i-Q水中，并 且添加6.9ml乙酸酐并将瓶填充直至11。将约IOmg多糖溶解于Iml流动相中，并且用针筒过 滤器(0 · 22mm，mStarII，CoStar Cambridge，MA)过滤粒子。在0 · 5ml/min的流速下进行测量。 使用串联连接的多角度激光散射检测器和维持在恒温下的折射计作为检测器。Astra软件 (5.3.4.14版，Wyatt Technology Cooperation)用于使用0· 147的dn/dc来确定样品的平均 Mw和平均Μη。根据以下文献以及如WO 2012/004007 Al，实施例1.9中所述在λ = 690nm下测 定值（溶剂NaOAc/H2〇/0 · 02 % NaN3，T = 20°C):W.M. Ku licke，U. Kaiser，D. Schwengers， R. Le_es，Starch，第43卷，第10期（1991 )，392-396。然而，在本说明书中提及的HAS和HES的 Mw和Mn值是根据Sommermey er等(在上述引文中）的方法测定的值。
[0037]优选地，多糖选自由以下组成的组:未取代的支链淀粉、取代的支链淀粉、未取代 的淀粉、取代的淀粉、未取代的麦芽糖糊精、未取代的右旋糖苷、未取代的艾考糊精、取代的 麦芽糖糊精、取代的右旋糖苷和取代的艾考糊精。更优选地，多糖选自由以下组成的组：（任 选取代的）右旋糖苷、艾考糊精、麦芽糖糊精和羟烷基淀粉，更优选地，多糖选自由以下组成 的组:右旋糖苷、艾考糊精和羟烷基淀粉。
[0038]特定来说，多糖不是透明质酸，并且优选不是包含葡糖胺或其衍生物的多糖。
[0039] 根据一优选实施方案，本发明涉及一种用于通过向罹患癌症的受试者的体腔施用 来预防转移形成和/或复发的多糖，其中所述多糖包含如上所述的取代或未取代的α-1，4_ 糖苷键连接的和/或α-1，6_糖苷键连接的脱水葡萄糖单元。更优选地，多糖包含以下或基本 上由以下组成:α-1，4_糖苷键连接的和/或α-1，6_糖苷键连接的取代或未取代的脱水葡萄 糖单元。甚至更优选地，多糖是右旋糖苷或艾考糊精，包括其取代的衍生物。
[0040] 术语"右旋糖苷"为本领域普通技术人员所知，并且涉及通常包含α-l，6-糖苷键连 接的脱水葡萄糖单元的主链以及α-l，4_和α-l，3_和任选α-l，2_键联作为分支点的葡聚糖。 天然右旋糖苷具有在介于10与50，000kDa之间的范围内的分子量。优选右旋糖苷是分子量 在介于10与l〇,〇〇〇kDa之间，更优选10与I ,OOOkDa之间，以及最优选35与75kDa之间的范围 内的右旋糖苷。
[0041] 优选地，包含右旋糖苷作为唯一多糖的组合物用于手术前、手术后或手术期内施 用，如下文所详述。
[0042] 术语"艾考糊精"也为熟练人士所知，并且涉及通常包含α-1，4-糖苷键连接的脱水 葡萄糖单元的主链以及α-1，6_键联作为分支点的葡聚糖。优选艾考糊精具有5至30kDa、更 优选10至20kDa、以及最优选13至16kDa的Mw。优选艾考糊精具有3至10kDa、更优选4至 7.5kDa、以及最优选5至6kDa的Μη。因此，在一优选实施方案中，艾考糊精具有13至16kDa的 Mw和 5 至 6kDa 的 Μη。
[0043] 当如本文所述的多糖已与它在它的产生过程中先前与之相伴的大多数组分分离 时，它可被称为"分离的"或"纯化的"。优选地，如本文所述的包含多肽的组合物可为至少或 约75%、80%、85%、90%、95%或99%纯净的。
[0044] 优选地，包含艾考糊精作为唯一多糖的组合物用于手术前施用，如下文所详述。
