术，WO9738013A中教导了端粒酶的肽核酸反义体分子(peptidenucleicacidantisensemolecules)(PNA)与抗肿瘤药物的联合使用。Kondo描述了抑制端粒酶可以提高肿瘤对损伤DNA的药物的易感性(Kondo，etal.，Oncogene，163323-3330，1998)。因此，早期的这些出版物教导了这一普遍被承认的概念对癌症采用两种有效治疗方式的联合治疗较分别使用这两种治疗方式更有效。但是，这些出版物没有揭示要使用细胞减灭治疗来达到减小肿瘤体积的目的足以使端粒酶抑制剂的治疗有效。这些出版物也没有揭示可以在细胞毒治疗终止后使用端粒酶抑制剂来作为一种抗击癌症的方式。因此，本申请所发现的理论是新的，即细胞减灭治疗对于使端粒酶抑制成为一种有效的抗肿瘤疗法是十分必要的，因为此前没有这种用法，也没有报道过此类结果。申请者发现，在细胞减灭治疗的同时合用低剂量的苏拉明，使血浆中苏拉明浓度维持在足以抑制端粒酶，但不足以产生抗肿瘤活性的水平，在人类患者中仍能有效抗癌，这一发现也是令人惊讶的，因为现有技术表明，这样低剂量的苏拉明在人类没有抗肿瘤活性。(Dreicer，etal.，Invest.NewDrugs，17183-189，1999；Falcone，etal.，Tumori，84666-668，1998；Falcone，etal.，Cancer，86470-476，1999；Hussain，etal.，JofClin.Oncol.，181043-1049，2000；Miglietta，etal.，JCancerRes.Clin.Oncol.，123407-410，1997；Mirza，eta/.，ActaOncologica，36171-174，1997；Motzer，etal.，Cancer，723313-3317，1993；Rapoport，etal.，Ann.Oncol.，4567-573，1993；Rosen，etal.，J.Clin.Oncol.，141626-1636，1996)。本发明也教导了用一种端粒酶抑制剂做预处理(pretreatment)，加强化疗的抗肿瘤效果。这是基于本申请的发现，即用低剂量例如达到50微摩尔的血浆浓度的苏拉明做预处理，这样的浓度足以抑制端粒酶，但不足以产生细胞毒性，可以增加化疗活性。将低剂量的苏拉明在肿瘤确立(tumorestablishment)之前或之后使用，或在肿瘤负荷尚未危及生命时使用，都观察到了苏拉明的化疗增敏作用。这一发现是新颖，因为此前没有报道过这种用法和这种结果。事实上，这一发现是惊人的，因为现有技术表明，这样低剂量的苏拉明在非人类的动物中，无论在肿瘤确立之前还是肿瘤确立之后都没有抗肿瘤活性(如，Pesenti，etal.，Br.J.Cancer，66367-372，1992)。端粒酶抑制剂.本申请教导了苏拉明，PPS，或hTR反义体在抑制端粒酶中的用法。这是基于本申请的发现，即苏拉明，PPS，或hTR反义体是有效的端粒酶抑制剂，可以使植于动物的肿瘤中端粒的长度缩短。现有技术教导了具有端粒酶抑制特性的数种化合物。(如，美国专利号Nos.5,656,638,5,760,062,5,767,278,5,770,613，以及5,863,936各文件中所述)。现有技术也教导了顺铂可以抑制端粒酶抑制作用，可能是由于端粒重复序列的交联(Burger，etal.，EurJCancer，33638-644，1997)。现有技术进一步教导了使用肽核酸(PNA)反义分子和硫代磷酸(phosphorothioate)寡核苷酸，通过靶向端粒酶的RNA成分，抑制端粒酶活性的用途(Norton，etal.，NatBiotechnol，14615-619，1996).。但是，这些报道都没有教导苏拉明，PPS，或hTR反义体作为端粒酶抑制剂的用途。端粒酶抑制剂用作(癌症)化学预防.建议用端粒酶抑制剂做化学预防。例如，Akama提示了给予噻唑(thiazolidinone)类化合物类端粒酶抑制剂作为预防用药的可能性(Akama，etal.，U.S.PatentNo.6,452，014,2002)。但是Akama没有教导使用苏拉明，PPS，或hTR义体来抑制端粒酶的用法。使用苏拉明的方法苏拉明，一种多磺酸化的萘基脲(polysulfonatednaphthylurea)，具有多种药理学活性(Ahmann，etal.，Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.，10178，1991；Armand，Bonnay，Gandia，Cvitkovic，DeBraud，Bertheault，Droz，Carde，Schlumberger，andFourcault，1991；Dreicer，etal.，1999；Falcone，etal.，1998；Falcone，etal.，1999；Garrett，etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，817466-7470，1984；Grazioli，etal.，IntJImmunopharmacol，14637-642，1992；Hawking，Adv.Pharmacol.Chemother.，5289-322，1978；Hensey，etal.，FASEB，258156-158，1989；Hosang，J.Cell.Biochem.，29265-273，1985；Hussain，eta/.，2000；Manetti，etal.，Bioorganic&Med.Chem.，6947-958，1998；Mills，etal.，CancerRes.，503036-3042，1990；Myers，etal.，Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.，9113，1990；Ono，eta/.，Eur.J.Biochem.，172349-353，1998；Pollak，etal.，Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.，954，1990；Pollak，etal.，J.Natl.CancerInst.，821349-1352，1990；Stein，CancerRes.，542239-2248，1993；Takano，etal.，CancerRes.，542654-2660，1994；Wade，eta/.，J.Surg.Res.，53195-198，1992；Waltenberger，etal.，J.Mol.CellCardiol.，281523-1529，1996).其抗肿瘤活性据信是由于抑制了DNA聚合酶α和逆转录酶，抑制生长因子(即，血小板衍生的生长因子，纤维母细胞生长因子或FGF，转换生长因子β，表皮生长因子，血管内皮生长因子及胰岛素样生长因子-1)的结合以及IL-2和转铁蛋白与各自的受体结合，抑制PKC的磷酸化活性和氨基葡聚糖代谢。苏拉明还可以抑制Na/K-ATP酶，肿瘤坏死因子以及拓扑异构酶II。任何浓度的苏拉明对端粒酶的抑制活性都是未知的，是本申请的新发现。苏拉明已经在前列腺癌中表现出一定活性(DeClercq，CancerLetters，89-22，1979；Eisenberger，etal.，CancerTreatRev.，20259-273，1994；Fotes，etal.，BiochimBiophysActa.，38262-272，1973；Huang，etal.，Oncogene，9491-499，1994)，在多种实体瘤中进行过试验，既作为单独的药剂使用也可与其他化学治疗联用。苏拉明治疗性血浆浓度在100到200μM(140-280μg/ml)(Funayama，etal.，AnticancerRes.，131981-1988，1993)，而指示的最宽范围为70到210μM(100-300μg/ml)(Klohs，等，US5,597,830,1997)。在这些浓度时，苏拉明在患者中表现出显著的毒性，而活性仅达中度。多个研究组表示苏拉明单药治疗在人类患者中没有可评估的抗肿瘤效果，而对人类患者，高剂量的苏拉明和细胞毒性药物的联合使用与单药相比较也没有产生有益的结果。基于这些发现，这些研究者推荐不使用苏拉明，无论其是单药使用还是与其他细胞毒性药物联合使用(Dreicer，eta/.，1999；Falcone，eta/.，1998；Falcone，eta/.，1999；Hussain，eta/.，2000；Miglietta，etal.，1997；Mirza，etal.，1997；Motzer，etal.，1993；Rapoport，etal.，1993；Rosen，etal.，1996)。因此，没有本发明所根据的发现，就没有使用苏拉明的动机，不论是单药还是任何剂量的苏拉明与其他细胞毒性药物联用，或是将亚治疗(subtherapeutic)剂量而且是非毒性剂量的苏拉明与细胞毒性药物联用。唯一的例外就是使用亚治疗剂量的苏拉明，以便增强其他形式治疗的作用。这一用法由申请者发现，在美国专利6,599,912号文件中有详细描述，该用法需要在对患者进行其他形式的治疗之前、治疗过程中或之后短期内给予苏拉明，如化疗或放疗。本发明支持苏拉明的例外用法或不同用法，并强调指出需要一个较长的总治疗期，例如数周或数个月，数年，或一段不确定的时间，以便抑制端粒酶，使得端粒缩短到足够的程度，抑制细胞增殖或导致细胞死亡。本发明教导了持续抑制端粒酶的需要。因此，需要一种从体内清除较慢的化合物(compound)。苏拉明符合这一需求。苏拉明在人类患者中的药代动力学以三级血浆浓度降低(triphasicplasmaconcentrationdecline)为特征，半衰期为5.5小时，4.1天和78天。总人体清除率(totalbodyclearance)为0.0095升/小时/m2(Jodrell，etal.，JClin.Oncol.，12166-175，1994)。苏拉明在狗体内的分布也很慢，最终半衰期(terminalhalf-life)约为13天(见例8)使用PPS的方法.PPS是一种半合成的类肝素(heparinoid)，具有抗凝作用(Wellstein，etal.，BreastCancerRes.Treat.，38109-119，1996)。鸡绒膜尿囊膜化验(chickenchorioannantoicmembraneassay)中，在患者血浆中没有抗凝作用、且低于其毒性作用的1000倍的浓度条件下，PPS抑制FGF与其受体结合，并抑制血管生成(Parker，etal.，J.Natl.CancerInst.，851068-1073，1993；Wellstein，etal.，1996)。仅在浓度超过1μg/ml(Parker，etal.，1993)时才发现抗凝作用。在体内条件下，如果治疗在肿瘤还不可触及时就开始，PPS可以抑制大鼠MAT-LyLu肿瘤的生长速度，但对于已经形成的肿瘤几乎没有作用，也不能抑制小鼠MCF7肿瘤的转移(McLeskey，etal.，Br.J.Cancer，731053-1062，1996；Nguyen，etal.，AnticancerRes.，132143-2148，1993；Wellstein，etal.，J.Natl.CancerInst.，83716-720，1991)。PPS在临床前肿瘤模型中的抗肿瘤活性使其得到临床评估。结果显示，当PPS剂量调整到避免其抗凝作用时，耐受性良好，但在患者中没有显示抗肿瘤活性(Lush，etal.，AnnOncol.，7939-944，1996；Swain，etal.，Invest.NewDrugs，1355-62，1995)。结果，不再将PPS作为潜在有效的抗肿瘤或抗血管生成药物进行评估。在PDQ临床试验数据库(http//www.nci.nih.gov)中检索2000年1月27日所有进行中的癌症临床试验，显示全球有1,790项试验，但没有关于PPS的试验。因此，没有本发现，就没有使用PPS治疗癌症的动机。用于抗肿瘤活性评估的PPS剂量约为每平方米每天400mg(相当于每天10mg/kg)，口服给药。每天连续给药，血浆浓度随时间增高，在治疗的第15天达到200-460ng/ml。在这一剂量水平，通常在第1-3个月时出现血液学毒性，如腹泻，胃肠道出血或直肠炎(proctitis)。在本试验中直肠炎是剂量限制性毒性(Marshalletal.，Clin.CancerRes.，32347-2354，1997)。