andRich,Chemical Biology, 2:548-552(1998)) 〇
[0151] 聚合物微球持续释放制剂的实例描述在PCT公告WO99/15154(Tracy等）、美国专 利 5, 674, 534 号和 5, 716, 644 号（两者都属于Zale等）、PCT公告W0 96/40073(zale等） 和PCT公告W0 00/38651 (Shah等）。美国专利5, 674, 534号和5, 716, 644号和PCT公告 W0 96/40073描述含有相对于与盐聚集稳定的红细胞生成素粒子的聚合物基质。
[0152] 在一些实施方案中，所述治疗化合物用将保护治疗化合物以防止其从身体中迅 速消除的载剂制备，例如受控释放制剂，包括植入剂和微囊化递送系统。可使用可生物降 解的生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚 乳酸。这类制剂可使用已知技术制备。这些物质也可例如自AlzaCorporation和Nova Pharmaceuticals，Inc.购得。脂质体混悬剂（包括具有针对细胞特异性抗原的单克隆抗 体的靶向大肺泡上皮细胞的脂质体）也可用作药学上可接受的载剂。这些物质可使用本领 域技术人员所知的方法，例如如在美国专利4, 522, 811号中所述来制备。
[0153] 所述治疗化合物也可配制成增强细胞内递送。例如，脂质体递送体系在本领域 中已知，参见例如Chonn和Cullis,"RecentAdvancesinLiposomeDrugDelivery Systems,'，CurrentOpinioninBiotechnology6:698-708 (1995) ；ffeiner,"Liposomes forProteinDelivery:SelectingManufactureandDevelopmentProcesses,'，Immu nomethods, 4(3):201-9(1994)；和Gregoriadis,"EngineeringLiposomesforDrug Delivery:ProgressandProblems,'，TrendsBiotechnol.，13 (12) : 527-37 (1995) 〇 Mizguchi等，CancerLett.，100:63-69(1996)描述融合脂质体体内或体外递送蛋白质到细 胞中的用途。
[0154] 治疗剂的剂量、毒性和治疗功效可通过标准医药程序在细胞培养物和/或实验动 物中确定，包括例如确定LD50 (使50%的群体致命的剂量）和ED50 (有效治疗50%的群体 的剂量）。在毒性作用与治疗作用之间的剂量比为治疗指数，且其可表示为LD50/ED50的比 率。优选表现出高治疗指数的化合物。虽然可使用表现出毒性副作用的化合物，但是应当 小心设计将这类化合物靶向受影响组织的部位的递送体系以使对未感染细胞的潜在损害 最小化且由此降低副作用。
[0155] 从细胞培养物测定和/或动物研究中获得的数据可用于配制用于人类的剂量范 围。所述化合物的剂量优选在包括m)5〇而几乎没有毒性的循环浓度的范围内。所述剂量 可根据所采用的剂型和所利用的施用路径而在该范围内变化。对于在所述方法中使用的任 何化合物，最初可由细胞培养物测定估计治疗有效剂量。剂量可在动物模型中配制以达到 包括如在细胞培养物中确定的IC50 (即，试验化合物的浓度达到对症状的最大抑制作用的 一半）的循环血浆浓度范围。可使用这类信息以更准确地确定在人类中的可用剂量。例如 可通过高效液相色谱测量在血浆中的水平。
[0156] 通常，对于实现治疗性或预防性作用足够的芳族阳离子肽的有效量为约 0.OOOOOlmg/公斤体重/天-约10,OOOrng/公斤体重/天。合适地，剂量范围为约0.OOOlmg/ 公斤体重/天-约lOOmg/公斤体重/天。例如，剂量可为每天、每隔一天或每隔两天lmg/ kg体重/天或10mg/kg体重，或者在每周、每两周或每三周l-10mg/kg范围内。在一个实施 方案中，单一剂量的肽为〇. 001-10, 〇〇〇微克/千克体重。在一个实施方案中，在载剂中的 芳族阳离子肽浓度为〇. 2-2000微克/递送毫升。例示性治疗方案要求每天或每隔一周施 用一次。在治疗性应用中，有时需要在相对较短的间隔下的相对较高的剂量，直至疾病的进 展降低或终止，且优选直至受试者显示疾病症状的部分或完全缓解。此后，患者可按预防性 方案施用。