[0045] 根据一甚至更优选实施方案，本发明涉及一种用于通过向罹患癌症的受试者的体 腔施用来预防转移形成和/或复发的多糖，其中所述多糖包含至少一个取代的脱水葡萄糖 单元，其中所述至少一个脱水葡萄糖单元优选被至少一个选自由以下组成的组的取代基取 代:糖基、烷基、环烷基、芳基、卤素、氛基酸和 _(烷基_)n-H，其中n = l_6,优选是1_3,并且其 中各重复单元（"η"）中的烷基可相同或可彼此不同，并且其中在存在于所述多糖中的各基 团_(烷基-〇) η-Η中，η可相同或可彼此不同。应了解当脱水葡萄糖单元的羟基被取代时，形 成基团取代基"。或者，羟基可被相应取代基置换。因此，术语"取代的脱水葡萄糖单元" 是指其中取代基可连接于羟基的氧，由此形成基团-〇-取代基，或可直接连接于糖单元的碳 原子的脱水葡萄糖单元。
[0046] 如本文所用的术语"取代的脱水葡萄糖"或"取代的单糖"或"取代的多糖"为本领 域普通技术人员所知，并且涉及包含在本发明的多糖中的在优选至少一个化学修饰反应中 通过化学修饰加以修饰的脱水葡萄糖单元或单糖。术语"化学修饰反应"为本领域普通技术 人员所知，并且涉及修饰本发明的多糖或包含在其中的脱水葡萄糖或单糖单元的化学结 构，优选不改变它的特征性结构特征的化学反应。因此，优选地，术语化学修饰反应涉及部 分水解或修饰本发明的多糖的侧链。优选地，对侧链的所述修饰使本发明的多糖在施用部 位的半衰期增加。优选地，对侧链的修饰是烷基化(例如甲基化或乙基化）、酰化(更优选是 乙酰化）、糖基化、羟基化、羟烷基化、脱酰化或脱甲基化、或用哌嗪、哌啶、哌啶胺、甘紫草酸 (teneraic acid)、哌啶丙醇、卤素、氨基酸或多肽(优选是脂肽）、官能团衍生化或其任何组 合。更优选地，对侧链的所述修饰是烷基化，甚至更优选是甲基化，或最优选是乙基化。优选 地，衍生物与如本文所述的母体多糖关于本文提及的疾病具有相同或类似活性。优选地，对 术语"取代"的定义在加以必要的变更下适用于对其它单糖单元的取代。优选地，对侧链的 修饰是用无抗癌活性的取代基进行修饰。在任何情况下，取代的多糖的取代基(诸如烷基， 如乙基)本身不具有迄今为止已知的癌症活性。
[0047]如本文所用，术语"烷基"是指由优选具有2至12个碳原子的链长度的饱和烃组成 的直链或支链官能团或侧链。所述饱和烃可为直链，诸如丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛 基、壬基、癸基、十一烷基和十二烷基残基；或支链，即其中碳主链在一个或多个方向上分 裂，包括例如异丙基、异丁基、叔丁基、1 _异戊基、2-异戊基、3-异戊基和新戊基剩余部分。
[0048] 优选地，多糖包含至少一个取代的单糖单元，特定来说是被至少一个基团_(烷基_ 〇)n-H取代的脱水匍萄糖单兀，其中η = 1_6，优选是1_3，并且其中各重复单兀η中的烷基可 相同或可彼此不同，并且其中在存在于多糖中的各基团_(烷基-〇) η_Η中，η可相同或可彼此 不同。特定来说，多糖包含-〇-(烷基-〇)η_Η基团，其中羟基的质子被基团-(烷基-0) η-Η取代。 整数η优选是1至6,更优选是1至4,诸如1、2、3或4,其中，如果存在超过一个基团-(烷基-0 ) η-Η，那么η可相同或可彼此不同，并且烷基可相同以及可彼此不同，优选地，在各基团中， 烷基是相同的。
[0049] 优选地，多糖包含至少一个取代的脱水葡萄糖单元，其被至少一个基团-(乙基- 〇)n-H取代，优选包含至少一个取代的脱水葡萄糖单元，其中至少一个羟基的质子被基团-(乙基_〇)n-H置换（由此形成-〇-(乙基-〇) n-H)，其中η = 1_6，优选是1_3，并且其中各重复单 元η中的乙基可相同或可彼此不同，并且其中在存在于多糖中的各基团-(乙基-0)η-Η中，η 可相同或可彼此不同。
[0050] 在一特别优选实施方案中，本发明的多糖是羟烷基淀粉(HAS)。羟烷基淀粉羟丙基 淀粉和羟乙基淀粉是优选的，其中羟乙基淀粉是最优选的。
[0051] 优选地，包含HAS作为唯一多糖的组合物用于手术前、手术后或手术期内施用，如 下文所详述。