要将端粒酶活性抑制50％所需PPS的浓度(0.5-0.6μg/ml，见实施例3)远远高于引起直肠炎毒性的浓度。该考虑以及以下发现对靶器官局部给予苏拉明可以在靶组织中达到端粒酶抑制浓度(如5到100μg/g)，而血浆中苏拉明的浓度相当低(如0.1μg/ml，见实施例13)，导致将PPS局部用于需要抑制端粒酶的器官这一发明。这种新用法减轻了系统性宿主毒性的潜在问题。使用AZT的方法.Melana等人最近总结了AZT的历史情况(Melana，etal.，1998)。AZT用于治疗人类免疫缺陷病毒所感染的患者。AZT最初是作为抗肿瘤药物开发的。但是，它已不再被视为潜在的抗肿瘤药物，因为在饮水中给药时，其在动物中的细胞毒性相对较高。后来发现AZT在弹丸注射的方式给药时，毒性很低。已经对AZT进行I期和II期临床试验，既有单药使用也有与其他药物联合使用，用于胃肠道癌症的治疗。根据可获得的数据计算，这些早期的研究使用的AZT剂量(如7到10g/m2/天)产生的血浆浓度超过10微摩尔，列举如下。通常的口服剂量即每4小时2.5mg/kg或15mg/kg/天之后，患者血浆中AZT的平均稳态浓度为1.06μg/ml(Physician′sDeskReference，2003)。用AZT进行细胞毒性治疗，使用的最小剂量为3g/m2/天(美国专利第5,116,823)，换算后约为85mg/kg/天。将15mg/kg/天时的1.06μg/ml的稳态浓度进行线性外推，得到6μg/ml的预期血浆浓度，对于85mg/kg/天的情况为22μM。现有技术教导，AZT是一种端粒酶抑制剂，产生50％抑制的浓度范围波动于微摩尔到毫摩尔数量级(Strahl，etal.，NucleicAcidRes，22893-900，1994；Strahl，etal.，Mol.CellBiol.，1653-65，1996)。本发明教导了低剂量AZT的使用。申请者发现给予产生毫微摩尔血浆浓度的非毒性剂量的AZT，导致动物中已经充分确定的肿瘤缩小。在动物中加用这种非毒性剂量的AZT也可以加强紫杉醇的抗肿瘤活性。尽管AZT被认为是抗肿瘤药物及端粒酶抑制剂，现有技术尚未描述如此低剂量AZT的用法及效力。事实上，本申请的发现，即产生纳摩尔浓度的低剂量AZT的抗肿瘤活性是令人惊讶的，由于现有技术显示，AZT产生抗肿瘤活性是在更高的剂量，所述剂量产生的血浆浓度在微摩尔水平(Clark，etal.，JCancerRes.Clin.Oncol.，122554-558，1996)。纳摩尔的AZT增强化疗活性这一发现也是令人惊讶的，因为现有技术显示AZT的细胞毒或端粒酶抑制浓度是在微摩尔或毫摩尔的范围内(Strahl，etal.，1994；Strahl，etal.，1996；(Melana，etal.，Clin.CancerRes.，4693-696，1998；例1中的表1).端粒酶反义体反义体构建体对端粒酶活性的抑制作用已有报道，它们应用于肿瘤治疗的可能性也被提出过(Kelland，LancetOncol，295-102，2001)。但是，这里报道的hTR反义体尚未被描述过。而且，通过利用用端粒反义体构建体联合长期端粒酶抑制治疗以及细胞减灭治疗联用的方法没有被提出或描述过。
发明内容本申请基于数个关于端粒酶抑制和端粒缩短的相关发现。首先，申请者发现苏拉明，PPS和hTR反义体是有效的端粒酶抑制剂，可以缩短植于动物的肿瘤的端粒长度。第二点发现是，对负荷肿瘤的动物中已经充分成型的肿瘤，用苏拉明进行预处理可以使化疗活性增强。第三点发现是，端粒酶抑制剂，诸如苏拉明和PPS等，可以增强癌症的化疗和放疗的抗肿瘤活性。第四点发现是，在细胞减灭治疗期间及其结束后使血浆苏拉明维持在端粒酶抑制性浓度会促进肿瘤缩小，延缓肿瘤生长和延长人类肿瘤患者的生存时间。第五点发现是，将苏拉明局部用于治疗所意图的靶组织，使得局部组织浓度达到足以使该组织内端粒酶被抑制、端粒被缩短的程度，而同时在血浆内苏拉明的浓度极低，不足以抑制端粒酶。第六点发现是，使用产生极低量的血浆浓度的非毒性剂量的AZT，导致动物充分确定的肿瘤消除，并使紫杉醇在动物中的抗肿瘤活性增强。因此，申请者提供了可以应用于多种肿瘤治疗中，并且使治疗结果较标准治疗有所改善的方法，化合物和组合物。第一方面，本发明教导了使用苏拉明，PPS或hTR反义体，通过与端粒酶或含有端粒酶的细胞接触，抑制端粒酶的方法。第二及其相关方面，教导了抑制患者优选哺乳动物中的端粒酶活性的方法，该患者患有端粒酶介导的疾病，所述方法包括给予该患者治疗有效量的苏拉明或其他端粒酶抑制剂。第三方面教导了改进肿瘤患者优选哺乳动物的治疗结果的方法，包括给予患者使用端粒抑制剂量的苏拉明或其他端粒酶抑制剂。给予端粒酶抑制治疗的方式应使肿瘤暴露于端粒酶抑制剂的时间维持至少数个增殖周期，优选情况下，至少维持10或20个增殖周期。第四方面教导了增强癌症患者优选哺乳动物的治疗的方法，包括在细胞减灭治疗期间或结束后，给予患者使用端粒酶抑制量的苏拉明或其他端粒酶抑制剂。这种细胞减灭治疗可以是肿瘤的外科切除或非手术治疗，如放射治疗，化疗，光动力学治疗。为了获得更好的结果，可以使用一种或多种端粒酶抑制剂。第五方面，本发明教导了治疗患者中癌症的方法，所述方法通过首先确认患者可能患有癌症或患有小到不能检测的癌症，给予该患者端粒酶抑制药物，从而达到治疗癌症或抑制癌症发展的目的。对这类患者使用端粒酶抑制药物治疗将会是有效的，因为初始的肿瘤体积较小，在肿瘤负荷威胁到患者的健康之前，还允许许多个肿瘤增殖周期。第六方面，本发明是一种治疗缓解期患者的方法，所述缓解期在他或她的癌症治疗成功后，并且所述患者还有新发癌症或癌症复发的潜在危险。对患者毒性小或无毒性的药物尤其适用，因为它具有良好的风险-受益比。苏拉明，PPS或AZT等，在抑制端粒酶活性所需的低剂量时，对患者毒性很小或无毒，并提供这种良好的风险-受益比。第七方面教导了用hTR反义体转染细胞来抑制端粒酶的方法。第八方面，本方面教导了使用无毒性剂量的AZT抗击癌症的方法，所述无毒性剂量产生的血浆浓度低于微摩尔范围，例如在纳摩尔范围。第九方面，端粒酶抑制剂可以局部用药，用于已知肿瘤附近的位置，或用于可疑目前或将来会发生肿瘤的器官。局部应用的端粒酶抑制剂会在应用部位附近的肿瘤细胞或组织内产生有效的端粒酶抑制性浓度。局部用药，例如注射法或埋入法，可以采用储存库(depot)的形式，比如缓慢释放的装置。端粒酶抑制剂的局部给药将在治疗所靶向的组织中产生端粒酶抑制性浓度，而不需要在非治疗靶向的血浆或其他器官中产生端粒酶抑制性浓度。此外，交叉参考的专利申请(美国专利申请第09/587,559号)中，申请人描述了这样的发现，即酸性和碱性纤维母细胞生长因子(FGF)会导致对化疗的广谱肿瘤耐受，且FGF抑制剂可以增强癌症化学治疗和放射治疗的抗肿瘤活性。苏拉明和PPS是FGF抑制剂。本发明教导了这两种制剂的端粒酶抑制活性。苏拉明和PPS在产生FGF抑制的浓度也能产生端粒酶抑制作用。因此，苏拉明或PPS可以与细胞毒抗癌治疗联合给予，以增强细胞毒药物的效果，同时也抑制端粒酶，使端粒长度缩短，从而获得附加的有益抗肿瘤效果。在细胞毒性疗法结束后，可以继续给予苏拉明或PPS，以获得长期抑制端粒酶活性的作用。这(两)种药物达即靶向FGF又靶向端粒酶的机制的用途给患者和治疗的医生提供了便利，也改善了细胞毒治疗的结果(outcome)。如上文所解释的，用端粒酶抑制剂进行有效的抗癌治疗需要在肿瘤细胞的多个增殖周期中(overmultipleproliferationcyclesofthetumorcells)抑制端粒酶活性。这种持续的抑制在使用在患者体内具有长终末半衰期(例如超过一周)的药物的情况下最有效地实现，以便在并不频繁的治疗中持续保持端粒酶活性的抑制作用。苏拉明的清除半衰期在人类(Jordelletal.，1994)和非人类动物(见例8)中超过一周，满足这一要求。本发明所述的化合物作为无害的端粒酶活性抑制剂，具有多种有价值的应用，例如用于哺乳动物诸如人中的癌症的治疗。本发明的药物组合物可以应用于在体内杀死癌细胞的治疗方案或用于在离体杀死癌细胞的治疗方案。因此，本发明提供了治疗癌症的治疗性化合物和组合物，以及治疗人类及其他哺乳动物(例如，狗，猫，牛，马和其他兽医学所涉及的动物)中的癌症及其他端粒酶介导的疾病的方法。本发明的其他特性和优点通过以下的详细描述和权利要求书可以明显体现出来。发明详述为方便起见，将说明书，实施例及权利要求书中使用的某些术语集合于此，以便保证对于本发明的理解清晰一致。定义本文术语“异常生长(aberrantgrowth)”指一种细胞表型，其与细胞的正常表型不同，具体指与疾病诸如癌症等直接或间接相关的那些细胞表型。本文术语“给药(adminstering)”指将药剂引入细胞，例如在体外；或动物体内的细胞，即在体内；或引入细胞之后再将所述细胞放回动物体内(即离体)。本文术语“药剂”、“药物”、“化合物”、“抗癌药”、“化疗剂(therapeutic)”、“抗瘤剂(antineoplastic)”及“抗肿瘤药”可以互换使用，指具有抑制或减慢异常细胞生长(如肿瘤)特性的药剂(除非作进一步限制)。前述术语也意图包含细胞毒性，杀细胞性或细胞生长抑制性药剂。术语“药剂”包括小分子，大分子(如，肽、蛋白、抗体或抗体片段)，以及核酸(如，基因治疗构建体，重组病毒、核酸片段(包括，例如合成核酸片段)。本文术语“凋亡”指任何非坏死的，细胞调控的细胞死亡形式，如本领域已经明确制定的标准所定义。本文术语“良性的”、“癌前的”和“恶性的”的定义按本领域公认的含义。本文术语“癌症”、“肿瘤细胞”、“肿瘤”、“白血病”，或“白血病细胞”可以互换使用，指代任何肿瘤(“新生物”)，诸如癌(来源于上皮细胞)，腺癌(来源于腺体组织)，肉瘤(来源于结缔组织)，淋巴瘤(来源于淋巴组织)或血液系统肿瘤(例如，白血病或红白血病(erythroleukemia))。术语“癌”和“肿瘤细胞”也意图包括癌组织或肿瘤团块，应理解为癌细胞或肿瘤细胞的集合(compilation)。此外，术语“癌症”和“肿瘤细胞”包括良性，癌前性及恶性的癌或细胞。通常情况下癌或肿瘤细胞会显示各种本领域公知的特性(hallmark)，诸如生长因子非依赖性，缺乏细胞/细胞接触生长抑制和/或异常核型。与之相反，通常情况下正常细胞在培养基内接种只能进行有限次数的传代且/或表现出各种本领域公认的属于正常细胞的特点(如，生长因子依赖性，接触抑制，和/或正常核型)。本文术语“细胞”包括任何真核细胞，诸如体细胞或生殖细胞系的哺乳动物细胞或细胞系，如，HeLa细胞(人类)、NIH3T3细胞(鼠)、胚胎干细胞和各种细胞类型如造血干细胞、成肌细胞(myoblast)、肝细胞、淋巴细胞和上皮细胞以及例如本文描述的各种细胞系。本文术语“确认患者患有或将患有(identifyingapatienthavingorabouttohave)”是指使用各种本领域所公认的诊断或预后技术，包括例如前列腺特异性抗原(PSA)试验、BRCA1和/或BRCA2基因分型(genotyping)、遗传绘图(geneticprofiling)等技术，患者已经被确诊患有或从统计学角度看可能患有癌症。这一术语也意图包含仅仅知道或者接受任何提示患者正患有或将患癌症的信息。本文术语“抑制或减慢细胞生长”，例如，癌细胞，是指使其生长和/或转移减慢，干扰或停滞，并且可能但不是必然需要，例如，细胞的异常生长完全消除。这一术语也意图包括通过细胞死亡(凋亡)或坏死来抑制或减慢细胞生长。本文术语“局域地(locally)”及“区域地(regionally)”可以互换使用，指将治疗用于肿瘤团块内，或带有肿瘤的器官内，或总体肿瘤范围或可以种植上转移灶的区域，或癌前病灶内，例如对某种肿瘤类型特异的器官，如前列腺特异于前列腺癌。本文术语“肿瘤负荷”是本领域中广泛公认的术语，指患者体内肿瘤组织的部分或全部质量、体积或尺寸。肿瘤尺寸要通过标准的临床手段确定，通常包括触诊或影像学方法(例如，x线，CAT扫描，PET扫描，超声扫描图(ultrasoundsonogram))。肿瘤负荷可以通过肿瘤尺寸的总和来评价。肿瘤负荷是一种公认的反映疾病的临床进程的指标，肿瘤负荷大预示预后不良，而肿瘤负荷小则是预后良好的征象。通常认为肿瘤负荷与肿瘤对患者的致命性相关。尽管人类患者经常能承受大约1kg的肿瘤负荷，但不能将其视为普遍规律，因为肿瘤发生的部位和肿瘤可能导致的破坏是与肿瘤团块相关的致命性的重要决定因素。例如，在脑内生长的转移肿瘤可以在尺寸仅有几厘米时就致命，而发生在肝脏或内脏(viscera)的肿瘤即使大得多也可以承受。因此，对于脑内发生了肿瘤转移的患者，致命性的肿瘤负荷量可以比没有脑内转移的患者小很多。