人参茎叶有效部位及其制备方法和应用_2

文档序号:9716176阅读:来源:国知局
如可 W制备成片剂、口服液、胶囊剂、丸剂、散剂、注射剂、颗粒剂、粉针剂等,优选剂型为经胃肠 道给药的剂型如胶囊剂、片剂。
[0024] 与现有技术相比,本发明将人参皂巧Re和Rgi作为一个整体进行分离纯化得到最 终的有效部位,大大降低了所述两种人参皂巧单体的分离纯化难度,同时所得有效部位性 质稳定,质量可控性更强。本发明人参茎叶有效部位中的活性成分由人参皂巧Re和人参皂 巧Rgi组成,二者相辅相成,具有协同增效作用。本发明人参茎叶有效部位具有有效成分明 确、组分简单、质量可控性强、产品稳定性好、服用量更小、药理活性更优等特点。本发明工 艺简单,成本更低、能耗更低,符合节能减排的大体趋势,适合工业化大生产,具有较大的推 广应用价值。
【附图说明】
[0025] 图1为本发明实施例1制备得到的人参茎叶有效部位HPLC图谱。
【具体实施方式】
[0026] 下面结合实施例对本发明的【具体实施方式】做进一步的描述,并不因此将本发明限 制在所述的实施例范围之中。
[0027] 实施例1 (1)取切好的人参茎叶20kg(从药材批发市场采购),先用自来水冲洗浸泡20分钟,然后 加入纯水回流加热提取3次,每次加水量分别为药材量的8、6、4倍,每次加热沸腾后继续加 热1小时,合并3次提取液。
[002引(2)取步骤(1)中所得人参茎叶提取液,离屯、过滤,取滤液,上预处理好的nm200聚 合物色谱柱(甲基丙締酸醋基质,苏州纳微科技有限公司)纯化,依次采用纯水、30%乙醇洗 脱,丢弃纯水洗脱下来的较质类杂质,收集富含人参皂巧Rgi/Re的低级醇溶液洗脱液,浓缩 至少量,室溫放置24小时得到结晶物。
[0029] (3)取步骤(2)中所得的结晶,用乙醇/水体系重结晶,得到最终有效部位,其中人 参皂巧Rgi/Re含量为98.2%,Rgi: Re=I. 2:3.7。
[0030] 实施例2 (1) 取切好的人参茎叶15kg(从药材批发市场采购),先用自来水冲洗浸泡20分钟,然后 加入50%乙醇回流加热提取3次,每次加水量分别为药材量的10、6、6倍,每次加热沸腾后继 续加热1小时,合并3次提取液,减压浓缩至无醇; (2) 取步骤(1)中所得人参茎叶浓缩液,离屯、过滤,取滤液,上预处理好的PSlOO聚合物 色谱柱(苯乙締基质,苏州纳微科技有限公司)纯化,依次采用纯水、25%甲醇洗脱,丢弃纯水 洗脱下来的较质类杂质,收集富含人参皂巧Rgi/Re的低级醇溶液洗脱液,浓缩至少量,室溫 放置24小时得到结晶物。
[0031] (3)取步骤(2)中所得的结晶,用甲醇/水体系重结晶,得到最终有效部位,其中人 参皂巧Rgi/Re含量为96.8%,Rgi: Re=I. 5:4.2。
[0032] 实施例3 (1)取市售人参茎叶提取物(UV〉80%,吉林宏久生物)Ikg,用水溶解离屯、过滤,取滤液, 上预处理好的皿200聚合物色谱柱纯化,依次采用纯水、30%乙醇洗脱,丢弃纯水洗脱下来的 较质类杂质,收集富含人参皂巧Rgi/Re的低级醇溶液洗脱液,浓缩至少量,室溫放置24小时 得到结晶物。
[0033] (3)取步骤(2)中所得的结晶,用乙醇/水体系重结晶,得到最终有效部位,其中人 参皂巧 Rgi/Re 含量为 97.2%,Rgi: Re=2.1:4.7。
[0034] 实施例4 (1)取市售人参茎叶提取物(UV〉80%,吉林宏久生物)Ikg,用水溶解离屯、过滤,取滤液, 上预处理好的中压C18反相层析柱(天津博纳艾杰尔科技),依次采用纯水、20%甲醇洗脱,丢 弃纯水洗脱下来的较质类杂质,收集富含人参皂巧Rgi/Re的低级醇溶液洗脱液,浓缩至少 量,室溫放置24小时得到结晶物。
[0035] (3)取步骤(2)中所得的结晶,用甲醇/水体系重结晶,得到最终有效部位,其中人 参皂巧Rgi/Re含量为98.4%,Rgi: Re=I. 9:4.0。
[0036] 实施例5药效学实验 1材料和方法 1.1动物:昆明系小鼠,13个月龄小鼠,3个月龄小鼠,购于四川大学华西药学院。
[0037] Wis化r大鼠,24个月龄大鼠购于四川大学华西药学院。