[0052]淀粉是一种依据式(C6HnjO5)n的熟知多糖，其基本上由通过糖苷键联偶联的α-D葡 萄糖单元组成。通常，淀粉基本上由直链淀粉和支链淀粉组成。直链淀粉由直链组成，其中 葡萄糖单元通过a-1，4_糖苷键联加以连接。支链淀粉是具有a-1，4_糖苷键联和a-1，6_糖苷 键联的高度分支结构。可由其制备羟烷基淀粉的天然淀粉包括但不限于谷物淀粉和马铃薯 淀粉。谷物淀粉包括但不限于稻米淀粉、小麦淀粉(诸如单粒小麦(e inkorn)淀粉、斯佩耳特 小麦（spe 11)淀粉、软质小麦淀粉、二粒小麦（emmer)淀粉、硬粒小麦淀粉或卡姆特小麦 (kamut)淀粉）、玉米淀粉、黑麦淀粉、燕麦淀粉、大麦淀粉、黑小麦淀粉、斯佩耳特小麦淀粉 和粟淀粉(诸如高粱淀粉或苔麸(teff)淀粉）。由其制备羟烷基淀粉的优选天然淀粉具有相 对于直链淀粉，高含量的支链淀粉。这些淀粉的支链淀粉含量是例如至少70重量％、优选至 少75重量％、更优选至少80重量％、更优选至少85重量％、更优选至少90重量％，诸如多达 95重量％、多达96重量％、多达97重量％、多达98重量％、多达99重量％或多达100重量％。 具有尤其高支链淀粉含量的天然淀粉是例如优选从属于传统育种(例如天然Eliane种类） 或遗传修饰的支链淀粉马铃薯种类的基本上无直链淀粉马铃薯提取的适合马铃薯淀粉(诸 如蜡质马铃薯淀粉)和蜡质种类的谷物(诸如蜡质玉米或蜡质稻米)的淀粉。
[0053] 羟烷基淀粉(HAS)是部分水解的天然淀粉的醚衍生物，其中淀粉中的羟基被适合 地羟烷基化；因此，HAS包含-0-(烷基-0) n-H基团，其中至少一个羟基的质子被基团-(烷基-〇)n_H置换，其中η是1至6,优选是1至4,更优选是1至2,以及更优选是1。作为聚合物以及由 于制备方法，HAS是一种多分散化合物，其中个别羟烷基淀粉分子就聚合度、分支位点的数 目和样式以及取代样式（即羟烷基的数目和/或位点）而言可不同。因此，通常通过统计平均 参数来表征羟烷基淀粉。这些参数通常是分子量分布、取代度和C2/C6取代比率。
[0054] 有两种可能的方式描述取代度。关于相对于所有葡萄糖部分被取代的葡萄糖单体 的部分来描述羟烷基淀粉的取代度(DS)。羟烷基淀粉的取代样式也可描述为摩尔取代度 (MS)，其中计数每个葡萄糖部分的羟烷基的数目。在本发明的情形下，羟烷基淀粉的取代样 式以MS描述。关于MS，也参照Sommermeyer等，（1987)Krankenhauspharmazie ,8(8) ,271-278，特定来说第273页。在总体水解羟烷基淀粉之后，通过气相色谱法测定MS。给出相应羟 烷基淀粉起始物质的MS值。假定在本发明的方法期间，MS值不受影响。
[0055] 此外，特定羟烷基淀粉溶液优选借助于统计手段，通过平均分子量来定义。在这个 情形下，视分子的数目和它们的分子量而定，MJ^Mn被计算为算术平均值。数量平均分子量 Mn*以下等式定义：
[0056] Mn= Σ imMi/ Σ im
[0057] 其中m是具有摩尔质量Mi的种类i的轻烷基淀粉分子的数目。或者，质量分布可通 过重量平均分子量MwSMw来描述。重量平均分子量^由以下等式定义：
[0058] Mw= Σ iruMi2/ Σ iruMi
[0059] 其中m是具有摩尔质量1的种类i的羟烷基淀粉分子的数目。根据本发明，MW值优 选在1至2000kDa、更优选5至700kDa、更优选10至300kDa、以及更优选70至150kDa的范围内。
[0060] 本领域普通技术人员应了解可根据Sommermeyer等（Krankenhauspharmazie，8， 1987，08,第271-278页)或根据欧洲药典7.0,01/2011:1785,第984页测定平均分子量。两种 方法之间的差异是所用光散射值dn/dc的值:在Sommermeyer方法中，使用dn/dc值0.135，而 在药典方法中，这个值变为0.147+/-0.001。如果不另外指示，那么如本文所用的平均分子 量的值涉及如用So_ermey er方法(在上述引文中）测定的值。
