一种从肝素副产物废蛋白中分离类肝素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种类肝素的制备方法，尤其涉及一种从肝素副产物中分离类肝素的 方法。
【背景技术】
[0002] 类肝素是指天然的、合成的和半合成的与肝素有类似作用的物质，类肝素能够与 数百种蛋白质相结合，影响蛋白质的空间构象、寿命和生物活性，类肝素还可以和胞外基 质中的多种蛋白质相结合，控制它们的分布、转移和信息传递。可见类肝素是一种重要的信 息分子，对主体细胞的行为如细胞的增殖、分化、结合起调控作用，并参与对外来细胞的识 别和控制过程。类肝素产品可作为生产舒洛地特，冠心舒等药物的原料，此类药物因安全有 效受到患者的广泛认同。
[0003] 从猪小肠粘膜经过离子交换以及分级沉淀生产肝素的过程中产生了大量的废蛋 白，这是因为树脂吸附过程中树脂也吸附蛋白，副产物蛋白中除了大量蛋白以外，其余主要 成分是硫酸乙酰肝素（类肝素）、硫酸皮肤素和少量残留肝素。但是由于其中的有效物质分 离困难，故生产肝素后一般将这些副产物丢弃或存储，造成资源浪费。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是克服上述【背景技术】中的不足，提供一种从肝素副产物中分离类肝 素的方法，进行废物利用，节约成本，而且应具有工艺简单，成本较低的特点。
[0005] 本发明所采用的技术方案是：
[0006] -种从肝素副产物废蛋白中分离类肝素的方法，其特征在于包括如下步骤：
[0007] 1)将肝素副产物废蛋白制成溶液；
[0008] 2)向溶液中加入吸附剂进行吸附；
[0009] 3)对吸附剂进行洗涤和洗脱，收集洗脱液并进行沉淀，得到沉淀固体一；
[0010] 4)将沉淀固体一制成溶液，之后依次经过调节pH、氧化、调节pH、还原、调节pH、调 节盐浓度以及沉淀，得到沉淀固体二；
[0011] 5)将沉淀固体二烘干，得到类肝素。
[0012] 作为优选，步骤1)中，肝素副产物废蛋白加入水制成溶液，肝素副产物废蛋白与 水的体积比是1:1~5。
[0013] 作为优选，步骤2)中，吸附剂为离子吸附树脂。
[0014] 作为优选，所述离子吸附树脂为强碱性阴离子吸附树脂，树脂量为6~10g/L，吸 附温度为50~65°C，吸附时间为4~8h，吸附pH7~9,盐浓度为0. 5~lmol/L。
[0015] 作为优选，步骤3)中，先用低浓度的氯化钠溶液搅拌洗涤吸附剂，然后采用高浓 度的氯化钠溶液搅拌洗脱吸附剂，收集洗脱液并用沉淀剂沉淀，得到沉淀固体一。
[0016] 作为优选，所述低浓度的氯化钠溶液的浓度为0. 1~0. 8mol/L，洗涤时间为20~ 40min ;所述高浓度的氯化钠溶液的浓度为3~5mol/L，洗脱时间为1~5h ;所述沉淀剂的 体积为洗脱液的1~2倍，沉淀时间12~24h。
[0017] 作为优选，所述沉淀剂为无水乙醇。
[0018] 作为优选，步骤4)中，沉淀固体一加水制成溶液后，依次加入氢氧化钠调节pH、加 入双氧水进行氧化、加入氯化氢调节pH、滴加亚硫酸氢钠进行还原除尽双氧根离子、加入氢 氧化钠调节pH、加入饱和氯化钠溶液调节盐浓度，最后加入沉淀剂沉淀，得到沉淀固体二。
[0019] 作为优选，步骤4)中，沉淀固体一与水按质量比1:10~20制成溶液后，依次利用 氢氧化钠调节pH至9~12、按体积比1:200加入质量分数为30%的双氧水，氧化6~8h、 利用氯化氢调节pH到6~8、滴加40%质量分数的亚硫酸氢钠进行还原除尽双氧根离子、 加入氢氧化钠调节pH至5~7、加入饱和食盐水调节盐浓度在1~2mol/L，电导率在45~ 50ms，最后加入沉淀剂沉淀，电导率控制在8~12ms，得到沉淀固体二。
[0020] 本发明的有益效果是：本发明有效解决了存储或丢弃大量肝素副产物所需财力和 物力，并变废为宝，将副产物再次利用，即节约了大量成本，又创造了价值。本发明从副产物 中直接分离得到符合标准的类肝素原料，可作为其他药物比如舒洛地特的起始原料药，传 统生产方式中的要分离获得硫酸乙酰肝素等类肝素相当困难，最终导致原料的价格升高， 而本方法获得类肝素原料工艺简单，成本低廉，适合工业化生产。