本文术语“系统性”指为使药物广泛分布于受试者的系统性而采用的治疗途径，诸如口服或经静脉内用药。同样“系统”浓度指的是整个体内的浓度，如循环血浆中检测到的浓度。本文术语“可药用的载体”是领域内公认的，包括一种可药用的材料、组合物或运载体(vehicle)，适于用来将本发明的药物用于哺乳动物。本文术语“药物组合物”包括适用于哺乳动物(如人类)的制剂。当本发明的化合物作为药剂用于哺乳动物，如人类时，以该药剂原型或以药物组合物的形式用药，所述药物组合物含有例如0.1到99.5％(较为优选的是0.5到90％)的活性成分(如，治疗有效量)以及可药用的载体。本文术语“受试者”意为包括人类和非人类动物(如，小鼠、大鼠、兔、猫、狗、家畜和灵长类)。优选的人类动物包括患有某种病症的人类患者，该病症的特点是异常的细胞生长，如癌症。本文术语“端粒”指真核细胞染色体的末端，其在癌细胞中经常会反常的延长。本文术语“端粒酶”指细胞酶或酶活性，其针对核苷酸聚合作用或维护染色体末端的、已知为端粒的结构。本文术语“端粒酶抑制药物”和“端粒酶抑制剂”指抑制(完全或部分地)端粒酶活性的药物。本文术语“端粒酶抑制作用”指可直接测定的对端粒酶的抑制作用，例如，通过采用改良的TRAP测定法证实，其中改良的TRAP测定法由Gan等人描述(Ganeta/.，Pharm.Res.，18488-493，2001)；或根据用TALA测定法证实所有细胞内平均端粒长度的缩短，其中TALA测定法证由Gan等人描述(Ganeta/.，Pharm.Res.，181655-1659，2001)；或用FISH测定法证实各个细胞中的单个端粒的损耗(erosion)，其中FISH测定法由Gan等人描述(Ganetal.，Pharm.Res.，181655-1659，2001)。本文术语“化学增敏剂”指一种药剂，它可以增强第二种药剂，如抗癌化疗药剂的抗肿瘤效果。术语“化学增敏作用”指通过化学增敏剂，癌症化疗药剂的抗肿瘤活性与没有使用这种化学增敏剂时该癌症化疗药剂的抗肿瘤活性相比而言有所提高。本文术语“化学预防”指使用药剂预防肿瘤、癌症的发生。术语“化学预防药剂”指可以预防肿瘤、癌症发生的药剂。本文中，端粒酶抑制药剂和/或化学治疗剂的“治疗学有效量”指这种药剂单独或联合使用时的量，所述量在以单剂或多剂给予受试者(如人类患者)后，可以有效抑制端粒酶的活性(对于端粒酶抑制药剂)或抑制或减慢异常细胞生长例如癌症(对于化学治疗剂)。本文术语“戊聚糖多聚硫酸酯(pentosanpolysulfate)”或“PPS”指半合成的硫酸酯化的(sulfated)多聚阴离子，其由β-D-吡喃木糖残基构成，特性与肝素类似，分子量在1500-5000范围内。举例来说，Merckindex，第10版，第1025页，Merck&Co，Inc，1983中有对该化合物的描述。表示该化合物的其他名称还有木聚糖氢硫酸酯(xylanhydrogensulfate)、木聚糖多聚硫酸酯(xylansulfate)、CB806l；Fibrase；Hemoclar.本文术语“生物标志”与领域内公认的意义相同，指分子或化合物，如蛋白或基因，其存在或其水平可以提示疾病的存在或发生疾病的可能性提高，所述疾病如癌症。例如，前列腺特异抗原水平升高的患者很可能患有或发生前列腺癌。BRCA1或BRCA2基因具有突变的患者很可能患有或发生乳腺癌和卵巢癌。本文术语“离体(exvivo)”指使用在组织培养中的活细胞进行的试验。端粒酶抑制剂如上所述，细胞的无限增殖常涉及端粒酶的活化等。更具体的是，分析端粒酶的活性已经证实了端粒酶活性与许多肿瘤细胞系保持无限增殖的能力之间的关系，所述肿瘤细胞系包括皮肤、结缔组织、脂肪、乳腺、肺、胃、胰腺、卵巢、宫颈、子宫、肾脏、膀胱、结肠、前列腺、中枢神经系统、视网膜和血液肿瘤细胞系(Kimeta/.，1994，Science，2662011-2014)。这一信息以及现有技术的补充都提示端粒长度的缩短可以产生凋亡信号或复制性的老化(replicativesenescence)(WO93/23572)，表明在足够长的时间内抑制端粒酶活性可以作为一种有效的抗癌治疗。在一项相关的实施方案中，本发明是抑制细胞增殖或复制的方法。在这项方法中，本发明所描述的可以抑制端粒酶活性的一种或多种制剂是在细胞复制时提供的。如上所解释的，端粒酶对线性染色体DNA的末端完全地复制而不会损失每股链的5’末端的终末碱基有重要作用。无限增殖的细胞和迅速增殖的细胞利用端粒酶来在染色体末端添加端粒DNA重复。端粒酶抑制会导致增殖的细胞不能添加端粒，这些细胞就会逐渐停止分裂。这种抑制细胞增殖能力的方法可以有效用于治疗与细胞增殖速度提高相关的疾病，诸如在癌症中(恶性细胞中的端粒酶活性)，及例如造血作用(hematopoiesis)(造血干细胞中的端粒酶活性)，这对于本领域普通技术人员来说也是显而易见的。因此，一方面，本发明教导了苏拉明、PPS和hTR-反义体抑制端粒酶的用途，用于预防或治疗多种类型的恶性肿瘤。具体是，本发明的化合物可以提供高度广泛的治疗恶性肿瘤的方法，如表达端粒酶的人肿瘤细胞系和肿瘤的高百分比所证明的。更重要的是，本发明中描述的化合物可以有效提供选择性攻击恶性细胞的疗法，因此避免了与细胞毒性化学治疗药剂有关的多种有害的副作用，所述药剂是不加区别地杀伤分裂中的细胞。本发明的化合物可以扩展到苏拉明和PPS的类似物，这些类似物也抑制端粒酶。另一方面，本发明提供了用于抑制端粒酶的化合物，与这些化合物有关的药物组合物和方法，或它们的可药用的盐，其中包括使端粒酶与化合物或其可药用的盐接触，其中该化合物是苏拉明或PPS。在一项优选的实施方案中，将要抑制的端粒酶是哺乳动物的端粒酶，如人的端粒酶。端粒酶抑制剂的抗肿瘤活性本发明的第二方面及其相关方面是，发现了苏拉明在受试者体内的量维持在可以有效抑制端粒酶活性的水平时，可以缩短肿瘤端粒的长度。因此，本发明的这一方面教导了抑制患者的端粒酶活性的方法，这类患者优选的是哺乳动物患有端粒酶介导的疾病，所述方法包括给药患者治疗有效剂量的苏拉明或其他端粒酶抑制剂。本发明所描述的化合物可以抑制细胞提取物、培养的细胞和完整动物细胞中的端粒酶。本发明中制剂的活性也可以用本文描述的技术来展示。用来鉴定本发明的化合物的方法之一是使细胞、组织、较优选的是细胞提取物或其他含有端粒酶的制备物，与数种已知浓度的受试化合物在与端粒酶活性相容的缓冲剂中接触。检测每个浓度的受试化合物的端粒酶活性，且化合物的IC50值(可以对酶活性产生的抑制作用达初始或对照值的50％的受试化合物浓度)以及其IC90用标准技术测定。可采用用于确定本发明中的制剂对端粒酶的抑制浓度的另外的方法，其根据本发明所公开的信息，对于本领域技术人员是显而易见的。根据如上描述的方法，检测并发现苏拉明和PPS的IC50值低于10μM。关于使用本文描述的化合物来治疗恶性疾病，预期本发明所描述的化合物会在端粒酶依赖细胞系中诱导骤退(crisis)。对端粒酶依赖的细胞系，如人类咽喉FaDu细胞，预期用本发明的化合物进行治疗也会引起所治疗细胞中端粒长度的缩短。预期本发明中描述的化合物也会引起人类肿瘤细胞系细胞分裂过程中的端粒缩短，所述人类肿瘤细胞系如FaDu细胞和人前列腺PC3细胞。但是重要的是，在作为对照的正常人类细胞中，如纤维母细胞来源的BJ细胞，观察到的端粒缩短与仅用运载体，如生理盐水处理的细胞没有差别。本发明所描述的化合物在推荐的端粒酶抑制的浓度时，在正常细胞中也没有显著的细胞毒效应。此外，本发明描述的化合物对端粒酶的特异性可以通过将它们对端粒酶的活性(IC50)与它们对其他酶类的活性比较来进行评价。如本领域内所公认的，酶是促进生物反应的分子。举例来说，体外试验中，具有与端粒酶类似的相似核酸结合或修饰活性的酶包括DNA聚合酶I，HeLaRNA聚合酶II，T3RNA聚合酶，MMLV逆转录酶I，拓扑异构酶I，拓扑异构酶II，末端转移酶和单链DNA结合蛋白(SSB)。也包括其他不属于该组的酶。如果化合物对于端粒酶的IC50值相对于其对于被筛查的其他酶的IC50值而言较低，认为该化合物对端粒酶具有特异性。或者，如果化合物对于端粒酶的IC90值相对于其对于被筛查的其他酶的IC90值低，就认为该化合物对端粒酶具有特异性。也可以用小鼠异种移植物模型进行体内试验，所述小鼠异种移植物模型如将FaDu肿瘤细胞植入裸鼠，用本发明的化合物进行治疗的小鼠被预期具有肿瘤团块，一般说来，可能会减小、持续不变或者甚至在首次剂量用药后一段时期内会增大，但是随着持续的治疗，肿瘤治疗(mass)将会缩小。与之相反，预期用生理盐水处理的对照组动物发生的肿瘤团块将会持续增大。根据前述信息，本领域技术人员将会意识到本发明也提供了对涉及本发明的化合物给药的治疗方案进行选择的方法。为了这一目的，进行末端限制片段(terminalrestrictionfragment，TRF)分析是有帮助的，这种分析中，将肿瘤细胞的DNA用对特异性序列不是端粒序列(T2AG3)n的限制性内切酶酶解。这种分析方法的一个示例是以前的一项专利申请(美国专利申请第10/464,018号)。DNA酶解之后，进行凝胶电泳来将限制内切片段按大小分离开来。分离开的片段用端粒序列特异性核酸引物检测，测定含有样本中细胞的端粒DNA的末端片段的长度。通过测量端粒DNA的长度，人们可以估计应端粒酶抑制剂的给药应持续多久，以及是否还应该采用其他的治疗方法(如，外科手术，化疗和/或放疗)。另外，在治疗中，人们可以检测细胞来判断经过进行性(progressive)细胞分裂，端粒长度是否发生了缩短，以便证明治疗的效果。在化疗前的端粒酶抑制预处理本发明的第三个方面是发现了在癌症化疗开始前用苏拉明治疗可以增强肿瘤化疗的有效性，此时存在最小残余病变(minimalresidualdisease)，给予的苏拉明的量可以有效抑制端粒酶活性。因此，本发明的这一方面教导了改善癌症患者优选哺乳动物的治疗结果的方法，包括给患者使用端粒酶抑制量的苏拉明或其他端粒酶抑制剂。优选的是，给予端粒酶抑制治疗的方式应使肿瘤暴露于端粒酶抑制剂的时间维持至少数个增殖周期，更优选的情况，至少维持10或20个增殖周期。优选的方法是在给予细胞毒性方案前给予端粒酶抑制剂。可替换的优选方法是在给予细胞毒性方案之前及其期间给予端粒酶。优选的实施方案是，所述端粒酶抑制剂是苏拉明，给予苏拉明的量可以有效抑制端粒酶活性，而不足以产生抗肿瘤活性。细胞减灭治疗之后继续端粒酶抑制作用本发明的第四方面是发现了在细胞减灭治疗期间或结束后维持血浆中苏拉明的浓度在端粒酶抑制性水平可以促进肿瘤缩小，延缓肿瘤生长，并延长肿瘤患者的生存时间。因此，本发明的这一方面提供了强化癌症患者治疗的方法，所述癌症患者优选的是哺乳动物，包括在细胞减灭治疗期间或结束后给患者使用治疗有效量的苏拉明或其他端粒酶抑制剂。这种细胞减灭治疗可以是外科切除肿瘤或非手术治疗，如，放射治疗，化疗，光动力治疗(photodynamic)。优选的，给予端粒酶抑制治疗的方式要使肿瘤暴露于端粒酶抑制剂的持续时间相当于至少数个增殖周期，更优选地应达至少10到20个增殖周期，端粒酶抑制剂的血浆浓度应为已知可以对肿瘤产生端粒酶抑制的浓度。优选的方法是在给予细胞毒性治疗方案期间和之后给药端粒酶，这样细胞毒性治疗方案会减小患者的肿瘤负荷，从而可以为端粒酶抑制剂提供足够长的前导时间(leadtime)，使得端粒缩短到低于引起细胞死亡和老化的临界长度。另一个实施方案中，通过外科方式实现肿瘤尺寸的缩小。再一个实施方案中，在细胞毒性治疗方案终止后(如由于在癌症患者中的剂量限制毒性作用而终止)后，给予端粒酶抑制剂作为抗击癌症的方式。优选地，在细胞毒性治疗方案终止之后给予端粒酶抑制剂，而且端粒酶抑制剂的用药应持续至少数周、数个月、数年，或更优选的是，无限期使用。申请者发现苏拉明和PPS使肿瘤细胞对细胞毒性治疗如癌症化学治疗和放疗的敏感性增加(美国专利申请序列号09/587,559；实施例10)。因此，这两种化合物中任何一种或两种化合物的联合使用可以用来使肿瘤细胞对细胞毒性抗癌治疗敏感性增加，而且同时也提供抑制端粒酶活性的附加益处，从而促进端粒的缩短。在细胞毒性肿瘤治疗方案终止后，用苏拉明和PPS或其他端粒酶活性的抑制剂的治疗可以持续下去。苏拉明和PPS的这种双重治疗获益代表了使用这些化合物治疗的意外优势。利用端粒酶抑制作用的化学预防第五方面，本发明教导了治疗患者的癌症的一种方法，其通过以下过程进行确认患者将患有癌症，或体内的(harbor)癌症小到常规方法不能检测的程度时，给予患者端粒酶抑制药物，从而达到治疗癌症或抑制癌症发展的目的。例如，某些检测肿瘤的常规方法是物理方法(如，触诊)，病理学方法(如，尿或便中的血)或影像学方法(如，X线、CAT扫描、PET扫描、超声扫描图)。