褐藻多糖硫酸酯在制备预防和/或治疗下肢外周动脉血管病的产品中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种褐藻多糖硫酸酯在制备预防和/或治疗下肢外周动脉血管病的产品中的应用。
【背景技术】
[0002]周围动脉疾病(peripheral arterial disease，PAD)，特别是下肢周围动脉疾病是临床常见的一种疾病，发病人群很广。病理改变为动脉内粥样物质不断增多和继发血栓形成，引起动脉管腔狭窄、闭塞，使肢体出现慢性或急性缺血症状。病因尚未完全清楚，一般认为与年龄、吸烟、血脂、糖尿病、高脂血症、高血压、遗传因素、精神紧张等多种因素有关。临床表现以间歇性跋行、静息痛、难治性溃疡等症状为特点[Mascarenhas.JV.，et al.，Peripheral arterial disease.Endocrinol Metab Clin North Am.2014；43(1):p.149-66.]。流行病学调查显示:PAD在自然人群中发病率为3.08%；对PAD住院患者的回顾性分析，合并2型糖尿病占比54.1%，高血压病占比70.9%，高脂血症占比45.9%。糖尿病(diabetes mellitus，DM)患者PAD发病率较非DM者高20倍，8%的患者诊断为DM时即存在PAD，并随年龄、病程增加而增多，DM病程20年后其发病率可达45% [Chen，Q.，et al.,Patterns of disease distribut1n of lower extremity peripheral arterialdisease.Ang1logy.2015;66(3):p.211-8.]。目前，临床常用的治疗手段及存在的缺陷是:I)血管旁路术等手术治疗，预后好，但有的患者无法手术，以及出现术后再狭窄；2)血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)等促进血管新生的生长因子的治疗，但其价格昂贵，在机体内不稳定，极易被降解，半衰期短;3)血管内皮前导细胞等细胞水平的治疗，目前尚缺乏更多的临床证据证明其有效性;4)抗血小板聚集、抗凝、扩张血管等相关药物的治疗，可在一定程度上缓解症状，但长期服用，有出血等不良反应[Forsythe，R0.,et al.,Management of peripheral arterial disease and the diabetic foot.JCard1vasc Surg(Torino).2014；55(2Suppl I):p.195-206.]。
[0003]褐藻多糖硫酸酯(fucoidan)是从褐藻中分离得到的一类富含岩藻糖的天然硫酸多糖，其生物活性的强弱与来源种属、分子量、组成和结构等相关[Fitton，J.H.，et al.，Therapies from fucoidan!multifunct1nal marine polymers.Mar Drugs,2011；9(10):p.1731-60.]。从海带中提取出的低分子量褐藻多糖硫酸酯(low molecule weightfucoidan，LMWF)是一种水溶性杂多糖，其主要成分为L-岩藻糖-4-硫酸酯。LMWF具有抗氧化、抗炎、抗凝血等作用。LMWF褐藻多糖硫酸酯及其片段来源广泛，其多种生物活性和天然产物的口服无毒性，使其在治疗骨性关节炎、肝纤维化、肾脏疾病及辐射损伤的保护等方面成为有希望的治疗药物。近期研究发现，LMWF能保护肾脏的缺血再关注损伤[Chen，J.，eta1.,Low Molecular Weight Fucoidan against Renal Ischemia-Reperfus1n Injuryvia Inhibit1n of the MAPK Signaling Pathway.PLoS One，2013.8(2):p.e56224.]。课题组前期研究结果发现:I )LMWF通过特异性抑制凝血酶原的活性抗血小板聚集，另外，其对胶原、胰蛋白酶、ADP、5-HT引起的血小板聚集也有一定作用[Zhu，Z.,et al ,Higherspecificity of the activity of low molecular weight fucoidan for thrombin-1nduced platelet aggregat1n.Thromb Res.2010; 125(5):419-26.] ;2)LMWF通过降低氧化应激改善离体血管收缩的高反应性，通过激活血管内皮一氧化氮合成酶(eNOS)的活性，促进一氧化氮(NO)的释放，扩张肾上腺素(PE)诱导的离体血管的收缩[Cui，W.,et al.