[0157] 在一些实施方案中，治疗有效量的芳族阳离子肽可定义为在靶组织中10 12_10 6摩 尔浓度如约10 7摩尔浓度的肽浓度。该浓度可通过0. 001-100mg/kg或等效剂量的全身性 剂量通过体表面积递送。应该优化剂量的进度以维持在靶组织中的治疗浓度，最优选通过 每天或每周单次施用，而且包括连续施用（例如，肠胃外输注或透皮应用）。
[0158] 熟练技术人员应当了解某些因素可能影响有效治疗受试者所需要的剂量和时程， 这些因素包括但不限于疾病或病症的严重性、先前的治疗、受试者的一般健康状况和/或 年龄及其它存在的疾病。此外，用治疗有效量的本文所述的治疗组合物治疗受试者可包括 单一治疗或一系列治疗。
[0159] 根据本发明方法治疗的受试者可为任何哺乳动物或动物，包括例如家畜，例如绵 羊、猪、奶牛和马；玩赏动物，例如狗和猫；实验室动物，例如大鼠、小鼠和兔。在一个优选的 实施方案中，所述哺乳动物为人类。
[0160] 芳族阳离子肽与其它治疗剂的组合疗法
[0161] 在一些实施方案中，例如D-Arg-2' 6' -Dmt-Lys-Phe_NH2的芳族阳离子肽或例如乙 酸盐或三氟乙酸盐的其药学上可接受的盐可与一种或多种额外的试剂组合以预防或治疗 降低的TAZ1表达水平或巴斯综合征。对于降低的TAZ1表达水平或巴斯综合征的药物治疗 通常包括抗生素、粒细胞集落刺激因子（GCSF)和用于控制心脏病状的试剂，包括但不限于 例如利尿剂、ACE抑制剂、地高辛（洋地黄）、钙通道阻断剂和β-阻断剂。在轻微情况下， 可使用噻嗪利尿剂，例如以25-50毫克/天的氢氯噻嗪或以250-500毫克/天的氯噻嗪。然 而，可能需要补充氯化钾，因为慢性多尿症导致hypokalemis碱中毒。此外，噻嗪利尿剂通 常在具有巴斯综合征的晚期症状的患者中无效。ACE抑制剂的典型剂量包括以25-50毫克 /天的卡托普利和以10毫克/天的喹那普利。
[0162] 在一个实施方案中，例如D-Arg-2' 6' -Dmt-Lys-Phe_NH2的芳族阳离子肽或例如乙 酸盐或三氟乙酸盐的其药学上可接受的盐与肾上腺素β-2激动剂组合。"肾上腺素β_2 激动剂"是指肾上腺素β-2激动剂及其类似物和衍生物，包括例如天然或合成的官能变体， 其具有肾上腺素β-2激动剂生物活性；以及肾上腺素β_2激动剂的片段，其具有肾上腺素 β-2激动剂生物活性。术语"肾上腺素β_2激动剂生物活性"是指模拟在受试者中肾上腺 素和去甲肾上腺素的作用并改善在具有巴斯综合征的患者中的心肌收缩性的活性。通常已 知的肾上腺素β-2激动剂包括但不限于克仑特罗（clenbuterol)、舒喘宁（albuterol)、福 莫特罗（formeoterol)、左沙丁胺醇（levalbuterol)、轻异丙肾上腺素（metaproterenol)、 口比布特罗（pirbuterol)、沙美特罗（salmeterol)和特布他林（terbutaline)。
[0163] 在一个实施方案中，例如D-Arg-2' 6' -Dmt-Lys-Phe_NH2的芳族阳离子肽或例如乙 酸盐或三氟乙酸盐的其药学上可接受的盐与肾上腺素β-l拮抗剂组合。肾上腺素β-l拮 抗剂和肾上腺素β-l阻断剂是指肾上腺素β-l拮抗剂及其类似物和衍生物，包括例如天 然或合成的官能变体，其具有肾上腺素β-1拮抗剂生物活性；以及肾上腺素β-1拮抗剂的 片段，其具有肾上腺素β-l拮抗剂生物活性。肾上腺素β-l拮抗剂生物活性是指阻断肾 上腺素对β受体的作用的活性。通常已知的肾上腺素的β-l拮抗剂包括但不限于醋丁洛 尔（acebutolol)、阿替洛尔（atenolol)、倍他洛尔（betaxolol)、比索洛尔（bisoprolol)、 艾司洛尔（esmolol)和美托洛尔（metoprolol) 〇