对可能患有癌症的或体内有不可检测的癌症的患者进行确认也可以通过监测生物标志物或基因缺陷来完成。例如，患者的血浆前列腺特异抗原(PSA)的水平可能超过正常界值即4ng/ml，但是直肠指检可能没有可以触及的肿瘤，通过超声成像也看不到肿瘤。升高的PSA水平提示前列腺癌症的形成或存在可能性大，而物理检测未发现则提示肿瘤相当小，或处于前驱(precursor)状态。另举一例，一名女性患者目前没有可测定的肿瘤，却具有BRCA1或BRCA2两种基因的突变，显示其患乳腺或卵巢癌的易患素质很强烈。领域内公认的其他用于评价肿瘤发生可能性的和肿瘤负荷方法也包括在内。对这类患者使用端粒酶抑制药物治疗可能有效，因为初始的肿瘤体积较小，在肿瘤负荷成胁到患者的健康和安乐之前，还留有许多个肿瘤增殖周期。第六方面，本发明是一种治疗缓解期患者的方法，这类患者在他或她的癌症治疗成功后，还有新发癌症或癌症复发的较大(substantial)危险。例如，一名患者因弥漫播散的大B细胞淋巴瘤而使用如下经静脉内给药的治疗方案方案环磷酰胺(cyclophosphamide)750mg/m2，阿霉素(doxorubicin)50mg/m2，长春新碱(vincristine)1.4mg/m2，及口服强的松(prednisone)100mg/m2，结果显示患者对此治疗反应缓慢，逐渐达到缓解，患者癌症发生复发的统计学上的可能性较高(Armitage，eta/.，JClin.Oncol.，4160-164，1986)。该患者用端粒酶抑制剂治疗将会获益。如果患者的肿瘤再次出现，端粒酶抑制剂会有效进行抗击该患者的癌症。对患者毒性小或无毒性的药物尤其适用，因为它具有良好的风险-受益比。苏拉明，PPS或AZT等，在抑制端粒酶活性所需的低剂量时，对患者毒性很小或无毒，也就具有这种良好的风险-受益比。用hTR反义体进行端粒酶抑制本发明的第七个方面是基于申请者的发现，即用hTR反义体转染细胞可以在体外有效抑制端粒酶的活性。实施例4中，明显显示出了定义hRT反义体的核酸序列。因此，本发明教导了用hRT反义体转染的细胞来抑制端粒酶的方法。低剂量AZT第八方面，本方面教导了使用无毒性剂量的AZT抗击癌症的方法，其产生的血浆浓度低于微摩尔范围，例如纳摩尔范围。一个实施方案中，将AZT给予肿瘤患者，没有伴随其他治疗。另一个实施方案，在手术细胞减灭治疗后给癌症患者使用AZT。另一个实施方案，在非手术细胞减灭治疗之前，期间或其后使用AZT。端粒酶抑制剂在靶位置或靶器官的局部用药第九方面，端粒酶抑制剂可以在已知肿瘤附近的位置局部或区域性用药，或用于可疑目前肿瘤发生的器官或预计将来会发生肿瘤的器官。局部应用的端粒酶抑制剂会在给药部位附近的肿瘤细胞或组织内产生有效端粒酶抑制性浓度。局域性用药，例如注射法或埋入法，可以采用储存库的形式，比如缓慢释放的装置。根据治疗部位的不同，植入可能需要外科手术。例如，一名高级别表皮膀胱癌的患者经过成功治疗后可能没有已知的残余肿瘤，但统计学上肿瘤复发的风险高。在这样的患者中，可以通过经尿道插入术(transurethralinsertion)直接在膀胱内置入慢性释放端粒酶抑制剂的装置，持续释放的时间可以在数周、数个月或数年。释放出来的端粒酶抑制剂可以在膀胱的粘膜层或肌肉层产生有效的抑制浓度，从而抑制肿瘤的形成，并最终抑制任何复发肿瘤。另举一例，在前列腺特异抗原(PSA)浓度升高而怀疑前列腺癌的患者，可以采用在前列腺内部或其附近局域性给予或植入缓慢释放的化合物，来递送一种或多种端粒酶抑制剂，来减少发生有症状的肿瘤的机率。端粒酶抑制剂的局部给药将在治疗所靶向的组织中产生端粒酶抑制性浓度，而不在血浆或并非治疗的靶的其他器官中产生端粒酶抑制性浓度。本发明的这一方面是基于如下发现，将苏拉明局部用于靶器官，结果在靶组织中产生端粒酶抑制浓度(如，5到100μg/g)，而血浆内的苏拉明浓度很低(如0.1μg/ml或更低)。局域性给药端粒酶抑制剂与系统性用药途径相比具有某些优势。一个优势是它即避免了频繁给药的需要，又能保证端粒酶抑制作用持续不间断。另一优势是，局部用药减小了端粒酶抑制剂对其他病非治疗靶的组织产生毒性作用可能。即使全身性给药低剂量端粒酶抑制剂如苏拉明后也没有明显毒性，其中需要在癌症患者中提供端粒酶抑制浓度(如，见实施例7)，减少非肿瘤携带器官的暴露可以进一步减少超敏反应或其他少见事件的几率。考虑到系统性用药后可能表现出毒性的其他端粒酶抑制剂的应用，这一优势就更加突出了。另一使用PPS(或苏拉明)的实施方案中，本发明可以通过采用膀胱局部给药如注射或植入来治疗膀胱间质炎，所述药物可为在储存库如慢性释放装置中的形式。这一方法可以用来使治疗患有膀胱间质炎的患者的治疗结果增强，并通过将有效量的以一种或多种物质局部给药患者的方式实现苏拉明，苏拉明的可药用的盐、戊聚糖多聚硫酸酯(PPS)及PPS的可药用的盐。抑制或减少细胞生长的方法一方面，本发明描述了抑制或减少细胞生长的方法，所述细胞生长例如异常生长，如增生或肥大性(hypertrophic)细胞生长，通过将细胞与至少一种细胞减灭药物和至少一种端粒酶抑制药物接触来实现。一般说来，这些方法包括一个步骤，即将病理性过度增殖的细胞(如癌细胞)与至少一种端粒酶抑制药物接触，其剂量可以有效减少或抑制细胞的增殖或导致细胞杀伤。本方法可以用于培养的细胞，如，在体外或离体条件下，也可以用于受试者体内的细胞，如，作为体内治疗试验的一部分。治疗方案可以实施于人类或其他动物受试者。本发明的联合治疗的治疗有效性增强，代表了一种有希望的方案，其可以替代传统的高毒性抗肿瘤药物方案。虽然端粒酶抑制药物也可以单独使用，本药物优选地与细胞毒性药物联用，以获得优于任一药物单用的预期疗效的治疗效果。更进一步的，这些药物还可以与其他抗癌药物联用，如抗微管药物，拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢药物、有丝分裂抑制剂、烷化剂，嵌入剂、可以影响信号转换途径的药剂(如蛋白激酶C抑制剂，如抗激素，如生长因子受体的抗体)、促进凋亡和/或坏死的药剂，生物反应调节剂(如干扰素，如白介素，如肿瘤坏死因子)、手术或放射治疗。使用上述策略，细胞毒药物与端粒酶抑制药物联用时得到增强且优选协同的作用，提高了抗癌药物的有效性，从而允许使用较低剂量的这些药物的一种或多种(甚至，例如，可以使用药物的亚治疗剂量，只要其仅在单独使用而不是联用时被测试或使用)；由此降低受试者如人类癌症患者中的诱导的副反应(如，任何领域内公认的与给予未更改剂量的化疗药物相关的副反应，如，脱发、中性粒细胞减少(neutropenia)、肠上皮细胞脱落(intestinalepithelialcellsloughing)等)。治疗癌症的方法本发明中的方法可以用于治疗多种器官系统的恶性疾病，如影响肺、乳腺、淋巴样组织(lymphoid)、胃肠道(如，结肠、直肠)、泌尿生殖道(如，前列腺、膀胱、睾丸)、咽的恶性疾病，以及腺癌，其包括如下恶性疾病，诸如结肠癌、直肠癌、肾细胞癌、前列腺癌和/或睾丸肿瘤、肺非小细胞癌、小肠癌和食道癌。可以用本发明的方法治疗的常见实体肿瘤包括例如纤维肉瘤(fivrosarcoma)、肌肉瘤(myosarcoma)、脂肪肉瘤(liposarcoma)、软骨肉瘤(chondrosarcoma)、成骨肉瘤(ostergeincsarcoma)、脊索瘤(chordoma)、血管肉瘤(angiosarcoma)、内皮肉瘤(endotheliosarcoma)、淋巴管肉瘤(lymphangiosarcoma)、淋巴管内皮肉瘤(lymphangioendotheliosarcoma)、滑膜瘤(synovioma)、间皮瘤(mesothelioma)、尤文氏肉瘤(Ewing’stumor)、平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma)、横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)、胃癌(gastriccancer)、食管癌(esophagealcancer)、结肠癌(coloncarcinoma)、直肠癌(rectalcancer)、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫癌、头和颈部的癌(canceroftheheadandneck)、皮肤癌、脑癌、鳞状细胞癌、皮脂腺癌(sebaceousglandcarcinoma)、乳头状癌(papillarycarcinoma)、乳头状腺癌(papillaryadenocarcinoma)、囊腺癌(cystadenocarcinoma)、髓样癌(medullarycarcinoma)、支气管源性癌(bronchogeniccarcinoma)、肾细胞癌、肝细胞癌、胆管癌、绒毛膜癌(choriocarcinoma)、精原细胞瘤(seminoma)、胚胎性癌(embryonalcarcinoma)、Wilm氏瘤(Wilm’stumor)、宫颈癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、上皮细胞癌、胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤(oligodentroglioma)、脑膜瘤、黑素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、白血病、淋巴瘤或卡波奇肉瘤(Kaposi’ssarcoma)。本发明的方法也可以用于抑制或减少造血细胞起源的细胞的生长，如来源于髓系、淋巴系或红系或其任何前体细胞。举例说，本发明涉及各种骨髓来源的疾病的治疗，所述疾病包括急性早幼粒细胞性白血病(acutepromyeloidleukemia)(APML)、急性粒细胞白血病(acutemyelogenousleukemia)(AML)和慢性粒细胞白血病(chronicmyelogenousleukemia)(CML)，但不限于此。(综述于Vaickus，L.(1991)Crit.Rev.Oncol./Hemotol.11267-97)。可以用此法治疗的淋巴细胞的恶性疾病包括，急性成淋巴细胞性白血病(acutelymphoblasticleukemia)(ALL，包括B系ALL和T系ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(chroniclymphocyticleukemia)(CLL)、幼淋巴细胞性白血病(prolymphocyticleukemia)(PLL)、毛细胞白血病(ha的cellleukemia)(HLL)和Waldenstrom氏巨球蛋白血症(WM)(Waldenstrom′smacroglobulinemia)，但不限于此。预期可以使用本发明的治疗方法其他类型的恶性淋巴瘤还包括，非何杰金淋巴瘤(non-Hodgkin′slymphoma)及其变体，如外周T细胞淋巴瘤(peripheralT-celllymphomas)、成人T细胞白血病/淋巴瘤(adultT-cellleukemia/lymphoma)(ATL)、皮肤T细胞淋巴瘤(cutaneousT-celllymphoma)(CTCL)和大颗粒淋巴细胞白血病(largegranularlymphocyticleukemia)(LGF)，但不限于此。其他可以用本发明的方法治疗的恶性疾病包括红白血病、淋巴瘤、何杰金氏病和来源不明的恶性疾病，例如，难以分类的恶性病以及表现多种细胞类型的恶性病，诸如某些胚胎性癌或畸胎瘤。举例说明，受试者可以是患非小细胞肺癌的患者，使用紫杉醇、卡铂和长期苏拉明联合治疗，在紫杉醇/卡铂联合治疗因药物相关的毒性或因患者对其反应终止而需要停用之后，苏拉明治疗可以顺利地持续进行。或者，患非小细胞肺癌的患者可以使用吉西他滨(gemcitabine)、顺铂和长期苏拉明联合治疗。另举一例，受试者可以是激素难治性(refractory)前列腺癌的患者，使用磷酸雌二醇氮芥(estromustinephosphate)、泰索帝(taxotere)和长期苏拉明联合治疗或阿霉素、酮康唑(ketoconazole)和长期苏拉明联合治疗。再举例说明，受试者可以是患转移性乳腺癌的患者，对其使用环磷酰胺、阿霉素、5氟尿嘧啶和长期苏拉明联合治疗，或阿霉素、泰索帝和长期苏拉明联合治疗。相关的例子中，受试者是患有具有HER2/neu致癌基因的过度表达的晚期(advanced)乳腺癌的患者，对其使用赫赛汀(Herceptin)和长期苏拉明治疗，联用或不联用紫杉醇或顺铂。