，Low-molecular-weight fucoidan protects endothelial funct1n and amel1ratesbasal hypertens1n in diabetic Goto-Kakizaki rats.Lab Invest.2014Apr；94(4):p.382-93.) 此外，文献报道，LMWF通过增强碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的活性，提高基质细胞衍生因子(SDF-1)的水平，促进血管新生，改善下肢肌肉等组织的血供[Luyt，CE.，et al.,Low-molecular-weight fucoidan promotes therapeutic revascularizat1nin a rat model of critical hindlimb ischemia.J Pharmacol Exp Ther.2003；305
(l):p.24-30.]o
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种褐藻多糖硫酸酯在制备预防和/或治疗下肢外周动脉血管病的产品中的应用。
[0005]本发明提供的褐藻多糖硫酸酯在制备预防和/或治疗下肢外周动脉血管病的产品中的应用。
[0006]上述的应用中，所述下肢外周动脉血管病为动脉粥样硬化、大动脉炎、血栓闭塞性脉管炎和糖尿病等所致的慢性动脉闭塞症中的至少一种，本领域内下肢动脉闭塞的外周血管病均包含在此。
[0007]上述的应用中，所述褐藻多糖硫酸酯的重均分子量为3-30KD，称为低分子量褐藻多糖硫酸酯。
[0008]上述的应用中，所述褐藻多糖硫酸酯中岩藻糖含量为25?35%，硫酸基含量为25?35%。
[0009]上述的应用中，所述褐藻多糖硫酸酯是从海带、马尾藻、裙带菜、羊栖菜、鼠尾藻、海黍子、昆布、泡叶藻和墨角藻中的至少一种中提取得到。
[0010]上述的应用中，所述褐藻多糖硫酸酯是从所述海带中提取得到的。
[0011]本发明中，所述海带(Laminaria japonica)为天然海带和/或人工养殖的海带。
[0012]本发明中，所述褐藻多糖硫酸酯的活性成分是L-褐藻糖-4-硫酸酯，还含有少量的半乳糖、甘露糖、木糖、葡萄糖、阿拉伯糖、糖醛酸、蛋白质、K+、Na+、Ca2+、Mg2+等金属离子，它的结构特征是I，2_联结的聚α-L吡喃褐藻糖，而硫酸酯主要是在C-4位的羟基上。
[0013]上述的应用中，所述产品为药物和/或保健品。
[0014]上述的应用中，所述药物包含有效治疗量的所述褐藻多糖硫酸酯和药学上可接受的载体;所述药物可通过口服、注射、喷射、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织;或是被其他物质混合或包裹后导入机体;所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂。
[0015]上述的应用中，所述药物的剂型为口服制剂或注射剂。
[0016]上述的应用中，所述药物的剂型为注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊或口服液。
[0017]本发明中，所述低分子量褐藻多糖硫酸酯的制备方法，包括如下步骤:取海带粉碎后用蒸馏水提取，得到提取液;将所述提取液用水透析，然后将透析液浓缩，加乙醇析出沉淀，所述沉淀为粗褐藻多糖硫酸酯，然后将粗褐藻多糖硫酸酯分离纯化，得到褐藻多糖硫酸酯;将褐藻多糖硫酸酯配成水溶液，加入抗坏血酸和过氧化氢降解，分离纯化，即得到低分子量褐藻多糖硫酸酯。
[0018]所述褐藻多糖硫酸酯的制备方法中，粗褐藻多糖硫酸酯分离纯化采用MgCl2存在时乙醇沉淀，除去水溶性褐藻胶，然后滤液透析、浓缩后乙醇沉淀，干燥沉淀，得到褐藻多糖硫酉交酷;
[0019]将褐藻多糖硫酸酯降解后的反应体系分离纯化采用自来水和蒸馏水透析，之后浓缩，冻干，得到低分子量褐藻多糖硫酸酯。
[0020]本发明具有以下优点:
[0021]低分子量褐藻多糖硫酸酯(LMWF)来源于天然存在的海带之中，其易得性与安全性;能对下肢外周血管病有一定改善作用。具体如下:I)LMWF可以改善下肢动脉闭塞的外周血管病大鼠足底