[003引1.2药品与仪器 1.2.1药品:人参茎叶有效部位(含量:Re+Rgl > 95%),按实施例1制备。
[0039] 人参皂巧Re:含量为98%,成都普瑞法科技开发有限公司制备。
[0040] 人参皂巧Rgl:含量98%,成都普瑞法科技开发有限公司制备。
[0041] 1.2.2试剂与仪器 试剂:硫代己比妥酸:上海试剂工厂,批号8720513; 5,5/ -二硫-对硝基苯甲酸(DN TB) Flukachemie AG,CH-9370Buchs批号47328;超氧化物歧化酶(SOD)长沙生化厂。
[0042] 仪器:Y迷宫,浙江医用分析仪器厂;医用高速冷冻离屯、机(Fk20),江苏省西岗医 用器械厂;岛津UU-260分光光度计(日本岛津)。
[0043] 1.3试验方法 1.3.1人参茎叶有效部位对老年小鼠学习与记忆的影响 选13月龄和3月龄小鼠,实验前按电迷路法筛选小鼠,按在12次电击中有9次正确为合 格小鼠。按体重随机分为5组,每组10只,分别为老年对照组、青年对照组、人参茎叶皂巧Re 组、人参茎叶皂巧Rgl组、本发明有效部位组,其中青年组小鼠为3月龄小鼠,其余为13月龄 小鼠。将本发明有效部位、人参茎叶皂巧Re、人参茎叶皂巧Rgl按皂巧实际含量配制成0.8% (W/V)溶液,每只鼠按125mg/kg给药,老年对照组、青年对照组灌W等容水,连续3个月,在实 验结束前3天,各组鼠每天腹腔注射A1C13溶液一次,剂量为500mg/kg,在第3日注射完 AlCb后30min,用Y迷宫测定小鼠学习与记忆,第4日再测一次,记录连续10次行为中9次 正确为止的总次数(A),再将A-9,用于统计分析,然后处死动物,取各组小鼠大脑,左半球用 于测定MDA,右半球用于MAO-B的测定。
[0044] 1.3.2人参茎叶有效部位对老年小鼠大脑MDA及MAO-B的影响 取上述各组实验小鼠大脑左半球用0.05mol/L憐酸缓冲液制成10%的脑匀浆,用硫代己 比妥酸比色法测定小鼠大脑中MDA含量,按考马斯亮兰法测定蛋白含量。
[0045] 取上述实验各组小鼠右侧大脑,用10倍体积预冷的0.2mol/L憐酸缓冲液(pH7.4) 悬浮冰浴中ISOOOr/min匀浆SOmin后,在1000 g下离屯、IOmin,其上清液在4°C,ITOOOr/min离 屯、30min,其沉淀用Iml预冷的缓冲液悬浮,制成粗酶,按McEwen法测定小鼠大脑中MAO-B活 性,用考马斯亮兰法测定蛋白含量。
[0046] 1.3.3人参茎叶有效部位对老年小鼠大脑中GSH-Px及SOD的影响 取老年小鼠按体重随机分为5组,每组10只,分别为老年对照组、人参茎叶皂巧Re组、 人参茎叶皂巧Rgl组、本发明有效部位组,并设置青年小鼠对照组。将本发明有效部位、人参 茎叶皂巧Re、人参茎叶皂巧Rgl按皂巧实际含量配制成0.8%(W/V)溶液,每只鼠按125mg/kg 给药,老年对照组、青年对照组灌W等容水,实验连续40天,停药1天,处死,取大脑,冲洗,吸 干,称重,-40°C保存。取上述各组小鼠大脑,在冰浴上制备5%匀浆离屯、,精密吸取上清液 0.1 ml,按化man法加 W修改测定GSH-Px活性,采用卡马斯亮兰法测定蛋白含量。
[0047] 取上述各组鼠脑组织0.1 Og,加入2ml生理盐水(NS)在12500r/min或5000r/min的 高速组织匀浆机匀浆Imin得5%(W/V)的组织匀浆,将其于3000r/min下,离屯、lOmin,上清液 用于SOD的测定,用邻苯S酪自氧化法测定小鼠大脑中SOD活性,采用库马斯亮兰法测定蛋 白含量。
[0048] 1.3.4人参茎叶有效部位对中老年大鼠脑线粒体和微粒体的影响 Wistar大鼠,24个月龄,按体重随机分为4组,每组12只,分别为老年对照组、人参茎叶 皂巧Re组、人参茎叶皂巧Rgl组、本发明有效部位组。将本发明有效部位、人参茎叶皂巧Re、 人参茎叶皂巧Rgl按皂巧实际含量配制成0.8%(W/V)溶液,每只鼠按125mg/kg给药,老年对 照组灌W等容水,实验连续40天,停药1天,处死,剖取大脑,用TMS(
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