再举例说明，受试者可以是患有进展性或转移的结直肠癌的患者，使用依利替康(irinotecan)和长期苏拉明联合治疗。相关的例子中，受试者是患进展性结肠癌的患者，使用5氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸(leucoorin)和长期苏拉明联合治疗。给药方法本发明的优选实施方案中，端粒酶抑制剂是系统性应用。例如，所选的化合物可以经胃肠道外给药(如，经皮下、经静脉内、经肌内、经腹腔内、经皮内、经鞘内等方式)、口服、经鼻、吸入式肺内给药、经直肠给药和/或透皮给药。另一个实施方案中，端粒酶抑制剂是局部或区域性用药。例如，所选的化合物可以经膀胱内(intravesically)给药(如，给药至膀胱内)、经前列腺内给药、经肿瘤内给药或局部性(topically)给药。另一个实施方案中，本方法进一步地包括使用重复剂量的相同或不同药剂，某些细节将在下文中进一步讨论。给药方案本领域的普通内科医师或兽医可以很容易地确定并给予有效量的所述药剂(如，以药物组合物的形式)。例如，通常情况下，内科医师或兽医可以从低于所需剂量的水平开始使用本发明的化合物，以便启动所需的治疗效果，并逐渐提高剂量，直至达到所需效果。总的来说，本发明的化合物合适的剂量是可以产生治疗效果即可以治疗受试者的疾病如癌症的最低有效剂量。这一有效剂量通常由上述因素决定。一般地，将本发明的化合物经静脉和皮下给药患者的剂量，由每公斤体重约0.0001到约100mg，更优选的范围是约0.01到约10mg每公斤体重，更加优选的是约0.01到约4mg每公斤体重。如果需要，可以将活性药剂的有效日剂量在全天内以适当间隔分为二、三、四、五、六或更多个亚剂量来给药，可选为以单位剂量形式。一个优选的实施方案中，所述端粒酶抑制剂是苏拉明，且苏拉明的浓度足以抑制端粒酶活性，但不足以产生下述作用的一或多种情况(i)对细胞增殖有显著抑制；(ii)在人类或动物肿瘤细胞中引起显著的细胞死亡；(iii)在受试者如人类受试者中有可测定的抗肿瘤效果和/或(iv)细胞周期停滞。评价其在培养的细胞中的效果可使用实施例14中描述的系统来确定。一个优选的实施方案中，端粒酶抑制剂是苏拉明，其用药的水平使得存在的苏拉明血浆浓度不会出现下述一或多种情况(i)显著的细胞周期停滞；(ii)显著的细胞死亡；(iii)显著的细胞生长抑制，例如，血浆浓度是这样的水平，如果将同样浓度的苏拉明用于培养的细胞中，被治疗的培养细胞中至少有50％，较优选则为至少80％，最优选的为99％在用苏拉明治疗后可以继续下述一或多种情形分裂周期中的(cycling)细胞继续在细胞周期中前进；细胞保持活力或细胞仍能增殖。优选的是，给予的苏拉明量产生的血浆浓度为约0.001到100μg/ml，较优选的是约0.1到约70μg/ml，更加优选是大约0.5到30μg/ml。苏拉明的药代动力学以三级浓度清除为特征，半衰期分别为5.5小时，4.1天和78天。总人体清除率为0.0095升/小时/m2(Jodrell，etal.，JClin.Oncol.，12166-175，1994)。基于药代动力学原理，本领域内的专业人员可以计算出，平均应给予患者的初始剂量约为240mg/m2，从而达到的血浆浓度将在168小时内由约90μg/ml(63pM)降至约为14μg/ml(10μM)。选择168小时或1周的间期来举例，是因为通常按这一时间间隔到治疗的内科医师处复诊。在所需的其他治疗间期中，也可以进行类似的计算来确定给予苏拉明的初始剂量，以便达到优选的苏拉明血浆浓度。在其后的治疗周期中为调节血浆浓度所需的维持剂量也可以同样计算。在优选的实施方案中，优选血浆内总的苏拉明暴露量应在112天中小于7840μM-天，在112天中小于7100μM-天，在84天中小于5,880μM-天，在84天中小于5,300μM-天，在20天中小于2,000μM-天，在96小时中优选地应小于800μM-天，在96小时中优选地应小于600μM-天，在96小时中优选地应小于500μM-天，在96小时中优选地应小于400μM-天，在96小时中优选地应小于300μM-天，在96小时中优选地应小于252μM-天，在96小时中优选地应小于200μM-天，在96小时中优选地应小于150μM-天，在96小时中优选地应小于100μM-天，在96小时中最优选地应小于52μM-天。总的苏拉明暴露量以μM-天表示，是以μM-天为单位表示的药物血浆浓度(如24小时中的平均微摩尔浓度)与以天为单位表示的治疗期间两者的乘积。例如，以13μM的苏拉明对受试者治疗4天，导致总药物暴露量在96小时中为52μM-天。优选地，给予苏拉明的量所产生的血浆浓度应小于100μM/ml，优选地应小于90μM/ml，优选地应小于80μM/ml，优选地应小于60μM/ml，优选地应小于40μM/ml，更优选地应小于15μM/ml，最优选地应小于10μM/ml。在优选的实施方案中，所述端粒酶抑制剂是苏拉明，给予苏拉明或使血浆中苏拉明浓度维持在足以抑制端粒酶活性的水平的期间超过一个月，或更优选的为超过一年，或更优选的为无限期。在优选的实施方案中，所述端粒酶抑制剂是苏拉明，给予苏拉明或使血浆中苏拉明浓度维持在足以抑制端粒酶活性的水平的期间超过60天，优选的为超过100天，优选的为超过150天，优选的为超过1年，更优选的为超过2年，最优选的为无限期，超过给予细胞减灭治疗的期间。在优选的实施方案中，所述端粒酶抑制剂是苏拉明，给予苏拉明的方式是局部给药靶器官，将苏拉明治疗所针对组织中的苏拉明浓度维持在足以抑制端粒酶活性的水平的期间超过1个月，或优选的为超过1年，或更优选的为无限期。例如，使用苏拉明来进行癌症预防时，治疗可能需要使用数年，延伸到患者的整个余生。在一项优选的实施方案中，所述端粒酶抑制剂是苏拉明，给予苏拉明的方式是局部给药靶器官，将苏拉明治疗所针对组织中的苏拉明浓度维持在足以抑制端粒酶活性的水平的期间超过60天，优选的为超过100天，优选的为超过150天，优选的为超过1年，更优选的为超过2年，最优选的为无限期，超过给予细胞减灭治疗的期间。在优选的实施方案中，所述端粒酶抑制剂是苏拉明，给药苏拉明或将血浆中苏拉明的浓度维持在足以抑制端粒酶活性或增强细胞减灭治疗效力的水平的期间为30天以上，优选的为超过60天，优选的为超过100天，优选的为超过150天，优选的为超过1年，最优选的为超过2年，所述期间为在给予细胞减灭治疗第一天之前的期间。本文描述的方法使用苏拉明来增强细胞减灭治疗的抗肿瘤效果，选择苏拉明剂量使其在用细胞减灭疗法治疗的哺乳动物中所产生的血浆浓度低于100μg/ml，优选低于80μg/ml，优选低于60μg/ml，更优选低于40μg/ml，最优选低于15μg/ml。苏拉明的给药可以在使用至少一种抗癌药或其他细胞减灭治疗之前、同时或之后进行。本文所示动物试验显示，以两个每周一次(twoweekly)10mg/kg静脉内弹丸式苏拉明对小鼠的治疗增强其后应用的抗肿瘤药(如紫杉醇)的疗效，而不会产生附加的体重减轻。计算采用这一剂量可以使得在定量给药(doseadministration)72小时后产生的血浆苏拉明浓度约为10μM(～14μg/ml)。现有技术的方法使用高剂量的苏拉明，将其单独使用或与细胞毒药物联用，对于人类患者，要产生可测量的抗肿瘤作用需要将血浆苏拉明的浓度维持在150到300μg/ml(Eisenbergereta/.，(1995)JClinOncol132174-2186；Klohs，美国专利第5,597,830和第5,767,110号)。目的在于维持苏拉明血浆浓度在150到300μg/ml的通常的苏拉明剂量时间表组成为第一周内初始给药量为2100mg/m2，并每28天重复给药后续剂量，所述给药持续6个月或更久；后续剂量的调整使用贝叶斯定理(Bayesian)药代动力学方法(Dawsonetal.，ClinCancerRes437-44，1998；Falconeeta/.，Cancer86470-476，1999)。以这种剂量和长期治疗，苏拉明会对人类患者引起以下毒性作用肾上腺机能不全、凝血疾病(coagulopathy)、外周神经病及近端肌无力(DorrandVonHoff，CancerChemotherapyHandbook，1994，pp859-866)。确知这些毒性作用的发生率和严重性与剂量累积有关，而且本文描述的方法可以将其减至最小。一项优选的实施方案中，所述端粒酶抑制剂是PPS，优选地，给药苏拉明的浓度足以抑制端粒酶活性并导致肿瘤细胞的端粒缩短，但不足以产生下述一或多种影响(i)显著的抗凝活性；(ii)在人类或动物肿瘤细胞中引起显著的细胞死亡；(iii)在受试者如人类受试者中有可测定的抗肿瘤效果和/或(iv)细胞周期停滞。虽然本发明的药剂可以单独给予也可以与其他药物联合给予，优选所述药剂作为药物组合物的形式给药。在一项优选的实施方案中，所述端粒酶抑制剂是苏拉明。组合物和配方另一方面，本发明涉及药物组合物，其包括至少一种端粒酶抑制剂和可药用的载体。优选的，存在的药剂的量可有效抑制人类肿瘤中端粒酶的活性，并增强对过度增殖的细胞的杀伤。在一项优选的实施方案中，所述药物组合物或多种药物组合物的包装中带有使用说明，如本文所述。本发明也包含定时释放的(timed-release)配方，例如，端粒酶抑制剂的缓慢释放的配方和可药用的载体。在另一个实施方案中，药物组合物适用于将静脉内注射。这一组合物也适于局部性、区域性或系统性用药。在另一个实施方案中，药物组合物可以包含一种或多种可药用的载体。而另一个实施方案中，发明有涉及纳米颗粒，其包含交叉相连的凝胶和治疗药剂，如端粒酶抑制剂，例如苏拉明或PPS等。此外另一个实施方案中，本发明涉及包含纳米颗粒和可药用的载体的复合物。该载体，例如，可以适用于系统性给药、区域性给药或局部给药。在一个实施方案中，纳米颗粒直径约为约500到约1μm，或约为600nm到约800nm。本发明还有涉及含有治疗药物如端粒酶抑制剂、如苏拉明或PPS等的纳米颗粒。在一个实施方案中，所述纳米颗粒直径为约500nm到约100μm，约500nm到约50μm，约500nm到约25μm，约500nm到约20μm，约500nm到约15μm，约500nm到约10μm，约750nm到约10μm，约1μm到约10μm，约750nm到约7.5μm，约1μm到约7.5μm，约2μm到约7.5μm，3μm到约7μm，或约5μm。另一个实施方案中，发明有涉及化合物，其包含纳米颗粒和可药用的载体。该可药用的载体，例如，可以适用于系统性给药、区域性给药或局部给药。本发明还涉及治疗患者的方法，包括对患者给药本发明的纳米颗粒和可药用的载体。另一个实施方案中，本发明涉及适用于经口服或系统性给药患者的纳米颗粒，其含有紫杉醇，其中所述的纳米颗粒直径约为5μm。另一个实施方案中，本发明涉及适用于经口服或系统性给药患者的纳米颗粒，其含有苏拉明或PPS，其中所述的纳米颗粒直径约为5μm。本发明还涉及试剂盒，即制品，其用于癌症的治疗。这种试剂盒包括可药用的载体中的端粒酶抑制剂，容器，以及使用所述端粒酶抑制剂来抑制或减少细胞生长的说明书，所述细胞生长例如与肿瘤或癌症有关的异常生长。例如，本发明的试剂盒中可能包含用于提前、后续或同时给药的端粒酶抑制剂。试剂盒也可以提供配制成剂型的端粒酶抑制剂和适用于局部、区域或系统性用药的载体。更进一步，试剂盒也可以提供预后、诊断和/或癌症的分期，用于例如，评价对癌症的易感性和抵抗力。含有本发明的复合物的药物组合物可以含有湿化剂、乳化剂和润滑剂，如月桂基硫酸钠(sodiumlaurylsulfate)和硬脂酸镁，以及着色剂、释放剂、包被剂、甜味剂、调味剂及香化剂，和防腐剂。本发明的配方包括适于各种给药方式的配方，所述给药方式包括口服、经鼻、局部、吸入、透皮、经颊、经舌下、经直肠、经阴道和/或经胃肠道外给药。按各种用药途径采用合适的形式。例如，可以用药片或胶囊的形式给药，通过注射、吸入、滴眼液、软膏、栓剂等，通过注射、输注或吸入给药；用洗剂或软膏局部给药；用栓剂经直肠给药。该配方易于以单位剂量的形式提供，可以用制药技术中众所周知的方法制备。单剂形式中与载体物质结合的活性成分的量通常是可以产生治疗效果的量。通常情况下，按百分比例计，活性成分的量可以在约1％到约99％，优选的是约5％到约70％，最优选的是约10％到约30％。本发明适于口服给药的配方的形式包括胶囊、扁囊、丸剂、药片、锭剂(采用有味道的基质，通常是蔗糖和阿拉伯树胶或西黄蓍胶)、药粉、颗粒剂，或用水或非水液体中的溶液或悬浮液，或制成水包油或油包水的液体乳剂，或制成酏剂或糖浆，或制成软锭剂(采用惰性基质，如白明胶或甘油，或蔗糖和阿拉伯树胶)和/或漱口液等。