一种桑葚多糖的提取方法及其产品的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种桑葚多糖的提取方法及其产品，属于中药提取技术领域。
【背景技术】
[0002] 桑葚（Fructus Mori)又名桑率、桑果、葚子、乌葚等，是桑科桑属多年生落叶乔木 桑树的成熟果穗的统称，原产于中国中部约有四千年的栽培史，品种较多栽培范围广泛，资 源较为丰富。新鲜桑葚不但有甘美的滋味，并且含有大量的维生素、氨基酸、矿物元素、微 量元素、无机盐类、果胶、黄酮、生物碱、酚类及糖类等多种营养成分，又具有食用和医疗保 健的作用，因而被广大人群所喜爱。桑葚是被国家卫生部列为首批"既是食品又是药品"的 农产品之一。我国许多中医名著如《本草纲目》、《中药大辞典》等，认为桑葚性寒，具有滋阴 养血、镇静安神、补肝益肾、养颜益智、乌发明目、生津止渴、延年祛斑、降压消渴和解酒的功 效，还可以用于治疗肝肾阳虚、心悸失眠、肠燥便秘、须发早白等症。随着现代医学对桑葚 进行药理、药效毒理测试的研究，发现桑葚具有促进造血细胞的生长，提高动物体内酶的活 性，抗诱变，抗菌，抗病毒，抗辐射，抑制肿瘤及有害物质的生成，增强免疫力、抗寒功能及耐 劳能力，抗氧化，延缓细胞衰老，防止血管硬化，调节血糖和血脂，护肝等功效。
[0003] 桑葚多糖是由多个相同或不同的单糖以糖苷键连接而成的高聚合物，具有较为广 泛的生物活性。主要包括参与机体代谢、调节机体免疫力、延缓细胞衰老、防止血管硬化、防 衰老、调节血糖、抗菌、抗病毒、抗辐射、抑制肿瘤、抗氧化等生物活性。
[0004] 《桑葚多糖提取、纯化分离及其降糖作用的研究》（赵喜兰，《食品工业科技》，2011 年第2期）公开了一种用回流提取并经树脂纯化得到桑葚多糖的方法。《桑葚多糖提取方 法的比较》（刘胜利等，《安徽农业科学》，2012年第5期）中对不同的桑葚多糖提取方法进 行了比较。
[0005] 传统的桑葚多糖提取方法主要有回流提取法、超声波辅助提取法、热水提取法、碱 提取法或酸提取法，总体上呈现提取效率低、提取得率低、工艺复杂、污染环境等诸多缺陷， 不适合工业化大生产。因此提供一种高效、安全环保、工艺简单的提取方法，显得尤为必要。
【发明内容】
[0006] 为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种桑葚多糖的提取方法，采用 生物酶酶解与超声相结合，具有提取效率高、提取物得率高、安全环保，适合工业化大生产 的特点。
[0007] 为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
[0008] -种桑葚多糖的提取方法，包括以下步骤：
[0009] (1)除杂：将桑葚原料进行水洗，干燥，粉碎，备用；
[0010] (2)脱脂、脱色：将步骤（1)所得原料置于容器中，先后加入乙醇、乙醚进行回流， 回流完毕后，晾干，备用；
[0011] (3)将步骤（2)所得产物置于容器中，加入水，调节pH值，保温，加入葡萄糖氧化酶 进行酶解；
[0012] (4)将步骤⑶中酶解产物进行超声处理，得提取液；
[0013] (5)将提取液趁热过滤，得滤液，将滤液浓缩，醇沉两次，离心，收集沉淀物，沉淀物 用无水乙醇反复洗涤，干燥，得到桑葚多糖提取物。
[0014] 进一步地，前述提取方法，包括以下步骤：
[0015] (1)除杂：将桑葚原料进行水洗，干燥，粉碎，备用；
[0016] (2)脱脂、脱色：将步骤（1)所得原料置于容器中，先加入75%~100%乙醇回流 两次，再加入90%~100%乙醚回流两次，每次回流60~150分钟，回流完毕后，晾干，备 用；
[0017] (3)将步骤（2)所得产物置于容器中，加入步骤（2)所得产物重量6~25倍的水， 调节pH值为3~7,保持温度在25°C~75°C，加入步骤（2)所得产物重量0. 001~0. 006 倍的葡萄糖氧化酶进行酶解，酶解时间为15~120分钟；
[0018] (4)将步骤（3)中酶解产物进行超声处理，超声频率为20~lOOKHz，时间为10~ 40分钟，得提取液；
[0019] (5)将提取液趁热过滤，得滤液，将滤液浓缩至原体积的1/5~1/3,乙醇沉淀两 次，两次均加入4~6倍体积、浓度为90 %~100 %的乙醇，均放置于3 °C~5 °C下保持 12h~48h ;醇沉后离心，收集沉淀物，沉淀物用无水乙醇反复洗涤，干燥，得到桑葚多糖提 取物。