【具体实施方式】
[0021] 以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于以下实施例。
[0022] 实施例1 :
[0023] 取肝素副产物废蛋白8L，与16L水溶解。按照每升蛋白加入6g树脂的比例，加 入48g树脂进行吸附，吸附温度为59°C，pH为7. 67,盐浓度为0. 75mol/L，吸附时间为8h。 吸附结束后收集树脂，加入〇. 82mol/L的氯化钠溶液进行洗涤，洗涤20min结束后，再加 入4. 5mol/L氯化钠溶液进行洗脱，洗脱4h结束后收集洗脱液，加入300ml的90%乙醇，沉 淀16h。沉淀结束后，倒掉上层乙醇，加入180ml水进行溶解。用30%氢氧化钠调节pH至 11. 22,加入30%的双氧水2ml，搅拌均匀，氧化时间为6h，氧化结束后，利用8%氯化氢，调 节pH至6. 05,逐滴滴加40%的亚硫酸氢钠，用默克试纸判断是否还有剩余的双氧根离子。 之后，再加入氢氧化钠，调节pH至5. 23,加入饱和氯化钠溶液，调节电导率为45ms。加入 410ml的90 %乙醇进行沉淀，沉淀终点电导率为11ms，沉淀18h，烘干得到类肝素产品，重 量为7. 7057g，效价39u/mg，总单位数300523U，吸光度0. 561，旋光度21. 22°，干燥失重为 3%，蛋白含量为0。
[0024] 作为类肝素药物的原料，其理化性质需达到一定的标准，如果某些指标超标太多， 再一次纯化的过程会增加原料损失，增加运行成本，因而总结了类肝素产品的一些主要理 化性质的参考标准，下表为实施例1得到的理化结果。
[0025]
[0026] 实施例2 :
[0027] 取肝素副产物废蛋白8L，与16L水溶解。按照每升蛋白加入8g树脂的比例加入 64g树脂进行吸附，吸附温度为59°C，pH为7. 79,盐浓度为0. 78mol/L，吸附时间为8h。吸 附结束后收集树脂，加入0. 82mol/L的氯化钠溶液进行洗涤，洗涤20min结束后，再加入 4. 5mol/L氯化钠溶液进行洗脱，洗脱3h结束后收集洗脱液，加入300ml的90%乙醇，沉淀 16h。沉淀结束后，倒掉上层乙醇，加入180ml水进行溶解。用30%氢氧化钠调节pH至11. 3， 加入30 %的双氧水2ml，搅拌均匀，氧化时间为6h，氧化结束后，利用8 %氯化氢，调节pH至 6. 83,逐滴滴加40%的亚硫酸氢钠，用默克试纸判断是否还有剩余的双氧根离子。之后，再 加入氢氧化钠，调节pH至5,加入饱和氯化钠溶液，调节电导率为50ms。加入410ml的90% 乙醇进行沉淀，沉淀终点电导率为l〇ms，沉淀18h，烘干得到类肝素产品，重量为10. 446g， 效价37u/mg，总单位数386502U，吸光度0. 591，旋光度21. 31°，干燥失重为4%，蛋白含量 为0〇
[0028] 下表为实施例2得到的理化结果。
[0029]
[0030] 实施例3 :
[0031] 取肝素副产物废蛋白10L，与25L水溶解。按照每升蛋白加入7g树脂的比例加 入70g树脂进行吸附，吸附温度为59°C，pH为7. 96,盐浓度为0. 78mol/L，吸附时间为6h。 吸附结束后收集树脂，加入〇. 82mol/L的氯化钠溶液进行洗涤，洗涤20min结束后，再加 入4. 5mol/L氯化钠溶液进行洗脱，洗脱4h结束后收集洗脱液，加入410ml的90 %乙醇， 沉淀16h。沉淀结束后，倒掉上层乙醇，加入360ml水进行溶解。用30%氢氧化钠调节pH 至11. 36,加入30%的双氧水4ml，搅拌均匀，氧化时间为9h，氧化结束后，利用8%氯化氢， 调节pH至7,逐滴滴加40 %的亚硫酸氢钠，用默克试纸判断是否还有剩余的双氧根离子。 之后，再加入氢氧化钠，调节pH至5. 12,加入饱和氯化钠溶液，调节电导率为50ms。加入 610ml90 %乙醇进行沉淀，沉淀终点电导率为12ms，沉淀1