透皮贴剂具有额外的优势，可以使得本发明的药物有控制地释放入体内。这种药剂形式可以通过将所述化合物溶解或分散入合适的介质中制成。也可以用吸收增强剂来提高化合物通过皮肤的流速。这种流速可以通过下述两种方式之一控制提供控速膜或将活性化合物分散到聚合物基质或凝胶中。眼科配方、滴眼液、药粉、溶液等也可以认为包含在本发明的范围内。本发明适于经胃肠道外给药的药物组合物含有本发明的化合物中的一种或多种，其与一种或多种以下物质联合可药用的消毒等张含水或非水溶液、分散剂、混悬剂，或乳剂，或无菌粉剂，其在使用前要溶解于无菌的可注射溶剂或分散剂中，其中可以含有缓冲剂、抑菌剂、使得配方与目的受者血液等张的溶质，或悬浮剂或增稠剂。某些情况中，为了延长药物的作用，需要通过经皮下或经肌内注射的方式减慢药物的吸收。这可以通过使用晶体的悬液或水溶性差的无定形物质来实现。药物的吸收速率依赖于其溶解率，而溶解率则由晶体的大小和晶体形式决定。或者可以通过将药物溶解或悬浮到油质载体中来使得经胃肠道外给药的药物形式吸收减慢。可注射的存储形式的制备是通过在生物可降解的聚合物例如多乳酸聚乙醇酸交酯(polylactide-polyglycolide)中，形成受试化合物的微胶囊状基质。根据药物与聚合体的比值和所用的特定聚合体的性质，药物的释放速度可以得到控制。其他生物可降解的聚合体的例子包括，例如聚(原酸酯(orthoester))和聚(脱水物(anhydride))。可注射的存储形式也可以用另一种方式制备，即将药物包埋(entrapping)于与机体组织相容的脂质体或微乳剂中。无论选择哪种给药途径，本发明的化合物和/或本发明的药物组合物都是用本领域专业人员众所周知的常规方法配制成的可药用的剂型，其中该化合物可以以合适的水合形式应用。本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可能各不相同，以便获得一定量的活性成分，所述一定量可有效实现对具体患者、组合物和给药方式的所需反应，而对患者没有毒性。所选的剂量水平由多种因素决定，包括本发明所采用的具体化合物或其酯、盐或酰胺的活性，给药途径、给药时间、所采用的具体化合物的排泄率、治疗持续的时间、与所用药物联合使用的其他药物、制剂和/或物质、所治疗患者的年龄、性别、体重、状态、总体健康情况和既往病史，以及医学领域内公认的类似因素。实施例现已简要说明本发明，提供以下实施例以有利于进一步理解。提供这些实施例旨在说明本发明的一些实际应用领域，并非限制本发明的应用。在所述的所有实施例中，除非特别说明，本发明所运用的技术均为化学、分子生物学、微生物学、重组DNA技术、细胞培养、动物饲养等常规技术，均属于现有技术人员能力范围内的技术并在文献中有详述。如参见Sambrook，FritschandManiatis，MolecularCloningColdSpringHarborLaboratoryPress(1989)；DNACloning，第1和2卷，(D.N.Glover，Ed.1985)；HarlowandLane，AntibodiesaLaboratoryManual，(1988)ColdSpringHarbor；OligonucleotideSynthesis(M.J.Gait，Ed.1984)；NucleicAcidHybridization(B.D.HamesandS.J.Higgins，Eds.1984)；theseriesMethodsInEnzymology(AcademicPress，Inc.)，特别是第154和第155卷(WuandGrossman，Eds；andCurrentProtocolsinMolecularBiology，eds.Ausubeleta/.，JohnWiley&Sons(1992)).材料与方法基本方法学所需材料(例如，药物、化学品及反应物，人乳腺MCF7细胞，因FaDu细胞，前列腺PC3细胞)，免疫缺陷鼠体内的FaDu肿瘤异种移植物以及三维肿瘤组织培养均根据美国应用专利序列号09/587,662，andGanetal.，FEBSLetters，52710-14，2002所述获得、准备及使用。组织培养细胞的药物效果的测定方法如美国应用专利序列号09/587,662所述。细胞溶解产物及完整细胞内端粒酶活性的抑制改良的端粒重复扩增方案(ModifiedTelomericRepeatAmplificationProtocol)(TRAP)分析(Gan，etal.，Pharm.Res.，18488-493，2001)用于测定细胞溶解产物中的端粒酶活性。完整细胞内端粒酶活性的测定采用细胞内TRAP分析，如下所述用PBS洗涤细胞(1×105)两次，并离心分离。将细胞沉淀重悬于含有5u/毫升的链球菌溶血素(Streptolysin)O、2微摩的TS引物及50微摩dNTP的100微升无血清RPMI1640中，室温保温5分钟。酶链球菌溶血素O增加细胞膜对TS引物的通透性。进入细胞后，TS引物由细胞内端粒酶原位延长。然后，将延长后的TS引物从细胞中分离，作为PCR放大的模版。向细胞中加入200微升含有10％PBS的RPMI1640培养基以终止反应。将混合物在30℃保温30分钟，以利用端粒酶延伸细胞内TS引物。之后，将细胞溶解，使用TRAP方法直接对含有已经被延长的TS引物的细胞溶解物进行分析。培养的细胞中的端粒酶长度的测定两种方法可用于测定端粒酶的长度。第一种方法是基于端粒酶含量及长度测定的溶液杂交法(TALA)(Gan，etal.，Pharm.Res.，181655-1659，2001)，测定终端限制片段(TRF)的平均长度。第二种方法是原位荧光杂交法(FISH)来测定端粒酶信号，并估计染色体末端各个端粒的大约长度。FISH方法如美国应用专利序列号.09/587,662及Gan等，2001所述。衰老细胞的测定可使用(Dimri等，1995)所述的4-半乳糖苷酶染色法测定衰老细胞。实施例1苏拉明及AZT是有效的端粒酶抑制剂-在细胞提取物及培养的细胞中端粒酶的抑制苏拉明是有轻度的抑制反转录酶活性的作用、但不确定是否能抑制端粒酶的药剂，在多种人类肿瘤细胞系中对其进行了研究，所述细胞系包括人类咽FaDu，人类前列腺PC3及人类乳腺MCF7细胞。将其活性与AZT活性相比较。处理方法使用苏拉明或AZT的处理在允许培养瓶内的细胞接触生长界面之后开始。试验当天，将培养基移出，用含有抑制剂的培养基置换。所用药物浓度分别是0，0.1，1，5，10，50微摩的苏拉明，或0，0.1，1，10，100微摩的AZT。在含有0到50微摩的苏拉明或AZT的培养基中生长7-15周后，测定细胞溶解物及完整细胞中的端粒酶活性及端粒长度。苏拉明及AZT对端粒酶活性的影响在人类癌症细胞中端粒酶活性可以被苏拉明和AZT抑制，并有浓度依赖性。产生50％抑制的浓度见表1。产生90％抑制所需的浓度少于50毫摩。表1端粒酶活性的抑制a不能确定，由于从AZT到三磷酸盐的活化仅发生在完整细胞中而非细胞提取物中，所述活化是抑制端粒酶的部分。苏拉明和AZT对端粒酶长度的影响使用苏拉明或AZT进行的7-15周的延长处理导致FaDu细胞中的34-55％端粒缩短，PC3细胞中约30％端粒缩短。结论苏拉明在毫摩浓度水平能够有效地抑制端粒酶的活性，并与已知端粒酶抑制剂AZT的作用相似。实施例2在负瘤动物体内，苏拉明是有效的端粒酶抑制剂苏拉明在体内抑制端粒酶并缩短端粒长度。苏拉明为端粒酶抑制剂在体内的有效性，是通过对免疫抑制的小鼠体内所移植肿瘤细胞内的端粒长度进行测定来评估的。处理方法将FaDu细胞(0.51×106细胞/100ul)移植于雄性BALB/cnu/nu鼠皮下。该鼠接受经尾静脉内注射的重复剂量的10毫克/千克苏拉明。首次剂量应在肿瘤移植后立即给与，之后每周两次重复给药。苏拉明治疗2-6周后收集肿瘤标本。采用荧光原位杂交法分析冰冻组织切片中各细胞内的端粒长度。从各个切片中随机选取10个400倍放大的显微镜视野，记录端粒信号减弱或消失的肿瘤细胞百分比例。结果与注射生理盐水而非苏拉明的对照组进行比较。苏拉明在体内对端粒酶长度的影响经苏拉明或生理盐水处理后的鼠体肿瘤种植成功率相同，均为100％，体重升高不明显。FISH的结果显示随时间延长，肿瘤细胞内的端粒长度逐渐缩短。在苏拉明处理过的动物体内，第一个两周内，端粒信号减弱或消失的细胞比例保持在约10％的对照组水平；在第三周升高到40％的细胞，第四周为75％，第五周超过80％，第六周95％。在使用生理盐水处理的对照动物体内细胞未观察到变化。结论苏拉明能够有效地缩短体内所生长肿瘤的端粒长度。实施例3PPS是有效的端粒酶抑制剂PPS抑制端粒酶研究了暴露于PPS后FaDu细胞内端粒酶活性的抑制。处理方法使用PPS的处理在允许培养瓶内的细胞接触生长界面之后开始。试验当天，将培养基移出，用含有抑制剂的培养基置换。所用药物浓度分别是0，0.1，1，5，10，50微摩的PPS。使用改良的定量TRAP分析对端粒酶活性进行测定。对端粒酶活性的影响在FaDu及SKOV-3细胞中端粒酶活性被PPS抑制，并有浓度依赖性。导致50％抑制的浓度分别为0.56和0.60微克/毫升。导致80％抑制的浓度对于两种细胞均为小于10微克/毫升。导致90％抑制的浓度对于两种细胞均为小于100微克/毫升。结论PPS能够有效的抑制细胞内的端粒酶活性。产生50％端粒酶活性抑制的浓度低于抗凝所需浓度(约1微克/毫升)。实施例4hTR-反义体抑制端粒酶反义体研究包括下述两个步骤(a)建立对人端粒酶RNA部分的有义体及反义体；(b)用hTR-反义体(或者hTR-有义体对照)稳定转染细胞，以及(c)确定hTR-反义体抑制端粒酶活性以及诱导缩短端粒的能力。方法在现有技术如Mo等，CancerRes.2003.等中有详述。反义和有义构建体制备人类端粒酶RNA部分的有义体及反义体表达质粒。下面给出185碱基对的有义体及反义体序列，其与GenBank序列(登录号NR001566)一致。上述处理可以得到含有hTR片段的5种克隆。序列分析表明，一种克隆为有义体，另外四种均为反义体。将这些hTR有义体及反义体表达质粒转染入人类因FaDu癌症细胞。转染方法反义构建体的转染采用IPTG-可诱导型哺乳动物表达系统。所得克隆用于实验。hTR-反义体对细胞生长的影响表2总结了结果，所述结果显示与未用反义体转染的、未经转染但经IPTG处理的、由有义体转染并经IPTG处理的或转染了反义体但未经IPTG介导的细胞(即对照，+IPTG，+有义体+IPTG，及反义体)相比，反义体+IPTG细胞(即经hTR-反义体转染，又经IPTG处理以诱导hTR表达的细胞)生长速度较慢。hTR-反义体对紫杉醇细胞毒作用的影响研究两种稳定的hTR-反义体转染的细胞克隆。紫杉醇的细胞毒作用采用SRB方法进行定量测定，所述方法对细胞蛋白总量进行测定。经hTR-反义体转染的细胞使用IPTG处理44(克隆#1)至57(克隆#2)天，再用紫杉醇处理96小时。表2中总结了所得结果，显示hTR-反义体可抑制端粒酶活性；从反义体转染的转染细胞中紫杉醇的IC50较其它对照组细胞的IC50减小，可以看出在两个克隆中hTR-反义体均可使紫杉醇的细胞毒性作用增强约两倍。表2hTR反义体对细胞生长、紫杉醇细胞毒性、端粒长度以及端粒酶活性的影响185bp反义hTR序列5′；1cagctgacattttttgtttgctctagaatgaacggtggaaggcggcaggccgaggctttt61ccgcccgctgaaagtcagcgagaaaaacagcgcgcggggagcaaaagcacggcgcctacg121cccttctcagttagggttagacaaaaaatggccaccacccctcccaggcccaccctccgc181aaccc3’185bp有义hTR序列5’1gggttgcggagggtgggcctgggaggggtggtggccattttttgtctaaccctaactgag61aagggcgtaggcgccgtgcttttgctccccgcgcgctgtttttctcgctgactttcagcg121ggcggaaaagcctcggcctgccgccttccaccgttcattctagagcaaacaaaaaatgtc181agctg3’hTR反义体对端粒长度及端粒酶活性的影响采用TALA方法对端粒长度(即末端限制性片段)进行测定。采用改良的TRAP方法对端粒酶活性进行测定。表2中总结的结果表明，hTR反义体可以减少端粒长度及减低端粒酶活性。