8h，烘干得到类肝素产品，重量
[0034] 为7. 9051g，效价50. 6u/mg，总单位数399998U，吸光度0. 595,旋光度41. 16°，干燥失重为4%，蛋白含量为0。[0032] 下表为实施例3得到的理化结果。[0033]
[0035] 实施例4 :
[0036] 取肝素副产物废蛋白8L，与20L水溶解。按照每升蛋白加入6g树脂的比例加入 48g树脂进行吸附，吸附温度为59°C，pH为7. 92,盐浓度为0. 77mol/L，吸附时间为6h。吸 附结束后收集树脂，加入0. 82mol/L的氯化钠溶液进行洗涤，洗涤20min结束后，再加入 4. 5mol/L氯化钠溶液进行洗脱，洗脱3h结束后收集洗脱液，加入300ml的90%乙醇，沉 淀16h。沉淀结束后，倒掉上层乙醇，加入180ml水进行溶解。用30%氢氧化钠调节pH至 11. 36,加入30%的双氧水3ml，搅拌均匀，氧化时间为6h，氧化结束后，利用8%氯化氢，调 节pH至7. 13,逐滴滴加40%的亚硫酸氢钠，用默克试纸判断是否还有剩余的双氧根离子。 之后，再加入氢氧化钠，调节pH至5. 56,加入饱和氯化钠溶液，调节电导率为50ms。加入 310ml90 %乙醇进行沉淀，沉淀终点电导率为11ms，沉淀18h，烘干得到类肝素产品，重量为 4. 719g，效价47. 9u/mg，总单位数226040U，吸光度0. 525,旋光度31. 9°，干燥失重为3%， 蛋白含量为0。
[0037] 下表为实施例4得到的理化结果。
[0038]
[0039] 实施例5 :
[0040] 取肝素副产物废蛋白8L，与8L水溶解。按照每升蛋白加入lOg树脂的比例加入 80g树脂进行吸附，吸附温度为65°C，pH为9. 01，盐浓度为0. 5mol/L，吸附时间为8h。吸附 结束后收集树脂，加入〇. lmol/L的氯化钠溶液进行洗涤，洗涤40min结束后，再加入5mol/L 氯化钠溶液进行洗脱，洗脱lh结束后收集洗脱液，加入300ml的90%乙醇，沉淀24h。沉淀 结束后，倒掉上层乙醇，加入180ml水进行溶解。用30%氢氧化钠调节pH至12,加入30% 的双氧水2ml，搅拌均勾，氧化时间为8h，氧化结束后，利用8%氯化氢，调节pH至7. 93,逐 滴滴加40%的亚硫酸氢钠，用默克试纸判断是否还有剩余的双氧根离子。之后，再加入氢 氧化钠，调节pH至6. 98,加入饱和氯化钠溶液，调节电导率为45ms。加入320ml90 %乙醇 进行沉淀，沉淀终点电导率为10. lms，沉淀18h，烘干得到类肝素产品，重量为4. 612g，效价 50.111/11^，总单位数2310611]，吸光度0.625，旋光度29.1°，干燥失重为3%，蛋白含量为0。
[0041] 下表为实施例5得到的理化结果。
[0042]
[0043] 实施例6 :
[0044] 取肝素副产物废蛋白8L，与40L水溶解。按照每升蛋白加入8g树脂的比例加入 64g树脂进行吸附，吸附温度为50°C，pH为7. 02,盐浓度为lmol/L，吸附时间为4h。吸附 结束后收集树脂，加入〇. 8mol/L的氯化钠溶液进行洗涤，洗涤20min结束后，再加入3mol/ L氯化钠溶液进行洗脱，洗脱5h结束后收集洗脱液，加入600ml的90%乙醇，沉淀12h。沉 淀结束后，倒掉上层乙醇，加入360ml水进行溶解。用30%氢氧化钠调节pH至9,加入30% 的双氧水4ml，搅拌均匀，氧化时间为6h，氧化结束后，利用8%氯化氢，调节pH至6. 0,逐滴 滴加40 %的亚硫酸氢钠，用默克试纸判断是否还有剩余的双氧根离子。之后，再加入氢氧化 钠，调节pH至5,加入饱和氯化钠溶液，调节电导率为50ms。加入610ml90%乙醇进行沉淀， 沉淀终点电导率为1 lms，沉淀18h，烘干得到类肝素产品，重量为5. 212g，效价48. 3u/mg，总 单位数251740U，吸光度0. 431，旋光度30. 7 °，干燥失重为3 %，蛋白含量为0。
[0045] 下表为实施例6得到的理化结果。
[0046]