[0020] 更优选的提取方法，包括以下步骤：
[0021] (1)除杂：将桑葚原料进行水洗，干燥，粉碎，备用；
[0022] (2)脱脂、脱色：将步骤（1)所得原料置于容器中，先加入无水乙醇回流两次，再加 入无水乙醚回流两次，每次回流105分钟，回流完毕后，晾干，备用；
[0023] (3)将步骤⑵所得产物置于容器中，加入步骤⑵所得产物重量11倍的水，调 节pH值为5,保持温度在58°C，加入步骤（2)所得产物重量0. 003倍的葡萄糖氧化酶进行 酶解，酶解时间为38分钟；
[0024] (4)将步骤⑶中酶解产物进行超声处理，超声频率为80KHz，时间为20分钟，得 提取液；
[0025] (5)将提取液趁热过滤，得滤液，将滤液浓缩至原体积的1/4,乙醇沉淀两次，两次 均加入5倍体积、浓度为95%的乙醇，均放置于4°C下保持30h ;醇沉后离心，收集沉淀物， 沉淀物用无水乙醇反复洗涤，干燥，得到桑葚多糖提取物。
[0026] 前述提取方法中，所述的葡萄糖氧化酶为0. 2wt%~0. 4wt%葡萄糖氧化酶水溶 液。
[0027] 以上所述桑葚多糖的提取方法提取得到的桑葚多糖提取物。
[0028] 前述的桑葚多糖提取物中含有多糖、糖醛酸、蛋白质和硫酸酯，其中多糖的重量百 分含量大于55%，糖醛酸的重量百分含量大于12%。
[0029] 前述桑葚多糖提取物，按照重量百分数计，其中含有多糖6 5 %~7 0 %、糖醛酸 16%~21 %、蛋白质1 %~2%和硫酸酯5%~7%。
[0030] 进一步地，按照重量百分数计，前述桑葚多糖提取物中含有多糖67. 9%、糖醛酸 18. 5%、蛋白质1. 6%和硫酸酯6. 2%。
[0031] 前述桑葚多糖提取物中，所述多糖由质量比为1.8~2.4 : 0.3~1 : 1.9~ 2.5 : 60~61 : 2. 8~3.4 : 18~18.8 : 12. 2~13的鼠李糖残基、岩藻糖残基、木糖 残基、甘露糖残基、半乳糖残基、半乳糖醛酸残基和葡萄糖残基组成。
[0032] 进一步地，前述桑葚多糖提取物中，所述多糖由质量比为 2. 1 : 0.6 : 2.2 : 60. 5 : 3.1 : 18.4 : 12. 5的鼠李糖残基、岩藻糖残基、木糖残基、甘 露糖残基、半乳糖残基、半乳糖醛酸残基和葡萄糖残基组成。
[0033] 为了确保本发明的桑葚多糖的提取方法科学、合理，发明人进行了相应的实验研 究和筛选，才得以确定本发明的技术方案。具体实验内容如下：
[0034] 1?仪器与试药
[0035] 1. 1 仪器
[0036] 三角瓶、具塞试管、移液管、量筒、烧杯、试剂瓶、容量瓶、离心管、电子天平、台 秤、旋转蒸发仪、电热恒温鼓风干燥箱、水浴锅、高速万能粉碎机、紫外可见分光光度计、 PHS-3C+酸度计（pH精确0. 01)、温度计、冰柜、恒温培养箱、酶标仪等。
[0037] 1. 2 试药
[0038] 如表1所示。
[0039] 表 1
[0040]
[0041] 2?方法与结果
[0042] 2. 1桑葚多糖提取工艺
[0043] 2. 1. 1工艺流程
[0044] 原材料一除杂一脱脂、脱色一加适量水一调节适当pH、温度一酶解一超声一过滤、 浓缩一醇沉一桑葚多糖提取物
[0045] 2. 1. 2操作过程
[0046] A?桑葚预处理过程：
[0047] 1)用清水将原料进行水洗，去除桑葚原料中的杂质，干燥，粉碎，备用；
[0048] 2)将1)中粉碎的桑葚置于容器中，加入75%~100%的乙醇，回流两次，每次回流 60~150分钟；
[0049] 3)加入90%~100%的乙醚，回流两次，每次回流60~150分钟，晾干，备用。
[0050] B.酶解过程：将A项中所得产物置于容器中，加入7K，水的用量为A项中所得产物 重量6~25倍，调节pH值为3~7,保持温度在25°C~75°C，加入葡萄糖氧化酶，酶的用量 为A项中所得产物重量的0. 001~0. 006倍，进行酶解，酶解时间为15~120分钟。
[0051] C.超声过程：将B项中酶解产物进行超声处理，超声频率为20~lOOKHz，时间为 10~40分钟，得提取液。
[0052] D.醇沉过程：将提取液趁热过滤，得滤液，浓缩滤液至原来体积的1/5~1/3,醇沉 两次，两次均加入4~6倍体积、浓度为90 %~100 %的乙醇，均放于温度3 °C~5 °C的环境 下并且保持12~48小时进行醇沉，醇沉后离心，收集沉淀。沉淀用无水乙醇反复洗涤，干