结论总而言之，这些结果表明采用hTR-反义体对人类肿瘤细胞进行处理，可以抑制端粒酶活性、损失端粒、抑制细胞生长及增强紫杉醇的细胞毒作用。实施例5使用端粒酶抑制量的苏拉明可使动物体内的肿瘤体积减小在某些动物中使用低剂量苏拉明后出现肿瘤体积的减小测定移植了FaDu肿瘤的免疫抑制的小鼠中低剂量苏拉明对于肿瘤体积的影响。处理方法在免疫抑制的小鼠的大腿区经皮下注射植入5×105FaDu细胞。苏拉明(10毫克/千克)经腹腔注射给药，每周两次共6周。肿瘤细胞接种当日开始给药苏拉明。处理将注射用的苏拉明溶液改为生理盐水，对于对照组动物的其他处理完全一致。每周两次观察肿瘤大小。低剂量苏拉明对肿瘤生长的影响6只动物接受了苏拉明治疗。在5只动物中，肿瘤体积随时间增大。另外一只中的肿瘤起初仍生长，2周后达4毫米，之后逐渐减小，于第六周完全消失。结论经长时间的端粒酶抑制剂苏拉明处理，可使得某些宿主体内的肿瘤完全消失。实施例6使用低剂量苏拉明进行预处理，可以增强负瘤动物中化学治疗的抗瘤活性本例描述经端粒酶抑制剂的延长预处理后化疗剂的抗瘤作用增强。端粒酶抑制剂的处理在瘤负荷尚低不能触及时就开始，与微小或不可检出的肿瘤的情况相似。处理方法在6-8周龄的雌性无胸腺裸鼠大腿区经皮下注射5×105有活力的FaDu细胞。苏拉明(10毫克/千克)则经腹腔注射给药，每周两次共6周。肿瘤细胞接种当日、肿瘤非常小时(代表微小病变(minimaldisease))，开始给药苏拉明。除了将注射溶剂由苏拉明溶液改为生理盐水，对于对照动物的其他处理完全一致。6周预处理期后，中断苏拉明处理，所有动物均接受每周两次的10毫克/千克紫杉醇治疗，共三周。在紫杉醇治疗的三周内每周两次观察并记录肿瘤大小。低剂量苏拉明预处理的作用如表3中所示，用盐水预处理6周的对照组动物，在3周后显示肿瘤体积增大，而接受苏拉明预处理的动物则出现肿瘤体积缩小。表3在使用紫杉醇进行治疗的鼠体内苏拉明预处理对肿瘤体积的影响实施例7维持低、端粒酶抑制性浓度的苏拉明可以促进肿瘤缩小、延缓肿瘤生长、延长人类癌症患者的生存期患有病理确诊的、进展期、转移性、分期为IIIB、IIV期的非小细胞肺癌的人类患者，使用紫杉醇、卡铂及苏拉明进行治疗。治疗每三周给予一次。苏拉明的负荷(load)剂量为约240毫克/平方米，后面的剂量申请人研发的数学等式计算(PCT专利号PCT/US02/30210)。这些苏拉明剂量使得至少21天后血浆浓度达到约2至约90毫摩。如实施例1中所示，这些浓度足以抑制端粒酶。共54名患者接受了治疗。首先接受治疗的6位患者接受了单剂量苏拉明治疗，其他患者接受了间隔24小时的分开剂量的治疗。未发现使用苏拉明引起的任何毒性。49名患者的数据可评估。总反应率为40.8％(包括6％完全反应，对应无可检测的肿瘤；34.8％部分反应，对应肿瘤缩小至少50％)疾病进展时间(timetodiseaseprogression)(TTP)超过6个月，中位生存时间(mediansurvivaltime)(MST)超过12个月(Villalona-Calero，etal.，Clin.CancerRes.，93303-3311，2003；Villalona-Calero，etal.，MSLCMeeting，Vancouver，August，2003)。这些临床试验结果与在患有进展期、转移性、IIIB/IV期非小细胞肺癌的相似患者中，对紫杉醇/卡铂进行的前期临床试验结果的比较显示，加入苏拉明可使紫杉醇/卡铂的抗肿瘤活性有明显的提高。例如，近期完成的290名患者的实验显示，总体反应率为约17％(仅有＜1％的患者获得了完全的反应)，TTP为3.1个月，MST为8.1个月(Schilleretal.，NewEngJMed，34692-98，2002)。结论长期(如12到30周)保持端粒酶抑制性苏拉明血浆浓度，能够增强紫杉醇及卡铂的抗肿瘤活性，提高反应率，延缓肿瘤进展、延长人类癌症患者的生存期。实施例8苏拉明在狗体内的血浆半衰期较长狗体内的苏拉明药代动力学使用四只比格犬(beaeledog)对苏拉明的血浆药代动力学进行研究。处理方法使用四只比格犬，体重为11.4±0.4千克。在动物两前腿的头静脉中插管。将6.75毫克/千克苏拉明在30分钟内经静脉输注入一侧静脉，从另一侧静脉抽取血样。苏拉明以苏拉明钠盐水溶液的形式给药。在5分钟、30分钟、1，2，4，6，9，12，24，48及72小时、7、14及21天时抽取血样，注入肝素化的管内，离心制备血浆。用高效液相色谱法测定苏拉明的血浆浓度，前面已有详述(Kassack，etal.，JChromatogr.BBiomed.Appl.，686275-284，1996)。以标准方式进行无隔室(Non-compartmental)药代动力学分析(Gibaldi，etal.，Pharmacokinetics.，1982)。结果在狗体内，苏拉明消除缓慢，总清除率为2.1±0.2毫升/小时/千克，最终半衰期为13.0±3.8天。结论苏拉明在狗体内消除缓慢，其消除半衰期格外长，达13天。实施例9PPS增强了化疗的抗肿瘤活性本实施例教导第二种端粒酶抑制剂聚戊糖多聚硫酸酯(PPS)，其增强了细胞毒药物在培养的肿瘤细胞及肿瘤患者的原代培养物中的抗肿瘤活性。PPS的化疗有义体化效应发生在端粒酶抑制性浓度为10至100微克/毫升之间时，分别低于产生抗肿瘤活性的PPS浓度的＞10倍和＞100倍。(Wellstein等，J.Natl.CancerInst.，83716-720，1991；Zugmaier，等，Ann.NYAcad.Sciences，886243-248，1999)。使用两种肾细胞癌细胞(RCC45和RCC54)进行研究。5-氟尿嘧啶(fluorouracil)作为化疗药物。细胞经5-氟尿嘧啶合并或不合并PPS处理96小时，使用ELISA测定药效，其作为掺入DNA前体(溴脱氧尿苷(bromodeoxyuridine)，BrdU)的抑制作用。结果显示PPS在10至100克/毫升无细胞毒性；作为单一药物，PPS的IC50为1,400克/毫升。表4显示了5-氟尿嘧啶的IC50值(即产生50％抑制的药物浓度)随PPS的加入而减低。表4的结果还显示加入端粒酶抑制浓度的第二种端粒酶抑制剂苏拉明(30微摩)，能进一步减低5-氟尿嘧啶的IC50，这说明端粒酶抑制剂的化疗增敏作用是可相加的。表4非毒性浓度的PPS增强5氟尿嘧啶的活性实施例10非常低浓度的端粒酶抑制剂AZT增强了化疗药物的体内抗肿瘤作用本实施例描述了在携带人头和颈部癌症FaDu异种移植物的免疫缺陷的小鼠体内，端粒酶抑制剂AZT对化疗药物(例如紫杉醇)抗肿瘤作用的增强作用。在携带人头和颈部癌症FaDu异种移植物的免疫缺陷的小鼠(雄性Balb/cnu/nu小鼠，6-8周龄)体内，在有或没有AZT的情况下，评估紫杉醇的活性，异种移植物的形成如下在左、右侧肋壁区经皮下注射0.1毫升生理盐水中的106有活力的肿瘤细胞，生长约14天后于药物治疗开始前肿瘤大小超过15mm3。四个治疗组是盐水对照组、AZT组、紫杉醇组、紫杉醇+AZT组。对盐水对照组连续5天每天注射盐水200微升；紫杉醇组连续5天每天注射溶于Cremophor及乙醇中的10毫克/千克紫杉醇(即Taxol)200微升；AZT组经皮下埋植的Alzet微型泵以速度200纳克/小时接受7天AZT输注。紫杉醇+AZT组接受紫杉醇组及AZT组的组合治疗，其中AZT的输注较紫杉醇注射提前开始一天。紫杉醇治疗开始后第1、3、6、8及10天测定动物体重及肿瘤大小。药物治疗的抗肿瘤效果有以下三种方法进行测定。第一种是测定肿瘤体积的缩小。肿瘤体积测定首先通过制备Jeltrate突出(protruding)肿瘤模型(mold)(这种模型成型迅速)，之后制备并称重恢复模型(countermold)。其次，测定细胞凋亡效应。第10天，将动物安乐死，获得肿瘤标本并将其浸泡于福尔马林中。制作5微米厚的组织切片并用苏木精和伊红进行染色。对肿瘤切片进行形态学评价，评估肿瘤细胞密度以及凋亡细胞密度。由于凋亡细胞随时间消失，所以非凋亡细胞的密度可以作为细胞凋亡的第二指标。细胞密度通过使用图像分析法，在随机选定四个400倍放大的显微镜视野中计数细胞数目来测定(Song，etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，978658-8663，2000)。第三，测定药物延长存活时间的能力。监测动物100天后或指导濒死状态(moribundity)(指肿瘤长度超过10厘米)。AZT的血浆浓度在平行试验中测定，使用在皮下植入Alzet1002渗透性微型泵的三只小鼠。药物的注入在采集动物血样前进行四天。这样的长时间输注保证获得恒定的稳定状态苏拉明血浆浓度。采用可购得的ELISA分析法测定AZT血浆浓度(Neogen，Lexington，KY)。表五中总结的结果显示，AZT增强了紫杉醇的体内抗肿瘤效果，首先，AZT和紫杉醇的组合治疗使得在10天的随访期中肿瘤体积减小，而在对照组、紫杉醇组、AZT组则观察到了高至4倍的肿瘤体积的增加。第十天时，接受紫杉醇和AZT联合治疗的动物体的肿瘤体积明显小于其他所有剂量组的(p＜0.001，ANOVA、重复测定)。第二，肿瘤形态的评价显示，接受紫杉醇和AZT联合治疗的动物，其肿瘤的凋亡细胞密度高于其他剂量组2-4倍，非凋亡细胞的密度低于其他剂量组2.6-4倍。第三，生存(survival)时间分析(KaplanMeier分析)，显示达濒死状态的中位时间对于对照组及AZT组而言为21-26天，而对于紫杉醇组增加到了42天和对于联合治疗组为49天。紫杉醇组无肿瘤的存活者，而联合治疗组有两例无肿瘤的存活者(2/12，16％)。接受紫杉醇和AZT联合治疗的组的生存率在统计学上明显高于所有其他组(p＜0.01，对数秩(logrank)检验)。单一药物(紫杉醇或AZT)的治疗产生最小毒性，无毒性相关死亡发生，与治疗前体重比较体重减轻幅度最小(＜3％)。在紫杉醇中加入AZT不会加重体重的减轻，提示AZT不会增加紫杉醇的宿主毒性。采用ELISA法测定的AZT血浆浓度为9.6纳摩。该浓度明显低于抑制端粒酶所需浓度(FaDu细胞中2微摩，见表1)或诱发细胞毒性所需的浓度(20微摩FaDu细胞；Mo等，CancerRes.63579-585，2003)。本研究的结果令人吃惊。表5AZT对紫杉醇抗肿瘤作用的强化作用ap＜0.05与对照组和AZT组比较bp＜0.05与所有其他组比较。c数据表示四组独立试验的平均值±SD。细胞密度及凋亡水平利用在图像分析以每个肿瘤4个随机连续区域进行测定。结论结果显示使用可得到纳摩级AZT血浆浓度的极低AZT剂量进行治疗，可增强化疗的抗肿瘤活性。实施例11给药端粒酶抑制量的AZT可以导致动物体内的肿瘤体积缩小动物体内的肿瘤体积在给药AZT后减小使用移植了FaDu细胞的免疫抑制的小鼠测定重复给药单一药物AZT对肿瘤体积的影响。处理方法在免疫缺陷的小鼠两侧肋腹区经皮下注射106FaDu细胞/一侧肋腹。采用Alzet渗透性微型泵通过连续皮下输注给药AZT，给药速度为5微克/小鼠/天。该AZT剂量导致约10纳克/毫升的稳定血浆浓度。接种后14天开始给药AZT，持续14天。对于对照组动物，将注射的苏拉明溶液改为生理盐水，其他处理完全一致。每周两次观察肿瘤体积。AZT治疗对肿瘤生长的作用所有16只移植有肿瘤细胞的动物在接受AZT治疗前均显示有可测定的肿瘤。其中的2只动物中，肿瘤在开始接受AZT治疗时停止生长，随后体积逐渐减小。第38天肿瘤已不可触及，第59天尸检证实肿瘤完全消失。这两只动物初始肿瘤平均体积为35立方毫米(范围18-80立方毫米)，与其余动物中的肿瘤体积相似。结论长期使用可得到纳摩级血浆浓度的低剂量单药物AZT(端粒酶抑制剂)治疗，可以使得肿瘤完全消失。实施例12预期端粒酶抑制治疗联合肿瘤体积-缩小治疗可改进治疗效果本实施例显示了当将细胞减灭治疗与长期使用端粒酶抑制剂联合应用时，细胞减灭治疗的抗肿瘤效果的预期强化。端粒酶抑制剂的使用可以在细胞减灭之前、与细胞减灭同时或在细胞减灭完成之后进行。使用端粒酶抑制剂的长期治疗与细胞减灭治疗联用的效果为了使端粒酶抑制剂能够有效地抑制细胞增殖，或诱导凋亡及细胞衰老，宿主体内的肿瘤负荷必须较小，使得在端粒酶抑制剂削减端粒长度至抑制增殖及诱导凋亡和细胞衰老的临界水平以下前，肿瘤负荷不会达到致死水平。这可通过采用细胞减灭治疗实现。因此，如果某种形式的细胞减灭治疗与长期的端粒酶活性抑制联合应用，那么肿瘤细胞内的端粒长度将随时间缩短，最终诱导细胞凋亡或细胞衰老。处理方法其最佳治疗方法为某种形式的细胞减灭性治疗的癌症患者，将接受所选细胞减灭治疗。