[0164] 克仑特罗例如在包括SpilOpent?(BoehingerIngelheim)、Broncodil?(V〇n BochI)、Bmncoterol?(QuimedicalPT)、Cesbroil㊣（FidelisPT)和Clenbuter? (BiomedicaFoscama)的许多商标名称下得到。类似地，制备例如美托洛尔的肾上腺 素β-l拮抗剂及其类似物和衍生物的方法在本领域中熟知。美托洛尔尤其在商标名称 L〇|Mr6SS0：F⑩（美托洛尔酒石酸盐）下购得，由NovartisPharmaceuticalsCorporation, OneHealthPlaza,EastHanover,N.J. 07936-1080 生产。Lopressor?:的通用版本也自MylanLaboratoriesInc. , 1500CorporateDrive,Suite400,Canonsburg,Pa. 15317 和 WatsonPharmaceuticals,Inc·, 360Mt.KembleAve.Morristown,N.J. 07962 购得。美托洛 尔也为在商标名称ToprolXL'K下购得，由AstraZeneca,LP生产。
[0165] 在一个实施方案中，将额外的治疗剂与芳族阳离子肽组合施用到受试者，从而产 生增效的治疗作用。因此，在治疗巴斯综合征中可使用较低剂量的一种或两种治疗剂，产生 增加的治疗功效和减小的副作用。
[0166] 在任何情况下，多种治疗剂可以任何顺序或甚至同时施用。如果同时施用，多种治 疗剂可以单一一元化形式或以多种形式提供（仅举例而言，作为单一丸剂或作为两个单独 的丸剂）。所述治疗剂中的一种可以多次剂量给予或者两者可作为多次剂量给予。如果不 同时施用，则在多次剂量之间的时程可为大于零周至小于4周。另外，组合方法、组合物和 制剂不限于仅使用两种试剂。
[0167] 实施例
[0168] 通过以下实施例进一步说明本发明，不应该将其视为以任何方式加以限制。
[0169] 实施例1-在心脏衰竭的狗樽铟中芳族阳离子肽对心脏线粒体心磷脂的影响
[0170] 该实施例说明芳族阳离子肽D-Arg-2' 6' -Dmt-LyS-Phe-NH2对在具有冠状 微栓塞诱发的心脏衰竭的狗中的心脏线粒体心磷脂水平的影响。具体地讲，评价 D-Arg-2' 6' -Dmt-Lys-Phe-NHJt18:2-18:2-18:2-18:2 心磷脂物质的水平的影响。
[0171] 方法
[0172] 心脏衰竭在狗中经由多次连续的冠状动脉内微栓塞诱发，如在Sabbah等，AmJ Physiol. (1991)260:H1379-84中所述，其整体以引用的方式结合到本文中。一半的狗接着 用线粒体肽治疗；另一半的狗用药物赋形剂治疗并充当对照物。肽治疗在定义为约30%的 左心室射血分数的心脏衰竭（HF)诱发时开始。肽的每日剂量为静脉内施用的0.5mg/kg/ 天。在治疗期的最后（12周），将在赋形剂组和治疗组两者中的狗处死并移出来自左心室的 心肌样品，用盐水洗涤，并立即冷冻且在-80°C下储存。对于心磷脂分析，脂质用氯仿/甲醇 溶液从心脏组织样品中提取（BlighDyer提取）。将单个脂质提取物用氯仿：甲醇（1:1) 重构，用N2冲洗，且随后在-20°C下储存，之后经由电喷雾离子化质谱使用装备有自动纳米 喷雾设备的三极-四极质谱仪分析。对于心磷脂的基于增强的多维质谱的鸟枪法脂质组学 如Han等，"Shotgunlipidomicsofcardiolipinmolecularspeciesinlipidextracts ofbiologicalsamples,"JLipidRes47(4)864-879(2006)中所述进行。
[0173] MM.
[0174] 与来自正常受试者的心脏组织（正常）相比，18:2心磷脂物质在未治疗的心脏衰 竭狗（心脏衰竭，对照物）显著降低（Ρ〈〇· 05)。然而，图1，用D-Arg-2' 6' -Dmt-Lys-Phe-NH2 治疗的心脏衰竭狗（心脏衰竭，肽）具有与正常受试者类似但大于心脏衰竭对照受试者的 18:2心磷脂水平（p〈0. 05)。图1。
[0175] 结论
[0176] 18:2心磷脂物质在心脏衰竭受试者中降低。18:2心磷脂降低导致不良的氧化磷 酸化和随后的LV功能障碍。用D-Arg-2' 6' -Dmt-LyS-Phe-NH2的慢性治疗使18:2心磷脂 正规化，这产生改善的LV功能和线粒体ATP合成速率。
[0177] 这些结果显示例如D-Arg-2' 6' -Dmt-Lys-Phe-NHj^本发明的芳族阳离子肽或例 如乙酸盐或三氟乙酸盐的其药学上可接受的盐可用于预防和治疗与异常心磷脂水平相关 的疾病和病状。具体地讲，这些