[0047] 最后，需要注意的是，以上列举的仅是本发明的具体实施例。显然，本发明不限于 以上实施例，还可以有很多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容中直接导 出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种从肝素副产物废蛋白中分离类肝素的方法，其特征在于包括如下步骤： 1) 将肝素副产物废蛋白制成溶液； 2) 向溶液中加入吸附剂进行吸附； 3) 对吸附剂进行洗涤和洗脱，收集洗脱液并进行沉淀，得到沉淀固体一； 4) 将沉淀固体一制成溶液，之后依次经过调节pH、氧化、调节pH、还原、调节pH、调节盐 浓度以及沉淀，得到沉淀固体二； 5) 将沉淀固体二烘干，得到类肝素。2. 根据权利要求1所述的一种从肝素副产物废蛋白中分离类肝素的方法，其特征在 于：步骤1)中，肝素副产物废蛋白加入水制成溶液，肝素副产物废蛋白与水的体积比是 1:1 ~5〇3. 根据权利要求1所述的一种从肝素副产物废蛋白中分离类肝素的方法，其特征在 于：步骤2)中，吸附剂为离子吸附树脂。4. 根据权利要求3所述的一种从肝素副产物废蛋白中分离类肝素的方法，其特征在 于：所述离子吸附树脂为强碱性阴离子吸附树脂，树脂量为6~10g/L，吸附温度为50~ 65°C，吸附时间为4~8h，吸附pH7~9,盐浓度为0. 5~lmol/L。5. 根据权利要求1所述的一种从肝素副产物废蛋白中分离类肝素的方法，其特征在 于：步骤3)中，先用低浓度的氯化钠溶液搅拌洗涤吸附剂，然后采用高浓度的氯化钠溶液 搅拌洗脱吸附剂，收集洗脱液并用沉淀剂沉淀，得到沉淀固体一。6. 根据权利要求5所述的一种从肝素副产物废蛋白中分离类肝素的方法，其特征在 于：所述低浓度的氯化钠溶液的浓度为〇. 1~〇. 8mol/L，洗涤时间为20~40min ;所述高浓 度的氯化钠溶液的浓度为3~5mol/L，洗脱时间为1~5h ;所述沉淀剂的体积为洗脱液的 1~2倍，沉淀时间12~24h。7. 根据权利要求5或6所述的一种从肝素副产物废蛋白中分离类肝素的方法，其特征 在于：所述沉淀剂为无水乙醇。8. 根据权利要求1~6任一项所述的一种从肝素副产物废蛋白中分离类肝素的方法， 其特征在于：步骤4)中，沉淀固体一加水制成溶液后，依次加入氢氧化钠调节pH、加入双氧 水进行氧化、加入氯化氢调节pH、滴加亚硫酸氢钠进行还原除尽双氧根离子、加入氢氧化钠 调节pH、加入饱和氯化钠溶液调节盐浓度，最后加入沉淀剂沉淀，得到沉淀固体二。9. 根据权利要求8所述的一种从肝素副产物废蛋白中分离类肝素的方法，其特征在 于：步骤4)中，沉淀固体一与水按质量比1:10~20制成溶液后，依次利用氢氧化钠调节 pH至9~12、按体积比1:200加入质量分数为30%的双氧水，氧化6~8h、利用氯化氢调 节pH到6~8、滴加40%质量分数的亚硫酸氢钠进行还原除尽双氧根离子、加入氢氧化钠 调节pH至5~7、加入饱和食盐水调节盐浓度在1~2mol/L，电导率在45~50ms，最后加 入沉淀剂沉淀，沉淀过程中的电导率控制在8~12ms，得到沉淀固体二。
【专利摘要】本发明涉及一种从肝素副产物废蛋白中分离类肝素的方法。目的是提供的从肝素副产物中分离类肝素的方法，进行废物利用，节约成本，而且应具有工艺简单，成本较低的特点。技术方案是：一种从肝素副产物废蛋白中分离类肝素的方法，其特征在于包括如下步骤：1)将肝素副产物废蛋白制成溶液；2)向溶液中加入吸附剂进行吸附；3)对吸附剂进行洗涤和洗脱，收集洗脱液并进行沉淀，得到沉淀固体一；4)将沉淀固体一制成溶液，之后依次经过调节pH、氧化、调节pH、还原、调节pH、调节盐浓度以及沉淀，得到沉淀固体二；5)将沉淀固体二烘干，得到类肝素。
【IPC分类】C08B37/10
【公开号】CN105037584
【申请号】CN201510394022
【发明人】高秉学, 童永刚, 潘卫春, 汤彬彩, 杨志秋, 江玲超
【申请人】杭州惠顺生物科技有限公司
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年7月2日