为个体患者所选的细胞减灭治疗取决于患者的癌症、健康状况、年龄、以前的治疗史以及在治疗方案中通常考虑的其他因素。当细胞减灭性治疗方案完成后，如果认为患者仍然未治愈或疾病可能复发，则患者将接受利用端粒酶抑制剂的继续治疗，所述继续治疗所用剂量足以诱发端粒酶抑制效应。继续治疗的疗程应持续至少2周，优选长于2月，或更优选长于6个月，或更优选直至认为所述患者痊愈。优选这样的可选治疗方案，其中端粒酶抑制剂治疗在细胞减灭治疗前开始或与其同时开始，并持续至细胞减灭治疗完成后，这是由于能使肿瘤暴露于端粒酶抑制作用较长一段时间。结论预期将端粒酶抑制治疗与常规细胞减灭性治疗联合使用，可使得端粒酶抑制治疗更为有效，也将解决长期存在的一个问题，就是优先利用端粒酶抑制作用来治疗肿瘤患者的方法。实施例13局部给药苏拉明可导致目标靶器官内而非血浆内的端粒酶抑制性浓度本实施例描述局部给药端粒酶抑制剂，可实现在靶组织或器官内达到端粒酶抑制性浓度，而在血浆中存在低且无效的端粒酶抑制性浓度。区域性递送后的苏拉明膀胱壁及系统浓度将苏拉明溶液缓慢滴入狗的膀胱腔内，并对作为与膀胱腔的距离之函数的膀胱壁浓度(bladderwallconcentrationsasafunctiondistancefromthebladdercavity)，及系统性血浆浓度进行研究。处理方法使用体重9.0±0.4千克的5只比格犬。在动物的头静脉中插管用于给药麻醉剂，在颈静脉中插管用于取血样。插入尿道导管用于定量滴注(doseinstillation)和膀胱内容物取样。经膀胱内给药动物苏拉明水溶液(20毫升水含有6毫克/毫升苏拉明)。间断120分钟频繁抽查膀胱内容物及系统性血浆中的浓度(concentrationsofthebladdercontentsandsystemicplasmaweresampledatfrequentintervalsfor120minutes)，此时处死动物并收集膀胱组织。表面积约2厘米x2厘米的组织切片取自膀胱壁，在干冰冷却的不锈钢平盘(flatstainlesssteelplate)内快速冰冻。对组织样品的外缘进行修整，以免被滴注液污染，将冰冻组织块切成与尿道上皮表面平行的40微米切片。利用HPLC分析测定组织层、血浆及膀胱内容物中的苏拉明浓度。结果对于经膀胱内接受苏拉明6毫克/毫升的动物，膀胱内容物中的浓度从0分钟时的6毫克/毫升降低到120分钟时的3.6毫克/毫升。所有时点的血浆浓度均低于0.1微克/毫升。膀胱壁组织内的药物浓度自尿道表面(0毫米)到浆膜表面(4-5毫米)逐渐递减。0毫米处的组织浓度大约为约80微克/克，以对数-线性(log-linear)模式递减直至约2毫米处，在该处的浓度达到约3微克/克。在膀胱壁残余物中的浓度显示浓度几乎不随深度变化，约为3微克/克。结论这些结果显示在器官内区域性给药可提供在目的器官或组织内的端粒酶抑制性的药物浓度，而系统性血浆浓度则低很多倍，不足以产生端粒酶抑制性效应。实施例14细胞培养系统细胞培养分析试验对人前列腺PC3肿瘤细胞、人乳腺MCF7细胞或人咽FaDu细胞进行。如果本文三种细胞中的任何一种符合本发明的需要，端粒酶抑制剂的选择和剂量适合用于本发明。优选使用PC3细胞。人类前列腺PC3肿瘤细胞、乳腺MCF7细胞或咽FaDu细胞可自美国通常培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)获得。这三种细胞系的倍增时间均为大约24小时。所有三种细胞系应作为单层培养于含5％CO2、95％空气的潮湿环境、37℃中。PC3细胞应保持在RPMI1640培养基中；MCF7细胞保持在RPMI1640或者极限必需培养基(MEM)中；FaDu细胞保持在MEM中。所有培养基应补充有9％热灭活的胎牛血清、2毫摩1-谷氨酰胺、0.1％10毫摩非必需氨基酸、90微克/毫升庆大霉素以及90微克/毫升头孢噻肟钠(cefotaximesodium)。使用胰蛋白酶从亚满底的培养物收获细胞，于铺板前再悬于新鲜培养基中。根据锥虫蓝排除法(trypanblueexclusion)，存活力＞90％的细胞被用于评价端粒酶抑制剂如苏拉明的细胞毒作用。细胞铺于96孔板，密度使得在药物治疗阶段末期不能达到满底。通过在无药物培养基中20-24小时允许细胞附着于所述板的表面。之后，将细胞与含有FGF拮抗剂(一个实施例使用0.2毫升苏拉明)的培养基一同保温，所述FGF拮抗剂的浓度跨至少在4个对数范围(spanningatleast4logscales)。将药效测定为对BrdU掺入的抑制，例如可依据CellProliferationELISABrdU(BoehringerMannheim)。结论本发明参照各种实施方案描述并以其举例说明，本领域技术人员会发现可以做各种改进，其成分可以使用其等价物替代，而不偏离本发明的范围。另外，可根据本发明的教导进行多种修饰以适于具体情况或材料而不偏离本发明的基本范围。利用用常规实验，本领域技术人员将认识到或能够肯定本发明具体描述的具体实施方案的许多等同物。所述等同物包含在权利要求的范围内。因此，本发明并非意图限与作为实施本发明的最佳方式的具体实施方案，但本发明将包括所有落入权利要求范围内的实施方案。在本申请中，所有单位均为米系统，所有量和百分比都通过重量表示，除非另有说明。同时，本申请所引用的所有文献都包含在本文中作为参考。中的除非另外说明，仅使用常规的试验方法，这里特别叙述的很多本发明特殊应用实施例的等价物。这些等价物均包含在后述的权利声明范围中。因此，需要强调的是本发明并不限制于那些作为最佳实践本发明预期的方式的一些特殊，在本申请中，所有单位使用的是米系统，所有计数及百分比均为权重。并且，这里的所有引用后均列有参考文献出处。参考文献·美国专利5,116,823·美国专利5,489,508.·美国专利5,597,830.·美国专利5,656,638.·美国专利5,760,062.·美国专利5,767,110.·美国专利5,767,278.·美国专利5,770,613·美国专利5,863,936.·美国专利6,452,014·WO专利9323572.·WO专利9738013A·Ahmann，F.R.，J.Schwartz，R.Dorr，andS.Salmon，SuramininhormoneresistantmetastaticprostaticcancerSignificantanticanceractivitybutunanticipatedtoxicity.，Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.，10，178，1991.·Armand，J.P.，M.Bonnay，D.Gandia，E.Cvitkovic，F.DeBraud，F.Bertheault，J.P.Droz，P.Carde，M.Schlumberger，andD.Fourcault，PhaseI-IIsuramin(SRM)studyinadvancedcancerpatients.(abstract)，Proc.Am.Assoc.CancerRes.，32，175，1991.·Armitage，J.O.，D.D.Weisenburger，M.Hutchins，D.F.Moravec，M.Dowling，S.Sorensen，J.Mailliard，J.Okerbloom，P.S.Johnson，D.Howe，andetal.，Chemotherapyfordiffuselarge-celllymphoma-rapidlyrespondingpatientshavemoredurableremissions.，JClin.Oncol.，4，160-164，1986.·Burger，A.M.，J.A.Double，andD.R.Newell，Inhibitionoftelomeraseactivitybycisplatininhumantesticularcancercells..EurJCancer，33.638-644，1997.·Clark，J.，W.Sikov，F.Cumings，M.Browne，W.Akerley，H.Wanebo，A.Weitberg，T.Kennedy，B.Cole，J.Bigley，J.Beitz，andJ.Darnowski，PhaseIIstudyof5-fluoruracilleucovorinandazidothymidineinpatientswithmetastaticcolorectalcancer.，JCancerRes.Clin.Oncol.，122，554-558，1996.·DeClercq，E.，SuraminApotentinhibitorofthereversetranscriptaseofRNAtumorviruses.，CancerLetters.8，9-22，1979.·Dimri，C.P.，Lee，X.，Basile，G.，Acosta，M.，Scott，G.，Roskelley，C.，Medrano，E.E.，Linskens，M.，Rubeli，I.，Pereira-Smith，O.，andPeacocke，M.Abiomarkerthatidentifiessenescenthumance¨sincultureandinagingskininvivo.Proc.Natl.Acad.USA.，929363-9367，1995.·Dreicer，R.，D.C.Smith，R.D.Williams，andW.A.See，PhaseIItrialofsuramininpatiertswithmetastaticrenalcellcarcinoma.，Invest.NewDrugs，17，183-189，1999.·Eisenberger，M.A.andL.M.Reyno，Suramin，CancerTreatRav.，20，259-273，1994.·Falcone，A.，A.Antonuzzo，R.Danesi，G.Allegrini，L.Monica，E.Pfanner，G.Masi，S.Ricci，M.DelTacca，andP，F.Conte，Suraminincombinationwithweeklyepirubicinforpatientswithadvancedhormone-refractoryprostatecarcinoma.，Cancer，86，470-476，1999.·Falcone，A.，E.Pfanner，I.Brunetti，G.Allegrini，M.Lencioni，C.Galli，G.Masi，R.Danesi，A.Antonuzzo，M.DelTacca，andP.F.Conte，Suraminincombinati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制量的端粒酶抑制剂来治疗患有肿瘤的癌症患者的治疗后果的方法，包括有以下步骤(a)获得所述肿瘤的样本；(b)对所述肿瘤样本进行末端限制片段(TRF)分析以确定末端片段的长度，所述末端片段含有样本中细胞的端粒DNA；以及(c)使端粒DNA长度与使用端粒酶抑制量的端粒酶抑制剂治疗癌症患者所需的时间长度相关，其中所述端粒酶抑制剂是苏拉明、可药用的苏拉明盐、戊聚糖多聚硫酸酯(PPS)、可药用的PPS盐、hTR-反义体转染物中的一种或多种。53.权利要求52的方法，其中所述患者为哺乳动物。54.确定使用端粒酶抑制量的端粒酶抑制剂治疗患肿瘤的癌症患者的治疗效力的方法，包括以下步骤(a)获得所述肿瘤的样本；(b)对所述肿瘤样本进行末端限制片段(TRF)分析以确定末端片段的长度，所述末端片段含有样本中细胞的端粒DNA的；以及(c)使端粒DNA的长度与所述治疗的时程相关。55.权利要求54的方法，其中所述患者为哺乳动物。56.改进间质性膀胱炎患者的治疗后果的方法，包括以下步骤对所述患者局部给药有效量的下述一种或多种药物苏拉明、可药用的苏拉明盐、戊聚糖多聚硫酸酯(PPS)、可药用的PPS盐。全文摘要本发明提供了用于抑制端粒酶活性的方法、组合物，以及由端粒酶介导疾病或病症的治疗。在由端粒酶活性介导的疾病或病症如癌症的治疗中，本发明的方法、合成物及本发明的组合物可以单独使用，也可以与其他有药理活性的药物、外科手术或放射治疗联用。文档编号A61K48/00GK1768075SQ200480009121公开日2006年5月3日申请日期2004年1月30日优先权日2003年1月31日发明者杰西·L·S·奥,M·吉尔劳姆·温特杰斯申请人:杰西·L·S·奥,M·吉尔劳姆·温特杰斯