[0061] 通常被称为MS(分子取代度）的第二参数描述给定羟烷基淀粉的每个脱水葡萄糖 单元的轻烷基化位点的数目，并且可根据Sommermeyer等(Krankenhauspharmazie 8(8)， 1987，第271-278页，特定来说第273页)或根据欧洲药典7.0，01/2011:1785，第984页加以测 定。MS的值对应于由α-淀粉酶对羟烷基淀粉的可降解性。通常，羟烷基淀粉的MS值越高，它 的相应可降解性越低。也可根据Ying-Che Lee等，Anal · Chem · 55，1983，第334-338页；或 K.L.Hodges等，Anal.Chem.51,1979,第2171页测定参数MS。根据这些方法，使已知量的羟烷 基淀粉在二甲苯中经受醚裂解，借此添加己二酸和氢碘酸。随后通过气相色谱法，使用甲苯 作为内部标准物以及碘代烷校正溶液作为外部标准物来测定释放的碘代烷的量。根据本发 明，MS值优选在0.1至3、更优选0.2至1.3、以及更优选0.3至0.7的范围内。
[0062]被称为"C2/C6比率"的第三参数描述在C2位置中被取代的脱水葡萄糖单元的数目 相对于在C6位置中被取代的脱水葡萄糖单元的数目的比率。在制备羟烷基淀粉期间，C2/C6 比率可通过用于羟烷基化反应的pH来影响。通常，pH越高，C6位置中越多羟基被羟烷基化。 可例如根据Sommermeyer等，Krankenhauspharmazie 8(8) ,1987,第271-278页，特定来说第 273页测定C2/C6比率。根据本发明，C2/C6比率的典型值在2至20、优选2至14、以及更优选2 至12的范围内。
[0063]出于实际原因，以下命名应用于识别不同HAS和HES制剂:缩写字母代码指示修饰 的种类(例如"HES"代表羟乙基淀粉），继之以两个分别指示平均分子量和分子取代度的数 字。因此，"HES 130/0.4"指示具有130kDa的平均分子量和0.4的MS的羟乙基淀粉。本领域普 通技术人员应了解因为部分水解以及侧链取代是统计性过程，所以指示的值是平均值，包 括某一范围。优选地，MS值和C2/C6值指示值的± 20 %、更优选± 10%以及最优选± 5 %范 围。
[0064] 因此，本发明的多糖的优选实施方案是HES 70/0.5、HES 130/0.4和HES 450/0.7。 所述特定HES衍生物尤其优选用于手术前、手术期内和手术后施用。
[0065 ] 关于制备轻烷基淀粉，更特定来说制备轻乙基淀粉，参照例如S omme r me y e r等， Chromatographia，25，1988，第167-168页;C.Jungheinrich等,Clin.Pharmacokin·,44(7)， 2005,第681-699页；J.-M.Mishler IV，Pharmacology of hydroxyethyl starches，Oxford Medical Publications，202002，第1-30页。
[0066]优选地，多糖具有渗透活性。如本文所用，术语"渗透活性"意指化合物具有导致渗 透发生的性质。因此，当存在于在半透膜的一侧的溶液中时，本发明的渗透活性多糖导致存 在于另一侧的蒸馏水经所述半透膜扩散。优选地，通过根据英国药典第V卷，附录V : N. Osmo I a I i ty (2012)中所述的标准方法测定5 %多糖溶液的重量摩尔渗透浓度来确定多糖 具有渗透活性的性质。如通过上述方法所测定，具有IOOmOsmoVkg的重量摩尔渗透浓度的 多糖被视为具有渗透活性。
[0067] 优选地，多糖是生物可降解的，并且最优选地，多糖具有渗透活性并且是生物可降 解的。
[0068] 如本文所用的术语"生物可降解"意指本发明的多糖在特定时段内通过活生物体 的作用被分解。优选地，所述术语涉及本发明的多糖通过已向其施用所述多糖的受试者的 代谢作用被分解。更优选地，所述术语涉及本发明的多糖在施用部位通过存在于受试者中 的细胞和/或酶的作用被分解。优选地，为降解初始施用的多糖的一半量所需的时段是至少 或约一天，更优选是至少或约两天，并且最优选是至少或约三天。优选地，为降解初始施用 的多糖